P161 Production D'un Anticorps Monoclonal Humain ANTI-AB

Posters/Transfusion clinique et biologique 12 (2005) $57-S137

S 116

Tableau P158 ~Echantillon

MER2 (copies/cellule)

GR lymphocyte normal 15-275 623-1 493 insertion G383 0 0

granulocyte 1017-3 083 0

plaquette monocyte 2795-4 076 4820-11 400 0 0

RI78H R171C

430 50

650 800

0 <5

10 190

2,600 800

P159 LES ANTICORPS IRRI~GULIERS CAUSANT LA MALADIE HI~MOLYTIQUE DU NOUVEAU-NI~ (MHNN) REZAGUI AMARA S., OUELAA H. FA CULTE MEDECINE ANNABA ALGERIE amara.souad@ caramail.com Certainement l'une des plus grandes dEcouvertes dans le domaine obstetrical a EtE la prevention de la sensibilisation matemelle par l'antigEne " D " standard ; ceci par administration intramusculaire de 250gg d'immunoglobulines antiD humaines ~tla mere avant les 72 Heures qui suivent la dElivrance. L'effet de cette prophylaxie 5 diminu6 considdrablement la frEquence de la maladie hdmolytique due au syst~me rhesus " D ". Ceci a coincide avec une augmentation de celle due aux autres antigbnes [TEL C, c, E, e, KELL .... ETC]. I1 a EtE dEcrit darts la littEramre que 98 % de maladie hdmolytique est due fi l'incompatibilitE rhesus " D " et ABO, les 2 % restant sont dues aux autres antig~nes immunog~nes. I1 appara~t que les 2 % sont passes subitement ~t 5 % ; la raison est l'utilisation libdrale des transfusions de sang chez les femmes. La pathologie de la maladie hEmolytique du nouveau-n6 est identique pour tous les anticorps. Le feetus dolt avoir des antigbnes qui ne sont pas presents chez la m~re, qui peuvent traverser la barribre placentaire et initier la production d'anticorps maternel. L'anticorps qui est de la classe IgG entre dans la circulation feetale et provoque une hEmolyse des globules rouges feetaux. Le but de cet article est de sensibiliser le cfinicien afin qu'il soit conscient de la sEvdritE de la maladie hEmolytique due aux autres anticorps irrEguliers et dEmontrcr les erreurs d'interprEtations qui peuvent induire un faux diagnostic, entra~nant ainsi l'aggravation de la maladie hdmolytique nEonatale, causant soit la mort soit des sEquelles irrdversibles. Mots el~s" maladie hEmolytique, anticorps irrEguliers autres que " D ".

P160 PRODUCTION D'UN NOUVEAU RI~ACTIF MONOCLONAL ANTI-B SADIQ F., TISSENT A., HABTI N., BENCHEMSI N. LABORATOIRE DE GENIE GE,NETIQUE ET CELLULAIRE SERVICE HE,MATOLOGIE FACULTE DE MEDECINE ET DE PHARMA CIE, CASABLANCA, MAROC sadiq_fouad@ yahoo.fi"

Les anticorps monoclonaux sont des outils performants dans la recherche surtout en immunologie molEculaire et cellulaire. Ils ont remplac6 les anticorps polyclonaux darts l'identification des groupes sanguins et la detection des marqueurs cellulaires et des agents pathog~nes. Le but de ce travail est de produire un anticorps monoclonal identifiant les groupes sanguins ABO. La technique des hybridomes a EtE appliquEe. Une souris femelle Balb/c a 6t6 immunisEe intrapdritondalement avec des hEmaties humains de groupe B. Les splEnocytes ont 6t6 fusionnEs avec les cellules myElomateuses P3X63Ag8 selon le protocole modifiE de Galfr6 et al. L'identification des anticorps monoclonaux a 6t6 rEalisEe par hEmagglutination avec des hdmaties B traitEes par la bromEline. Un anticorps monoclonal anti-B (A22.10) a 6t6 sElectionn6 et 6valu6 pour son utilisation dans la fabrication d'un rEactif anti-B. L'anticorps A22.10 agglutine exclusivement les hEmaties B e t AB. I1 ne reconnait pas les hEmaties A et O. L'anticorps monoclonal A22.10 peut atre utilis6 dans le groupage sanguin en identifiant le syst~me ABH. I1 prEsente un intEr~t dans des Etudes de la cartographie 6pitopique des antigEnes B. I1 peut aussi 6tre utile en 6tudiant leur expression en cancer. Mots el~s : Anticorps monoclonal anti-B; Cellules MyElomateuses ; Hdmagglutination ; Balb/c ; Spldnocytes.

P161 PRODUCTION D'UN ANTICORPS MONOCLONAL HUMAIN ANTI-AB TISSENT A., SADIQ F., HABTI N., ELAMRANI N., BENCHEMSI N. LABORA TOIRE DE GE,NIE GENETIQ UE ET CELLULAIRE- FA CULTE DE ME,DECINE, CASABLANCA, MAROC [email protected] La production des anticorps monoclonaux a un impact important en immunohEmatologie. La majeure partie des anticorps monoclonaux sont d'origine murine, ils sont obtenus par la technique des hybridomes. Cependant cette technique ne permet pas l'obtention des anticorps monoclonaux anti-Rh. L'alternative est la technique de la transformation les lymphocytes humains par le virus d'Epstein Barr (EBV). Le but de ce travail est de produire des anticorps monoclonanx humains de groupages sanguins anti-Rh et anti-ABO. Les prdl~vements sanguins sont obtenus ~ partir de femmes immunisEes. Les lymphocytes sont ensuite sEparEs des autres ElEments figures du sang sur un gradient de densit6, et transformEs par I'EBV. La transformation des lymphocytes est observEe entre la quatriEme et la sixi~me semaine. Seize transformations ont dtd rEalisEes. Seul un clone nomm6 7JP3 sEcrEtant un anticorps anti-AB nomm6 7JP 6t6 obtenu et stabilisE par fusion avec des cellules myElomateuses murines P3X63Ag8 selon la technique des hybridomes puis clones par dilution limite. L'anticorps humain sEcrEtE reste stable plus de six mois. I1 reconnaR spEcifique-

Posters/Transfusion clinique et biologique 12 (2005) $57-S137

merit tousles groupes A1, A2, B, A1B, et A2B. En outre il pr6sente une r6activit6 int6ressante vis ~ vis des groupes faibles, notamment le groupe A x. La comparaison de la r6activit6 de cet anticorps ~ d'autres anticorps monoclonaux antiAB vis-~t-vis de 20 000 donneurs de sang et de plus de 3 000 malades pr6sentant diff6rentes pathologies n'a montr6 aucune discordance. L'anticorps 7JP peut ~tre utilis6 comme un r6actif pour la d6termination des groupes sanguins ABO et 1' 6tude des 6pitopes de 1' antigbne AB.

P162 LE SYSTI~ME DE GROUPE SANGUIN DUFFY DANS LA POPULATION TUNISIENNE SELLAMI H., KAABI H., CHERIF G., BEN TAHAR S., ENNEIFER H., ZAMMIT I., BEN HAMED L., MOJAAT N., HMIDA S., BOUKEF K. CNTS, TUNIS, TUNISIE [email protected] Introduction: Le groupe sanguin Duffy est compos6 de deux antigenes majeurs : Fya et Fyb, cod6s par deux alleles coodominants : FY*A et FY*B. Un troisi~me allele non 6xprim6 : FY*Fy, caract6rise la population ndgroide. FY*X est une quatribme version all61ique qui r6sulte de trois substitutions ponctuelles dont la C265T est la plus importante. Objectifs : Darts le pr6sent travail, nous nous sommes proposds d'dtudier le systbme Duffy darts la population Tunisienne et d'estimer les fr6quences all61iques et ph6notypiques. Mat6riels et m~thodes : 115 donneurs de sang non apparent6s habitant la capitale (Tunis), ont fait l'objet de notre 6tude.Les 6chantillons sanguins ont 6t6 collect6s sur un anticoagulant (EDTA) et la m6thode de Salting Out a 6t6 utilis6e pour l'extraction de ADN. Le gdnotypage Duffy a 6t6 r6alis6 par une technique de PCRSSP. Cinq versions all61iques du gbne FY sont d6tect6es par la technique utulisde. Pour chaque donneur, le ph6notype a 6t6 d~duit du g6notype. R6sultats : Les fr6quences all61iques et phdnotypiques sont repr6sent6es sur le tableau suivant : ALLELE FY*A exp FY*B exp FY*A null FY*B null FY*X

FREQUENCE (%) PHENOTYPE 27,39 Fya+b+ 39,56 Fya+b1,74 Fya-b+ 29,57 Fya+bweak 1,74 Fya-bweak Fya-b-

FREQUENCE (%) 22,61 24,35 40 1,74 ? 11,3

Conclusion : Cette 6tude a confirms les r6sultats avanc6s par d' autres 6qnipes quant ~ l'origine mixte de la population Tunisienne. L'utilisation de cette m6thode rapide de g6notypage pourrait ~tre d'un grand apport pour assurer une meilleure s6curit6 transfusionnelle.

S 117

P163 GI~NOTYPAGE COMPLET DU SYSTI~ME DUFFY PAR PCR EN TEMPS RI~EL (FRET) : UNE MI~THODE RAPIDE ET FIABLE POUR RI~PONDRE A L'URGENCE TRANSFUSIONNELLE TOURNAMILLE C.*, MARTIN-BLANC S., ARAUJO F.**, ROUGER P.*, ANSART-PIRENNE H.* * CNRGS-INTS/INSERM U665, PARIS, FRANCE ; ** HOPITAL S. JOAO, PORTO, PORTUGAL ctournamille @ ints.fr Les antig~nes du groupe sanguin Duffy sont produits par quatre alleles majeurs. Les alleles FY*A et FY*B codent les antig~nes Fy a et Fy b alors que l'all~le FY*X est responsable d'une faible expression de l'antig~ne Fyb. L'all~le FY*Fy est 5 l'origine de l'absence d'expression de l'antig~ne Fyb sur les globules rouges de la population noire. De par les risques d'alloimmunisation, le g6notypage du syst~me Duffy est n6cessaire lorsque le phdnotype courant ne peut atre r6alis6 : contexte transfusionnel, test direct h l'antiglobuline positif ou MHNN. En cas d'urgence, les m6thodes de g6notypage classiques (PCR-RFLP et PCR-ASP) sont peu appropri6es. R6cemment, le g6notypage par PCR en temps rdel a 6t6 d6velopp6. Cette m6thode, utilisable lorsque les allbles FY*A et FY*B sont exprim6s ind6pendamment de l'all~le FY*X, se r6v~le insatisfaisante quand l'allble FY*X est coexprim6 avec un all~le FY*A. Au CNRGS, nous souhaitons d6tecter efficacement les quatre alleles majeurs du systbme Duffy et particulibrement l'all~le FY*X dans les combinaisons d'all~les FY*A/FY*X, FY*X*/FY*X ou FY*fy/FY*X. Les deux dernitres combinaisons pouvant ~tre responsables de ph6notypes nuls en cas d'utilisation d'anticorps anti-Fyb tr6s faibles. Nous avons donc d6velopp6 deux nouvelles mdthodes de PCR en temps r6el par FRET. La premiere d6tecte le polymorphisme associ6 ~ l'expression des antig~nes Fy a etJou Fy b inddpendamment de l'allble FY*X. La deuxi~me ddtermine la pr6sence de la mutation 286C>T associ6e ~ l'all6le FY*X. Cette nouvelle procddure, compl6t6e par la recherche de 1'allele FY*fy, se r6v61e simple, rapide et fiable pour le g6notypage du syst6me sanguin Duffy chez les donneurs et les patients.

P164 Mt~CAN1SMES MOLI~CULAIRES DES PHI~NOTYPES RHD NI~GATIFS CHEZ LES DONNEURS DE SANG TUNISIENS JEMNI S., BOSLAMA M., HMIDA S., ABDELKEFI S., ZAEIR M., HOUISSA B., BOUKEF K. CENTRE NATIONAL DE TRANSFUSION SANGUINE DE TUNIS TUNISIE saloua.jemni @rns.tn Chez les caucasiens, le ph6notype RHD n6gatif est essentiellement lid ~ la d61~tion du g~ne RHD. En revanche chez les noirs africains, 66% des sujets Rh D ndgatif ont un pseudog~ne et 16% ont un gbne hybride RHD-CE-D et seulement 18% ont une d616tion totale.