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Pertinence clinique de l’Hev b 12, la protéine de transfert lipidique (LTP) du latex naturel (Hevea brasiliensis)
10e Congrès francophone d’allergologie – CFA 2015 / Revue française d’allergologie 3 (2015) 221–230
222 All-3
All-4
Pertinence clinique de l’Hev b 12, la protéine de transfert lipidique (LTP) du latex naturel (Hevea brasiliensis)
Production et caractérisation d’Amb a 11 mature, un nouvel allergène majeur du pollen d’ambroisie (Ambrosia artemisiifolia) avec une activité cystéine protéase
A.L. Van Gasse 1,2,∗ , M.A. Faber 1,2 , V. Sabato 1,2 , C.H. Bridts 1,2 , A. Nayak 3 , D.H. Beezhold 3 , D.G. Ebo 1,2 1 Département d’Immunologie-Allergologie-Rhumatologie, Faculté de Médecine, Université d’Anvers, Anvers, Belgique 2 Service d’Immunologie-Allergologie-Rhumatologie, Hôpital Universitaire d’Anvers, Anvers, Belgique 3 Health Effects Laboratory, National Institute for Occupational Safety and Health, Morgantown west Virginia 26585, États-Unis ∗ Auteur correspondant. Adresse e-mail : [email protected] (A.L. Van Gasse) Introduction Sept allergènes moléculaires sont disponibles pour aider au diagnostic de l’allergie au latex ; Hev b 1, 3, 5, 6, 8, 9 et 11. L’objectif était d’évaluer l’intérêt clinique de l’Hev b 12, la protéine de transfert lipidique (LTP) du latex. Méthodes Cinq patients avec une allergie au latex et aux aliments d’origine végétale ont été sélectionnés. Ils avaient tous un résultat sIgE positif pour le latex. Deux étaient négatifs pour les composants disponibles (ImmunoCAP). Tous ont été testés pour le recombinant rHev b 12 et le natif nCan s 3, une LTP isolée du Cannabis sativa par l’application BDTM Cytometric Bead Array (CBA). Un MFI > 0,01 était considéré positif. Un test d’activation de basophiles (TAB) a été effectué avec rHev b 12, nCan s 3 et nPru p 3, une LTP de la pêche. Trois personnes en bonne santé ont servi de groupe témoin. Résultats Les résultats concernant la population et sIgE sont présentés dans le Tableau 1. Le TAB était positif pour le latex et le rHev b 12 chez les 2 patients avec un dosage sIgE rHev b 12 positif. Tandis que chez les patients non-sensibilisés au rHev b 12 le TAB était positif pour le latex mais pas pour le rHev b 12. Le TAB nCan s 3 était positif chez la patiente avec une allergie à la marihuana. Les sIgE et les TAB demeurent négatifs chez les témoins. Conclusion Ces résultats suggèrent la possibilité d’une allergie au latex due à une sensibilisation isolée à l’Hev b 12. Dans un cas la cause de cette sensibilisation semble être une sensibilisation au C. sativa. Tableau 1
Résultats concernant la population et sIgE.
Sexe/âge (années)
Latex : symptômes
Allergie
sIgE latex (kUa/L)
sIgE par CBA (MFI)
F/26
U,AE
Cannabis, cerise, noix, pomme, cacahuète, pêche, tomate, ananas, blé, tabac, vin rouge Cacahuète, noix, carotte Soja, pomme, kiwi, noix, pomme de terre, tomate, melon, paprika, cacahuète Châtaigne, fruit de la passion, kiwi Kiwi, cacahuète, amande
3,23
2,19
sIgE(kUa/L)
rHev b 12 nCan s 3 rPru p 3
H/11
U
F/39a
D,Wh
F/53b
U,Rh
F/52c
AE
12,57
34,40
Introduction Le pollen d’ambroisie (Ambrosia artemisiifolia) est une cause majeure d’allergies respiratoires sévères en Amérique du Nord et en Europe. Récemment, nous avons identifié Amb a 11, un nouvel allergène majeur du pollen d’ambroisie de la famille des protéases à cystéines. L’objectif de la présente étude est la production et la caractérisation d’Amb a 11 mature produit sous une forme recombinante. Méthodes La protéine Amb a 11 recombinante est obtenue par renaturation in vitro du zymogène à partir de corps d’inclusions d’Escherichia coli, puis maturation à pH acide. Des expériences de mutagenèse ont permis d’étudier le processus de maturation. Une caractérisation de la protéine mature a été réalisée par spectrométrie de masse et dichroïsme circulaire et l’activité protéasique a été mesurée par un test fluorimétrique. La réactivité IgE a été analysée avec des patients allergiques à l’ambroisie. Résultats Le zymogène Amb a 11 renaturé peut-être maturé à pH acide par un mécanisme autocatalytique. L’analyse par spectrométrie de masse confirme l’élimination des deux propeptides N- et C-terminaux au cours de ce processus. Le spectre de dichroïsme circulaire indique l’acquisition d’une structure secondaire similaire à celle d’Amb a 11 naturel. De même que l’allergène naturel, Amb a 11 recombinant possède une forte activité cystéine protéase et est reconnu par les IgE sériques de 60 % des patients allergiques au pollen d’ambroisie. Enfin, aucune réactivité croisée n’est observée avec la protéase à cystéine allergénique Der p 1 de Dermatophagoides pteronyssinus. Conclusion Nous avons produit la protéine Amb a 11 recombinante, nouvel allergène majeur du pollen d’ambroisie, qui possède des caractéristiques structurales et fonctionnelles similaires à la molécule naturelle. Ces résultats ouvrent la voie à l’utilisation d’Amb a 11 pour le diagnostic et l’immunothérapie allergénique. Déclaration d’intérêts conflits d’intérêts.
Les auteurs n’ont pas transmis de déclaration de
http://dx.doi.org/10.1016/j.reval.2015.02.031 All-5 0,64
0,97
< 0,10
2,88
3,92
< 0,10
< 0,10
< 0,10
6,36
< 0,10
< 0,10
< 0,10
0,75
< 0,10
< 0,10
< 0,10
F : femme ; H : homme ; U : urticaire ; AE : angio-oedème ; D : dyspnée ; Wh : wheezing ; Rh : rhinite. a Sensibilisée à l’Hev b 8. b Sensibilisée à l’Hev b 5 et 6. c Sensibilisée à l’Hev b 5.
Déclaration d’intérêts conflits d’intérêts.
R. Groeme 1,∗ , J. Jaekel 1 , M. Le Mignon 1 , K. Jain 1 , E. Nony 1 , V. Baron-Bodo 1 , P. Briozzo 2 , V. Bordas-Le Floch 1 , L. Mascarell 1 , P. Moingeon 1 1 Stallergenes, Antony, France 2 UMR 1318, IJPB, Inra, Versailles, France ∗ Auteur correspondant. Adresse e-mail : [email protected] (R. Groeme)
Les auteurs n’ont pas transmis de déclaration de
http://dx.doi.org/10.1016/j.reval.2015.02.030
Cosensibilisation à Alt a 1 et Act d 2 : une association fortuite ? M. Degaud 1,∗ , S. Viel 1 , M. Lleres 1 , L. Garnier 1 , A. Barre 2 , P. Rougé 2 , J. Bienvenu 1 , F. Bienvenu 1 1 Laboratoire d’Immunologie, Centre Hospitalier Lyon Sud, Hospices Civils de Lyon, Pierre-Bénite, France 2 UMR 5546 CNRS, Pôle de Biotechnologies Végétales, Castanet-Tolosan, France ∗ Auteur correspondant. Adresse e-mail : [email protected] (M. Degaud) Introduction La puce ISAC 112 (Thermo Scientific) explore 112 allergènes moléculaires dont Alt a 1 (glycoprotéine acide d’Alternaria alternata) et Act d 2 (thaumatin-like protein [TLP] du kiwi), seule TLP présente sur la puce. Une analyse portant sur 221 puces ISAC a mis en évidence une cosensibilisation relativement fréquente à Alt a 1 et Act d 2. Les objectifs de cette étude sont d’analyser la fréquence de cette cosensibilisation, d’en comprendre la cause, et de la relier, si possible, à un tableau clinique. Méthodes Extraction des données de 221 puces ISAC, réalisées en routine entre le 30/05/2013 et le 22/09/2014 chez des patients allergiques (62 % d’hommes - âge médian : 12 ans/extrêmes : 11 mois–74 ans).
222 All-3
All-4
Pertinence clinique de l’Hev b 12, la protéine de transfert lipidique (LTP) du latex naturel (Hevea brasiliensis)
Production et caractérisation d’Amb a 11 mature, un nouvel allergène majeur du pollen d’ambroisie (Ambrosia artemisiifolia) avec une activité cystéine protéase
A.L. Van Gasse 1,2,∗ , M.A. Faber 1,2 , V. Sabato 1,2 , C.H. Bridts 1,2 , A. Nayak 3 , D.H. Beezhold 3 , D.G. Ebo 1,2 1 Département d’Immunologie-Allergologie-Rhumatologie, Faculté de Médecine, Université d’Anvers, Anvers, Belgique 2 Service d’Immunologie-Allergologie-Rhumatologie, Hôpital Universitaire d’Anvers, Anvers, Belgique 3 Health Effects Laboratory, National Institute for Occupational Safety and Health, Morgantown west Virginia 26585, États-Unis ∗ Auteur correspondant. Adresse e-mail : [email protected] (A.L. Van Gasse) Introduction Sept allergènes moléculaires sont disponibles pour aider au diagnostic de l’allergie au latex ; Hev b 1, 3, 5, 6, 8, 9 et 11. L’objectif était d’évaluer l’intérêt clinique de l’Hev b 12, la protéine de transfert lipidique (LTP) du latex. Méthodes Cinq patients avec une allergie au latex et aux aliments d’origine végétale ont été sélectionnés. Ils avaient tous un résultat sIgE positif pour le latex. Deux étaient négatifs pour les composants disponibles (ImmunoCAP). Tous ont été testés pour le recombinant rHev b 12 et le natif nCan s 3, une LTP isolée du Cannabis sativa par l’application BDTM Cytometric Bead Array (CBA). Un MFI > 0,01 était considéré positif. Un test d’activation de basophiles (TAB) a été effectué avec rHev b 12, nCan s 3 et nPru p 3, une LTP de la pêche. Trois personnes en bonne santé ont servi de groupe témoin. Résultats Les résultats concernant la population et sIgE sont présentés dans le Tableau 1. Le TAB était positif pour le latex et le rHev b 12 chez les 2 patients avec un dosage sIgE rHev b 12 positif. Tandis que chez les patients non-sensibilisés au rHev b 12 le TAB était positif pour le latex mais pas pour le rHev b 12. Le TAB nCan s 3 était positif chez la patiente avec une allergie à la marihuana. Les sIgE et les TAB demeurent négatifs chez les témoins. Conclusion Ces résultats suggèrent la possibilité d’une allergie au latex due à une sensibilisation isolée à l’Hev b 12. Dans un cas la cause de cette sensibilisation semble être une sensibilisation au C. sativa. Tableau 1
Résultats concernant la population et sIgE.
Sexe/âge (années)
Latex : symptômes
Allergie
sIgE latex (kUa/L)
sIgE par CBA (MFI)
F/26
U,AE
Cannabis, cerise, noix, pomme, cacahuète, pêche, tomate, ananas, blé, tabac, vin rouge Cacahuète, noix, carotte Soja, pomme, kiwi, noix, pomme de terre, tomate, melon, paprika, cacahuète Châtaigne, fruit de la passion, kiwi Kiwi, cacahuète, amande
3,23
2,19
sIgE(kUa/L)
rHev b 12 nCan s 3 rPru p 3
H/11
U
F/39a
D,Wh
F/53b
U,Rh
F/52c
AE
12,57
34,40
Introduction Le pollen d’ambroisie (Ambrosia artemisiifolia) est une cause majeure d’allergies respiratoires sévères en Amérique du Nord et en Europe. Récemment, nous avons identifié Amb a 11, un nouvel allergène majeur du pollen d’ambroisie de la famille des protéases à cystéines. L’objectif de la présente étude est la production et la caractérisation d’Amb a 11 mature produit sous une forme recombinante. Méthodes La protéine Amb a 11 recombinante est obtenue par renaturation in vitro du zymogène à partir de corps d’inclusions d’Escherichia coli, puis maturation à pH acide. Des expériences de mutagenèse ont permis d’étudier le processus de maturation. Une caractérisation de la protéine mature a été réalisée par spectrométrie de masse et dichroïsme circulaire et l’activité protéasique a été mesurée par un test fluorimétrique. La réactivité IgE a été analysée avec des patients allergiques à l’ambroisie. Résultats Le zymogène Amb a 11 renaturé peut-être maturé à pH acide par un mécanisme autocatalytique. L’analyse par spectrométrie de masse confirme l’élimination des deux propeptides N- et C-terminaux au cours de ce processus. Le spectre de dichroïsme circulaire indique l’acquisition d’une structure secondaire similaire à celle d’Amb a 11 naturel. De même que l’allergène naturel, Amb a 11 recombinant possède une forte activité cystéine protéase et est reconnu par les IgE sériques de 60 % des patients allergiques au pollen d’ambroisie. Enfin, aucune réactivité croisée n’est observée avec la protéase à cystéine allergénique Der p 1 de Dermatophagoides pteronyssinus. Conclusion Nous avons produit la protéine Amb a 11 recombinante, nouvel allergène majeur du pollen d’ambroisie, qui possède des caractéristiques structurales et fonctionnelles similaires à la molécule naturelle. Ces résultats ouvrent la voie à l’utilisation d’Amb a 11 pour le diagnostic et l’immunothérapie allergénique. Déclaration d’intérêts conflits d’intérêts.
Les auteurs n’ont pas transmis de déclaration de
http://dx.doi.org/10.1016/j.reval.2015.02.031 All-5 0,64
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2,88
3,92
< 0,10
< 0,10
< 0,10
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< 0,10
< 0,10
0,75
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F : femme ; H : homme ; U : urticaire ; AE : angio-oedème ; D : dyspnée ; Wh : wheezing ; Rh : rhinite. a Sensibilisée à l’Hev b 8. b Sensibilisée à l’Hev b 5 et 6. c Sensibilisée à l’Hev b 5.
Déclaration d’intérêts conflits d’intérêts.
R. Groeme 1,∗ , J. Jaekel 1 , M. Le Mignon 1 , K. Jain 1 , E. Nony 1 , V. Baron-Bodo 1 , P. Briozzo 2 , V. Bordas-Le Floch 1 , L. Mascarell 1 , P. Moingeon 1 1 Stallergenes, Antony, France 2 UMR 1318, IJPB, Inra, Versailles, France ∗ Auteur correspondant. Adresse e-mail : [email protected] (R. Groeme)
Les auteurs n’ont pas transmis de déclaration de
http://dx.doi.org/10.1016/j.reval.2015.02.030
Cosensibilisation à Alt a 1 et Act d 2 : une association fortuite ? M. Degaud 1,∗ , S. Viel 1 , M. Lleres 1 , L. Garnier 1 , A. Barre 2 , P. Rougé 2 , J. Bienvenu 1 , F. Bienvenu 1 1 Laboratoire d’Immunologie, Centre Hospitalier Lyon Sud, Hospices Civils de Lyon, Pierre-Bénite, France 2 UMR 5546 CNRS, Pôle de Biotechnologies Végétales, Castanet-Tolosan, France ∗ Auteur correspondant. Adresse e-mail : [email protected] (M. Degaud) Introduction La puce ISAC 112 (Thermo Scientific) explore 112 allergènes moléculaires dont Alt a 1 (glycoprotéine acide d’Alternaria alternata) et Act d 2 (thaumatin-like protein [TLP] du kiwi), seule TLP présente sur la puce. Une analyse portant sur 221 puces ISAC a mis en évidence une cosensibilisation relativement fréquente à Alt a 1 et Act d 2. Les objectifs de cette étude sont d’analyser la fréquence de cette cosensibilisation, d’en comprendre la cause, et de la relier, si possible, à un tableau clinique. Méthodes Extraction des données de 221 puces ISAC, réalisées en routine entre le 30/05/2013 et le 22/09/2014 chez des patients allergiques (62 % d’hommes - âge médian : 12 ans/extrêmes : 11 mois–74 ans).