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Paternal isodisomy is a frequent cause of sporadic pseudohypoparathyroidism Ib
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SFE Lyon 2014 / Annales d’Endocrinologie 75 (2014) 297–299
Conclusion L’expression relative des transcrits de GNAS semble essentielle pour la croissance fœtale et post-natale. Certaines formes de PHP présentent une croissance excessive. Déclaration d’intérêts conflits d’intérêts.
Les auteurs n’ont pas transmis de déclaration de
http://dx.doi.org/10.1016/j.ando.2014.07.117 CO-75
Caractérisation fonctionnelle de mutations de PDE4D responsables d’acrodysostose sans résistance hormonale C. Briet (Dr) a,∗ , C. Le Stunff b , E. Motte (Dr) c , E. Clauser (Pr) d , N. Dumaz e , C. Silve (Dr) b a Endocrinologie, CHU Bicêtre, Le Kremlin-Bicêtre, France b Inserm U 986, Le Kremlin-Bicetre, France c service de pédiatrie.CHU bicêtre, Le Kremlin-Bicêtre, France d Inserm U976, HEGP, Paris, France e Inserm U 976N Hôpital Saint-Louis, Paris, France ∗ Auteur correspondant. Adresse e-mail : [email protected] (C. Briet) Introduction Plusieurs mutations des PDE4D, une des quatre sous-familles PDE4 impliquées spécifiquement dans la dégradation de l’AMPc ont été identifiées dans l’acrodysostose sans résistance hormonale. Le phénotype osseux indique une perte d’activation de la voie cAMP-PKA. Le but du travail est de caractériser les conséquences fonctionnelles de ces mutations. Matériels et méthodes Quatre mutations des PDE4D, localisées dans trois domaines fonctionnels caractérisant cette famille, ont été introduites par mutagenèse dirigée dans le plasmide pcDNA3-hPDE4D3. La fonction des PDE4D est mesurée après transfection transitoire dans les cellules CHO, en condition basale, stimulée, avec ou sans inhibiteur spécifique (rolipram) via : – la mesure de l’activité PDE4D (technologie de BRET via l’utilisation d’un biosensor EPAC et mesure de l’hydrolyse d’AMPc-H3 ) ; – la mesure de l’activité de la PKA (système rapporteur CRE-luciférase). Résultats L’expression des protéines mutées est similaire à celle de la PDE4D sauvage. Les mutants ont une activité augmentée par rapport au sauvage par technique de BRET et par mesure d’hydrolyse d’AMPc-H3 . L’activité PKA est inhibée par les mutants. Cette inhibition est réversée de fac¸on concentrationdépendante par le rolipram, avec une sensibilité au rolipram des mutants diminuée par rapport au sauvage. Quelle que soit la localisation des mutations, les résultats sont similaires. Discussion/conclusion Les 4 mutants PDE4D étudiés entraînent une augmentation de l’activité PDE4D en condition basale et stimulée et modifient leur sensibilité au rolipram. Ces résultats sont compatibles avec un gain de fonction des PDE4D mutées causant une perte d’activation de la voie cAMP-PKA. Déclaration d’intérêts conflits d’intérêts.
Les auteurs n’ont pas transmis de déclaration de
http://dx.doi.org/10.1016/j.ando.2014.07.118 CO-76
Étude de corrélation génotype-phénotype chez des patients avec réarrangement de la région du gène SHOX détecté par MLPA dans la population franc¸aise J. Auger (Dr) a,∗ , A. Baptiste b , S. Schmitt (Dr) c , G. Thierry (Dr) c , J.M. Costa (Dr) d , M. Amouyal e , M.L. Kottler (Pr) f , R. Touraine (Dr) g , M. Lebru (Dr) g , B. Leheup (Pr) h , V. Cormier-Daire (Pr) i , N. De Roux (Dr) j , C. Elie b , J.P. Bonnefont (Dr) k a Service de Médecine Infantile et Génétique clinique, CHU Nancy, Nancy, France b Unité de Recherche clinique, Paris Centre, CHU Necker–Enfants-Malades, Paris, France c CHU Nantes, Service de génétique médicale, Nantes, France d Service de génétique, Laboratoire Cerba, Saint-Ouen l’Aumône, Saint-Ouen L’Aumône
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CHU Robert-Debré, Paris, Service de génétique, Paris, France CHU Caen, Service de génétique médicale, Caen, France g CHU Saint-Étienne, Service de génétique, Saint-Étienne, France h CHU Nancy, Service de Médecine Infantile et Génétique clinique, Nancy, France i CHU Necker–Enfants-Malades, Paris, Service de Génétique médicale, Paris, France j CHU Robert-Debré, Paris, Service de Génétique médicale, Paris, France k Service de génétique médicale, CHU Necker–Enfants-Malades, Paris, Paris, France ∗ Auteur correspondant. Adresse e-mail : [email protected] (J. Auger) f
Objectif Les anomalies de SHOX ont des conséquences phénotypiques variables telles qu’une petite taille idiopathique ou la dyschondrostéose de Leri-Weill. Le but de notre étude multicentrique observationnelle était de décrire les phénotypes et les génotypes d’une grande population avec anomalie de SHOX, ou de ses régions régulatrices, et d’identifier une possible corrélation phénotype-génotype. Matériel et méthodes Les phénotypes et les génotypes ont été recueillis entre 2009 et 2013 dans 7 laboratoires franc¸ais utilisant la technique MLPA à visée diagnostique. Le séquenc¸age du gène a parfois été éffectué pour détecter une mutation ponctuelle quand la MLPA était normale. Résultats Au total, 305 patients ont été ainsi diagnostiqués, 91,3 % avaient une dyschondrostéose clinique. La taille médiane en DS était de –2,1. Les filles étaient diagnostiquées plus tôt que les garc¸ons (12,7 vs 15,2 ans, p = 0,04), étaient plus petites (–2,4 DS vs –2,0 DS, p = 0,007) et avaient plus fréquemment une déformation de Madelung (78,2 % vs 21,7 %, p = 0,0004). Les anomalies génétiques étaient: 40,3 % de délétions de SHOX ± PAR1, 33,7 % de délétions de PAR1, 5,9 % de duplications de PAR1, 2,0 % de duplications de SHOX + PAR1 et 18 % de mutations ponctuelles. Chez les filles, les délétions étaient plus fréquemment associées avec une déformation de Madelung, un avant-bras court et des signes radiologiques que les duplications (p = 0,02, p = 0,006 et p = 0,008). Conclusion Nous avons realisé une description de la population franc¸aise mutée pour SHOX et démontré que les phénotypes chez les garc¸ons sont moins sévères que chez les filles. Déclaration d’intérêts conflits d’intérêts.
Les auteurs n’ont pas transmis de déclaration de
http://dx.doi.org/10.1016/j.ando.2014.07.119 CO-77
Paternal isodisomy is a frequent cause of sporadic pseudohypoparathyroidism Ib
C. Colson ∗ , N. Richard , N. Grucgy , M. Decamp , M.L. Kottler Service génétique CHU Caen, Caen, Francr ∗ Corresponding author. E-mail address: [email protected] (C. Colson) Pseudohypoparathyroidism Ib (PHP-Ib) is associated with methylation changes at differentially methylated regions (DMRs) within the complex GNAS locus, located at 20q13.2-13.3, gives rise different transcripts according to parental origin of the allele. PHP-Ib familial form is defined by an isolated loss of methylation at the A/B DMR, secondary to deletion in the STX16 gene. However the cause of the GNAS diffuse imprinting defects in sporadic PHP-Ib remains understood. Epigenetic changes mimic the paternal-specific methylation pattern. Uniparental disomy (UPD) is when both copies of a chromosome are from one parent only. Thus, paternal UPD of chromosome 20 (patUPD20) is a plausible cause of PHP-Ib. We screened a cohort of 53 patients presenting sporadic PHP-Ib to evaluate the frequency of patUPD20. CGH + SNP-array was used to identify copy neutral (absence of copy number variant) with loss of heterozygosity (cnLOH). Comparison of STR along chromosome 20 between the proband and his parents were used to confirm cnLOH and patUPD20. We also detailed phenotype of patients. Because CGH + SNP-array required high quality DNA, only 20 samples were tested. We found 5 patients (25%) with patUPD20: 3 complete patUPD20, 1 patUPD of the long arm of chromosome 20 and 1 with an interstitial UPD including GNAS locus. Patients with patUPD20 are not different of patients without patUPD20. Up to day, few isolated cases of patUPD20 have been published and our study suggests that patUPD20 is a frequent cause of PHP-Ib that is important for
SFE Lyon 2014 / Annales d’Endocrinologie 75 (2014) 297–299 genetic counseling and should be tested in evaluation of patients with sporadic PHP-Ib. Disclosure of interest conflict of interest.
The authors have not supplied their declaration of
http://dx.doi.org/10.1016/j.ando.2014.07.120 CO-78
Traitement substitutif de l’hypoparathyroïdie sévère par la PTH recombinante : une alternative efficace au traitement conventionnel M. Denis a,∗ , J. Young (Pr) b , S. Salenave (Dr) a , C. Jublanc (Dr) c , P. Chanson (Pr) b , A. Linglart (Pr) d , P. Kamenick´y (Dr) b a Service d’Endocrinologie et des Maladies de la Reproduction, CHU de Bicêtre, Le Kremlin-Bicêtre, France b Université Paris-Sud, Faculté de Médecine, Service d’Endocrinologie et des Maladies de la Reproduction, CHU de Bicêtre, Le Kremlin-Bicêtre, France c Service d’Endocrinologie, Hôpital Pitié-Salpêtrière, Paris, France d Université Paris-Sud, Faculté de Médecine, Service d’Endocrinologie Pédiatrique, CHU de Bicêtre, Le Kremlin-Bicêtre, France ∗ Auteur correspondant. Adresse e-mail : [email protected] (M. Denis) Contexte Le traitement conventionnel de l’hypoparathyroïdie par supplémentation orale en calcium et dérivés actifs de la vitamine D ne permet pas toujours de maintenir une calcémie acceptable, s’accompagne fréquemment
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d’une hypercalciurie et expose au risque de néphrocalcinose et de précipitation ectopique de phosphate de calcium. La substitution par PTH recombinante (PTHr) – plus physiologique – n’est pas habituellement utilisée, alors que l’hormone est disponible en France pour le traitement de l’ostéoporose. Objectif Évaluer l’efficacité et la tolérance de la PTHr dans l’hypoparathyroïdie sévère. Patients Neuf patients âgés de 46 ans (23–70 ans, 7F/2H) présentant une hypoparathyroïdie congénitale (n = 3) ou acquise (n = 6) difficile à contrôler par le traitement conventionnel (séjours répétés en réanimation pour hypocalcémie sévère, malabsorption, troubles psychiatriques) ont rec¸u un traitement sous-cutané biquotidien par la PTHr. Résultats Avant l’instauration de la PTHr, sous 2000 mg (1000–3000) de calcium et 1,75 g (1,50–3,00) d’alfacalcidol par jour, la médiane de calcémie était 1,86 mmol/L (1,55–2,01) et de calciurie 2,95 mmol/24 h (1,30–10,0). Sous PTHr, malgré l’arrêt d’alfacalcidol et de supplémentation orale en calcium, la calcémie augmentait de 20 % pour une médiane à 2,17 mmol/L (1,97–2,29, p < 0,05) alors que la calciurie diminuait de 44 % pour une médiane à 2,24 mmol/24 h (0,30–5,74, p < 0,05). La dose médiane de PTHr était 35 g/jour (30–40). Dans tous les cas, une nette amélioration de l’état clinique, notamment une disparition ou diminution des paresthésies, a été observée. Conclusion La PTHr est une alternative thérapeutique efficace pour le traitement de l’hypoparathyroidie non contrôlée par le traitement conventionnel. Déclaration d’intérêts conflits d’intérêts.
Les auteurs n’ont pas transmis de déclaration de
http://dx.doi.org/10.1016/j.ando.2014.07.121
SFE Lyon 2014 / Annales d’Endocrinologie 75 (2014) 297–299
Conclusion L’expression relative des transcrits de GNAS semble essentielle pour la croissance fœtale et post-natale. Certaines formes de PHP présentent une croissance excessive. Déclaration d’intérêts conflits d’intérêts.
Les auteurs n’ont pas transmis de déclaration de
http://dx.doi.org/10.1016/j.ando.2014.07.117 CO-75
Caractérisation fonctionnelle de mutations de PDE4D responsables d’acrodysostose sans résistance hormonale C. Briet (Dr) a,∗ , C. Le Stunff b , E. Motte (Dr) c , E. Clauser (Pr) d , N. Dumaz e , C. Silve (Dr) b a Endocrinologie, CHU Bicêtre, Le Kremlin-Bicêtre, France b Inserm U 986, Le Kremlin-Bicetre, France c service de pédiatrie.CHU bicêtre, Le Kremlin-Bicêtre, France d Inserm U976, HEGP, Paris, France e Inserm U 976N Hôpital Saint-Louis, Paris, France ∗ Auteur correspondant. Adresse e-mail : [email protected] (C. Briet) Introduction Plusieurs mutations des PDE4D, une des quatre sous-familles PDE4 impliquées spécifiquement dans la dégradation de l’AMPc ont été identifiées dans l’acrodysostose sans résistance hormonale. Le phénotype osseux indique une perte d’activation de la voie cAMP-PKA. Le but du travail est de caractériser les conséquences fonctionnelles de ces mutations. Matériels et méthodes Quatre mutations des PDE4D, localisées dans trois domaines fonctionnels caractérisant cette famille, ont été introduites par mutagenèse dirigée dans le plasmide pcDNA3-hPDE4D3. La fonction des PDE4D est mesurée après transfection transitoire dans les cellules CHO, en condition basale, stimulée, avec ou sans inhibiteur spécifique (rolipram) via : – la mesure de l’activité PDE4D (technologie de BRET via l’utilisation d’un biosensor EPAC et mesure de l’hydrolyse d’AMPc-H3 ) ; – la mesure de l’activité de la PKA (système rapporteur CRE-luciférase). Résultats L’expression des protéines mutées est similaire à celle de la PDE4D sauvage. Les mutants ont une activité augmentée par rapport au sauvage par technique de BRET et par mesure d’hydrolyse d’AMPc-H3 . L’activité PKA est inhibée par les mutants. Cette inhibition est réversée de fac¸on concentrationdépendante par le rolipram, avec une sensibilité au rolipram des mutants diminuée par rapport au sauvage. Quelle que soit la localisation des mutations, les résultats sont similaires. Discussion/conclusion Les 4 mutants PDE4D étudiés entraînent une augmentation de l’activité PDE4D en condition basale et stimulée et modifient leur sensibilité au rolipram. Ces résultats sont compatibles avec un gain de fonction des PDE4D mutées causant une perte d’activation de la voie cAMP-PKA. Déclaration d’intérêts conflits d’intérêts.
Les auteurs n’ont pas transmis de déclaration de
http://dx.doi.org/10.1016/j.ando.2014.07.118 CO-76
Étude de corrélation génotype-phénotype chez des patients avec réarrangement de la région du gène SHOX détecté par MLPA dans la population franc¸aise J. Auger (Dr) a,∗ , A. Baptiste b , S. Schmitt (Dr) c , G. Thierry (Dr) c , J.M. Costa (Dr) d , M. Amouyal e , M.L. Kottler (Pr) f , R. Touraine (Dr) g , M. Lebru (Dr) g , B. Leheup (Pr) h , V. Cormier-Daire (Pr) i , N. De Roux (Dr) j , C. Elie b , J.P. Bonnefont (Dr) k a Service de Médecine Infantile et Génétique clinique, CHU Nancy, Nancy, France b Unité de Recherche clinique, Paris Centre, CHU Necker–Enfants-Malades, Paris, France c CHU Nantes, Service de génétique médicale, Nantes, France d Service de génétique, Laboratoire Cerba, Saint-Ouen l’Aumône, Saint-Ouen L’Aumône
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CHU Robert-Debré, Paris, Service de génétique, Paris, France CHU Caen, Service de génétique médicale, Caen, France g CHU Saint-Étienne, Service de génétique, Saint-Étienne, France h CHU Nancy, Service de Médecine Infantile et Génétique clinique, Nancy, France i CHU Necker–Enfants-Malades, Paris, Service de Génétique médicale, Paris, France j CHU Robert-Debré, Paris, Service de Génétique médicale, Paris, France k Service de génétique médicale, CHU Necker–Enfants-Malades, Paris, Paris, France ∗ Auteur correspondant. Adresse e-mail : [email protected] (J. Auger) f
Objectif Les anomalies de SHOX ont des conséquences phénotypiques variables telles qu’une petite taille idiopathique ou la dyschondrostéose de Leri-Weill. Le but de notre étude multicentrique observationnelle était de décrire les phénotypes et les génotypes d’une grande population avec anomalie de SHOX, ou de ses régions régulatrices, et d’identifier une possible corrélation phénotype-génotype. Matériel et méthodes Les phénotypes et les génotypes ont été recueillis entre 2009 et 2013 dans 7 laboratoires franc¸ais utilisant la technique MLPA à visée diagnostique. Le séquenc¸age du gène a parfois été éffectué pour détecter une mutation ponctuelle quand la MLPA était normale. Résultats Au total, 305 patients ont été ainsi diagnostiqués, 91,3 % avaient une dyschondrostéose clinique. La taille médiane en DS était de –2,1. Les filles étaient diagnostiquées plus tôt que les garc¸ons (12,7 vs 15,2 ans, p = 0,04), étaient plus petites (–2,4 DS vs –2,0 DS, p = 0,007) et avaient plus fréquemment une déformation de Madelung (78,2 % vs 21,7 %, p = 0,0004). Les anomalies génétiques étaient: 40,3 % de délétions de SHOX ± PAR1, 33,7 % de délétions de PAR1, 5,9 % de duplications de PAR1, 2,0 % de duplications de SHOX + PAR1 et 18 % de mutations ponctuelles. Chez les filles, les délétions étaient plus fréquemment associées avec une déformation de Madelung, un avant-bras court et des signes radiologiques que les duplications (p = 0,02, p = 0,006 et p = 0,008). Conclusion Nous avons realisé une description de la population franc¸aise mutée pour SHOX et démontré que les phénotypes chez les garc¸ons sont moins sévères que chez les filles. Déclaration d’intérêts conflits d’intérêts.
Les auteurs n’ont pas transmis de déclaration de
http://dx.doi.org/10.1016/j.ando.2014.07.119 CO-77
Paternal isodisomy is a frequent cause of sporadic pseudohypoparathyroidism Ib
C. Colson ∗ , N. Richard , N. Grucgy , M. Decamp , M.L. Kottler Service génétique CHU Caen, Caen, Francr ∗ Corresponding author. E-mail address: [email protected] (C. Colson) Pseudohypoparathyroidism Ib (PHP-Ib) is associated with methylation changes at differentially methylated regions (DMRs) within the complex GNAS locus, located at 20q13.2-13.3, gives rise different transcripts according to parental origin of the allele. PHP-Ib familial form is defined by an isolated loss of methylation at the A/B DMR, secondary to deletion in the STX16 gene. However the cause of the GNAS diffuse imprinting defects in sporadic PHP-Ib remains understood. Epigenetic changes mimic the paternal-specific methylation pattern. Uniparental disomy (UPD) is when both copies of a chromosome are from one parent only. Thus, paternal UPD of chromosome 20 (patUPD20) is a plausible cause of PHP-Ib. We screened a cohort of 53 patients presenting sporadic PHP-Ib to evaluate the frequency of patUPD20. CGH + SNP-array was used to identify copy neutral (absence of copy number variant) with loss of heterozygosity (cnLOH). Comparison of STR along chromosome 20 between the proband and his parents were used to confirm cnLOH and patUPD20. We also detailed phenotype of patients. Because CGH + SNP-array required high quality DNA, only 20 samples were tested. We found 5 patients (25%) with patUPD20: 3 complete patUPD20, 1 patUPD of the long arm of chromosome 20 and 1 with an interstitial UPD including GNAS locus. Patients with patUPD20 are not different of patients without patUPD20. Up to day, few isolated cases of patUPD20 have been published and our study suggests that patUPD20 is a frequent cause of PHP-Ib that is important for
SFE Lyon 2014 / Annales d’Endocrinologie 75 (2014) 297–299 genetic counseling and should be tested in evaluation of patients with sporadic PHP-Ib. Disclosure of interest conflict of interest.
The authors have not supplied their declaration of
http://dx.doi.org/10.1016/j.ando.2014.07.120 CO-78
Traitement substitutif de l’hypoparathyroïdie sévère par la PTH recombinante : une alternative efficace au traitement conventionnel M. Denis a,∗ , J. Young (Pr) b , S. Salenave (Dr) a , C. Jublanc (Dr) c , P. Chanson (Pr) b , A. Linglart (Pr) d , P. Kamenick´y (Dr) b a Service d’Endocrinologie et des Maladies de la Reproduction, CHU de Bicêtre, Le Kremlin-Bicêtre, France b Université Paris-Sud, Faculté de Médecine, Service d’Endocrinologie et des Maladies de la Reproduction, CHU de Bicêtre, Le Kremlin-Bicêtre, France c Service d’Endocrinologie, Hôpital Pitié-Salpêtrière, Paris, France d Université Paris-Sud, Faculté de Médecine, Service d’Endocrinologie Pédiatrique, CHU de Bicêtre, Le Kremlin-Bicêtre, France ∗ Auteur correspondant. Adresse e-mail : [email protected] (M. Denis) Contexte Le traitement conventionnel de l’hypoparathyroïdie par supplémentation orale en calcium et dérivés actifs de la vitamine D ne permet pas toujours de maintenir une calcémie acceptable, s’accompagne fréquemment
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d’une hypercalciurie et expose au risque de néphrocalcinose et de précipitation ectopique de phosphate de calcium. La substitution par PTH recombinante (PTHr) – plus physiologique – n’est pas habituellement utilisée, alors que l’hormone est disponible en France pour le traitement de l’ostéoporose. Objectif Évaluer l’efficacité et la tolérance de la PTHr dans l’hypoparathyroïdie sévère. Patients Neuf patients âgés de 46 ans (23–70 ans, 7F/2H) présentant une hypoparathyroïdie congénitale (n = 3) ou acquise (n = 6) difficile à contrôler par le traitement conventionnel (séjours répétés en réanimation pour hypocalcémie sévère, malabsorption, troubles psychiatriques) ont rec¸u un traitement sous-cutané biquotidien par la PTHr. Résultats Avant l’instauration de la PTHr, sous 2000 mg (1000–3000) de calcium et 1,75 g (1,50–3,00) d’alfacalcidol par jour, la médiane de calcémie était 1,86 mmol/L (1,55–2,01) et de calciurie 2,95 mmol/24 h (1,30–10,0). Sous PTHr, malgré l’arrêt d’alfacalcidol et de supplémentation orale en calcium, la calcémie augmentait de 20 % pour une médiane à 2,17 mmol/L (1,97–2,29, p < 0,05) alors que la calciurie diminuait de 44 % pour une médiane à 2,24 mmol/24 h (0,30–5,74, p < 0,05). La dose médiane de PTHr était 35 g/jour (30–40). Dans tous les cas, une nette amélioration de l’état clinique, notamment une disparition ou diminution des paresthésies, a été observée. Conclusion La PTHr est une alternative thérapeutique efficace pour le traitement de l’hypoparathyroidie non contrôlée par le traitement conventionnel. Déclaration d’intérêts conflits d’intérêts.
Les auteurs n’ont pas transmis de déclaration de
http://dx.doi.org/10.1016/j.ando.2014.07.121