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Informations réactifs : DHEA, DHEA-sulfate, 17α-OH progestérone
Immuno-analyse & Biologie spécialisée 17 (2002) 348–355 www.elsevier.com/locate/immbio
Techniques au quotidien
Informations réactifs : DHEA, DHEA-sulfate, 17α-OH progestérone Reactive informations: DHEA, DHEA sulfate, 17α-OH progesterone L. Nonnenmacher * Service de médecine nucléaire, GH Cochin St-Vincent-de-Paul, 27, rue du Fg St-Jacques, 75679 Paris cedex 14, France Reçu le 1 janvier 2002; accepté le 2 janvier 2002
Cette rubrique est alimentée par les informations recueillies auprès de l’Agence française de sécurité sanitaire des produits de santé (direction de l’évaluation des dispositifs in vitro, département diagnostic in vitro, unité enregistrement des réactifs) et des industriels. Les données fournies, qui sont extraites de la notice d’utilisation des réactifs, ne prétendent pas à l’exhaustivité et ne comportent aucun jugement sur la valeur intrinsèque des trousses. Pour chaque réactif, le contenu du texte a été soumis à l’industriel pour vérification avant publication. En outre, la Rédaction s’engage à publier un additif ou un rectificatif dans le cas d’une erreur ou d’une omission préjudiciable à un fabricant.
1. La déhydroépiandrostérone (DHEA) et son sulfate (S-DHEA) La DHEA est synthétisée dans la corticosurrénale à partir de la 17-hydroxy-pregnénolone sous l’action de la C17–20 desmolase. C’est un ∆5-stéroïde à faible pouvoir androgénique, qui peut être métabolisé en androstérone (∆5stéroïde), soit en androstènedione (∆4-stéroïde) sous l’action de la 3∆-ol-deshydrogénase. La DHEA circule liée à l’albumine. Son taux présente un rythme circadien qui est corrélé à celui du cortisol. Elle est convertie en forme sulfatée (S-DHEA), sous l’action d’une sulfotransférase, au
Abréviations: NA, Non Applicable; abs. lum., absorption lumineuse; émis. lum., émission lumineuse; Ryt., rayonnement; PAL, Phosphatase alcaline; HRP, Peroxydase de raifort; BSA, sérum albumine bovine; SAH, sérum albumine humaine; CE, marquage selon la directive 98/79/CE; [1] Origine, E (Extraction), S (Synthèse), R (Recombinant); IRP, préparation internationale de référence; [2] Nature, APC (Polyclonal), AMC (Monoclonal), OC (Oligoclonal). * Auteur correspondant. Adresse e-mail : [email protected] (L. Nonnenmacher). © 2002 Éditions scientifiques et médicales Elsevier SAS. Tous droits réservés. PII: S 0 9 2 3 - 2 5 3 2 ( 0 2 ) 0 1 2 2 2 - X
niveau des glandes endocrines stéroïdogènes, du foie, du rein, des surrénales, de l’intestin et à un niveau moindre du système nerveux central et des muscles. La DHEA est produite en faible quantité, de l’ordre de 2 à 4 mg par jour, sa demi-vie estimée est de 15 à 30 minutes. Le S-DHEA est sécrété à hauteur de 20 à 25 mg, sa demi-vie est de 7 à 10 heures. En conséquence, les concentrations plasmatiques de ces deux substances sont très différentes, de l’ordre du ng/ml pour la DHEA et du µg/ml pour le S-DHEA. Le dosage du S-DHEA est direct par radio-immunologie, celui du DHEA nécessite une extraction préalable par un solvant organique. Les taux de DHEA et de S-DHEA sont élevés à la naissance, puis diminuent au cours des 6 premiers mois pour devenir très bas. Ils recommencent à s’élever dès 6 à 7 ans, chez le garçon comme chez la fille, pour atteindre un maximum entre 25–30 ans, puis ils diminuent de façon régulière pour atteindre une concentration sérique inférieure à 20 % au cours de la huitième et la neuvième décennies. Le dosage du S-DHEA est intéressant à l’état basal : • Lors de l’exploration des pubertés précoces ou retardées, pour mettre en évidence un dysfonctionnement de production surrénaliennes des androgènes. • Lors des explorations des hyperandrogènies : on note des taux très importants lors des tumeurs virilisantes de la surrénale. Des taux intermédiaires dans le syndrome des ovaires polykystiques ou les déficits enzymatiques surrénaliens. Le dosage de la forme libre du DHEA n’est pas informatif sur un prélèvement isolé dans la majorité des cas, sauf si la valeur est très élevée. En effet, le taux de DHEA est très influencé par une situation de stress. Il est donc préférable de réaliser le dosage du DHEA après stimulation par le test au Synacthène Immédiatt. Le taux de DHEA libre augmente à T + 60 mn de 50 à 100 % par rapport au taux de
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base : une valeur supéreure à 20 ng/ml (70 nmol/ml) est l’un des 4 critères requis pour le diagnostic des blocs enzymatiques en 3β-ol-deshydrogénase. Le S-DHEA n’est pas stimulable par le test au Synacthène Immédiatt. Le facteur de conversion des ng/ml en nmol/l pour les différentes trousses est de : • pour la DHEA : ng/ml × 3,47 = nmol/l ; • pour le S-DHEA : ng/ml × 0,027 = nmol/l.
2. La 17α-hydroxyprogestérone (17α-OHP) La 17α-OHP est un stéroïde produit dans les glandes corticosurrénales et les gonades. Comme les autres stéroïdes, il est synthétisé à partir du cholestérol en plusieurs étapes d’enzymes inter dépendantes. La première étape est la conversion du cholestérol en prégnénolone, qui est stimulée par l’ACTH. La prégnénolone est ensuite convertie en progestérone ou en 17-hydroxyprégnénolone, tous deux précurseurs de la 17α-OHP. Dans les surrénales, la 17αOHP, se convertie ensuite en cortisol sous l’action séquentielle de 21-hydroxylase et de la 11-hydroxylase. Dans les surrénales et dans les ovaires la 17α-OHP peut aussi être convertie sous l’action de la 17,20-lyase en ∆4androstenedione, précurseur de la testostérone et de l’estradiol. La 17α-OHP n’a pas d’activité biologique connue. La 17α-OHP est dosée par méthode radio-immunologique après extraction ou non par un solvant organique. Les valeurs usuelles varient selon l’âge, le sexe et la phase du cycle menstruel. Il est préférable d’effectuer le prélèvement le matin car il existe une variation nycthémère en fonction de l’ACTH, avec des pics observés le matin et un nadir durant la nuit. Le sujet doit être au repos, car le stress peut augmenter les taux. Chez le sujet sain, après stimulation par le test au Synacthène Immédiatt, la réponse au temps T + 60 min est de l’ordre de 50 à 300 % du taux de base.
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L’intérêt du dosage de la 17α-OHP réside dans l’exploration des hyperandrogénies dues à un déficit en 21 ou en 11-hydroxylase. • Le déficit en 21-hydroxylase est une maladie génétique, autosomique récessive, présentant un très grand polymorphisme en fonction du degré de l’atteinte enzymatique. Il se caractérise par une accumulation, en amont du bloc, de 17α-OHP qui sera transformée en androgènes (androstènedione, testostérone) et en 21désoxycortisol. En aval du bloc, les synthèses de cortisol et d’aldostérone sont insuffisantes, entraînant une synthèse accrue d’ACTH provoquant l’hyperplasie des surrénales. Il existe deux formes de déficit en 21-hydroxylase : + Le déficit complet ou forme précoce qui se révèle dès la naissance, 80 % des cas sont reconnus avant l’âge de 3 ans. + Le déficit à révélation tardive ou déficit incomplet qui touche 0,5 à 2 % des sujets avec une prévalence dans certains groupes ethniques. • Le déficit en 11-hydroxylase est plus rare. On observe, en amont, une accumulation du 11-désoxycortisol et de la 17α-OHP. Les taux observés de 17α-OHP sont généralement plus bas qu’au cours du déficit en 21hydroxylase. Le facteur de conversion des ng/ml en nmol/l est identique pour les différentes trousses : ng/ml × 3,03 = nmol/l.
Remerciements La Rédaction remercie Mme Hélène Delattre (Agence française de sécurité sanitaire des produits de santé) Direction de l’évaluation des dispositifs in vitro, département diagnostic in vitro, unité enregistrement des réactifs pour sa collaboration.
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DHEA
Beckman Coulter Immunotech
Brahms France
Dénomination commerciale N° d’enregistrement AFSSAPS Année d’enregistrement Automate dédié Méthode manuelle Détecteur final Signal détecté Marqueur Nature du spécimen analysé Anticoagulant(s) recommandé(s) Volume de la prise d’essai (µl) Volume mort de l’automate (µl) Calibrateurs Origine [1] Matrice des calibrateurs autres que le point zéro Unités utilisées Concentration du dernier calibrateur Limite de détection annoncée Courbe de calibration mémorisable Ajusteurs de recalibration Anticorps Si compétition : Nature de l’anticorps [2] Origine de l’anticorps Autres éléments Support utilisé Matrice utilisée pour les tests de dilution 1er résultat obtenu en (min) Temps d’incubation (min) Température d’incubation (°C) Protocole expérimental : – agitation – lavage – séparation (type) Limites ou précautions d’utilisation signalées
DHEA J 5911 0 1998 Non Oui Compteur gamma Ryt. 125 I Sérum ou plasma EDTA, héparine 100* NA
Dehydroepiandrosterone (DHEA) RIA K 8759 1 1995 Non Oui Compteur gamma Ryt. 125 I Sérum ou plasma EDTA 100 NA
Tampon + BSA ng ml–1 30 0,3 NA NA
S Tampon + BSA ng ml–1 30 0,01 NA NA
AMC
APC
Souris
Lapin
Tube revêtu Tampon + BSA
Tampon + BSA
60 37
60 + 15 + 20 37 et (18–25)
Non Non Aspiration Échantillons fortement : – Ictériques – Hémolysés Éviter les décongélations et recongélations répétées
Non Non Centrifugation + décantation Échantillons fortement : – Lipémiques – Hémolysés Éviter les décongélations et recongélations répétées
* Après extraction de l’échantillon par l’éther éthylique.
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S-DHEA
Beckman Coulter Immunotech
Brahms France
Cis BioInternational
Dade Behring
Dénomination commerciale N° d’enregistrement AFSSAPS Année d’enregistrement Automate dédié Méthode manuelle Détecteur final Signal détecté Marqueur Nature du spécimen analysé Anticoagulant(s) recommandé(s) Volume de la prise d’essai (µl) Volume mort de l’automate (µl) Calibrateurs Origine[1] Matrice des calibrateurs autres que le point zéro Unités utilisées Concentration du dernier calibrateur Limite de détection annoncée Courbe de calibration mémorisable Ajusteurs de recalibration Anticorps Si compétition : Nature de l’anticorps [2] Origine de l’anticorps Autres éléments Support utilisé Matrice utilisée pour les tests de dilution 1er résultat obtenu en (min) Temps d’incubation (min) Température d’incubation (°C) Protocole expérimental : – agitation – lavage – séparation (type) Limites ou précautions d’utilisation signalées
DHEA-Sulfate G 2751 1 1989 Non Oui Compteur gamma Ryt. 125 I Sérum ou plasma EDTA, héparine 25 NA
ActiveTMDHEA-S EIA M 1988 2 1997 Non Oui Photomètre Abs.lum. HRP Sérum NA 50 NA
DHEA S-CT P 4344 2 1998 Non Oui Compteur gamma Ryt. 125 I Sérum ou plasma EDTA, héparine 25 NA
Coat-A-Count DHEA-SO4 E 9440 0 1988 Non Oui Compteur gamma Ryt. 125 I Sérum ou plasma EDTA 50 NA
Sérum humain
Tampon protéique
S Sérum humain
Matrice protéique humaine
µg dl–1 1000
ng ml–1 8000
µmol. l–1 30
µg dl–1 1000
6 NA
15 NA
0,03 NA
1,1 NA
NA
NA
NA
NA
AMC Souris
APC Chèvre
APC Lapin
APC
Tube revêtu Sérum humain
Puits recouverts Tampon protéique
Tube revêtu Sérum humain
Tube revêtu Matrice protéique humaine
30 37
60 + 15 (18–25)
60 37
30 37
Non Non Aspiration Échantillons fortement : – Lipémiques – Hémolysés – Ictériques
Oui Oui Aspiration Échantillons fortement : – Lipémiques – Hémolysés – Ictériques Éviter les décongélations et recongélations répétées
Non Oui Aspiration Échantillons fortement : – Lipémiques Citrate à proscrire
Non Non Décantation Éviter les décongélations et recongélations répétées
Éviter les décongélations et Éviter les décongélations et recongélations répétées recongélations répétées
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S-DHEA
DPC France
DPC France
LabBo Immunosytèmes Nichols Institute
Roche Diagnostics
Dénomination commerciale N° d’enregistrement AFSSAPS Année d’enregistrement Automate dédié Méthode manuelle Détecteur final Signal détecté Marqueur Nature du spécimen analysé Anticoagulant(s) recommandé(s) Volume de la prise d’essai (µl) Volume mort de l’automate (µl) Calibrateurs Origine [1] Matrice des calibrateurs autres que le point zéro Unités utilisées Concentration du dernier calibrateur Limite de détection annoncée Courbe de calibration mémorisable Ajusteurs de recalibration Anticorps Si compétition : Nature de l’anticorps [2] Origine de l’anticorps Autres éléments Support utilisé
Immulite DHEA-SO4
S-DHEA SR1 M 1225 2
Nichols Advantage DHEA-S T 8155 2
Elecsys DHEA-S
M 2100 2
Immulite 2000 DHEASO4 M 2100 2
1995 Immulite Non Luminomètre Émis. lum. PAL Sérum
1995 Immulite 2000 Non Luminomètre Émis. lum. PAL Sérum
1994 Analyseurs SR1 / SR1+ Non Photomètre Émis. lum. PAL Sérum ou plasma
1999 Advantaget Non Luminomètre Émis. lum. Acridinium Sérum
2000 Elecsys 1010/2010 Non Luminomètre Émis. lum. Ruthénium Sérum ou plasma
NA
NA
Héparine
NA
EDTA, héparine, citrate
5
5
200
15
15
100
250
Sérum humain
Sérum humain
Sérum humain
µg dl–1 1000
µg dl–1 1000
µg ml–1 10
µg dl–1 800
µg dl–1 1000
2
1,4
0,05
1
0,1
Oui
Oui
Oui
Oui
Oui
Oui
Oui
Oui
Oui
Oui
APC Lapin
APC Lapin
APC Lapin
APC Chèvre
APC Lapin
Bille recouverte
Bille recouverte
Particules magnétiques
Particules magnétiques
Sérum humain
Sérum humain
Sérum humain
Microparticules magnétiques Sérum humain
40
35
70
30
30
20 + 10
18
37
70
37
37
(18–25)
Non Oui Centrifugation axiale Présence d’anticorps hétérophiles Éviter les décongélations et recongélations répétées
Non Oui Centrifugation axiale Présence d’anticorps hétérophiles Éviter les décongélations et recongélations répétées
Non Oui Aimantation Échantillons fortement : – lipémiques – hémolysés – ictériques
Non Oui Aimantation Échantillons fortement : – lipémiques – hémolysés
Non Oui Aimantation Présence d’anticorps antistreptavidine Échantillons traités par la chaleur ou l’azide de sodium Éviter les décongélations et recongélations répétées
Matrice utilisée pour les tests de dilution 1er résultat obtenu en (min) Temps d’incubation (min) Température d’incubation (°C) Protocole expérimental : – agitation – lavage – séparation (type) Limites ou précautions d’utilisation signalées
U 9470 2
200
Sérum humain
Présence d’anticorps hétérophiles Échantillons présentant Éviter les une activité phosphatase décongélations et alcaline élevée recongélations répétées EDTA et citrate à proscrire Éviter les décongélations et recongélations répétées
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17α-OH Progestérone
Beckman Coulter Immunotech
Brahms France
Brahms France
Cis BioInternational
Dénomination commerciale
17 hydroxyprogestérone
17OH-RIA-CT
17-OHP-NN
N° d’enregistrement AFSSAPS Année d’enregistrement Automate dédié Méthode manuelle Détecteur final Signal détecté Marqueur Nature du spécimen analysé Anticoagulant(s) recommandé(s) Volume de la prise d’essai (µl) Volume mort de l’automate (µl) Calibrateurs Origine [1] Matrice des calibrateurs autres que le point zéro Unités utilisées Concentration du dernier calibrateur Limite de détection annoncée Courbe de calibration mémorisable Ajusteurs de recalibration Anticorps Si compétition : Nature de l’anticorps [2] Origine de l’anticorps Autres éléments Support utilisé Matrice utilisée pour les tests de dilution 1er résultat obtenu en (min) Temps d’incubation (min) Température d’incubation (°C) Protocole expérimental : – agitation – lavage – séparation (type) Limites ou précautions d’utilisation signalées
L 0327 2 1995 Non Oui Compteur gamma Ryt. 125 I Sérum ou plasma EDTA, héparine 50* NA
ActiveTM 17 α-OH progestérone M 0820 2 1996 Non Oui Compteur gamma Ryt. 125 I Sérum ou plasma EDTA 50 NA
P 4344 2 1997 Non Oui Compteur gamma Ryt. 125 I Sérum ou plasma EDTA, héparine 25 NA
G 1900 1 1989 Non Oui Compteur gamma Ryt. 125 I Sang total séché NA Pastille de 3 mm NA
Tampon + BSA
S Sérum humain
Sérum humain
S Sang humain
ng ml–1 50
ng ml–1 20
ng ml–1 10
nmol l–1 600
0,06 NA
0,01 NA
0,02 NA
1 NA
NA
NA
NA
NA
APC
APC Lapin
APC
APC Lapin
Tube revêtu Tampon + BSA
Tube revêtu Sérum humain
Tube revêtu Sérum humain
NA
180 37
60 37
180 37
30 + 60 + 30 (18–25) et 37
Non Non Aspiration Éviter les décongélations et recongélations répétées
Non Non Décantation Échantillons fortement : – Lipémiques – Hémolysés Éviter les décongélations et recongélations répétées
Non Oui Aspiration Éviter les décongélations et recongélations répétées
Non Non Centrifugation et aspiration Ne pas utiliser d’alcool au moment du prélèvement Stocker les taches de sang à + 4 °C à l’abri de l’humidité
* Les très jeunes enfants (en particulier jusqu’à 3 mois) ont des taux de sulfate de 17 OH-prégnénolone très élevés. Dans ce cas, il est recommandé de pratiquer le dosage de 17 OH-P après extraction à l’éther.
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17α-OH progestérone
Cis BioInternational
Dade Behring
Perkin ElmerTM Life Science
Dénomination commerciale N° d’enregistrement AFSSAPS Année d’enregistrement Automate dédié Méthode manuelle Détecteur final Signal détecté Marqueur Nature du spécimen analysé Anticoagulant(s) recommandé(s) Volume de la prise d’essai (µl) Volume mort de l’automate (µl) Calibrateurs Origine [1] Matrice des calibrateurs autres que le point zéro Unités utilisées Concentration du dernier calibrateur Limite de détection annoncée Courbe de calibration mémorisable Ajusteurs de recalibration Anticorps Si compétition : Nature de l’anticorps [2] Origine de l’anticorps Autres éléments Support utilisé Matrice utilisée pour les tests de dilution 1er résultat obtenu en (min) Temps d’incubation (min) Température d’incubation (°C) Protocole expérimental : Agitation Lavage Séparation (type) Limites ou précautions d’utilisation signalées
OHP-CT F 0344 1 1988 Non Oui Compteur gamma Ryt. 125 I Sérum ou plasma EDTA, héparine 25* NA
Coat-A-Count 17 α-OH progestérone (1) E 9435 0 1988 Non Oui Compteur gamma Ryt. 125 I Sérum ou plasma EDTA, héparine, citrate 25 NA
Delfiat Nenonatal 17 α-OH-progestérone J 5228 0 1995 Non Oui Fluorimètre Emis. lum. Europium Sang total séché NA Pastille de 3,2 mm NA
Sérum humain
Sérum humain
Sang humain
nmol l–1 75,7 0,06 NA NA
ng ml–1 20 0,07 NA NA
nmol l–1 de sang 260 2 NA NA
APC Lapin
APC
APC Lapin
Tube revêtu Sérum humain
Tube revêtu Sérum humain
Puits revêtu NA
150 37
180 (18–25)
180 (1) (18–25)
Non Non Décantation Échantillons fortement : – Lipémiques – Hémolysés Éviter les décongélations et recongélations répétées
Non Non Décantation Éviter les décongélations et recongélations répétées
Non Oui Aspiration EDTA et citrate à proscrire Stocker les taches de sang à + 4 °C à l’abri de l’humidité
* Pour les échantillons de femmes enceintes et de nouveau-nés il est fortement recommandé d’effectuer le dosage après extraction. Possibilité d’incuber pendant 1 nuit à + 4 °C.
(1)
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Additif Lors du bouclage du Volume 17, N° 3, consacré aux réactifs de dosage de : hGH, IGF1 et IGF-BP, la société DiaSorin commercialisait dans le cadre de la recherche un dosage d’IGF II. Depuis ce réactif possède un marquage CE. Aussi il nous a semblé intéressant de porter à la connaissance des lecteurs d’IBS les informations concernant ce réactif. Dénomination commerciale : IGF II RIA Marquage CE Année d’enregistrement 2002 Méthode manuelle Détecteur final : Compteur gamma Signal détecté : Rayonnement Marqueur : Iode 125 Nature du spécimen analysé : Sérum ou plasma, liquide céphalo-rachidien, urine Anticoagulant(s) recommandé(s) : EDTA, héparine Volume de la prise d’essai : 100 µl après extraction de l’échantillon sur colonne ou par l’acide-éthanol Unités utilisées : ng ml–1 Concentration du dernier calibrateur : 50 ng ml–1 Limite de détection annoncée : 0,1 ng ml–1 Dosage en compétition avec un anticorps polyclonal Matrice utilisée pour les tests de dilution : Tampon Temps d’incubation (min) : 2880 + 60 + 30 Température d’incubation (°C) : (2–8) Protocole expérimental simplifié : agitation, lavage, centrifugation et aspiration Limites ou précautions d’utilisation signalées : éviter les décongélations et recongélations répétées
Techniques au quotidien
Informations réactifs : DHEA, DHEA-sulfate, 17α-OH progestérone Reactive informations: DHEA, DHEA sulfate, 17α-OH progesterone L. Nonnenmacher * Service de médecine nucléaire, GH Cochin St-Vincent-de-Paul, 27, rue du Fg St-Jacques, 75679 Paris cedex 14, France Reçu le 1 janvier 2002; accepté le 2 janvier 2002
Cette rubrique est alimentée par les informations recueillies auprès de l’Agence française de sécurité sanitaire des produits de santé (direction de l’évaluation des dispositifs in vitro, département diagnostic in vitro, unité enregistrement des réactifs) et des industriels. Les données fournies, qui sont extraites de la notice d’utilisation des réactifs, ne prétendent pas à l’exhaustivité et ne comportent aucun jugement sur la valeur intrinsèque des trousses. Pour chaque réactif, le contenu du texte a été soumis à l’industriel pour vérification avant publication. En outre, la Rédaction s’engage à publier un additif ou un rectificatif dans le cas d’une erreur ou d’une omission préjudiciable à un fabricant.
1. La déhydroépiandrostérone (DHEA) et son sulfate (S-DHEA) La DHEA est synthétisée dans la corticosurrénale à partir de la 17-hydroxy-pregnénolone sous l’action de la C17–20 desmolase. C’est un ∆5-stéroïde à faible pouvoir androgénique, qui peut être métabolisé en androstérone (∆5stéroïde), soit en androstènedione (∆4-stéroïde) sous l’action de la 3∆-ol-deshydrogénase. La DHEA circule liée à l’albumine. Son taux présente un rythme circadien qui est corrélé à celui du cortisol. Elle est convertie en forme sulfatée (S-DHEA), sous l’action d’une sulfotransférase, au
Abréviations: NA, Non Applicable; abs. lum., absorption lumineuse; émis. lum., émission lumineuse; Ryt., rayonnement; PAL, Phosphatase alcaline; HRP, Peroxydase de raifort; BSA, sérum albumine bovine; SAH, sérum albumine humaine; CE, marquage selon la directive 98/79/CE; [1] Origine, E (Extraction), S (Synthèse), R (Recombinant); IRP, préparation internationale de référence; [2] Nature, APC (Polyclonal), AMC (Monoclonal), OC (Oligoclonal). * Auteur correspondant. Adresse e-mail : [email protected] (L. Nonnenmacher). © 2002 Éditions scientifiques et médicales Elsevier SAS. Tous droits réservés. PII: S 0 9 2 3 - 2 5 3 2 ( 0 2 ) 0 1 2 2 2 - X
niveau des glandes endocrines stéroïdogènes, du foie, du rein, des surrénales, de l’intestin et à un niveau moindre du système nerveux central et des muscles. La DHEA est produite en faible quantité, de l’ordre de 2 à 4 mg par jour, sa demi-vie estimée est de 15 à 30 minutes. Le S-DHEA est sécrété à hauteur de 20 à 25 mg, sa demi-vie est de 7 à 10 heures. En conséquence, les concentrations plasmatiques de ces deux substances sont très différentes, de l’ordre du ng/ml pour la DHEA et du µg/ml pour le S-DHEA. Le dosage du S-DHEA est direct par radio-immunologie, celui du DHEA nécessite une extraction préalable par un solvant organique. Les taux de DHEA et de S-DHEA sont élevés à la naissance, puis diminuent au cours des 6 premiers mois pour devenir très bas. Ils recommencent à s’élever dès 6 à 7 ans, chez le garçon comme chez la fille, pour atteindre un maximum entre 25–30 ans, puis ils diminuent de façon régulière pour atteindre une concentration sérique inférieure à 20 % au cours de la huitième et la neuvième décennies. Le dosage du S-DHEA est intéressant à l’état basal : • Lors de l’exploration des pubertés précoces ou retardées, pour mettre en évidence un dysfonctionnement de production surrénaliennes des androgènes. • Lors des explorations des hyperandrogènies : on note des taux très importants lors des tumeurs virilisantes de la surrénale. Des taux intermédiaires dans le syndrome des ovaires polykystiques ou les déficits enzymatiques surrénaliens. Le dosage de la forme libre du DHEA n’est pas informatif sur un prélèvement isolé dans la majorité des cas, sauf si la valeur est très élevée. En effet, le taux de DHEA est très influencé par une situation de stress. Il est donc préférable de réaliser le dosage du DHEA après stimulation par le test au Synacthène Immédiatt. Le taux de DHEA libre augmente à T + 60 mn de 50 à 100 % par rapport au taux de
L. Nonnenmacher / Immuno-analyse & Biologie spécialisée 17 (2002) 348–355
base : une valeur supéreure à 20 ng/ml (70 nmol/ml) est l’un des 4 critères requis pour le diagnostic des blocs enzymatiques en 3β-ol-deshydrogénase. Le S-DHEA n’est pas stimulable par le test au Synacthène Immédiatt. Le facteur de conversion des ng/ml en nmol/l pour les différentes trousses est de : • pour la DHEA : ng/ml × 3,47 = nmol/l ; • pour le S-DHEA : ng/ml × 0,027 = nmol/l.
2. La 17α-hydroxyprogestérone (17α-OHP) La 17α-OHP est un stéroïde produit dans les glandes corticosurrénales et les gonades. Comme les autres stéroïdes, il est synthétisé à partir du cholestérol en plusieurs étapes d’enzymes inter dépendantes. La première étape est la conversion du cholestérol en prégnénolone, qui est stimulée par l’ACTH. La prégnénolone est ensuite convertie en progestérone ou en 17-hydroxyprégnénolone, tous deux précurseurs de la 17α-OHP. Dans les surrénales, la 17αOHP, se convertie ensuite en cortisol sous l’action séquentielle de 21-hydroxylase et de la 11-hydroxylase. Dans les surrénales et dans les ovaires la 17α-OHP peut aussi être convertie sous l’action de la 17,20-lyase en ∆4androstenedione, précurseur de la testostérone et de l’estradiol. La 17α-OHP n’a pas d’activité biologique connue. La 17α-OHP est dosée par méthode radio-immunologique après extraction ou non par un solvant organique. Les valeurs usuelles varient selon l’âge, le sexe et la phase du cycle menstruel. Il est préférable d’effectuer le prélèvement le matin car il existe une variation nycthémère en fonction de l’ACTH, avec des pics observés le matin et un nadir durant la nuit. Le sujet doit être au repos, car le stress peut augmenter les taux. Chez le sujet sain, après stimulation par le test au Synacthène Immédiatt, la réponse au temps T + 60 min est de l’ordre de 50 à 300 % du taux de base.
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L’intérêt du dosage de la 17α-OHP réside dans l’exploration des hyperandrogénies dues à un déficit en 21 ou en 11-hydroxylase. • Le déficit en 21-hydroxylase est une maladie génétique, autosomique récessive, présentant un très grand polymorphisme en fonction du degré de l’atteinte enzymatique. Il se caractérise par une accumulation, en amont du bloc, de 17α-OHP qui sera transformée en androgènes (androstènedione, testostérone) et en 21désoxycortisol. En aval du bloc, les synthèses de cortisol et d’aldostérone sont insuffisantes, entraînant une synthèse accrue d’ACTH provoquant l’hyperplasie des surrénales. Il existe deux formes de déficit en 21-hydroxylase : + Le déficit complet ou forme précoce qui se révèle dès la naissance, 80 % des cas sont reconnus avant l’âge de 3 ans. + Le déficit à révélation tardive ou déficit incomplet qui touche 0,5 à 2 % des sujets avec une prévalence dans certains groupes ethniques. • Le déficit en 11-hydroxylase est plus rare. On observe, en amont, une accumulation du 11-désoxycortisol et de la 17α-OHP. Les taux observés de 17α-OHP sont généralement plus bas qu’au cours du déficit en 21hydroxylase. Le facteur de conversion des ng/ml en nmol/l est identique pour les différentes trousses : ng/ml × 3,03 = nmol/l.
Remerciements La Rédaction remercie Mme Hélène Delattre (Agence française de sécurité sanitaire des produits de santé) Direction de l’évaluation des dispositifs in vitro, département diagnostic in vitro, unité enregistrement des réactifs pour sa collaboration.
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DHEA
Beckman Coulter Immunotech
Brahms France
Dénomination commerciale N° d’enregistrement AFSSAPS Année d’enregistrement Automate dédié Méthode manuelle Détecteur final Signal détecté Marqueur Nature du spécimen analysé Anticoagulant(s) recommandé(s) Volume de la prise d’essai (µl) Volume mort de l’automate (µl) Calibrateurs Origine [1] Matrice des calibrateurs autres que le point zéro Unités utilisées Concentration du dernier calibrateur Limite de détection annoncée Courbe de calibration mémorisable Ajusteurs de recalibration Anticorps Si compétition : Nature de l’anticorps [2] Origine de l’anticorps Autres éléments Support utilisé Matrice utilisée pour les tests de dilution 1er résultat obtenu en (min) Temps d’incubation (min) Température d’incubation (°C) Protocole expérimental : – agitation – lavage – séparation (type) Limites ou précautions d’utilisation signalées
DHEA J 5911 0 1998 Non Oui Compteur gamma Ryt. 125 I Sérum ou plasma EDTA, héparine 100* NA
Dehydroepiandrosterone (DHEA) RIA K 8759 1 1995 Non Oui Compteur gamma Ryt. 125 I Sérum ou plasma EDTA 100 NA
Tampon + BSA ng ml–1 30 0,3 NA NA
S Tampon + BSA ng ml–1 30 0,01 NA NA
AMC
APC
Souris
Lapin
Tube revêtu Tampon + BSA
Tampon + BSA
60 37
60 + 15 + 20 37 et (18–25)
Non Non Aspiration Échantillons fortement : – Ictériques – Hémolysés Éviter les décongélations et recongélations répétées
Non Non Centrifugation + décantation Échantillons fortement : – Lipémiques – Hémolysés Éviter les décongélations et recongélations répétées
* Après extraction de l’échantillon par l’éther éthylique.
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S-DHEA
Beckman Coulter Immunotech
Brahms France
Cis BioInternational
Dade Behring
Dénomination commerciale N° d’enregistrement AFSSAPS Année d’enregistrement Automate dédié Méthode manuelle Détecteur final Signal détecté Marqueur Nature du spécimen analysé Anticoagulant(s) recommandé(s) Volume de la prise d’essai (µl) Volume mort de l’automate (µl) Calibrateurs Origine[1] Matrice des calibrateurs autres que le point zéro Unités utilisées Concentration du dernier calibrateur Limite de détection annoncée Courbe de calibration mémorisable Ajusteurs de recalibration Anticorps Si compétition : Nature de l’anticorps [2] Origine de l’anticorps Autres éléments Support utilisé Matrice utilisée pour les tests de dilution 1er résultat obtenu en (min) Temps d’incubation (min) Température d’incubation (°C) Protocole expérimental : – agitation – lavage – séparation (type) Limites ou précautions d’utilisation signalées
DHEA-Sulfate G 2751 1 1989 Non Oui Compteur gamma Ryt. 125 I Sérum ou plasma EDTA, héparine 25 NA
ActiveTMDHEA-S EIA M 1988 2 1997 Non Oui Photomètre Abs.lum. HRP Sérum NA 50 NA
DHEA S-CT P 4344 2 1998 Non Oui Compteur gamma Ryt. 125 I Sérum ou plasma EDTA, héparine 25 NA
Coat-A-Count DHEA-SO4 E 9440 0 1988 Non Oui Compteur gamma Ryt. 125 I Sérum ou plasma EDTA 50 NA
Sérum humain
Tampon protéique
S Sérum humain
Matrice protéique humaine
µg dl–1 1000
ng ml–1 8000
µmol. l–1 30
µg dl–1 1000
6 NA
15 NA
0,03 NA
1,1 NA
NA
NA
NA
NA
AMC Souris
APC Chèvre
APC Lapin
APC
Tube revêtu Sérum humain
Puits recouverts Tampon protéique
Tube revêtu Sérum humain
Tube revêtu Matrice protéique humaine
30 37
60 + 15 (18–25)
60 37
30 37
Non Non Aspiration Échantillons fortement : – Lipémiques – Hémolysés – Ictériques
Oui Oui Aspiration Échantillons fortement : – Lipémiques – Hémolysés – Ictériques Éviter les décongélations et recongélations répétées
Non Oui Aspiration Échantillons fortement : – Lipémiques Citrate à proscrire
Non Non Décantation Éviter les décongélations et recongélations répétées
Éviter les décongélations et Éviter les décongélations et recongélations répétées recongélations répétées
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S-DHEA
DPC France
DPC France
LabBo Immunosytèmes Nichols Institute
Roche Diagnostics
Dénomination commerciale N° d’enregistrement AFSSAPS Année d’enregistrement Automate dédié Méthode manuelle Détecteur final Signal détecté Marqueur Nature du spécimen analysé Anticoagulant(s) recommandé(s) Volume de la prise d’essai (µl) Volume mort de l’automate (µl) Calibrateurs Origine [1] Matrice des calibrateurs autres que le point zéro Unités utilisées Concentration du dernier calibrateur Limite de détection annoncée Courbe de calibration mémorisable Ajusteurs de recalibration Anticorps Si compétition : Nature de l’anticorps [2] Origine de l’anticorps Autres éléments Support utilisé
Immulite DHEA-SO4
S-DHEA SR1 M 1225 2
Nichols Advantage DHEA-S T 8155 2
Elecsys DHEA-S
M 2100 2
Immulite 2000 DHEASO4 M 2100 2
1995 Immulite Non Luminomètre Émis. lum. PAL Sérum
1995 Immulite 2000 Non Luminomètre Émis. lum. PAL Sérum
1994 Analyseurs SR1 / SR1+ Non Photomètre Émis. lum. PAL Sérum ou plasma
1999 Advantaget Non Luminomètre Émis. lum. Acridinium Sérum
2000 Elecsys 1010/2010 Non Luminomètre Émis. lum. Ruthénium Sérum ou plasma
NA
NA
Héparine
NA
EDTA, héparine, citrate
5
5
200
15
15
100
250
Sérum humain
Sérum humain
Sérum humain
µg dl–1 1000
µg dl–1 1000
µg ml–1 10
µg dl–1 800
µg dl–1 1000
2
1,4
0,05
1
0,1
Oui
Oui
Oui
Oui
Oui
Oui
Oui
Oui
Oui
Oui
APC Lapin
APC Lapin
APC Lapin
APC Chèvre
APC Lapin
Bille recouverte
Bille recouverte
Particules magnétiques
Particules magnétiques
Sérum humain
Sérum humain
Sérum humain
Microparticules magnétiques Sérum humain
40
35
70
30
30
20 + 10
18
37
70
37
37
(18–25)
Non Oui Centrifugation axiale Présence d’anticorps hétérophiles Éviter les décongélations et recongélations répétées
Non Oui Centrifugation axiale Présence d’anticorps hétérophiles Éviter les décongélations et recongélations répétées
Non Oui Aimantation Échantillons fortement : – lipémiques – hémolysés – ictériques
Non Oui Aimantation Échantillons fortement : – lipémiques – hémolysés
Non Oui Aimantation Présence d’anticorps antistreptavidine Échantillons traités par la chaleur ou l’azide de sodium Éviter les décongélations et recongélations répétées
Matrice utilisée pour les tests de dilution 1er résultat obtenu en (min) Temps d’incubation (min) Température d’incubation (°C) Protocole expérimental : – agitation – lavage – séparation (type) Limites ou précautions d’utilisation signalées
U 9470 2
200
Sérum humain
Présence d’anticorps hétérophiles Échantillons présentant Éviter les une activité phosphatase décongélations et alcaline élevée recongélations répétées EDTA et citrate à proscrire Éviter les décongélations et recongélations répétées
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17α-OH Progestérone
Beckman Coulter Immunotech
Brahms France
Brahms France
Cis BioInternational
Dénomination commerciale
17 hydroxyprogestérone
17OH-RIA-CT
17-OHP-NN
N° d’enregistrement AFSSAPS Année d’enregistrement Automate dédié Méthode manuelle Détecteur final Signal détecté Marqueur Nature du spécimen analysé Anticoagulant(s) recommandé(s) Volume de la prise d’essai (µl) Volume mort de l’automate (µl) Calibrateurs Origine [1] Matrice des calibrateurs autres que le point zéro Unités utilisées Concentration du dernier calibrateur Limite de détection annoncée Courbe de calibration mémorisable Ajusteurs de recalibration Anticorps Si compétition : Nature de l’anticorps [2] Origine de l’anticorps Autres éléments Support utilisé Matrice utilisée pour les tests de dilution 1er résultat obtenu en (min) Temps d’incubation (min) Température d’incubation (°C) Protocole expérimental : – agitation – lavage – séparation (type) Limites ou précautions d’utilisation signalées
L 0327 2 1995 Non Oui Compteur gamma Ryt. 125 I Sérum ou plasma EDTA, héparine 50* NA
ActiveTM 17 α-OH progestérone M 0820 2 1996 Non Oui Compteur gamma Ryt. 125 I Sérum ou plasma EDTA 50 NA
P 4344 2 1997 Non Oui Compteur gamma Ryt. 125 I Sérum ou plasma EDTA, héparine 25 NA
G 1900 1 1989 Non Oui Compteur gamma Ryt. 125 I Sang total séché NA Pastille de 3 mm NA
Tampon + BSA
S Sérum humain
Sérum humain
S Sang humain
ng ml–1 50
ng ml–1 20
ng ml–1 10
nmol l–1 600
0,06 NA
0,01 NA
0,02 NA
1 NA
NA
NA
NA
NA
APC
APC Lapin
APC
APC Lapin
Tube revêtu Tampon + BSA
Tube revêtu Sérum humain
Tube revêtu Sérum humain
NA
180 37
60 37
180 37
30 + 60 + 30 (18–25) et 37
Non Non Aspiration Éviter les décongélations et recongélations répétées
Non Non Décantation Échantillons fortement : – Lipémiques – Hémolysés Éviter les décongélations et recongélations répétées
Non Oui Aspiration Éviter les décongélations et recongélations répétées
Non Non Centrifugation et aspiration Ne pas utiliser d’alcool au moment du prélèvement Stocker les taches de sang à + 4 °C à l’abri de l’humidité
* Les très jeunes enfants (en particulier jusqu’à 3 mois) ont des taux de sulfate de 17 OH-prégnénolone très élevés. Dans ce cas, il est recommandé de pratiquer le dosage de 17 OH-P après extraction à l’éther.
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17α-OH progestérone
Cis BioInternational
Dade Behring
Perkin ElmerTM Life Science
Dénomination commerciale N° d’enregistrement AFSSAPS Année d’enregistrement Automate dédié Méthode manuelle Détecteur final Signal détecté Marqueur Nature du spécimen analysé Anticoagulant(s) recommandé(s) Volume de la prise d’essai (µl) Volume mort de l’automate (µl) Calibrateurs Origine [1] Matrice des calibrateurs autres que le point zéro Unités utilisées Concentration du dernier calibrateur Limite de détection annoncée Courbe de calibration mémorisable Ajusteurs de recalibration Anticorps Si compétition : Nature de l’anticorps [2] Origine de l’anticorps Autres éléments Support utilisé Matrice utilisée pour les tests de dilution 1er résultat obtenu en (min) Temps d’incubation (min) Température d’incubation (°C) Protocole expérimental : Agitation Lavage Séparation (type) Limites ou précautions d’utilisation signalées
OHP-CT F 0344 1 1988 Non Oui Compteur gamma Ryt. 125 I Sérum ou plasma EDTA, héparine 25* NA
Coat-A-Count 17 α-OH progestérone (1) E 9435 0 1988 Non Oui Compteur gamma Ryt. 125 I Sérum ou plasma EDTA, héparine, citrate 25 NA
Delfiat Nenonatal 17 α-OH-progestérone J 5228 0 1995 Non Oui Fluorimètre Emis. lum. Europium Sang total séché NA Pastille de 3,2 mm NA
Sérum humain
Sérum humain
Sang humain
nmol l–1 75,7 0,06 NA NA
ng ml–1 20 0,07 NA NA
nmol l–1 de sang 260 2 NA NA
APC Lapin
APC
APC Lapin
Tube revêtu Sérum humain
Tube revêtu Sérum humain
Puits revêtu NA
150 37
180 (18–25)
180 (1) (18–25)
Non Non Décantation Échantillons fortement : – Lipémiques – Hémolysés Éviter les décongélations et recongélations répétées
Non Non Décantation Éviter les décongélations et recongélations répétées
Non Oui Aspiration EDTA et citrate à proscrire Stocker les taches de sang à + 4 °C à l’abri de l’humidité
* Pour les échantillons de femmes enceintes et de nouveau-nés il est fortement recommandé d’effectuer le dosage après extraction. Possibilité d’incuber pendant 1 nuit à + 4 °C.
(1)
L. Nonnenmacher / Immuno-analyse & Biologie spécialisée 17 (2002) 348–355
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Additif Lors du bouclage du Volume 17, N° 3, consacré aux réactifs de dosage de : hGH, IGF1 et IGF-BP, la société DiaSorin commercialisait dans le cadre de la recherche un dosage d’IGF II. Depuis ce réactif possède un marquage CE. Aussi il nous a semblé intéressant de porter à la connaissance des lecteurs d’IBS les informations concernant ce réactif. Dénomination commerciale : IGF II RIA Marquage CE Année d’enregistrement 2002 Méthode manuelle Détecteur final : Compteur gamma Signal détecté : Rayonnement Marqueur : Iode 125 Nature du spécimen analysé : Sérum ou plasma, liquide céphalo-rachidien, urine Anticoagulant(s) recommandé(s) : EDTA, héparine Volume de la prise d’essai : 100 µl après extraction de l’échantillon sur colonne ou par l’acide-éthanol Unités utilisées : ng ml–1 Concentration du dernier calibrateur : 50 ng ml–1 Limite de détection annoncée : 0,1 ng ml–1 Dosage en compétition avec un anticorps polyclonal Matrice utilisée pour les tests de dilution : Tampon Temps d’incubation (min) : 2880 + 60 + 30 Température d’incubation (°C) : (2–8) Protocole expérimental simplifié : agitation, lavage, centrifugation et aspiration Limites ou précautions d’utilisation signalées : éviter les décongélations et recongélations répétées