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C7. Perfil de expressão génica por PCR em tempo real em doentes VIH negativos com tuberculose multirresistente
REVISTA PORTUGUESA DE PNEUMOLOGIA/XIX CONGRESSO DE PNEUMOLOGIA
C7. Perfil de expressão génica por PCR em tempo real em doentes VIH negativos com tuberculose multirresistente
C7. Gene expression profiling by realtime system PVR analysis in HIV negative patients with multidrugresistant tuberculosis
P SANTOS 1,2, A CUNHA 3, JP LOPES 3, A DOMINGOS 4, F REGATEIRO 2, A SEGORBE-LUÍS 1.
P SANTOS 1,2, A CUNHA 3, JP LOPES 3, A DOMINGOS 4, F REGATEIRO 2, A SEGORBE-LUÍS 1.
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Centro de Pneumologia da Faculdade de Medicina da Universidade de Coimbra. 2 Centro de Histocompatibilidade do Centro, Coimbra. 3 Faculdade de Ciências e Tecnologia da Universidade de Coimbra. 4 Centro Hospitalar de Torres Vedras.
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Centro de Pneumologia da Faculdade de Medicina da Universidade de Coimbra. 2 Centro de Histocompatibilidade do Centro, Coimbra. 3 Faculdade de Ciências e Tecnologia da Universidade de Coimbra. 4 Centro Hospitalar de Torres Vedras.
Em resposta à estimulação imunológica crónica induzida pelo M. Tuberculosis, os doentes com tuberculose multi-resistente (MDRTB) regulam positiva e negativamente a expressão de vários genes. Assim, a quantificação relativa do RNA mensageiro de genes envolvidos na resposta imunológica pode ser útil para o esclarecimento da imunopatologia da MDR-TB abrindo perspectivas para uma intervenção imunomodulatória. O presente estudo teve como objectivo a avaliação da expressão génica associada a MDR-TB. Analisaram-se sangues periféricos de 18 doentes MDR-TB e 17 controlos saudáveis. A quantificação relativa dos mRNAs de genes com importância na resposta imune (citocinas, quimiocinas, receptores activadores e inibidores, etc.) foi efectuada por PCR em tempo real com sondas Taqman®. Utilizou-se um painel de primers e sondas específicas para os seguintes 20 genes: IL-1a, IL-1b, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, IFN-g, TGF-b, TNF-a, TNF-b, RANTES, MCP1, MIP1b, IP-10, CTLA-4, CD28, CD80 and CD86. No grupo MDR-TB, os genes das seguintes citocinas mostraram-se regulados positivamente: IFN-g (1.8 logs; p<0.001), IL-10 (2.3 logs; p<0.05), IL-2 (3.0 logs; p<0.001), IL-4 (3.4 logs; p<0.00001) e TNFb (1.1 logs; p<0.05). Observou-se ainda uma tendência para aumento de expressão da IL-6 (1.0 logs; p=0.054) e uma ligeira diminuição da IL-1b, embora sem significado estatístico. Outros genes com funções imuno-reguladoras importantes (e.g. CD28, RANTES, CD86) apresentaram níveis de mRNA alterados. No seu conjunto, estes resultados corroboram a noção de activação imunológica crónica em curso nos doentes MDR-TB. Contudo, a expressão de citocinas inibidoras de uma resposta Th1 (v.g. IL-10, IL-4) sugere a manutenção de uma resposta imunológica ineficaz na tuberculose multi-resistente Palavras-chave: tuberculose multi-resistente; genes de resposta imunológica; perfil de expressão génica, PCR em tempo real. Parte deste trabalho recebeu o apoio da Comissão de Fomento da Investigação em Cuidadosde Saúde do Ministério da Saúde.
In response to chronic stimulation of M. tuberculosis, multidrugresistant tuberculosis (MDR-TB) patients up-regulate and downregulate the expression of several genes. Thus, relative quantification of mRNA from genes involved with the immune response could be helpful to elucidate the immunopathology of MDR-TB giving clues to immune modulation. The purpose of this study was to evaluate immunologic gene expression profile associated with MDR-TB. Peripheral blood drawn from 18 MDR-TB patients and 17 healthy control individuals was analysed. Real-time PCR analysis with Taqman® probes was used for relative quantification of mRNAs from genes with important involvement in immune response (cytokines, chemokines, activatory and inhibitory receptors, etc). A panel of primers and probes specific for the following 20 genes was used: IL-1a, IL-1b, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, IFN-g, TGFb, TNF-a, TNF-b, RANTES, MCP1, MIP1b, IP-10, CTLA-4, CD28, CD80 and CD86. In the MDR-TB group, the following cytokine genes were found significantly up-regulated: IFN-g (1.8 logs; p<0.001), IL-10 (2.3 logs; p<0.05), IL-2 (3.0 logs; p<0.001), IL-4 (3.4 logs; p<0.00001) and TNF-b (1.1 logs; p<0.05). A trend for IL-6 up-regulation (1.0 logs) was also observed (p=0.054). A slight down-regulation of IL-1b was noticed although lacking statistic significance. Additional genes with important immunologic functions showed altered levels of mRNA (e.g. CD28, RANTES, CD86). Taken together these results corroborate the concept of chronic immune activation ongoing in MDR-TB patients. However, the gene expression of inhibitory Th1-response cytokines (v.g., IL-10 and IL-4) suggest the maintenance of an ineffective immune response in MDR tuberculosis. Key-Words: MDR tuberculosis; immune response genes; gene expression profiling; real-time system PCR. This work was partially supported from the Funding Committee for Health Care Research from the Portuguese Health Ministry Office.
444
Vol. IX N.º 5
Setembro/Outubro 2003
C7. Perfil de expressão génica por PCR em tempo real em doentes VIH negativos com tuberculose multirresistente
C7. Gene expression profiling by realtime system PVR analysis in HIV negative patients with multidrugresistant tuberculosis
P SANTOS 1,2, A CUNHA 3, JP LOPES 3, A DOMINGOS 4, F REGATEIRO 2, A SEGORBE-LUÍS 1.
P SANTOS 1,2, A CUNHA 3, JP LOPES 3, A DOMINGOS 4, F REGATEIRO 2, A SEGORBE-LUÍS 1.
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Centro de Pneumologia da Faculdade de Medicina da Universidade de Coimbra. 2 Centro de Histocompatibilidade do Centro, Coimbra. 3 Faculdade de Ciências e Tecnologia da Universidade de Coimbra. 4 Centro Hospitalar de Torres Vedras.
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Centro de Pneumologia da Faculdade de Medicina da Universidade de Coimbra. 2 Centro de Histocompatibilidade do Centro, Coimbra. 3 Faculdade de Ciências e Tecnologia da Universidade de Coimbra. 4 Centro Hospitalar de Torres Vedras.
Em resposta à estimulação imunológica crónica induzida pelo M. Tuberculosis, os doentes com tuberculose multi-resistente (MDRTB) regulam positiva e negativamente a expressão de vários genes. Assim, a quantificação relativa do RNA mensageiro de genes envolvidos na resposta imunológica pode ser útil para o esclarecimento da imunopatologia da MDR-TB abrindo perspectivas para uma intervenção imunomodulatória. O presente estudo teve como objectivo a avaliação da expressão génica associada a MDR-TB. Analisaram-se sangues periféricos de 18 doentes MDR-TB e 17 controlos saudáveis. A quantificação relativa dos mRNAs de genes com importância na resposta imune (citocinas, quimiocinas, receptores activadores e inibidores, etc.) foi efectuada por PCR em tempo real com sondas Taqman®. Utilizou-se um painel de primers e sondas específicas para os seguintes 20 genes: IL-1a, IL-1b, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, IFN-g, TGF-b, TNF-a, TNF-b, RANTES, MCP1, MIP1b, IP-10, CTLA-4, CD28, CD80 and CD86. No grupo MDR-TB, os genes das seguintes citocinas mostraram-se regulados positivamente: IFN-g (1.8 logs; p<0.001), IL-10 (2.3 logs; p<0.05), IL-2 (3.0 logs; p<0.001), IL-4 (3.4 logs; p<0.00001) e TNFb (1.1 logs; p<0.05). Observou-se ainda uma tendência para aumento de expressão da IL-6 (1.0 logs; p=0.054) e uma ligeira diminuição da IL-1b, embora sem significado estatístico. Outros genes com funções imuno-reguladoras importantes (e.g. CD28, RANTES, CD86) apresentaram níveis de mRNA alterados. No seu conjunto, estes resultados corroboram a noção de activação imunológica crónica em curso nos doentes MDR-TB. Contudo, a expressão de citocinas inibidoras de uma resposta Th1 (v.g. IL-10, IL-4) sugere a manutenção de uma resposta imunológica ineficaz na tuberculose multi-resistente Palavras-chave: tuberculose multi-resistente; genes de resposta imunológica; perfil de expressão génica, PCR em tempo real. Parte deste trabalho recebeu o apoio da Comissão de Fomento da Investigação em Cuidadosde Saúde do Ministério da Saúde.
In response to chronic stimulation of M. tuberculosis, multidrugresistant tuberculosis (MDR-TB) patients up-regulate and downregulate the expression of several genes. Thus, relative quantification of mRNA from genes involved with the immune response could be helpful to elucidate the immunopathology of MDR-TB giving clues to immune modulation. The purpose of this study was to evaluate immunologic gene expression profile associated with MDR-TB. Peripheral blood drawn from 18 MDR-TB patients and 17 healthy control individuals was analysed. Real-time PCR analysis with Taqman® probes was used for relative quantification of mRNAs from genes with important involvement in immune response (cytokines, chemokines, activatory and inhibitory receptors, etc). A panel of primers and probes specific for the following 20 genes was used: IL-1a, IL-1b, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, IFN-g, TGFb, TNF-a, TNF-b, RANTES, MCP1, MIP1b, IP-10, CTLA-4, CD28, CD80 and CD86. In the MDR-TB group, the following cytokine genes were found significantly up-regulated: IFN-g (1.8 logs; p<0.001), IL-10 (2.3 logs; p<0.05), IL-2 (3.0 logs; p<0.001), IL-4 (3.4 logs; p<0.00001) and TNF-b (1.1 logs; p<0.05). A trend for IL-6 up-regulation (1.0 logs) was also observed (p=0.054). A slight down-regulation of IL-1b was noticed although lacking statistic significance. Additional genes with important immunologic functions showed altered levels of mRNA (e.g. CD28, RANTES, CD86). Taken together these results corroborate the concept of chronic immune activation ongoing in MDR-TB patients. However, the gene expression of inhibitory Th1-response cytokines (v.g., IL-10 and IL-4) suggest the maintenance of an ineffective immune response in MDR tuberculosis. Key-Words: MDR tuberculosis; immune response genes; gene expression profiling; real-time system PCR. This work was partially supported from the Funding Committee for Health Care Research from the Portuguese Health Ministry Office.
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Vol. IX N.º 5
Setembro/Outubro 2003