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R23: L’oncogène JAK2 V617F induit une dérégulation de CDC25A, phosphatase clé du cycle cellulaire, dans la maladie de Vaquez
6es Journées du Cancéropôle Grand Sud-Ouest
R23 L’oncogène JAK2 V617F induit une dérégulation de CDC25A, phosphatase clé du cycle cellulaire, dans la maladie de Vaquez Gautier EF.1, Manenti S.1, Laurent C.1, 2, Ducommun B.3, Delhommeau F.4, Demur C.1, 6, Bonnevialle N.7, Villeval JL.4, Laurent G.1, 5, Mansat de Mas V.1, 6 1 Inserm U563, Purpan, Toulouse ; 2Service d’Anatomie et Cytologie Pathologiques, CHU Purpan, Toulouse ; 3LBCMCP, CNRS, Toulouse ; 4Inserm U1009, Institut Gustave-Roussy (IGR), Villejuif ; 5Service d’Hématologie clinique, CHU Purpan, Toulouse ; 6Laboratoire d’Hématologie, CHU Purpan, Toulouse ; 7Service d’Orthopédie CHU Purpan, Toulouse
L
a maladie de Vaquez (MV) est un syndrome myéloprolifératif entraînant une production excessive de globules rouges. Une mutation ponctuelle de la tyrosine kinase JAK2, la mutation JAK2 V617F, a été retrouvée dans la majorité des cas de MV. L’oncogène JAK2 V617F induit une activation constitutive de cette kinase associée au récepteur de l’érythropoïétine (EPO) et entraîne une hypersensibilité à l’EPO. Au niveau physiologique, sa présence entraîne une amplification de l’érythropoïèse terminale et semble être responsable du phénotype de la maladie. Des travaux récents montrent que l’inhibition de JAK2 V617F entraîne un arrêt en G1 du cycle cellulaire, suggérant l’implication, en aval de l’oncogène, de protéines impliquées dans la transition G1/S. Parmi ces protéines de la transition G1/S, l’une d’entre elles a attiré notre attention en raison de l’inhibition extrêmement rapide de son expression suite à l’inhibition de l’activité de JAK2 V617F. Il s’agit d’une phosphatase souvent considérée comme un proto-oncogène, CDC25A. Notre étude révèle une surexpression de CDC25A en aval de JAK2 V617F, à la fois dans des lignées cellulaires, des coupes de moelle de patients, des échantillons de moelle et de rate de souris knock in et des progéniteurs/précurseurs CD36+ de patients atteints de MV. L’analyse de l’expression de CDC25A au cours de la différenciation érythroïde terminale révèle une surexpression de la phosphatase et un rallongement de son expression au cours du temps en aval de la mutation. La dérégulation de CDC25A menant à cette surexpression ne paraît pas faire intervenir le transcrit, ni la stabilité de la protéine, suggérant une dérégulation traductionnelle. De plus, la déplétion de CDC25A par interférence ARN révèle son implication dans la prolifération cellulaire en aval de l’oncogène. Ces résultats mènent à penser que CDC25A pourrait, par son rôle dans la prolifération, être impliquée dans l’expansion érythroïde terminale retrouvée dans la maladie de Vaquez.
R24 Une structure G-quadruplexe présente dans le 5’UTR de TRF2 bloque la traduction in vitro et in cellulo Gomez D.1, 2, Guédin A.3, Mergny JL.3, 4, Salles B.1, 2, Riou JF.3, Teulade Fichou MP.5, Calsou P.1,2 1
CNRS, IPBS (Institut de Pharmacologie et de Biologie Structurale), 205, route de Narbonne, F3077 Toulouse, France ; 2Université de Toulouse, UPS, IPBS, F-31077 Toulouse, France ; Laboratoire de Biophysique, Muséum national d’histoire naturelle, Inserm U 565, CNRS UMR 7196, 43, rue Cuvier, 75231 Paris Cedex 05, France ; 4Laboratoire ARNA (Inserm U869) Institut Européen de Chimie et Biologie, Université de Bordeaux, Pessac, France ; 5Institut Curie, CNRS, UMR 176, Centre Universitaire Paris-XI, 91405 Orsay (France) 3
L
e télomère est un complexe nucléo-protéique qui protège les extrémités chromosomiques et empêche que celles-ci
Bull Cancer vol. 97, supplément 4, octobre 2010
soient reconnues et traitées comme des cassures double brin de l’ADN. La fonction télomérique est assurée en partie part un complexe multiprotéique appelé « shelterin », dans lequel la protéine TRF2 joue un rôle essentiel. De part sa richesse en guanines la séquence télomérique humaine peut adopter une structure particulière appelée un G-quadruplexe (G4). In vitro, les structures G-quadruplexes sont fixées et stabilisées par des petits composés chimiques appelés ligands G4. Des études cellulaires ont permis de montrer que ces molécules altèrent la fonction télomérique et conduisent à des défauts de protection des chromosomes, entraînant l’arrêt de prolifération ou la mort cellulaire. Dans cette étude, nous montrons qu’une séquence riche en guanines présente dans la région 5’ UTR de l’ARNm codant pour la protéine TRF2 est capable d’adopter une structure en G-quadruplexe. La formation de cette structure réprime la traduction in cellulo d’un gène rapporteur par 2,8 fois quand comparée à une séquence contrôle qui est incapable de former une telle structure. Dans cette même étude, nous montrons aussi que plusieurs ligands G4 hautement sélectifs fixent et stabilisent cette structure et modulent la traduction de l’ARNm TRF2 in vitro. De ce fait, et étant donné que la séquence étudiée a été conservée au cours de l’évolution, nous proposons que les niveaux intracellulaires de la protéine TRF2 pourraient être régulés par la formation d’une structure en G-quadruplexe. D’autre part, nos résultats suggèrent que certains effets télomériques observés lors de traitements avec des ligands G4 pourraient être la conséquence d’un effet direct sur la production de la protéine TRF2.
R25 Cibler les łbroblastes associés au cancer (CAFs) avec un inhibiteur sélectif de PDGF-R-TK est une approche thérapeutique prometteuse pour des tumeurs solides Volle-Challier C., Gueguen G., Blanc I., Labouret C., Morin G., Laplace MC., Trombe M., Dol F., Bono F. Sanofi-aventis R&D, E2C Unit, 195, route d’Espagne, BP 13669, 31036 Toulouse, Cedex 1, France
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ne étape critique dans la progression tumorale est l’interaction des cellules malignes et stromales via des mécanismes paracrines. Parmi ces cellules stromales, les fibroblastes associés de cancer (CAFs) représentent le type cellulaire le plus abondant dans le stroma tumoral. Les CAFs sont impliqués non seulement dans la remodélisation de l’invasion tissulaire et la progression tumorale, mais aussi dans l’augmentation de la pression interstitielle mesurée dans les tumeurs solides (IFP). Ceci a augmenté l’intérêt de considérer les CAFs comme une cible thérapeutique. Deux modèles tumoraux orthotopiques dans des souris immunocompétentes ont été étudiés : le carcinome pulmonaire LL2 et l’adénocarcinome pancréatique Panc02 dans le souris C57Bl6. Une étude immunohistochimique a été réalisée sur les carcinomes et un inhibiteur puissant et sélectif du PDGFRTK, le SAR109511 a été évalué. In vitro, le SAR109511 inhibe la prolifération et la migration de fibroblaste humain induit par PDGF-AA, BB et DD ainsi que la sécrétion de collagène induite par PDGF-BB. Par immunohistochimie, nous avons mis en évidence la présence de CAFs illustré par un important marquage de alpha-SMA, de PDGF-R et de la vimentine.
S25
R23 L’oncogène JAK2 V617F induit une dérégulation de CDC25A, phosphatase clé du cycle cellulaire, dans la maladie de Vaquez Gautier EF.1, Manenti S.1, Laurent C.1, 2, Ducommun B.3, Delhommeau F.4, Demur C.1, 6, Bonnevialle N.7, Villeval JL.4, Laurent G.1, 5, Mansat de Mas V.1, 6 1 Inserm U563, Purpan, Toulouse ; 2Service d’Anatomie et Cytologie Pathologiques, CHU Purpan, Toulouse ; 3LBCMCP, CNRS, Toulouse ; 4Inserm U1009, Institut Gustave-Roussy (IGR), Villejuif ; 5Service d’Hématologie clinique, CHU Purpan, Toulouse ; 6Laboratoire d’Hématologie, CHU Purpan, Toulouse ; 7Service d’Orthopédie CHU Purpan, Toulouse
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a maladie de Vaquez (MV) est un syndrome myéloprolifératif entraînant une production excessive de globules rouges. Une mutation ponctuelle de la tyrosine kinase JAK2, la mutation JAK2 V617F, a été retrouvée dans la majorité des cas de MV. L’oncogène JAK2 V617F induit une activation constitutive de cette kinase associée au récepteur de l’érythropoïétine (EPO) et entraîne une hypersensibilité à l’EPO. Au niveau physiologique, sa présence entraîne une amplification de l’érythropoïèse terminale et semble être responsable du phénotype de la maladie. Des travaux récents montrent que l’inhibition de JAK2 V617F entraîne un arrêt en G1 du cycle cellulaire, suggérant l’implication, en aval de l’oncogène, de protéines impliquées dans la transition G1/S. Parmi ces protéines de la transition G1/S, l’une d’entre elles a attiré notre attention en raison de l’inhibition extrêmement rapide de son expression suite à l’inhibition de l’activité de JAK2 V617F. Il s’agit d’une phosphatase souvent considérée comme un proto-oncogène, CDC25A. Notre étude révèle une surexpression de CDC25A en aval de JAK2 V617F, à la fois dans des lignées cellulaires, des coupes de moelle de patients, des échantillons de moelle et de rate de souris knock in et des progéniteurs/précurseurs CD36+ de patients atteints de MV. L’analyse de l’expression de CDC25A au cours de la différenciation érythroïde terminale révèle une surexpression de la phosphatase et un rallongement de son expression au cours du temps en aval de la mutation. La dérégulation de CDC25A menant à cette surexpression ne paraît pas faire intervenir le transcrit, ni la stabilité de la protéine, suggérant une dérégulation traductionnelle. De plus, la déplétion de CDC25A par interférence ARN révèle son implication dans la prolifération cellulaire en aval de l’oncogène. Ces résultats mènent à penser que CDC25A pourrait, par son rôle dans la prolifération, être impliquée dans l’expansion érythroïde terminale retrouvée dans la maladie de Vaquez.
R24 Une structure G-quadruplexe présente dans le 5’UTR de TRF2 bloque la traduction in vitro et in cellulo Gomez D.1, 2, Guédin A.3, Mergny JL.3, 4, Salles B.1, 2, Riou JF.3, Teulade Fichou MP.5, Calsou P.1,2 1
CNRS, IPBS (Institut de Pharmacologie et de Biologie Structurale), 205, route de Narbonne, F3077 Toulouse, France ; 2Université de Toulouse, UPS, IPBS, F-31077 Toulouse, France ; Laboratoire de Biophysique, Muséum national d’histoire naturelle, Inserm U 565, CNRS UMR 7196, 43, rue Cuvier, 75231 Paris Cedex 05, France ; 4Laboratoire ARNA (Inserm U869) Institut Européen de Chimie et Biologie, Université de Bordeaux, Pessac, France ; 5Institut Curie, CNRS, UMR 176, Centre Universitaire Paris-XI, 91405 Orsay (France) 3
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e télomère est un complexe nucléo-protéique qui protège les extrémités chromosomiques et empêche que celles-ci
Bull Cancer vol. 97, supplément 4, octobre 2010
soient reconnues et traitées comme des cassures double brin de l’ADN. La fonction télomérique est assurée en partie part un complexe multiprotéique appelé « shelterin », dans lequel la protéine TRF2 joue un rôle essentiel. De part sa richesse en guanines la séquence télomérique humaine peut adopter une structure particulière appelée un G-quadruplexe (G4). In vitro, les structures G-quadruplexes sont fixées et stabilisées par des petits composés chimiques appelés ligands G4. Des études cellulaires ont permis de montrer que ces molécules altèrent la fonction télomérique et conduisent à des défauts de protection des chromosomes, entraînant l’arrêt de prolifération ou la mort cellulaire. Dans cette étude, nous montrons qu’une séquence riche en guanines présente dans la région 5’ UTR de l’ARNm codant pour la protéine TRF2 est capable d’adopter une structure en G-quadruplexe. La formation de cette structure réprime la traduction in cellulo d’un gène rapporteur par 2,8 fois quand comparée à une séquence contrôle qui est incapable de former une telle structure. Dans cette même étude, nous montrons aussi que plusieurs ligands G4 hautement sélectifs fixent et stabilisent cette structure et modulent la traduction de l’ARNm TRF2 in vitro. De ce fait, et étant donné que la séquence étudiée a été conservée au cours de l’évolution, nous proposons que les niveaux intracellulaires de la protéine TRF2 pourraient être régulés par la formation d’une structure en G-quadruplexe. D’autre part, nos résultats suggèrent que certains effets télomériques observés lors de traitements avec des ligands G4 pourraient être la conséquence d’un effet direct sur la production de la protéine TRF2.
R25 Cibler les łbroblastes associés au cancer (CAFs) avec un inhibiteur sélectif de PDGF-R-TK est une approche thérapeutique prometteuse pour des tumeurs solides Volle-Challier C., Gueguen G., Blanc I., Labouret C., Morin G., Laplace MC., Trombe M., Dol F., Bono F. Sanofi-aventis R&D, E2C Unit, 195, route d’Espagne, BP 13669, 31036 Toulouse, Cedex 1, France
U
ne étape critique dans la progression tumorale est l’interaction des cellules malignes et stromales via des mécanismes paracrines. Parmi ces cellules stromales, les fibroblastes associés de cancer (CAFs) représentent le type cellulaire le plus abondant dans le stroma tumoral. Les CAFs sont impliqués non seulement dans la remodélisation de l’invasion tissulaire et la progression tumorale, mais aussi dans l’augmentation de la pression interstitielle mesurée dans les tumeurs solides (IFP). Ceci a augmenté l’intérêt de considérer les CAFs comme une cible thérapeutique. Deux modèles tumoraux orthotopiques dans des souris immunocompétentes ont été étudiés : le carcinome pulmonaire LL2 et l’adénocarcinome pancréatique Panc02 dans le souris C57Bl6. Une étude immunohistochimique a été réalisée sur les carcinomes et un inhibiteur puissant et sélectif du PDGFRTK, le SAR109511 a été évalué. In vitro, le SAR109511 inhibe la prolifération et la migration de fibroblaste humain induit par PDGF-AA, BB et DD ainsi que la sécrétion de collagène induite par PDGF-BB. Par immunohistochimie, nous avons mis en évidence la présence de CAFs illustré par un important marquage de alpha-SMA, de PDGF-R et de la vimentine.
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