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Cellules immunorégulatrices et effectrices dans la polyglobulie de Vaquez
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18es Journées de biologie de Marseille — 30e Colloque IBS CORATA
forte prévalence de la maladie (enfants et sujets âgés) qui sont superposables aux troubles physiologiques en rapport avec le métabolisme phosphocalcique. Matériels et méthodes.— Il s’agit d’une étude cas-témoins ayant porté sur 50 sujets atteints de l’ulcère de Buruli, âgés de deux à 71 ans, et 50 témoins présumés sains, d’âge similaire. L’avis favorable pour participer à l’étude a été donné par le sujet même ou ses parents (pour les enfants). Pour chaque sujet nous avons procédé à des dosages biochimiques sanguins et urinaires du calcium, du phosphore et du magnésium par colorimétrie, et au dosage sanguin enzymatique des phosphatases alcalines. Résultats.— Comparativement aux témoins, les patients atteints d’ulcère de Burili ont présenté des phosphaturies et calciuries significativement abaissées (p < 0,05), sans augmentation des concentrations sanguines de calcium et phosphore. Conclusion.— Ces résultats suggèrent une rétention phosphocalcique au cours de l’ulcère de Buruli.
que l’effet de la mutation JAK2 V617F sur une lignée cellulaire NK. Chez les patients atteints de PV, nous montrons tout d’abord une anomalie de répartition des sous-populations lymphocytaires : diminution des lymphocytes CD3+ et T ␥/␦ et augmentation des cellules NK. Plus particulièrement, nous rapportons des anomalies des cellules NK, impliquées dans la lutte antitumorale, et incapables de contrôler la maladie. doi:10.1016/j.immbio.2011.03.046
Nouveau dosage de la phosphatase alcaline osseuse humaine (PAL-O) sur l’analyseur automatique IDS-iSYS N. Baeyens , A.K. Barnes , G. Sarlet , M. Bougoussa , J. Leblon , M.L. Garrity Immunodiagnostic Systems (IDS) Ltd, Boldon, Royaume-Uni
doi:10.1016/j.immbio.2011.03.045
Cellules immunorégulatrices et effectrices dans la polyglobulie de Vaquez C. Sanchez a,b,c,d , T. Le Treut b,d , N. Beaufils a , D. Olive b,e , G. Sebahoun b,d,f , R. Costello b,c,d,f a Service de biochimie et biologie moléculaire, hôpital Nord, APHM, Chemin des Bourrely, 13915 Marseille cedex 20, France b Université de la Méditerranée, Marseille, France c U928 Inserm, TAGC, Marseille, France d Laboratoire d’hématologie, hôpital Nord, APHM, Marseille, France e Centre de recherche en cancérologie de Marseille, UMR891 Inserm, Marseille, France f Service d’hématologie, hôpital de la conception, APHM, 147, boulevard Baille, 13385 Marseille cedex 05, France Des anomalies des cellules Natural Killer (NK), notamment un défaut de l’activité cytotoxique, ont été décrites dans toutes les hémopathies. Peu de données sont disponibles dans la polyglobulie de Vaquez (PV), un syndrome myéloprolifératif de développement lent (pouvant permettre le développement d’une réponse immune) et caractérisé par la présence quasi constante d’une mutation du gène JAK2. Notre étude porte sur 15 patients et 25 témoins. Nous avons quantifié les sous-populations lymphocytaires, phénotypé les cellules NK et analysé leurs capacités de dégranulation par cytométrie de flux. La mutation JAK2 V617F a été recherchée par biologie moléculaire. Si le nombre de lymphocytes est normal chez les patients, nous montrons une anomalie de répartition des sous-populations lymphocytaires : les diminutions des pourcentages des lymphocytes CD3+ et T ␥/␦ sont compensées par une augmentation du pourcentage de cellules NK, également augmentées en valeur absolue. La répartition des sous-populations NK (CD56bright et CD56dim ) est normale. Le test de dégranulation du CD107a nous a permis de montrer que les cellules NK présentent un déficit d’activation. L’expression des récepteurs activateurs (Natural Cytotoxicity Receptors et NKG2D) est normale alors que l’expression des récepteurs inhibiteurs (Killer Immunoglobulinlike Receptors, NKG2A et CD85j) est augmentée, de fac ¸on significative pour le CD158a. Les anomalies observées pourraient être liées à la présence de la mutation JAK2 V617F dans les cellules NK. La recherche de la mutation a été réalisée par PCR quantitative sur cellules NK préalablement triées. De fait, il existe une corrélation entre le pourcentage de mutation JAK2 et les capacités de dégranulation des cellules NK mais pas avec les autres paramètres significativement anormaux (nombre de cellules NK, expression du CD158a). Par contre, l’expression de la perforine et de la granzyme sont normales. Au vu de ces premiers résultats, il nous semble intéressant d’étudier les capacités de prolifération des cellules NK des patients ainsi
L’analyseur automatique IDS-iSYS est une plateforme modulaire innovante multidisciplinaire qui intègre différents modules permettant des mesures simultanées selon trois techniques reconnues : luminescence, photométrie et chronométrie. Cette étude porte sur le développement et l’évaluation d’un test permettant la détermination de l’activité enzymatique de la phosphatase alcaline osseuse (PAL-O) humaine dans le sérum. Le niveau circulant de la phosphatase alcaline osseuse est connue pour refléter l’état métabolique des ostéoblastes impliqués dans la formation de la matrice osseuse. Il a été démontré que la détermination de la phosphatase alcaline osseuse circulante est un paramètre important dans le diagnostic de la maladie de Paget, de l’ostéomalacie, de l’hyperparathyroïdie primaire, de l’ostéodystrophie rénale, de l’ostéoporose et de métastases osseuses. Cette étude a été conduite afin d’automatiser un test manuel de dosage de la phosphatase alcaline osseuse (IDS OSTASE®* ELISA) sur l’analyseur automatique IDS-iSYS. Des modules de détection photométrique et luminescente sont embarqués à bord de cet analyseur. Cela permet un transfert rapide, fiable et robuste d’un test manuel vers un test totalement automatisé, sans modification majeure dans la formulation des réactifs. Ce nouveau test développé ici est un test colorimétrique utilisant comme phase solide de capture des particules magnétiques. Les mesures de densité optique sont faites à une longueur d’onde de 405 nm à l’aide du photomètre selon une méthode de mesure de type cinétique. La vitesse de réaction de la cinétique enzymatique est proportionnelle à la dégradation du substrat par la phosphatase alcaline osseuse et, à l’activité enzymatique de celle-ci. Le protocole consiste à incuber l’échantillon en présence d’un anticorps dirigé contre la PAL-O et couplé à la biotine. Les complexes immunologiques formés sont ensuite incubés en présence de particules magnétiques enrobées de streptavidine Après cette phase de capture, les particules magnétiques sont fixées par des aimants et lavées automatiquement par l’automate. Les particules magnétiques sont ensuite mises en présence d’un substrat colorimétrique (pNpp). Après homogénéisation, la Densité Optique (DO) est mesurée à 405 nm toutes les 30 secondes durant 450 secondes afin d’obtenir une mesure de la cinétique, exprimée en milli-DO par minute (mDo/min). Le temps nécessaire à l’obtention du premier résultat est de 45 minutes. Le test automatisé pour IDS-iSYS présente une gamme de mesure allant de 2 g/L à 100 g/L avec une sensibilité analytique ≤ 1 g/L, une sensibilité fonctionnelle proche de 2 g/L et une précision inter-série ≤ 7 %. Ce test montre une excellente corrélation avec la trousse manuelle IDS OSTASE®* ELISA selon l’équation de régression linéaire suivante : PAL-O IDS-iSYS = 1,05 × PAL-O ELISA — 0,18 g/L avec r = 0,98 (n = 110). Ces caractéristiques analytiques indiquent que le dosage automatisé de la PAL-O sur l’IDS-iSYS donne des résultats sensibles et précis, présentant une excellente corrélation avec la trousse manuelle ELISA OSTASE® .
18es Journées de biologie de Marseille — 30e Colloque IBS CORATA
forte prévalence de la maladie (enfants et sujets âgés) qui sont superposables aux troubles physiologiques en rapport avec le métabolisme phosphocalcique. Matériels et méthodes.— Il s’agit d’une étude cas-témoins ayant porté sur 50 sujets atteints de l’ulcère de Buruli, âgés de deux à 71 ans, et 50 témoins présumés sains, d’âge similaire. L’avis favorable pour participer à l’étude a été donné par le sujet même ou ses parents (pour les enfants). Pour chaque sujet nous avons procédé à des dosages biochimiques sanguins et urinaires du calcium, du phosphore et du magnésium par colorimétrie, et au dosage sanguin enzymatique des phosphatases alcalines. Résultats.— Comparativement aux témoins, les patients atteints d’ulcère de Burili ont présenté des phosphaturies et calciuries significativement abaissées (p < 0,05), sans augmentation des concentrations sanguines de calcium et phosphore. Conclusion.— Ces résultats suggèrent une rétention phosphocalcique au cours de l’ulcère de Buruli.
que l’effet de la mutation JAK2 V617F sur une lignée cellulaire NK. Chez les patients atteints de PV, nous montrons tout d’abord une anomalie de répartition des sous-populations lymphocytaires : diminution des lymphocytes CD3+ et T ␥/␦ et augmentation des cellules NK. Plus particulièrement, nous rapportons des anomalies des cellules NK, impliquées dans la lutte antitumorale, et incapables de contrôler la maladie. doi:10.1016/j.immbio.2011.03.046
Nouveau dosage de la phosphatase alcaline osseuse humaine (PAL-O) sur l’analyseur automatique IDS-iSYS N. Baeyens , A.K. Barnes , G. Sarlet , M. Bougoussa , J. Leblon , M.L. Garrity Immunodiagnostic Systems (IDS) Ltd, Boldon, Royaume-Uni
doi:10.1016/j.immbio.2011.03.045
Cellules immunorégulatrices et effectrices dans la polyglobulie de Vaquez C. Sanchez a,b,c,d , T. Le Treut b,d , N. Beaufils a , D. Olive b,e , G. Sebahoun b,d,f , R. Costello b,c,d,f a Service de biochimie et biologie moléculaire, hôpital Nord, APHM, Chemin des Bourrely, 13915 Marseille cedex 20, France b Université de la Méditerranée, Marseille, France c U928 Inserm, TAGC, Marseille, France d Laboratoire d’hématologie, hôpital Nord, APHM, Marseille, France e Centre de recherche en cancérologie de Marseille, UMR891 Inserm, Marseille, France f Service d’hématologie, hôpital de la conception, APHM, 147, boulevard Baille, 13385 Marseille cedex 05, France Des anomalies des cellules Natural Killer (NK), notamment un défaut de l’activité cytotoxique, ont été décrites dans toutes les hémopathies. Peu de données sont disponibles dans la polyglobulie de Vaquez (PV), un syndrome myéloprolifératif de développement lent (pouvant permettre le développement d’une réponse immune) et caractérisé par la présence quasi constante d’une mutation du gène JAK2. Notre étude porte sur 15 patients et 25 témoins. Nous avons quantifié les sous-populations lymphocytaires, phénotypé les cellules NK et analysé leurs capacités de dégranulation par cytométrie de flux. La mutation JAK2 V617F a été recherchée par biologie moléculaire. Si le nombre de lymphocytes est normal chez les patients, nous montrons une anomalie de répartition des sous-populations lymphocytaires : les diminutions des pourcentages des lymphocytes CD3+ et T ␥/␦ sont compensées par une augmentation du pourcentage de cellules NK, également augmentées en valeur absolue. La répartition des sous-populations NK (CD56bright et CD56dim ) est normale. Le test de dégranulation du CD107a nous a permis de montrer que les cellules NK présentent un déficit d’activation. L’expression des récepteurs activateurs (Natural Cytotoxicity Receptors et NKG2D) est normale alors que l’expression des récepteurs inhibiteurs (Killer Immunoglobulinlike Receptors, NKG2A et CD85j) est augmentée, de fac ¸on significative pour le CD158a. Les anomalies observées pourraient être liées à la présence de la mutation JAK2 V617F dans les cellules NK. La recherche de la mutation a été réalisée par PCR quantitative sur cellules NK préalablement triées. De fait, il existe une corrélation entre le pourcentage de mutation JAK2 et les capacités de dégranulation des cellules NK mais pas avec les autres paramètres significativement anormaux (nombre de cellules NK, expression du CD158a). Par contre, l’expression de la perforine et de la granzyme sont normales. Au vu de ces premiers résultats, il nous semble intéressant d’étudier les capacités de prolifération des cellules NK des patients ainsi
L’analyseur automatique IDS-iSYS est une plateforme modulaire innovante multidisciplinaire qui intègre différents modules permettant des mesures simultanées selon trois techniques reconnues : luminescence, photométrie et chronométrie. Cette étude porte sur le développement et l’évaluation d’un test permettant la détermination de l’activité enzymatique de la phosphatase alcaline osseuse (PAL-O) humaine dans le sérum. Le niveau circulant de la phosphatase alcaline osseuse est connue pour refléter l’état métabolique des ostéoblastes impliqués dans la formation de la matrice osseuse. Il a été démontré que la détermination de la phosphatase alcaline osseuse circulante est un paramètre important dans le diagnostic de la maladie de Paget, de l’ostéomalacie, de l’hyperparathyroïdie primaire, de l’ostéodystrophie rénale, de l’ostéoporose et de métastases osseuses. Cette étude a été conduite afin d’automatiser un test manuel de dosage de la phosphatase alcaline osseuse (IDS OSTASE®* ELISA) sur l’analyseur automatique IDS-iSYS. Des modules de détection photométrique et luminescente sont embarqués à bord de cet analyseur. Cela permet un transfert rapide, fiable et robuste d’un test manuel vers un test totalement automatisé, sans modification majeure dans la formulation des réactifs. Ce nouveau test développé ici est un test colorimétrique utilisant comme phase solide de capture des particules magnétiques. Les mesures de densité optique sont faites à une longueur d’onde de 405 nm à l’aide du photomètre selon une méthode de mesure de type cinétique. La vitesse de réaction de la cinétique enzymatique est proportionnelle à la dégradation du substrat par la phosphatase alcaline osseuse et, à l’activité enzymatique de celle-ci. Le protocole consiste à incuber l’échantillon en présence d’un anticorps dirigé contre la PAL-O et couplé à la biotine. Les complexes immunologiques formés sont ensuite incubés en présence de particules magnétiques enrobées de streptavidine Après cette phase de capture, les particules magnétiques sont fixées par des aimants et lavées automatiquement par l’automate. Les particules magnétiques sont ensuite mises en présence d’un substrat colorimétrique (pNpp). Après homogénéisation, la Densité Optique (DO) est mesurée à 405 nm toutes les 30 secondes durant 450 secondes afin d’obtenir une mesure de la cinétique, exprimée en milli-DO par minute (mDo/min). Le temps nécessaire à l’obtention du premier résultat est de 45 minutes. Le test automatisé pour IDS-iSYS présente une gamme de mesure allant de 2 g/L à 100 g/L avec une sensibilité analytique ≤ 1 g/L, une sensibilité fonctionnelle proche de 2 g/L et une précision inter-série ≤ 7 %. Ce test montre une excellente corrélation avec la trousse manuelle IDS OSTASE®* ELISA selon l’équation de régression linéaire suivante : PAL-O IDS-iSYS = 1,05 × PAL-O ELISA — 0,18 g/L avec r = 0,98 (n = 110). Ces caractéristiques analytiques indiquent que le dosage automatisé de la PAL-O sur l’IDS-iSYS donne des résultats sensibles et précis, présentant une excellente corrélation avec la trousse manuelle ELISA OSTASE® .