Acides nucléiques circulants et fécondation in vitro

Gyne´cologie Obste´trique & Fertilite´ 42 (2014) 696–701

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ScienceDirect www.sciencedirect.com

Revue de la litte´rature

Acides nucle´iques circulants et fe´condation in vitro Circulating nucleic acids and in vitro fertilization E. Scalici a,b,c, S. Traver a, T. Mullet b,c, A. Ferrie`res b, M. Monforte d, E. Vintejoux d, S. Hamamah a,*,b,c Inserm U1040, institut de me´decine re´ge´ne´rative et biothe´rapie, hoˆpital Saint-E´loi, CHU de Montpellier, 80, avenue Augustin-Fliche, 34295 Montpellier, France De´partement de biologie de la reproduction, hoˆpital Arnaud-de-Villeneuve, CHU de Montpellier, 371, avenue du Doyen-Gaston-Giraud, 34295 Montpellier, France c Universite´ Montpellier 1, UFR de me´decine, 34000 Montpellier, France d De´partement de Gyne´cologie-Obste´trique, hoˆpital Arnaud-de-Villeneuve, CHU de Montpellier, 371, avenue du Doyen-Gaston-Giraud, 34295 Montpellier, France a

b

I N F O A R T I C L E

R E´ S U M E´

Historique de l’article : Rec¸u le 5 avril 2014 Accepte´ le 7 juillet 2014 ˆ t 2014 Disponible sur Internet le 22 aou

Au cours de ces dernie`res anne´es, l’utilisation des acides nucle´iques circulants (microARNs et ADN libre) comme outils diagnostiques et/ou pronostiques en cance´rologie a e´te´ largement documente´e. De la meˆme manie`re en gyne´cologie-obste´trique, le de´veloppement du diagnostic pre´natal non invasif, base´ sur l’e´tude de ces biomarqueurs, a confirme´ leur inte´reˆt grandissant dans cette discipline. En reproduction humaine, plusieurs e´tudes se sont inte´resse´es aux microARNs, petites se´quences d’ARN non codantes, pre´sents dans le follicule ovarien et a` leur implication dans la folliculogene`se. Certains de ces microARNs, ainsi que les ve´sicules qui les transportent, sont facilement de´tectables dans la circulation sanguine et pourraient devenir de ve´ritables biomarqueurs d’inte´reˆt dans la prise en charge de l’infertilite´. Le taux d’ADN libre circulant varie en fonction du contexte physiopathologique et refle`te la proportion d’e´ve´nements apoptotiques et/ou ne´crotiques survenant dans l’organisme. De ce fait, son dosage sanguin pourrait apporter une aide comple´mentaire aux praticiens dans l’e´valuation de l’e´tat fonctionnel ovarien. De plus, ces acides nucle´iques circulants pourraient e´galement constituer de nouveaux biomarqueurs pre´dictifs de la qualite´ ovocytaire et/ou embryonnaire et repre´senter une piste prometteuse dans la pre´vention des e´checs d’implantation. En conclusion, ces acides nucle´iques circulants ouvrent la voie au de´veloppement de nouveaux tests diagnostiques et/ou pronostiques innovants ayant pour principal objectif l’ame´lioration des re´sultats en fe´condation in vitro. ß 2014 Elsevier Masson SAS. Tous droits re´serve´s.

Mots cle´s : Acides nucle´iques circulants MicroARNs ADN libre Fe´condation in vitro Re´serve ovarienne Qualite´ embryonnaire Implantation

A B S T R A C T

Keywords: Circulating nucleic acids MicroRNAs Cell-free DNA In vitro fertilization Ovarian reserve Embryo quality Implantation

During the last years, the use of circulating nucleic acids (microRNAs and cell-free DNA) as diagnostic and/or prognostic tools in cancerology was widely documented. Likewise, in obstetrics and gynecology, the development of non-invasive prenatal testing based on the assessment of these biomarkers confirmed their growing interest in this speciality. In human reproduction, several studies were interested in the microRNAs, small non-coding RNA sequences, present in the ovarian follicle and their implication in folliculogenesis. Some of these microRNAs, as well as the vesicles which transport them, are easily detectable in the bloodstream and could be used as reliable biomarkers of interest in infertility care. Cell-free DNA level varies according to physiopathology and reflect the proportion of apoptotic and/or necrotic events occurring in the body. As a result, its quantification could give an additional help to the practitioners for ovarian functional status evaluation. Furthermore, these circulating nucleic acids could also constitute new predictive biomarkers of oocyte and/or embryo quality and represent a promising perspective for the prevention of in vitro fertilization implantation failures. In conclusion, these circulating nucleic acids open the way to the development of new diagnostic and/or prognostic innovative tests in order to improve in vitro fertilization outcomes. ß 2014 Elsevier Masson SAS. All rights reserved.

* Auteur correspondant. Adresse e-mail : [email protected] (S. Hamamah). http://dx.doi.org/10.1016/j.gyobfe.2014.07.014 1297-9589/ß 2014 Elsevier Masson SAS. Tous droits re´serve´s.

E. Scalici et al. / Gyne´cologie Obste´trique & Fertilite´ 42 (2014) 696–701

1. Introduction De nos jours, les acides nucle´iques circulants (microARNs et ADN libre) ont largement de´montre´ leurs inte´reˆts et leurs applications dans diffe´rentes disciplines me´dicales et particulie`rement en cance´rologie [1,2]. En effet, dans ce domaine, ils sont conside´re´s comme de ve´ritables outils diagnostiques et pronostiques, apportant ainsi une aide pre´cieuse aux cliniciens dans leur pratique courante [3–6]. De plus, il a e´te´ re´cemment rapporte´ que les ve´sicules extracellulaires responsables du transport des microARNs dans les fluides biologiques, repre´sentent e´galement une piste inte´ressante pour le de´veloppement de nouveaux biomarqueurs en cance´rologie [7,8]. Ces acides nucle´iques circulants sont aussi couramment utilise´s en gyne´cologieobste´trique comme biomarqueurs non invasifs pour la de´tection ou le suivi de pathologies cance´reuses [9–12], de pathologies lie´es a` la grossesse [13–15] ou encore d’anomalies fœtales [16–19]. Repre´sentant une approche prometteuse et non invasive pour le diagnostic pre´natal [16,19–21], ils ouvrent ainsi la voie au de´veloppement de nouveaux tests diagnostiques et/ou pronostiques et notamment en fertilite´. En effet, actuellement, tre`s peu d’e´tudes se sont inte´resse´es aux roˆles des acides nucle´iques circulants en reproduction humaine et a` leurs e´ventuelles contributions dans le domaine de l’assistance me´dicale a` la procre´ation (AMP). Cependant, les enjeux cliniques et biologiques semblent e´vidents, sachant que l’objectif principal des praticiens est l’ame´lioration des techniques et des re´sultats en fe´condation in vitro (FIV). Ainsi, cette revue de la litte´rature permettra d’apporter les donne´es scientifiques ne´cessaires pour justifier de l’inte´reˆt de ces acides nucle´iques circulants et de leurs applications possibles en AMP. 2. Biogene`se et physiopathologie des acides nucle´iques circulants Les microARNs appartiennent a` la famille des « petits ARNs » et correspondent a` de petites se´quences d’ARN simple brin non codantes de 19 a` 25 nucle´otides [22]. Identifie´s pour la premie`re fois chez le ne´matode Caenorhabditis elegans par Lee et al. en 1993 [23], ces microARNs ne codent pas pour des prote´ines mais re´gulent l’expression des ge`nes [24]. Ce type de re´gulation posttranscriptionnelle qui consiste a` mettre sous silence l’expression de certains ge`nes en interfe´rant avec l’ARNm correspondant est appele´e « l’interfe´rence ARN ». Andrew Fire et Craig Mello, deux biologistes ame´ricains ont obtenu le Prix Nobel de physiologie et de me´decine en 2006, pour la de´couverte de ce me´canisme chez Caenorhabditis elegans RNA interference - gene silencing by doublestranded RNA [25]. Les microARNs sont issus de pri-microARNs, transcrits primaires replie´s sur eux-meˆmes en structure dite de « tige-boucle ». Ces pri-microARNs sont synthe´tise´s via la voie classique de transcription par l’ARN polyme´rase II [26], puis clive´s par un complexe prote´ique forme´ de Drosha (RNase ou Ribonucle´ases III de classe 2) et de la DiGeorge critical region 8 (DGCR8) pour donner un pre´-microARN long d’environ 70 nucle´otides [27]. Celui-ci est ensuite transporte´ par l’Exportine 5, du noyau vers le cytoplasme [28], dans lequel il sera clive´ par une enzyme de la famille Dicer (RNases ou Ribonucle´ases III de classe 3) permettant ainsi l’hydrolyse de la structure boucle terminale. Ce clivage aboutit alors a` la libe´ration d’un microARN double brin de 22 nucle´otides environ (miARNdb) [29] qui interagira par la suite avec une prote´ine de la famille Argonaute (AGO1 ou AGO2) pour former le complexe miRNA-induced silencing complex (miRISC) [30]. Seul le brin spe´cifique de l’ARNm cible du microARN sera incorpore´ au sein du complexe miRISC permettant ainsi l’interaction microARN-ARNm. Enfin, deux voies de mise sous silence (silencing en anglais) des ARNm cibles ont e´te´ de´crites : la premie`re

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par de´gradation de l’ARNm dans le cas ou` le complexe miRISC contiendrait AGO2 et la seconde par re´pression de la traduction prote´ique en pre´sence d’AGO1 dans le complexe miRISC [31]. La plupart des microARNs sont localise´s a` l’inte´rieur des cellules ou` ils jouent un roˆle crucial dans la re´gulation de nombreux processus biologiques [32]. Cependant, un certain nombre d’entre eux sont e´galement de´tecte´s dans les fluides extracellulaires de l’organisme tels que le se´rum, le plasma, l’urine, le liquide ce´phalorachidien, la salive et le liquide folliculaire [32–35]. Ces microARNs dits « circulants » sont contenus dans des ve´sicules (exosomes ou microparticules), des lipoprote´ines (HDL ou LDL) ou des complexes ribonucle´oprote´iques pour e´viter leur de´gradation par les RNAses, lors de leur transport intercellulaire [36–38]. Par ailleurs, la de´couverte de ces me´canismes de transport intercellulaire par des « ve´sicules-cargo » a valu le Prix Nobel de physiologie et de me´decine en 2013 aux chercheurs ame´ricains, Randy Schekman et James Rothman et au chercheur allemand Thomas Su¨dhof. Ainsi, ces microARNs circulants et les ve´sicules qui les transportent sont conside´re´s comme de nouveaux biomarqueurs spe´cifiques pour le diagnostic et le suivi de pathologies se´ve`res telles que les cancers [1–8,10,12,32,39–42]. Dans la circulation sanguine, des fragments d’ADN ont e´galement e´te´ identifie´s. Ces fragments sont de tailles variables (courts : de 70 a` 200 paires de bases ou longs : jusqu’a` 21 kb) et correspondent a` de l’ADN libre circulant double brin. La pre´sence de cet ADN libre circulant dans le se´rum ou le plasma re´sulte d’e´ve´nements inflammatoires, apoptotiques ou ne´crotiques cellulaires impliquant deux me´canismes distincts [43,44]. Le premier consiste en un relargage passif d’ADN nucle´aire et mitochondrial lie´ a` la de´gradation apoptotique ou ne´crotique de cellules dans l’organisme [1,2]. Chez les sujets sains, les de´bris cellulaires sont phagocyte´s par les macrophages, ce qui explique leur taux d’ADN libre circulant faible [45]. Cependant, apre`s phagocytose de cellules ne´crotiques, l’ADN peut eˆtre partiellement relargue´ dans la circulation sanguine a` l’inte´rieur de nucle´osomes et ainsi eˆtre prote´ge´ de la de´gradation enzymatique [46,47]. Ce processus peut survenir a` la fois chez des individus sains et dans le cadre de pathologies be´nignes. Le second me´canisme correspond a` une se´cre´tion cellulaire active [48] observe´e dans des cas de pathologies malignes telles que les cancers. Dans ces conditions pathologiques, le taux d’ADN libre peut eˆtre drastiquement augmente´, d’ou` son inte´reˆt en tant que biomarqueur diagnostique et/ou pronostique [1–6,9,11]. 3. Acides nucle´iques circulants : nouveaux biomarqueurs de la re´serve ovarienne Depuis ces huit dernie`res anne´es, de nombreuses e´tudes se sont inte´resse´es a` la pre´sence des microARNs dans le follicule ovarien chez les mammife`res [49]. Dans l’espe`ce humaine, ces microARNs ont e´te´ retrouve´s a` la fois dans l’ovocyte [50,51], les cellules du cumulus [51,52], le liquide folliculaire [34] et dans les cellules de la granulosa [53–56] (Tableau 1). Ceux-ci sont implique´s dans la re´gulation de plusieurs processus biologiques au sein du follicule, tels que la prolife´ration et l’apoptose des cellules folliculaires [51,54,56], la production d’hormones ste´roı¨diennes [34,51,53] ou encore la maturation ovocytaire [50,51]. Du fait de la forte repre´sentation de ces microARNs dans le follicule ovarien et de leur roˆle dans la folliculogene`se, ils constituent une nouvelle source de biomarqueurs inte´ressants en fertilite´. En effet, sachant que l’expression de ces microARNs est intimement lie´e a` l’e´tat fonctionnel des follicules ovariens, ils pourraient alors eˆtre utilise´s comme biomarqueurs dans l’e´valuation de la fonction ovarienne. De plus, certains microARNs sont se´cre´te´s dans le milieu extracellulaire et transporte´s dans les fluides biologiques par des ve´sicules [32–37]. Parmi les microARNs exprime´s dans le follicule

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Tableau 1 MicroARNs identifie´s dans le follicule ovarien et leurs fonctions. MicroARNs

Expression

miR-184

Ovocyte

Re´gulation

Ge`nes cibles

Fonction(s)

Re´fe´rences

NCOR2

Re´pression de la transcription de re´cepteurs nucle´aires Re´gulation de ge`nes spe´cifiques a` l’ovocyte Reprogrammation ovocytaire

Assou et al., en 2013

BCL2 CDC25A

Maturation ovocytaire

Xu et al., en 2011

HOXA1 SMARCA5

miR-10a miR-100 miR-15a miR-20a

Ovocyte

32 miRs (dont miR-23)

Cellules du cumulus

BCL2 CYP19A1

Apoptose Ste´roı¨dogene`se

Assou et al., en 2013

miR-222, miR-193b, miR-520c3p miR-132, miR-24, miR-320

Liquide folliculaire

PTEN, ESR1 TGFb1

Suppresseur de tumeur, ste´roı¨dogene`se Vieillissement ovarien, prolife´ration cellulaire, maladies me´taboliques Syndrome des ovaires micropolykystiques Ste´roı¨dogene`se

Sang et al., en 2013

miR-132, miR-320, miR-520-3p. miR-222, miR-24, miR-193b, miR-483-5p

FSH

HMGA2, RAB5B TGFb1

miR-23a

Cellules de la granulosa

XIAP Caspase-3

Roˆle pro-apoptotique

Yang et al., en 2012

miR-21

Ligne´es de cellules de la granulosa humaines

COL4A1

Roˆle dans la membrane basale autour des cellules de la granulosa (structure extracellulaire)

Mase et al., en 2012

Pre´-miR-10a, miR-105, miR-182 miR-15a

Cellules de la granulosa

Cycline B1, TdT Caspase-3, PCNA

Apoptose et prolife´ration cellulaire

Sirotkin et al., en 2010

ovarien, certains sont e´galement de´tectables dans la circulation sanguine [57] (Fig. 1). Par conse´quent, ces microARNs circulants pourraient eˆtre utilise´s en pratique courante en comple´ment du dosage de l’hormone antimu¨lle´rienne (AMH) et du compte folliculaire antral (CFA) au 3e jour du cycle, afin d’appre´cier au mieux la re´serve ovarienne des patientes prises en charge en FIV. En particuliers, dans les cas de discordance entre le taux d’AMH et le CFA [58], ils pourraient s’ave´rer eˆtre des outils d’e´valuation tre`s utiles, voire discriminants. Plusieurs e´tudes rapportent que l’expression des microARNs circulants varie dans certaines pathologies responsables d’infertilite´ fe´minine, telles que l’endome´triose [59,60], le syndrome des ovaires micropolykystiques (SOMPK) [34,61] et l’insuffisance ovarienne pre´mature´e (IOP) [56]. En effet, Wang et al. [59] rapportent une augmentation de l’expression de miR-199a et miR222 ainsi qu’une diminution de l’expression de miR-145 et miR542-3p chez des patientes atteintes d’endome´triose. De plus, Murri et al. [61] de´montrent que l’expression des miR-21, miR-27b, miR-

103 et miR-155 est plus e´leve´e dans les cas de SOMPK. D’apre`s yang et al. [56], une augmentation de l’expression des miR-146a, miR-23a, miR-27a et miR-126 et une diminution de l’expression de let-7c et miR-144 sont observe´es dans le se´rum de patientes souffrant d’IOP. Ces re´sultats sugge`rent que certains microARNs circulants constituent de ve´ritables biomarqueurs se´riques spe´cifiques pour le diagnostic de pathologies lie´es a` l’infertilite´ et en particuliers pour la de´tection d’anomalies de la re´serve ovarienne. Conjointement a` l’e´tude des microARNs circulants, il serait e´galement inte´ressant de doser le taux d’ADN libre se´rique chez des patientes prises en charge en FIV. En effet, il a e´te´ de´montre´ que le contenu en ADN libre dans la circulation sanguine est plus e´leve´ dans certains contextes pathologiques [1–6,9,11]. Par extension, certaines pathologies a` l’origine d’infertilite´ fe´minine telles que des anomalies de la re´serve ovarienne pourraient alors conduire a` une augmentation du taux d’ADN libre se´rique. En effet, l’atre´sie folliculaire physiologique lie´e au « vieillissement ovarien » ou pathologique (IOP) est sous-tendue par la mise en place de

Fig. 1. Acides nucle´iques circulants, nouveaux biomarqueurs d’inte´reˆt en AMP.

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me´canismes apoptotiques dans les cellules de la granulosa [56,62]. Par conse´quent, l’ADN libre mesure´ dans le se´rum des patientes pourrait alors refle´ter la proportion de ces e´ve´nements apoptotiques intra-ovariens en dehors de tout autre contexte pathologique. De plus, il a e´te´ observe´ que le taux d’ADN libre se´rique augmente physiologiquement avec l’aˆge [63] ce qui justifie d’autant plus l’inte´reˆt de son dosage dans l’exploration de la re´serve ovarienne. 4. Acides nucle´iques circulants : biomarqueurs pre´dictifs de la qualite´ ovocytaire et embryonnaire De nombreuses e´tudes ont eu pour principal objectif d’identifier de nouveaux biomarqueurs de la qualite´ embryonnaire dans les fluides biologiques, les tissus, ainsi que dans le milieu de culture embryonnaire [64–70]. En effet, l’observation morphologique des embryons a montre´ ses limites et l’e´valuation plus pre´cise de la viabilite´ embryonnaire semble eˆtre ne´cessaire a` l’ame´lioration des re´sultats en AMP [67,71]. Le microenvironnement ovocytaire fournit un important re´servoir de biomarqueurs non invasifs influenc¸ant d’abord la qualite´ ovocytaire et par conse´quent la qualite´ embryonnaire [64– 66,68,72]. Ainsi, l’e´tude de l’expression des microARNs pre´sents dans le follicule ovarien et de leur(s) fonction(s) constitue une approche tre`s inte´ressante pour identifier de nouveaux biomarqueurs pre´dictifs de la qualite´ ovocytaire et/ou embryonnaire (Tableau 1). De plus, certains de ces microARNs candidats sont circulants et sont donc facilement de´tectables dans les fluides biologiques tels que le se´rum ou le plasma et le liquide folliculaire [32–35]. Ainsi, ils pourraient repre´senter une aide pre´cieuse en pratique courante pour pre´dire la qualite´ ovocytaire et/ou embryonnaire et par conse´quent pour se´lectionner aux mieux les embryons a` fort potentiel implantatoire avant transfert. Par ailleurs, il a e´te´ de´montre´ chez les mammife`res que, l’embryon exprime des microARNs implique´s dans la re´gulation de son de´veloppement pre´implantatoire [73]. Afin d’identifier de nouveaux biomarqueurs de la qualite´ embryonnaire, des analyses me´tabolomiques du milieu de culture de l’embryon humain ont e´te´ propose´es, visant a` caracte´riser au mieux son se´cre´tome [69,70]. Ainsi, en se fondant sur ce type d’approches et en supposant que l’embryon humain exprime lui aussi certains microARNs, le relargage de ceux-ci dans le milieu de culture embryonnaire demande a` eˆtre explorer. De fac¸on similaire, une e´tude re´cente a largement de´montre´ l’inte´reˆt du dosage d’ADN libre dans le milieu de culture embryonnaire. En effet, le contenu en ADN libre mitochondrial du milieu est significativement associe´ a` la qualite´ embryonnaire et plus pre´cise´ment au taux de fragmentation de l’embryon [74] (Fig. 1). De plus, la pre´sence d’ADN libre circulant pourrait eˆtre e´tudie´e dans le follicule ovarien afin d’e´valuer son impact sur le futur de´veloppement embryonnaire (Fig. 1). 5. Acides nucle´iques circulants : inte´reˆt dans les e´checs d’implantation Les e´checs re´pe´te´s d’implantation posent un re´el proble`me en AMP [75]. L’identification de marqueurs capables de pre´dire les taux d’e´checs d’implantation permettrait de pre´venir au mieux ce risque. Ainsi, le profil d’expression des microARNs dans l’endome`tre de patientes pre´sentant des e´checs re´pe´te´s d’implantation a e´te´ compare´ a` celui de femmes fertiles [76]. Au total, 13 microARNs (dont miR-145, miR-23b et miR-99a) s’expriment diffe´remment chez les patientes souffrant d’un de´faut d’implantation. Les re´sultats de cette e´tude sugge`rent que l’analyse des microARNs et notamment ceux dits « circulants » pourrait contribuer a` la

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compre´hension, au diagnostic et au traitement de ces e´checs d’implantations re´pe´te´s en AMP. D’autre part, la pre´sence de facteurs embryotoxiques dans le se´rum de patientes infertiles ou ayant pre´sente´ des avortements spontane´s re´pe´te´s [77] ont conduit certaines e´quipes a` e´valuer le taux d’ADN libre circulant chez des patientes prises en charge en FIV [78–80]. Ainsi, Czamanski-Cohen et al., rapportent qu’un taux e´leve´ d’ADN libre plasmatique a une influence ne´faste sur les taux d’implantation apre`s transfert embryonnaire [79]. Cette augmentation d’ADN libre circulant, issu probablement de processus apoptotiques cellulaires (maternels et/ou embryonnaires), cre´erait un environnement de´favorable a` la conception. Par ailleurs, cette meˆme e´quipe a de´montre´ que le stress provoque´ par une prise en charge en AMP e´tait responsable d’une e´le´vation du taux d’ADN libre dans le se´rum des patientes et que des techniques de relaxation permettent de re´duire significativement ce taux et donc d’ame´liorer leurs re´sultats en FIV [80]. 6. Conclusions et perspectives Au cours de ces dernie`res anne´es, l’e´tude des acides nucle´iques circulants a fait l’objet d’importantes avance´es scientifiques et me´dicales. En effet, ils occupent a` l’heure actuelle une place primordiale en tant que biomarqueurs d’inte´reˆt en pathologie humaine. Facilement accessibles dans les fluides biologiques ou dans le milieu de culture embryonnaire, ils repre´sentent des outils de choix en AMP pour le de´veloppement de nouveaux tests non invasifs diagnostiques et pronostiques. L’utilisation de ces biomarqueurs a` la fois dans l’e´valuation de la re´serve ovarienne, dans l’appre´ciation de la qualite´ ovocytaire et embryonnaire et dans la pre´vention des e´checs d’implantation, correspond a` une approche innovante et extreˆmement prometteuse dans le domaine. De ce fait, la physiopathologie pre´cise de l’ADN libre, ainsi que l’identification et la caracte´risation des ge`nes cibles de ces microARNs demandent a` eˆtre e´tudie´es plus pre´cise´ment au cours de la folliculogene`se, du de´veloppement embryonnaire pre´coce et au moment de l’implantation, dans le but d’envisager potentiellement des approches the´rapeutiques base´es sur la re´gulation de ces acides nucle´iques. L’ADN libre, les microARNs, ainsi que leurs ve´sicules de transport extracellulaire offrent alors de nouvelles perspectives d’un point de vue diagnostique, pronostique, voire the´rapeutique dans la prise en charge de l’infertilite´. De´claration d’inte´reˆts Les auteurs de´clarent ne pas avoir de conflits d’inte´reˆts en relation avec cet article. Remerciements Les auteurs remercient l’ensemble du personnel du De´partement de biologie de la reproduction et du DPI ainsi que la direction ge´ne´rale du CHU de Montpellier. Une partie de ce travail a e´te´ re´alise´ graˆce au soutien financier partiel des laboratoires Ferring, Merck Serono, Genevrier et Vitrolife. Re´fe´rences [1] Vlassov VV, Laktionov PP, Rykova EY. Circulating nucleic acids as a potential source for cancer biomarkers. Curr Mol Med 2010;10:142–65. [2] Schwarzenbach H, Hoon DS, Pantel K. Cell-free nucleic acids as biomarkers in cancer patients. Nat Rev Cancer 2011;11:426–37. [3] Sita-Lumsden A, Fletcher CE, Dart DA, Brooke GN, Waxman J, Bevan CL. Circulating nucleic acids as biomarkers of prostate cancer. Biomark Med 2013;7:867–77. [4] Schwarzenbach H. Circulating nucleic acids as biomarkers in breast cancer. Breast Cancer Res 2013;15:211.

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