Estado de los marcadores de fase aguda y estrés oxidativo en los enfermos con litiasis de la vía urinaria

Estado de los marcadores de fase aguda y estrés oxidativo en los enfermos con litiasis de la vía urinaria

Actas Urol Esp. 2012;36(5):296---301 Actas Urológicas Españolas www.elsevier.es/actasuro ARTÍCULO ORIGINAL Estado de los marcadores de fase aguda y...

893KB Sizes 2 Downloads 187 Views

Actas Urol Esp. 2012;36(5):296---301

Actas Urológicas Españolas www.elsevier.es/actasuro

ARTÍCULO ORIGINAL

Estado de los marcadores de fase aguda y estrés oxidativo en los enfermos con litiasis de la vía urinaria J. Carrasco-Valiente a,∗ , F.J. Anglada-Curado a , P. Aguilar-Melero b , R. González-Ojeda b , J. Muntané-Relat b , F.J. Padillo-Ruiz c y M.J. Requena-Tapia a a

Unidad de Gestión Clínica de Urología, Hospital Universitario Reina Sofía, Córdoba, Espa˜ na Unidad de Experimentación Hepática, Hospital Universitario Reina Sofía, Córdoba, Espa˜ na c Unidad de Gestión Clínica de Cirugía General y del Aparato Digestivo, Hospital Universitario Virgen del Rocío, Sevilla, Espa˜ na b

Recibido el 3 de agosto de 2011; aceptado el 21 de agosto de 2011 Disponible en Internet el 1 de febrero de 2012

PALABRAS CLAVE Litiasis renal; Da˜ no glomerular; Estrés oxidativo



Resumen Objetivo: El objetivo del presente estudio es evaluar el estado de los marcadores de fase aguda y de estrés oxidativo en enfermos con litiasis renal. Material y métodos: Estudio prospectivo en enfermos con litiasis renal. Se incluyeron 100 enfermos y 25 controles sanos. Se evaluaron como marcadores de fase aguda: albúmina, ß2microglobulina, gamma-glutamil transpepsidasa, lactato deshidrogenasa, factor de necrosis tumoral alfa, interleucina 1 e interleucina 6 y como marcadores de estrés oxidativo los niveles de lipoperóxidos, superóxido dismutasa y glutatión peroxidasa. Resultados: En los enfermos estudiados se apreció un incremento de los marcadores de da˜ no celular renal expresado por la ß2microglobulina (p = 0,04), albúmina (p = 0,004), lactato deshidrogenasa (p = 0,001), así como gamma-glutamil transpepsidasa (p = 0,01). Existió una correlación directa entre los niveles de ß2microglobulina con el tama˜ no de la litiasis (r = 0,3; p = 0,03). La asociación entre la extensión del cálculo y la activación de las citoquinas se apreció de forma más intensa en los enfermos con cálculos coraliformes en los que las cifras de factor de necrosis tumoral alfa (p = 0,011), interleucina 1 (p = 0,004) e interleucina 6 (p = 0,004) fueron significativamente mayores. Los enfermos con litiasis de la vía urinaria presentaron cifras significativamente elevadas de radicales libres en plasma, expresados como lipoperóxidos (p = 0,03), que se acompa˜ naron de un descenso en la actividad de las enzimas antioxidantes superóxido dismutasa (p = 0.03) y glutatión peroxidasa (p = 0,002). Conclusiones: Los pacientes con litiasis urinaria presentan una elevación de los marcadores de fase aguda, asociada a un incremento de especies reactivas del oxígeno y un descenso en la actividad de las enzimas antioxidantes. © 2011 AEU. Publicado por Elsevier España, S.L. Todos los derechos reservados.

Autor para correspondencia. Correo electrónico: [email protected] (J. Carrasco-Valiente).

0210-4806/$ – see front matter © 2011 AEU. Publicado por Elsevier España, S.L. Todos los derechos reservados. 10.1016/j.acuro.2011.08.004

Marcadores de fase aguda y estrés oxidativo en enfermos con litiasis renal

KEYWORDS Nephrolithiasis; Kidney glomerulus; Oxidative stress

297

State of acute phase markers and oxidative stress in patients with kidney stones in the urinary tract Abstract Objective: This present study has aimed to assess the state of acute phase markers and oxidative stress in patients with kidney stones. Material and methods: A prospective study was carried out on 100 patients with kidney stones and 25 healthy controls. Albumin, ß2 microglobulin, Gamma-glutamyl transpepsidase, Lactate dehydrogenase, Tumor necrosis factor alpha, Interleukin 1 and Interleukin-6 were evaluated as acute phase markers and lipid peroxidation products, Superoxide dismutase and Glutathione peroxidase levels acted as oxidative stress markers. Results: An increase in renal cell damage markers as expressed by the ß2 microglobulin (p = 0.04), albumin (p = 0.004), Lactate dehydrogenase (p = 0.001) and Gamma glutamyl transpepsidasa (p = 0.01) was observed in the patient group. There was a direct correlation between levels of ß2microglobulin and stone size (r = 0.3, p = 0.03). The association between stone size and cytokine activation was observed to be stronger in patients with staghorn calculi. In these patients, Tumor necrosis factor alpha (p = 0.011), Interleukin 1 (p = 0.004) and Interleukin 6 (p = 0.004) were significantly higher. Patients with stones in the urinary tract showed data of significantly higher oxidative stress, expressed as an increase in levels of lipid peroxidation products (p = 0.03) and a decrease in the antioxidant activity of Superoxide dismutase (p = 0.03) and Glutathione peroxidase (p = 0.002). Conclusions: Patients undergoing urolithiasis showed an elevation of acute phase markers, associated with oxidative stress as expressed by an increase in lipid peroxidation products and a decrease in the antioxidant enzyme activity. © 2011 AEU. Published by Elsevier España, S.L. All rights reserved.

Introducción La litiasis urinaria es una enfermedad muy prevalente cuya incidencia se ha incrementado en las últimas décadas. Se estiman unas cifras de prevalencia que oscilan entre el 4 y el 20%, aunque varían mucho en función de factores como la zona geográfica, el clima o la alimentación. En Espa˜ na, según el Registro del Grupo de Urolitiasis de la Asociación Espa˜ nola de Urología, la prevalencia es del 4,6%1 . Existen trabajos que demuestran que el depósito de cristales causa atrofia tubular, fibrosis intersticial e infiltrado inflamatorio, como se ha objetivado in vitro, donde monocitos expuestos a cristales secretan factor de necrosis tumoral alfa (TNF-␣), interleucina 1 (IL-1) e interleucina 6 (IL-6) que podrían participar en los fenómenos inflamatorios acontecidos2 . Por otro lado, se ha comprobado que la administración de cargas de oxalato a animales de experimentación eleva los marcadores urinarios de da˜ no celular. El mecanismo exacto por el que se produce la lesión celular inducida por el oxalato es desconocido, pero algunos estudios experimentales sugieren que los radicales libres desempe˜ narían un papel importante asociados a citoquinas proinflamatorias de fase aguda (IL-1, IL-6 y TNF-␣)3 . El estrés oxidativo describe un estado de da˜ no causado por las especies reactivas de oxígeno (EROs)4 . Estas son compuestos altamente reactivos formados durante el metabolismo normal del oxígeno en los procesos de oxidorreducción, que aparecen en células cuando se provoca una disrupción en el equilibrio existente entre sustancias prooxidantes y antioxidantes a favor de las primeras5 . Una de las consecuencias de dicho desequilibrio se manifiesta en la

formación de lipoperóxidos (LPO) en las membranas celulares, con la consiguiente disfunción de las mismas. Si bien el estrés oxidativo constituye un mecanismo de acción conocido en la génesis de da˜ no celular en diferentes patologías6 , en el contexto de la litiasis urinaria los trabajos que sustentan dicha hipótesis son mayoritariamente experimentales, no existiendo hasta el momento estudios clínicos que evalúen de forma conjunta el estado de los marcadores de fase aguda y de estrés oxidativo en los enfermos con litiasis urinaria.

Material y métodos Se realizó un estudio prospectivo en enfermos diagnosticados de litiasis de la vía urinaria en el Hospital Universitario Reina Sofía de Córdoba, en el periodo comprendido entre abril de 2009 y diciembre de 2010, en el que se incluyeron un total de 125 sujetos distribuidos de la siguiente forma: 100 enfermos diagnosticados de litiasis renal (51 hombres y 49 mujeres) considerados como «grupo de estudio» y 25 sujetos sanos (11 hombres y 14 mujeres) tomados como controles. Se excluyeron pacientes con patologías agudas o crónicas que pudieran alterar los marcadores estudiados (insuficiencia renal previa, hipertensión, diabetes, patología cardiaca.) Como marcadores de fase aguda se evaluaron: niveles de albúmina, ß2microglobulina, lactato deshidrogenasa (LDH) y gamma-glutamil transpepsidasa (GGT) en orina, y factor de necrosis tumoral alfa (TNF␣), interleucina 1 (IL-1) e interleucina 6 (IL-6) en suero. Como marcadores de estrés oxidativo se midieron niveles séricos de LPO y la actividad de las

298

8.000,00

B2microglobulina (microgr/L)I

enzimas superóxido dismutasa (SOD) y glutatión peroxidasa (GPx). Todas las determinaciones fueron realizadas en los laboratorios del Departamento de Bioquímica y el laboratorio del Departamento Experimental del Hospital Reina Sofía de Córdoba. Las muestras de sangre se extrajeron tras 8 horas de ayuno. La cantidad de la muestra de sangre venosa fue de 5 a 10 ml, se extrajo mediante Vacutainer® en tubos con EDTA como anticoagulante y el suero se separó inmediatamente por centrifugación. Tras ello se hicieron alícuotas y las muestras fueron congeladas dentro de las primeras 4 horas a ---70 ◦ C hasta su análisis. En cada paciente se realizó un análisis de orina. Cada muestra de orina se centrifugó a 2000 rpm durante 5 minutos y se almacenó a −20 ◦ C hasta la realización de las técnicas analíticas correspondientes. Dichas muestras correspondieron a la totalidad de la orina de la primera micción de la ma˜ nana, medida en mililitros, lo que representaba un periodo de excreción urinaria de 6-8 horas. Las técnicas de laboratorio empleadas para la determinación de los parámetros fueron las siguientes: a) la microalbuminuria (MA) se cuantificó mediante el autoanalizador Beckman CX7 siguiendo los métodos de turbimetría; b) la ß2microglobulina fue evaluada por el método de inmuno-ensayo Synelisa B-2-H de color; c) la LDH se midió con el analizador bioquímico Olympus AU560; d) la GGT mediante espectrofotometría (Genzyme® ; Kent, RU); e) los productos de lipoperoxidación, expresados como ácido malondialdehído (MDA) fueron determinados siguiendo una modificación del protocolo descrito por Lepage7 mediante cromatografía líquida de alta presión (HPLC) a través del kit comercial suministrado por Bioxytech S.A. (Oxis Internacional Inc., Portland, OR, EE. UU.): LPO-586; f) la actividad de la GPx se evaluó mediante espectrofotometría, en función de la disminución de absorbancia a 340 nm debido a la oxidación del NADPH8 , con un kit comercial suministrado por BioVision incorporated (Mountain View, CA, EE, UU.): Glutathione Assay Kit (K264-100); y g) la SOD mediante el SOD Assay Kit-WST (SIGMA), método basado en el tetrazolium. Las concentraciones séricas de interleucinas proinflamatorias se midieron mediante kits comerciales de Bio Plex multi assay technology (Bio Rad laboratories, EE. UU.). Las pruebas se llevaron a cabo de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Para el análisis estadístico de los datos obtenidos se utilizó el programa SPSS (SPSS Inc) versión 18.0.0 para Windows (actualmente denominado PASW Statistic 18). Una vez confirmado el ajuste de la muestra a una distribución normal, según el test de Kolmogorov- Smirnov, se efectuaron los análisis de las muestras. Para la comparación de medias independientes se utilizó la «t» de Student. Para la comparación de variables cualitativas la Chi cuadrado con la corrección de Yates, y en el caso de menos de 5 observaciones la prueba de Fischer. Las correlaciones entre variables se evaluaron mediante la prueba de Pearson. Se consideraron valores estadísticamente significativos aquellos cuyo nivel de seguridad fue superior al 95% (p < 0,05). El protocolo fue evaluado y aprobado por el Comité de Ética e Investigación del Hospital Reina Sofía de Córdoba, y de todos los participantes se obtuvo consentimiento tras la

J. Carrasco-Valiente et al

r = 0,3; p = 0,03

6.000,00

4.000,00

2.000,00

10

20

30

Tamaño (mm)

Figura 1 Correlación entre tama˜ no del cálculo y niveles de ß2microglobulina (r = 0,3; p = 0,03).

explicación verbal y escrita de los métodos empleados en el estudio.

Resultados La edad media del grupo de estudio fue de 48,27 ± 12,9, de los cuales 51 eran hombres y 49 mujeres. En el grupo control la edad media fue de 42,65 ± 12 de los que 11 eran hombres y 14 mujeres.

Características generales de la litiasis La localización de la litiasis dentro del ri˜ nón fue en el 50% en el cáliz inferior, en el 32% en el superior y en el 18% restante en el cáliz medio. En el 82% de los casos la afectación renal fue unilateral y en el 10% se trató de cálculos coraliformes. La litiasis fue única en el 75% de los enfermos y múltiple en el 25% restante.

Estado de los marcadores de lesión celular y fase aguda En los enfermos estudiados se apreció un incremento de los marcadores de da˜ no celular renal en orina expresado por el aumento de la ß2microglobulina (p = 0,04 vs. control), junto a cifras elevadas de albúmina (p = 0,004), GGT (p = 0.01) y LDH (p = 0,011) (tabla 1). Se objetivó una correlación directa entre los niveles de ß2microglobulina con el tama˜ no de la litiasis (r = 0,3; p = 0,03) (fig. 1). De hecho, los niveles de ß2microglobulina fueron significativamente mayores en los enfermos con cálculos coraliformes que en el resto (2.874 ± 2.309 ␮g/l vs. 1.789 ± 1.045 ␮g/l; p = 0,02). Los enfermos con mayor edad presentaron igualmente cifras más elevadas de ß2microglobulina (r = 0,25; p = 0,01) (fig. 1). Al igual que ocurrió con los marcadores de da˜ no celular, se observó una correlación directa entre los niveles de

Marcadores de fase aguda y estrés oxidativo en enfermos con litiasis renal Tabla 1

299

Marcadores de fase aguda y da˜ no celular. Comparación grupo estudio vs. grupo control Control n = 25 Media ± DE

Albúmina (mg/L) LDH (U/L) TNF␣ (pg/ml) IL-1 (pg/ml) IL-6 (pg/ml) ␤2 microglobulina (microgr/L) GGT (U/L)

12,8 190 10,6 0,30 4,2 1287 19,7

± ± ± ± ± ± ±

Estudio n = 100 Media ± DE

11,5 44 9,8 0,14 3,6 330 9

124 227 8,9 0,31 4,8 1870 36

LPO (nmol/g) 0,5000

0,4000

± ± ± ± ± ± ±

p

25 65 11,4 0,76 5 1215 33

0,004 0,011 0,78 0,28 0,71 0,04 0,01

SOD (UI/L) 40,00

46 42 93 72 66

96

122

30,00

0,3000 20,00 123 0,2000

124 52 10,00

43

0,1000

0,00

0,0000 0,00

1,00

0,00

1,00

Grupo

Grupo

Figura 2 Diagramas de cajas para los valores de LPO. Grupo 0: grupo estudio; grupo 1: grupo control.

Figura 3 Diagramas de cajas para los valores de SOD. Grupo 0: grupo estudio; grupo 1: grupo control.

IL-6 en plasma y el tama˜ no del cálculo (r = 0,25; p = 0,01). La asociación entre el volumen del cálculo y la activación de las citoquinas se apreció de forma más intensa en los enfermos con cálculos coraliformes, en los que las cifras de TNF␣ (19 ± 12 pg/ml vs. 8 ± 8 pg/ml; p = 0,001), IL-1 (1 ± 0,2 pg/ml vs. 0,25 ± 0,24 pg/ml; p = 0,004), e IL-6 (9 ± 8 pg/ml vs. 4,4 ± 4 pg/ml; p = 0,004) fueron significativamente mayores.

ambas enzimas antioxidantes mostraron mayor actividad plasmática en los enfermos con cálculos coraliformes (SOD: 8,1 ± 6 UI/l vs. 4,6 ± 2,4 UI/l; p = 0,001 y GPx: 52 ± 37 UI/l vs. 41 ± 21 UI/l; p = 0,04), existiendo una correlación directa entre el tama˜ no del cálculo y la SOD (r: 0,3; p = 0,003).

Estado de los marcadores de estrés oxidativo

250,00

GPx (UI/L)

122

200,00

Los enfermos con litiasis de la vía urinaria presentaron un estado de estrés oxidativo como demostró el aumento de los lipoperóxidos (p = 0,03) y el descenso en la actividad de las enzimas antioxidantes, tales como la SOD (p = 0,03) y GPx (p = 0.002) en plasma (tabla 2) (figs. 2-4). No obstante,

150,00

123

100,00 62 47 48

Tabla 2 Marcadores de estrés oxidativo. Comparación grupo estudio vs. grupo control

LPO (U/L) SOD (U/L) GPx (U/L)

Control n = 25 Media ± DE

Estudio n = 100 Media ± DE

p

0,10 ± 0,1 7,9 ± 0,4 65 ± 39

0,23 ± 0,04 4,9 ± 2,9 42 ± 23

0,03 0,03 0,002

65

50,00

0,00 1,00

0,00

Grupo

Figura 4 Diagramas de cajas para los valores de GPx. Grupo 0: grupo estudio; grupo 1: grupo control.

300 No se observaron correlaciones entre el grado de estrés oxidativo plasmático y las citocinas estudiadas. Tan solo existió una correlación directa entre los niveles de LPO y GGT (r = 0,3; p = 0,004).

Discusión Los cálculos renales se asocian con un mayor riesgo de enfermedad renal crónica; sin embargo, los mecanismos por los que estos se desarrollan no están bien definidos. El tama˜ no de la litiasis puede condicionar mayor lesión celular renal. En el presente estudio se ha comprobado que tanto los enfermos con litiasis de mayor tama˜ no como los que portaban cálculos coraliformes presentaron un mayor da˜ no celular renal expresado por las mayores alteraciones en la ß2microglobulina, GGT y LDH urinarias. Este aumento de la ß2microglobulina puede deberse a una incapacidad de los túbulos renales da˜ nados para reabsorber la ß2microglobulina filtrada. La LDH, sin embargo, es una proteína de alto peso molecular, por lo que en condiciones normales no es filtrada por el glomérulo, de forma que el aumento en orina de los niveles de LDH puede ser igualmente una prueba de la disfunción en el filtrado glomerular. Al igual que los anteriores parámetros, la GGT, una enzima de membrana ubicada en la superficie luminal del ribete en cepillo de la célula del túbulo proximal, se mostró alterada, habiéndose demostrado en estudios previos como un indicador muy precoz de da˜ no renal9 . Entre los diferentes mecanismos patogénicos de lesión renal el estrés oxidativo puede alterar la estructura y función glomerular debido principalmente al efecto de las EROs sobre las células mesangiales y endoteliales3,10 . El glomérulo es considerablemente más sensible al da˜ no oxidativo que otros segmentos de la nefrona, tales como el túbulo proximal11 . Dada la alta reactividad de las EROs los seres vivos han desarrollado diversos mecanismos eficientes que permiten la estabilización y eliminación de las mismas a fin de mitigar sus efectos nocivos12 . Parte de estos mecanismos están representados por enzimas antioxidantes como la SOD y la GPx. La relación entre litiasis renal y estrés oxidativo se pudo corroborar en los enfermos estudiados en el presente trabajo, que presentaron niveles elevados de LPO con descenso significativo en la actividad de las enzimas antioxidantes. La actividad de las enzimas antioxidantes SOD y GPx fue significativamente mayor en los enfermos con mayor tama˜ no de la litiasis y cálculos coraliformes; esto podría implicar una repuesta antioxidante exagerada ante un mayor da˜ no renal. Aparte del estrés oxidativo, en las lesiones glomerulares objetivadas en los pacientes con litiasis también pueden estar involucrados mediadores inflamatorios como citocinas y quemoquinas2 . De hecho, en el presente estudio, además de diferencias significativas de los niveles plasmáticos de TNF␣, IL-1 e IL-6 entre enfermos y controles sanos, se demostró que fueron mayores en los enfermos con mayor tama˜ no de la litiasis y cálculos coraliformes. Varios estímulos, incluyendo las EROs, han sido identificados como promotores de la respuesta inflamatoria que ocurre en las células mesangiales13 . El factor nuclear kappaB (NF-kB) es

J. Carrasco-Valiente et al claramente uno de los más importantes reguladores de la expresión de genes proinflamatorios14 , y también ha sido demostrado que las EROs pueden estimular esta activación en las células mesangiales15 , hechos que hablan a favor de nuestros datos. Un ejemplo de la relación existente entre citocina y da˜ no glomerular inducido por EROs está representado por el TGF␤, el cual puede mediar el incremento de permeabilidad de la barrera glomerular a la albúmina16 . Otro mediador inflamatorio, la IL-1, se ha demostrado con similar efecto en el presente estudio, al existir relación entre los niveles más altos de IL-1 y la mayor microalbuminuria. Además, se ha documentado que el radical superóxido participa en la apoptosis de las células glomerulares inducida por el TNF-␣17 . Estos datos apuntan a que las EROs están implicadas en la fisiopatología de diversos tipos de lesiones glomerulares, que van desde la inflamación a la apoptosis, pudiendo activar la secreción de moléculas proinflamatorias y estas a su vez ejercer efectos nocivos mediados por dichas EROs, originando un círculo vicioso que perpetúa la respuesta inflamatoria y el da˜ no del glomérulo renal. En conclusión, los enfermos con litiasis urinaria presentan un estado de estrés oxidativo que se asocia a un incremento de citoquinas proinflamatorias y marcadores de fase aguda.

Conflicto de intereses Los autores declaran no tener ningún conflicto de intereses.

Financiación El estudio cuenta con el apoyo del premio «Pedro Cifuentes Díaz», otorgado en la convocatoria de la Fundación para la Investigación en Urología del a˜ no 2010.

Bibliografía 1. Alapont Pérez FM, Gálvez Calderón J, Varea Herrero J, Colome Borros G, Olaso Oltra A, Sánchez Bisono JR. Epidemiología de la litiasis urinaria. Actas Urol Esp. 2001;25:341---9. 2. Khan SR. Crystal-induced inflammation of the kidneys: results from human studies, animal models, and tissue-culture studies. Clin Exp Nephrol. 2004;8:75---88. 3. Thamilselvan S, Khan SR. Oxalate and calcium oxalate crystals are injurious to renal epithelial cells: results of in vivo and in vitro studies. J Nephrol. 1998;11 Suppl I:66---9. 4. Andreoli SP, McAteer JA. Reactive oxygen molecule-mediated injury in endothelial and renal tubular epithelial cells in vitro. Kidney Int. 1990;38:785---94. 5. Marsden PA, Bitzan M, Abraham A. Reactive nitrogen and oxygen intermediates and the kidney. En: Brenner BM, editor. The Kidney. 6.a Ed. Filadelfia: Saunders Company; 2000. p. 701---55. na M, Céspedes E, García JC, Castillo J. Bases mole6. Broche F, Pe˜ culares de la hipertrofia ventricular izquierda. Papel del estrés oxidativo. Rev Cubana Invest Biomed. 1997;16:84---93. 7. Lepage G, Munoz G, Champagne J, Roy CC. Preparative steps necessary for the accurate measurement of malondialdehyde by high-performance liquid chromatography. Anal Biochem. 1991;197:277---83. 8. Flohé L, Günzler W. Assays of glutathione peroxidase. Methods Enzymol. 1984;105:114---21.

Marcadores de fase aguda y estrés oxidativo en enfermos con litiasis renal 9. Price RG. Urinary enzimes, nephrotoxicity and renal disease. Rev Toxicol. 1982;23:99---134. 10. Klahr S. Oxygen radicals and renal diseases. Miner Electrolyte Metab. 1997;23:140---3. 11. Gwinner W, Deters-Evers U, Brandes RP, Kubat B, Koch KM, Pape M, et al. Antioxidant-oxidant balance in the glomerulus and proximal tubule of the rat kidney. J Physiol. 1998;509: 599---606. 12. Betteridge D. What is oxidative stress? Metabolism. 2000;49: 3---8. 13. Ozaki M, Yamada Y, Matoba K, Otani H, Mune M, Yukawa S, et al. Phospholipase A2 activity in ox-LDL-stimulated mesangial cells and modulation by alpha- tocopherol. Kidney Int. 1999;56 Suppl 71:S171---3.

301

14. Tak P, Firestein G. NF-kB: a key role in inflammatory diseases. J Clin Invest. 2001;107:7---11. 15. Massy Z, Guijarro C, OˇıDonnell M, Kim Y, Kashtan C, Egido J, et al. The central role of nuclear factor-kB in mesangial cell activation. Kidney Int. 1999;56 Suppl 71:S76---9. 16. Sharma R, Khanna A, Sharma M, Savin V. Transforming growth factor-ß1 increases albumin permeability of isolated rat glomeruli via hydroxyl radicals. Kidney Int. 2000;58: 131---6. 17. Moreno Manzano V, Ishikawa Y, Lucio Czana J, Kitamura M. Selective involvement of superoxide anion, but not downstream compounds hydrogen peroxide and peroxynitrite, in tumor necrosis factor-ainduced apoptosis of rat mesangial cells. J Biol Chem. 2000;275:12684---91.