Dosage des cerebrosides et sulfatides cerebraux par chromatographie en couche mince (technique sans élution préalable)

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NOTES

CHROM.5313 Dosage

des

couche

mince

ceiebrosides (technique

et

sulfatides

sans Qlution

cerebraux

par

chromatographie

en

pr6alable)

La chromatographie en couche mince est couramment utilisee dans l’analyse des lipides cerebraux. Sur le plan quantitatif ce procede n&essite generalement entre le stade de la migration et celui di.r dosage proprement dit une Glution des lipides. Nous avons mis au point pour les cerebrosides et sulfatides cercibraux une technique de dosage par chromatographie en couche mince oh l’evaluation quantitative se fait sans elution prealabl e. Nous avons compare notre technique Q celles oil l’on utilise l’elution prealabl.el. .ii!ntbricl et techniqzces Le melange de cerebrosides et sulfatides utilise a 8te prdpare dans notre laboratoire *h partir de cerveaux de lapins. La chromatographie en couche mince est effect&e sur des plaques de Silica Gel G Merck. Gpaisseur de la couche de Silica Gel G, 0.25 mm; solvant de migration, chloroformel-methanol-acide acetique-eau (5 : I : z : I : 0.5) ; depbt sur IO cm du n&nge cerebrosides et sulfatides (correspondant a 200 pg de galactose). Apres migration et se&age, les zones correspondant & l’emplacement des cerebrosides et sulfatides sont grattees. Ces zones’sont soit trait&es separement pour doser les sulfatides et les cerebrosides, soit melangees pour etialuer le melange cerebrasides-sulfatides (ce que nous avons fait dans ce travail). Les cerebrosides et sulfatides sont hydrolyses par de l’acide sulfurique 6 iV a IOOO en pr&ence de la silice. La silice est ensuite Bliminee par centrifugation. Pour la suite du dosage nous utilisons la technique de SVENNERHOLM~ l&g&ement

modifide.

192

122

201

203 194 190 =92 =92 193

114

135 134 135

176 174 rS5 201

123

I82

202

X3.5 132 131

IS5 IS0 177

m=12S

1)L -= IS5 a = g.G p = go& 100.5~jo

126

200 202

m 3 196 a = 5.1 p = gGBrory/&

J.

Chrontatogr.,

.-

1: z

57 (1971)

187

57;2&67*5'f

448-44g

449

NOTES

Pour comparer nos resultats avec ceus obtenus par elution nous avons utilis6 cleus syst&mes cl’elution: (I) Ablution No. I : elutions successives par chloroforme(2 : I) (2 fois) ; (2) elution No. 2: acetom! (I : I), acetone, cbloroforme-m8tbanol klution par chl.oroforme-m&l1anol-eau (2: I :o.I) (3 fois).

Nous rapportons clans le Tableau I les resultats clue nous avons obtenus. Ces rkultats montrent : (I) clue la technique sans elution est indiscutablement la meilleure; (2) clue le rendement des techniques par Glution varie en fonction des solvants utilises pour lAJ61ution. Nous avow soumis ces resultat A. l’analyse statistique: l’etude des variances estimees h pariir de ces Mlantillons espdrimentawx montre qu’elles ne different pas significativement pour le risque de 5 %. La comparaison des moyennes au moyen de l’analyse de la variance montre que les moyennes different significativement dans leur ensemble pour le risque de I O/,. En conclusion, notre technique de dosage sans Ablution prealable des cerebrosides et sulfatides presente un svantage certain sur les techniques avec elution: elle est plus simple, plus rapide, son rendement est meilleur et lcs rdsultats qu’ellc fournit sont plus hoinogenes. de IiecltercIaes Neawo-Biologiqaces de l’I.N.S.E.II.M., 280, Boulevard de Stc Margacerite, x3-Mnvse~ille 1.Xe (France) Um?&

.*

f * Cllr~om-Lfogv.,

‘E. MESDJIAN*

57 (1971) 445-449