The AF-1 activation function of estrogen receptor alpha is necessary and sufficient for uterine epithelial cell proliferation in vivo

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www.sciencedirect.com Annales d’Endocrinologie 74 (2013) 265–266

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Gonades

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Et si l’ostéocalcine était aussi un régulateur de la biosynthèse de la testostérone chez l’homme

Caractérisation du rôle des récepteurs des oxystérols (LXRs) dans le testicule

Plotton a,e,∗ ,

Oury b ,

Confavreux c ,

Morel a,e ,

F. C. Y. I. H. Lejeune d,e , G. Karsenty b a Laboratoire hormonologie et endocrinologie moléculaire maladies rares, Hospices Civils de Lyon, Lyon, France b Genetics Department, Columbia University, New York, États-Unis c Inserm UMR 1033, université de Lyon, département de rhumatologie, Hospices Civils de Lyon, Lyon, France d Service de médecine de la reproduction, Hospices Civils de Lyon, Lyon, France e Inserm U846, Bron, France ∗ Auteur correspondant. L’ostéocalcine, hormone produite par les ostéoblastes, est active sur le métabolisme énergétique en stimulant l’insulinosécrétion et l’insulinosensibilité. Des travaux récents chez la souris montrent que l’ostéocalcine favorise la biosynthèse de testostérone après liaison à son récepteur spécifique GPRC6A sur les cellules de Leydig. Les souris déficientes pour l’ostéocalcine ou son récepteur présentent une hypofertilité, caractérisée par une diminution de la testostérone et une augmentation de la LH circulante comme cela peut être observé dans les cas d’insuffisance testiculaire idiopathique. Objectif.– L’objectif de l’étude était d’explorer si des mutations dans le gène de l’osteocalcine ou de son récepteur pouvaient être responsable d’une insuffisance testiculaire idiopathique chez l’homme. Patients et méthodes.– Parmi les patients consultants dans le service de médecine de la reproduction des Hospices Civils de Lyon, furent inclus dans cette étude tous les patients présentant une oligospermie sévère [10 UI/L (IRMA Beckamn Immunotech® )] et une testostérone < 10nmol/L et furent exclus les patients atteints de syndromes de Klinefelter, microdélétions du chromosome Y et infertilités secondaires ont été exclus. Les gènes de l’ostéocalcine et son récepteur GPRC6A ont été séquencés à partir de l’ADN génomique. Résultats.– Parmi 59 patients sélectionnés, deux non apparentés portaient une substitution F464Y du gène GPRC6A. L’étude fonctionnelle de la mutation in vitro et in vivo a montré que cette mutation sur un allèle agissait de fac¸on « dominante négative ». Discussion.– Notre étude chez l’homme, est la première à établir l’existence d’une mutation de la voie de l’ostéocalcine responsable d’oligospermie avec altération de production de testostérone. http://dx.doi.org/10.1016/j.ando.2013.07.094

夽 Résumés présentés lors du 30e Congrès de la Société franc ¸ aise d’endocrinologie Paris 2013.

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S. Maqdasy a,∗ , M. Baptissart b , D. Volle b , I. Tauveron a , J.M. Lobaccaro b , S. Baron b a GReD : UMR CNRS 6293, Inserm U1103, Service d’endocrinologie, CHU de Clermont-Ferrand, Clermont université, Clermont-Ferrand, France b GReD : UMR CNRS 6293, Inserm U1103, Clermont université, Clermont-Ferrand, France ∗ Auteur correspondant. Introduction.– Les récepteurs nucléaires des oxystérols LXR␣ et LXR␤ sont impliqués dans l’homéostasie cellulaire du cholestérol. L’analyse phénotypique des souris dont les gènes codant les LXRs ont été invalidés (souris lxrαβ–/–) a précisé le rôle de ces récepteurs dans la physiologie testiculaire. Ces souris présentent une stérilité précoce caractérisée par une attente de l’intégrité structurale et fonctionnelle du testicule. Objectifs.– Pour préciser le rôle de LXR␤ in vivo, une transgénèse additive d’ADNc codant Lxrβ dirigée par un promoteur d’Amh dans les souris lxrαβ–/– a été effectuée (souris lxrαβ–/–Tglxrβ). Méthodes.– Des analyses moléculaires et histologiques comparant trois phénotypes des souris (lxrαβ+/+, lxrαβ–/–, lxrαβ–/–Tglxrβ) ont été effectuées. Résultats.– L’expression de LXR␤ dans la cellule de Sertoli restaure l’homéostasie lipidique ainsi que le rétrocontrôle exercé sur l’axe gonadotrope par l’intermédiaire de la synthèse de l’inhibine testiculaire. En revanche, les autres fonctions sertoliennes, la phagocytose et la barrière hémato-testiculaire, ne sont pas restaurés. Concernant les autres compartiments cellulaires dans le testicule, la balance prolifération/apoptose des cellules germinales et l’activité stéroïdogénique des cellules de Leydig ne sont que partiellement corrigées. Au final.– Les résultats obtenus montrent que l’expression des LXRs dans les autres cellules du testicule et notamment dans les cellules germinales a une importance vitale dans le maintien de la fertilité. http://dx.doi.org/10.1016/j.ando.2013.07.095 CO-33

The AF-1 activation function of estrogen receptor alpha is necessary and sufficient for uterine epithelial cell proliferation in vivo A. Abot , C. Fontaine , P. Gourdy , F. Lenfant , J.F. Arnal ∗ Inserm, Toulouse, France ∗ Corresponding author.

Estrogen receptor-␣ (ER␣) regulates gene transcription through the two activation functions (AF) AF-1 and AF-2. The crucial role of ER␣AF-2 was previously demonstrated for endometrial proliferative action of 17b-estradiol (E2). Here, we investigated the role of ER␣AF-1 in the regulation of gene transcription and cell proliferation in the uterus. We show that acute treatment with E2 or tamoxi-

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fen, which selectively activates ERaAF-1, similarly regulate the expression of a uterine set of estrogen dependent genes as well as epithelial cell proliferation in the uterus of wild type mice. These effects were abrogated in mice lacking ERaAF-1 (ERαAF-10 ). Four weeks of E2 treatment led to uterine hypertrophy and sustained luminal epithelial and stromal cell proliferation in wild type mice, but not in ERαAF-10 mice. However, ERαAF-10 mice still presented a moderate uterine hypertrophy essentially due to a stromal oedema, potentially due to the persistence of VEGF-A induction. Epithelial apoptosis is largely decreased in these ERαAF-10 uteri, and response to progesterone response is also altered. Finally, E2-induced proliferation of an ERa positive epithelial cancer cell line was also inhibited by over-expression of an inducible ER␣ isoform lacking AF-1. Altogether, these data highlight the crucial role of ER␣AF-1 in the E2-induced proliferative response in vitro and in vivo. As ER␣AF-1 was previously reported to be dispensable for several E2 extra-reproductive protective effects, an optimal ERa modulation could be obtained using molecules activating ER␣ with a minimal ER␣AF-1 action. http://dx.doi.org/10.1016/j.ando.2013.07.096 CO-34

L’AMPK, une protéine impliquée dans les interactions entre les cellules nourricières et les cellules germinales M.J. Bertoldo a,∗ , E. Guibert a , P. Tartarin a , F. Guillou a , M. Foretz b , B. Viollet b , P. Froment a a Institut national de la recherche agronomique (Inra), UMR physiologie de la reproduction et des comportements, Nouzilly, France b Institut national de la sainte et de la recherche médicale (Inserm), U1016, Institut Cochin, Paris, France ∗ Auteur correspondant. La 5 AMP-Activated Protein Kinase (AMPK) est un indicateur important des réserves énergétiques, mais aussi de la polarité et la survie de la cellule. Cette protéine est activée en cas de déficit énergétique, mais est aussi la cible de polyphénols et de la metformine. Malgré que la relation entre le métabolisme et la fertilité soit bien établie, peu d’études se sont intéressées au rôle de l’AMPK, sur le contrôle de la fertilité masculine. Récemment, nous avons montré que l’absence totale de l’alpha1-AMPK chez la souris conduit a une baisse de fertilité associée à une altération de la qualité de spermatozoïdes. L’objectif de notre étude a été d’étudier l’implication de l’AMPK entre les cellules germinales et les cellules qui les entourent en utilisant 1/une lignée et des cellules primaires de Sertoli murine 2/une lignée de souris où le gène AMPK est inactivé spécifiquement dans les cellules de Sertoli. L’absence d’AMPK dans les cellules de Sertoli a conduit à une baisse d’expression et un changement de localisation de protéine de la barrière hématotesticulaire : beta-catenine et vimentine. De plus, l’activité de phagocytose dans les cellules mutantes est augmenté. In vivo, la qualité du sperme est dégradée puisque les spermatozoïdes ont plus de vésicules lipidiques et une forme de la tête anormale plus fréquente, qui peuvent être liée à l’altération des fonctions observées in vitro. Les perspectives vont compléter l’étude en analysant le métabolisme lipidique et en comparant les résultats avec les interactions ovocyte/cellules du cumulus chez la femelle. http://dx.doi.org/10.1016/j.ando.2013.07.097 CO-35

Comment peut-on expliquer les courbes dose–réponse non monotoniques en U inversé induites par le bisphénol A ? Le modèle de la prolifération des cellules germinales séminomateuses N. Chevalier a,∗ , R. Paul-Bellon b , A. Bouskine b , P. Fenichel a a Service d’endocrinologie, diabétologie et médecine de la reproduction, Inserm UMR 1065/UNS, équipe 5, Nice, France

b

Inserm UMR 1065/UNS, équipe 5, Nice, France correspondant.

∗ Auteur

Contexte.– Nous avons précédemment rapporté dans un modèle cellulaire de séminome humain (lignée JKT-1) qu’à doses faibles (nM), le 17béta-estradiol (E2) inhibait la prolifération cellulaire via le récepteur ERbeta, alors que le bisphénol A (BPA) stimulait la prolifération cellulaire via un récepteur membranaire GPER/GPR30. Méthodes.– Étude sur la prolifération cellulaire in vitro de doses croissantes d’E2 et BPA, avec ou sans agonistes/antagonistes spécifiques de ERbeta (ZU, ICI) ou de GPER/GPR30 (G1, G15). Résultats.– Les courbes dose–réponse (de 10−2 à 10−15 M) de E2 et du BPA sont non monotoniques, en U inversé, et en miroir l’une de l’autre, avec un effet maximal à 10−9 M inhibiteur pour E2 et promoteur pour BPA. L’utilisation des agonistes et antagonistes spécifiques, et le décalage vers le bas de la courbe dose–réponse du BPA lors de l’association à une dose fixe d’E2 (10−6 M) permet d’expliquer ces courbes comme l’effet résultant du BPA ou de E2 capables d’interagir à la fois avec les récepteurs ERbeta et GPER/GPR30 mais avec une affinité différente et inverse, maximale à 10−9 M avec GPER/GPR30 pour le BPA et avec ERbeta pour E2 à la même dose. Discussion.– Dans notre modèle n’exprimant pas ERalpha, le BPA est très affin pour GPER/GPR30, stimulant la prolifération à très faibles doses (identiques aux concentrations plasmatiques mesurées en population générale) mais pas pour ERbeta, E2 présentant une affinité inverse, expliquant ainsi les courbes dose–réponse non monotoniques observées. Cela est important à prendre en compte pour évaluer l’effet seul ou en cocktail des xéno-estrogènes. http://dx.doi.org/10.1016/j.ando.2013.07.098 CO-36

Analyse des taux d’AMH et de leur relation avec la probabilité de survenue d’une grossesse chez 112 patientes présentant un lupus systémique, exposées ou non au cyclophosphamide

N. Morel , A. Bachelot ∗ , Z. Chakhtoura , C. Coussieu , Z. Amoura , P. Touraine , N. Costedoat-Chalumeau Groupe hospitalier Pitié-Salpêtrière, Paris, France ∗ Auteur correspondant.

Le cyclophosphamide est un des traitements de référence du lupus systémique, notamment en cas d’atteinte rénale. Il peut être à l’origine d’insuffisance ovarienne prématurée. Nous avons analysé les taux d’AMH et la probabilité de survenue d’une grossesse chez des femmes lupiques exposées au cyclophosphamide. Patients et méthodes.– L’AMH a été mesuré chez 57 patientes lupiques de moins de 40 ans ayant été traitées par cyclophosphamide et chez 57 patientes lupiques non exposées au cyclophosphamide appariées sur l’âge, sur les tubes de sérothèque de l’étude PLUS. L’ensemble des patientes ont été interrogées en mai 2012 sur leur projet parental. Résultats.– L’âge moyen des 112 patientes étaient de 31,6 ± 5,8 ans. Les taux d’AMH étaient bas (1,21 ± 1,01 ng/mL) et étaient significativement plus bas chez les patients exposées au cyclophosphamide (p = 0,03) et chez les patientes âgées de plus de 30 ans (p = 0,02). Sur une période de suivi (intervalle entre le prélèvement sanguin et l’interrogatoire) de 4,2 [2,5–4,8] ans, 38 patientes ont eu un projet parental et 32 ont eu une grossesse (84,2 %). En analyse univariée, le risque d’échec du projet parental était associé à la dose cumulée de cyclophosphamide (p = 0,007) et à l’âge (p = 0,02), mais pas au taux d’AMH. Conclusion.– Notre étude confirme que les taux d’AMH sont bas chez les patients lupiques et diminuent avec l’âge et l’exposition au cyclophosphamide. Néanmoins, le risque d’échec du projet parental était peu fréquent et était associé à l’âge de la patiente et à l’exposition au cyclophosphamide, mais pas au taux d’AMH. http://dx.doi.org/10.1016/j.ando.2013.07.099