Évaluation des altérations endothéliales et cardiaques dans un modèle murin de purpura thrombotique thrombocytopénique

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68e Congrès de la Société franc¸aise de médecine interne, Saint-Malo, 12–14 décembre 2013 / La Revue de médecine interne 34S (2013) A22–A79

des marqueurs fibrotiques et des paramètres de remodelage de la matrice extracellulaire. De manière très intéressante, une réduction de la fibrose cutanée et pulmonaire est obtenue lors d’une injection de cellules souches mésenchymateuses à j21, lorsque la fibrose tissulaire est déjà bien installée. Ceci témoigne donc d’un effet curatif des cellules souches mésenchymateuses dans la sclérodermie systémique. Conclusion.– Cette étude préclinique montre un effet bénéfique des cellules souches mésenchymateuses sur la fibrose cutanée et pulmonaire dans la sclérodermie systémique murine. Cet effet est noté lors d’une injection de 2,5 × 105 cellules à j21, temps où la fibrose est déjà bien installée. Ce résultat, obtenu dans une approche curative, est très encourageant dans la perspective d’une application clinique chez l’Homme. http://dx.doi.org/10.1016/j.revmed.2013.10.072 CO058

Évaluation des altérations endothéliales et cardiaques dans un modèle murin de purpura thrombotique thrombocytopénique M. Le Besnerais a , J. Favre b,c , C. Denis d , P. Mulder b , L. Nicol b , B. Lenormand e , H. Levesque a , P. Coppo f , A. Veyradier g , A. Schiviz h , V. Richard b , Y. Benhamou a a Département de médecine interne, CHU de Rouen, Rouen, France b Inserm U1096, Rouen, France c Institut de recherche et d’innovation en biomédecine, CHU de Rouen, Rouen, France d Inserm U770, hôpital Bicêtre, Le-Kremlin-Bicêtre, France e Hématologie biologique et hémostase, CHU de Rouen, Rouen, France f Centre de référence des micro-angiopathies thrombotiques, hôpital Saint-Antoine, Paris, France g Service d’hématologie biologique, hôpital Antoine-Beclère, Clamart, France h Gmbh, Baxter Innovation, Vienne, Autriche Introduction.– Le purpura thrombotique thrombocytopénique (PTT) est une microangiopathie thrombotique résultant du défaut de clivage des multimères de facteur Von Willebrand (FVW) par la métalloprotéase ADAMTS13. Différents arguments sont en faveur d’un rôle clé de l’endothélium dans la formation d’agrégats plaquettaires entrainant des défaillances d’organes de sévérité variable. Cependant la nature de l’atteinte endothéliale reste à définir et semble limitée à certains territoires vasculaires. Parmi eux, l’atteinte cardiaque serait responsable d’une incidence élevée de la morbi-mortalité et n’a été que rarement étudiée. Matériels et méthodes.– Des souris B6.129 témoins (WT) et déficientes en ADAMTS 13 (KO) ont été injectées avec du FVW recombinant (2000 ui/kg). Toutes les expérimentations ont été faites sur n = 6 souris. L’étude de la fonction endothéliale ex-vivo a été réalisée sur des segments d’artères coronaires, mésentériques et rénales à l’aide d’un myographe de Mulvany en mesurant les relaxations endothélium et monoxyde d’azote (NO) dépendantes à l’acétylcholine ainsi que les relaxations endothélium indépendantes au nitroprussiate de sodium (NPS). Les artères ont également été incubées avec de la L Nitro-arginine (LNNA), un inhibiteur de la synthèse du NO afin d’évaluer l’implication d’autres facteurs que le NO. Des évaluations biologiques (plaquettes, hémoglobine, schizocytes), fonctionnelles (échographie cardiaque) et morphologiques (immuno-histochimie myocardique) ont été effectuées. Résultats.– À j1 de l’injection, les souris KO + FVW développent rapidement une thrombopénie (41,8 G/L ± 6,9 G/L) comparativement aux KO (1038 G/L ± 25 G/L) aux WT + FVW (480,7 G/L ± 86,5 G/L) et aux WT (1118,6 G/L ± 160,8 G/L) ; p < 0,001 et une anémie

hémolytique mécanique (40,9 % ± 0,8 % vs KO : 50,5 % ± 2,3 % ; WT + VWF : 51,3 % ± 3,8 % et WT : 56,1 % ± 3 % ; p < 0,05) permettant de confirmer le modèle de microangiopathie thrombotique. Également à j1 de l’injection du FVW, les souris KO + FVW présentent une dysfonction systolique objectivée par une baisse de la fraction d’éjection du ventricule gauche (73,8 % ± 2,7 % vs KO : 84,4 % ± 0,7 %, WT + VWF : 86,6 % ± 1,3 % et WT : 86,8 % ± 1,3 % ; p < 0,01), et de l’index cardiaque (1,21 mL/min/g ± 0,09 vs KO : 1,62 mL/min/g ± 0,11, WT + VWF : 1,70 mL/min/g ± 0,14 et WT : 1,66 mL/min/g ± 0,1 ; p < 0,05). À j2, l’analyse histologique cardiaque révèle la présence de nécrose myocardique associée à un infiltrat lymphocytaire et à de l’œdème interstitiel uniquement dans le groupe KO + FVW. Par ailleurs, la relaxation en réponse à l’acétylcholine est diminuée au niveau mésentérique (51,1 % ± 14,8 % vs KO : 92,4 % ± 2,4 %, WT + VWF : 94,4 % ± 1,6 % ; p < 0,05 et WT : 96,5 % ± 2,3 % ; p < 0,001) et coronaire (61,7 % ± 12,4 % vs WT + VWF : 89,9 % ± 6,3 % et WT : 96,8 % ± 0,9 % ; p < 0,05), sans atteinte rénale. De plus, les relaxations coronaires sous-LNNA sont particulièrement altérées (19,3 % ± 3,7 % vs WT + VWF : 70,2 % ± 4,7 % ; p < 0,001) et les réponses relaxantes au NPS sont légèrement atténuées (47,8 % ± 13,8 % vs WT + VWF : 79,1 % ± 13,3 % et WT : 80,2 % ± 7,2 % ; p < 0,05), suggérant l’existence d’une dysfonction vasculaire majeure au niveau coronaire. Conclusion.– Ce travail démontre dans un modèle de PTT induit l’implication du cœur comme cible privilégiée. Nous avons pour la première fois objectivée une dysfonction endothéliale marquée au niveau des territoires mésentérique et coronaire renforc¸ant le besoin d’explorer les mécanismes impliqués dans cette atteinte vasculaire précoce pouvant être à l’origine de la défaillance d’organe au cours de cette pathologie. http://dx.doi.org/10.1016/j.revmed.2013.10.073 CO059

Lupus systémique : comme les cellules dendritiques, les cellules NK s’activent via Toll-like recepteur 9

B. Hervier a , M. Pha b , M. Miyara c , F. Cohen-Aubart d , M. Hie d , P. Debre e , Z. Amoura f , V. Vieillard g a Service de médecine interne, CHU Pitié-Sapétrière, Paris, France b Service de médecine interne, CHU de Reims, Reims, France c Laboratoire immunochimie, Pitié-Salpêtrière, AP–HP, Paris, France d Service de médecine interne 2, centre de référence du lupus, Pitié-Salpêtrière, AP–HP, Paris, France e Umrs 945, Inserm & Upmc, Paris, France f Service de médecine interne 2, centre de référence lupus et Sapl, groupe hospitalier Pitié-Salpétrière, Paris, France g Umrs 945, Inserm &Amp, Upmc, Paris, France Introduction.– La physiopathologie du Lupus systémique (LS) est complexe. L’implication des acteurs de l’immunité innée, comme les cellules Natural Killer (NK), a pu être démontrée. Mais les mécanismes d’activation des NK au cours du LS restent mal compris. Au cours du LS, la voie Toll-like recepteur 9 (TLR9), dont les ligands correspondent à des petits fragments d’ADN hypométhylés, a été impliquée dans l’activation des cellules dendritiques plasmacytoïdes. Or TLR9 est également exprimé par les cellules NK, permettant par analogie d’envisager le rôle potentiel de cette voie (NK/TLR9) dans l’activation des NK au cours du LS. Patients et méthodes.– De janvier à août 2013, 36 patients ont été étudiés (F/H ratio = 35 ; âge médian 34 ans, 18-74) et comparés à 12 sujets témoins. Des analyses phénotypiques (marquages CD3, CD56, CD69, TLR9, NKG2A, CD16, CD226 en cytométrie en flux) et fonctionnelles (cytotoxicité directe en présence de cellules K562 : CD107a, productions d’IFNg et TNFa) des cellules NK ont été réalisées en l’absence ou en présence d’un ligand de TLR9 d’origine bactérienne (CpG ODN A). Les résultats ont été évalués à la