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Imaging and relative quantification of15n and14n by SIMS microscopy in plant samples
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32c Colloque SFME, Rouen-Mont St Aignan, juillet 1992
IMAGING AND RELATIVE QUANTIFICATION OF 15N AND 14N BY SIMS MICROSCOPY IN PLANT SAMPLES. GOJON Alain 1, GRIGNON Nicole 1, LEFEBVRE Fabrice2, RIPOLL Camille 2 et THELLIER Michel2.
IBiochimie Physiologie V~g~tales, INRA/ENSA-M CNRS URA 573, Montpellier, 2physiologie Cellulaire, CNRS URA 203, Universit~ de Rouen, Mont-Saint-Aignan. Several experiments were performed to investigate the usefulness of the SIMS microscopy in order to characterize the distribntion of both 15N and 14N in plant samples, and to quantify the 15N/14N ratio at the cell level. SIMS microanalysis of the secondary ions 12CI5N- and 12C14N-allowed us to vizualize the distribution of both isotopes in resin-embedded leaf sections from 15N-labelled soybean plants. The measurement of the 1 5 N / 1 4 N ratio may theoretically be achieved by SIMS. To check this possibility, biological standards with known 1 5 N / 1 4 N ratios were obtained by continuously growing soybean plants on 15Nlabelled nutrient solutions. SIMS measurements were reproducible and highly correlated to those performed by classical mass spectrometry. In addition, three other standards were made with yeast cells. When the cells from these standards were mixed toghether, 15N and 14N imaging by SIMS allowed the recognition of the three types of cells. The results from these experiments indicate that SIMS microscopy may be a powerfull tool for dynamic studies of the partitioning of nitrogen in plant samples.
ASTHENOSPERMIE
ET FLAGELLE COURT
A. MANSAT, C. LAGORCE, L. BUJAN, R. MIEUSSET, M. SARPENTIER et F. PONTONNIER
Laboratoire de Biologie de la Reproduction, CECOS Midi-Pyrdn&es ; Laboratoire de Cytologie et de Biologie de la Reproduction, H6pital de la Grave, place Lange, 31052 TOULOUSE cedex Les auteurs pr~sentent deux cas concernant deux hommes ages respectivement de 33 et 29 ans, consultant pour infertilit6 primaire. Ces h o m m e s p r e s e n t a i e n t tous deux une asth6nospermie severe isolee. Le spermocytogramme mettait en evidence une importante teratospermie avec pourcentage eleve d'anomalies du flagelle (flagelle ecourt~ et calibre irr6gulier). Une etude ultratructurale du sperme ~tail effectuee. Dans les deux cas elle montraiI une piece interm~diaire augmentee de Iongueur avec une piece principale anormalement courte et des anomalies axonemales predominant sur la piece principale.
ALTERATIONS ULTRASTRUCTURALES IDENTIQUES DES FLAGELLES DES SPERMATOZOIDES DE TROIS FRERES STERILES
ETUDE COMPAREE DU MEME SPERMATOZOIDE EN MICROSCOPIE OPTIQUE ET EN MICROSCOPIE ELECTRONIQUE A BALAYAGE
M.-C. CLAVEQUIN, D. LENYS, J.-L. BRESSON et C. ROUX
A. SAUVALLE et J. IZARD
CECOS BESANCON, Laboratoire de Cytologie-Gen~tique, place St Jacques, 25000 Besangon
Laboratoire d'Histo/ogie -Unit& de Formation et de Recherche M~dicale, CHU C6te de Nacre, 14032 CAEN cedex
Une asthenospermie majeure associ6e & une t~ratospermie concernant essentiellement des anomalies flagellaires a 6t6 observ~e chez trois fr6res, ayant consult6 pour infertilitY. Les etudes ultrastructurales ~'ont permis de constater au niveau des spermatozo'~'des de chacun d'eux le m~me type d'anomalies de la piOce intermediaire et de la piece principale des flagelles (duplication ou triplication fr~quente des c o m p l e x e s microtubulaires, remaniements multiples des structures fibreuses). Ces anomalies peuvent ~tre raccord~es directement & la st~rilit~ de ces trois patients.
Le rep6rage est d'autant plus difficile que les spermatozo'fdes sont des cellules de petite faille, ce qui exige une grande precision.
Un quatrieme, fr~re, dont le sp.ermogramme n'a pas ~t6 etudie, a eu trois enfants dont deux sont morts en bas age de malformations cardiaques cong6nitales. Les caryotypes des quatres fr6res sont normaux. Cette observation familiale pourrait toutefois correspondre & un exemple d'une situation rarement observee d'alteration g~nOtiquement d6termin6e de la structuration flagellaire.
lOa
Notre technique consiste ~ graver un quadrillage microscopique avec un stylo-diamant ~ la surface d'une lame pour microscopie (76 x 26 x 1 mm). Des lignes horizontales et verticales sont grav6es, d~limitant 100 petits carr~s d'l mm 2 environ. Un rep~re est grav~ dans un angle du quadrillage. De plus, il est n6cessaire de pr~-inciser la lame pour r~duire la taille des chambres de I'appareil ~ point critique et du microscope balayage. Une r~plique de la grille est dessin~e sur papier notant les coordonnees par un chiffre et une lettre. Par comparaison avec les autres techniques publiees, la confection de la grille est simple et ne n~cessite aucun materiel special. Elle reste trOs precise sans le rep6rage des cellules de petites dimensions. C'est la technique la plus simple et la moins co0teuse proposer aux microscopistes. Aussi la Revue Microscopy and Analysis nous a-t-elle demand~ de la presenter dans sa publication de mars 1991.
32c Colloque SFME, Rouen-Mont St Aignan, juillet 1992
IMAGING AND RELATIVE QUANTIFICATION OF 15N AND 14N BY SIMS MICROSCOPY IN PLANT SAMPLES. GOJON Alain 1, GRIGNON Nicole 1, LEFEBVRE Fabrice2, RIPOLL Camille 2 et THELLIER Michel2.
IBiochimie Physiologie V~g~tales, INRA/ENSA-M CNRS URA 573, Montpellier, 2physiologie Cellulaire, CNRS URA 203, Universit~ de Rouen, Mont-Saint-Aignan. Several experiments were performed to investigate the usefulness of the SIMS microscopy in order to characterize the distribntion of both 15N and 14N in plant samples, and to quantify the 15N/14N ratio at the cell level. SIMS microanalysis of the secondary ions 12CI5N- and 12C14N-allowed us to vizualize the distribution of both isotopes in resin-embedded leaf sections from 15N-labelled soybean plants. The measurement of the 1 5 N / 1 4 N ratio may theoretically be achieved by SIMS. To check this possibility, biological standards with known 1 5 N / 1 4 N ratios were obtained by continuously growing soybean plants on 15Nlabelled nutrient solutions. SIMS measurements were reproducible and highly correlated to those performed by classical mass spectrometry. In addition, three other standards were made with yeast cells. When the cells from these standards were mixed toghether, 15N and 14N imaging by SIMS allowed the recognition of the three types of cells. The results from these experiments indicate that SIMS microscopy may be a powerfull tool for dynamic studies of the partitioning of nitrogen in plant samples.
ASTHENOSPERMIE
ET FLAGELLE COURT
A. MANSAT, C. LAGORCE, L. BUJAN, R. MIEUSSET, M. SARPENTIER et F. PONTONNIER
Laboratoire de Biologie de la Reproduction, CECOS Midi-Pyrdn&es ; Laboratoire de Cytologie et de Biologie de la Reproduction, H6pital de la Grave, place Lange, 31052 TOULOUSE cedex Les auteurs pr~sentent deux cas concernant deux hommes ages respectivement de 33 et 29 ans, consultant pour infertilit6 primaire. Ces h o m m e s p r e s e n t a i e n t tous deux une asth6nospermie severe isolee. Le spermocytogramme mettait en evidence une importante teratospermie avec pourcentage eleve d'anomalies du flagelle (flagelle ecourt~ et calibre irr6gulier). Une etude ultratructurale du sperme ~tail effectuee. Dans les deux cas elle montraiI une piece interm~diaire augmentee de Iongueur avec une piece principale anormalement courte et des anomalies axonemales predominant sur la piece principale.
ALTERATIONS ULTRASTRUCTURALES IDENTIQUES DES FLAGELLES DES SPERMATOZOIDES DE TROIS FRERES STERILES
ETUDE COMPAREE DU MEME SPERMATOZOIDE EN MICROSCOPIE OPTIQUE ET EN MICROSCOPIE ELECTRONIQUE A BALAYAGE
M.-C. CLAVEQUIN, D. LENYS, J.-L. BRESSON et C. ROUX
A. SAUVALLE et J. IZARD
CECOS BESANCON, Laboratoire de Cytologie-Gen~tique, place St Jacques, 25000 Besangon
Laboratoire d'Histo/ogie -Unit& de Formation et de Recherche M~dicale, CHU C6te de Nacre, 14032 CAEN cedex
Une asthenospermie majeure associ6e & une t~ratospermie concernant essentiellement des anomalies flagellaires a 6t6 observ~e chez trois fr6res, ayant consult6 pour infertilitY. Les etudes ultrastructurales ~'ont permis de constater au niveau des spermatozo'~'des de chacun d'eux le m~me type d'anomalies de la piOce intermediaire et de la piece principale des flagelles (duplication ou triplication fr~quente des c o m p l e x e s microtubulaires, remaniements multiples des structures fibreuses). Ces anomalies peuvent ~tre raccord~es directement & la st~rilit~ de ces trois patients.
Le rep6rage est d'autant plus difficile que les spermatozo'fdes sont des cellules de petite faille, ce qui exige une grande precision.
Un quatrieme, fr~re, dont le sp.ermogramme n'a pas ~t6 etudie, a eu trois enfants dont deux sont morts en bas age de malformations cardiaques cong6nitales. Les caryotypes des quatres fr6res sont normaux. Cette observation familiale pourrait toutefois correspondre & un exemple d'une situation rarement observee d'alteration g~nOtiquement d6termin6e de la structuration flagellaire.
lOa
Notre technique consiste ~ graver un quadrillage microscopique avec un stylo-diamant ~ la surface d'une lame pour microscopie (76 x 26 x 1 mm). Des lignes horizontales et verticales sont grav6es, d~limitant 100 petits carr~s d'l mm 2 environ. Un rep~re est grav~ dans un angle du quadrillage. De plus, il est n6cessaire de pr~-inciser la lame pour r~duire la taille des chambres de I'appareil ~ point critique et du microscope balayage. Une r~plique de la grille est dessin~e sur papier notant les coordonnees par un chiffre et une lettre. Par comparaison avec les autres techniques publiees, la confection de la grille est simple et ne n~cessite aucun materiel special. Elle reste trOs precise sans le rep6rage des cellules de petites dimensions. C'est la technique la plus simple et la moins co0teuse proposer aux microscopistes. Aussi la Revue Microscopy and Analysis nous a-t-elle demand~ de la presenter dans sa publication de mars 1991.