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Activité du doripénème sur les bactéries anaérobies strictes
Pathologie Biologie 59 (2011) 102–107
Article original
Activite´ du doripe´ne`me sur les bacte´ries anae´robies strictes Activity of doripenem against anaerobic bacteria L. Dubreuil a,*, C. Neut a, S. Mahieux a, C. Muller-Serieys b, H. Jean-Pierre c, H. Marchandin c, C.J. Soussy d, A. Miara e a
Hoˆpital de Tourcoing, faculte´ de pharmacie, universite´ de Lille 2, BP 83 rue du Professeur-Laguesse, 59006 Lille cedex, France Hoˆpital Bichat–Claude-Bernard, 46, rue Henri-Huchard, 75018 Paris, France CHU Arnaud-de-Villeneuve, 191, avenue du Doyen-Gaston-Giraud, 34090 Montpellier, France d Hoˆpital Henri*-Mondor, 51, avenue du Mare´chal de Lattre-de-Tassigny, 94010 Cre´teil, France e Laboratoire Janssen-Cilag, 1, rue Camille-Desmoulins, 92130 Issy-les-Moulineaux, France b c
I N F O A R T I C L E
R E´ S U M E´
Historique de l’article : Rec¸u le 20 fe´vrier 2010 Accepte´ le 5 mars 2010 Disponible sur Internet le 26 mai 2010
But de l’e´tude. – L’activite´ du doripe´ne`me a e´te´ de´termine´e sur 316 souches anae´robies strictes et compare´e a` celle de l’association amoxicilline + acide clavulanique, pipe´racilline + tazobactam, imipe´ne`me, clindamycine et me´tronidazole. Me´thode. – Les concentration minimale inhibitrice (CMI) ont e´te´ de´termine´es par une me´thode de dilution en ge´lose selon la norme M11A7 du CLSI. Re´sultats. – A` la concentration de 4 mg/ml, doripe´ne`me et imipe´ne`me inhibent 122 (96 %) et 126 (99 %) souches de Bacteroides du groupe fragilis. En revanche, doripe´ne`me apparaıˆt plus actif que imipe´ne`me sur les anae´robies a` Gram positif puisqu’il inhibe a` la meˆme concentration de 4 mg/ml, 145/145 souches (100 %) versus 115/145 pour imipe´ne`me (79,3 %). Sur les 316 isolats anae´robies, avec le nouveau carbape´ne`me doripe´ne`me, la CMI50 est de 0,25 mg/ml et la CMI90 de 2 mg/ml. Ces re´sultats sont similaires a` ceux de l’imipe´ne`me (CMI50 = 0,125 mg/ml et CMI90 = 4 mg/ml). Si l’on conside`re les concentrations critiques de´finies par European Committee on antimicrobial susceptibility testing (EUCAST), le taux de re´sistance pour doripe´ne`me (CMI > 4 mg/ml) 1,6 % est quasi-identique a` celui de imipe´ne`me (CMI > 8 mg/ml) 1,3 %. Conclusion. – Inde´pendamment des parame`tres PK/PD, les deux carbape´ne`mes ont des activite´s identiques ; doripe´ne`me est plus actif sur les anae´robies a` Gram positif et le´ge`rement moins actif sur les anae´robies a` Gram ne´gatif dont essentiellement les Bacteroides du groupe fragilis. Des e´tudes cliniques devront de´montrer son utilite´ en clinique. ß 2010 Elsevier Masson SAS. Tous droits re´serve´s.
Mots cle´s : Anae´robies stricts Doripe´ne`me
A B S T R A C T
Keywords: Anaerobes Doripenem
Aims of the study. – This study examines the activity of doripenem, a new carbapenem compound compared with amoxicillin-clavulanic acid, piperacillin + tazobactam, imipenem, clindamycin and metronidazole against 316 anaerobes. Methods. – Inoculum preparation and agar dilution method were performed according to the CLSI method for anaerobes (M11A7). Results. – At a concentration of 4 mg/ml doripenem and imipenem (IMP) inhibited 122 (96 %) and 126 (99 %) strains of the Bacteroides fragilis group, respectively. In contrast, doripenem appeared more potent than IMP against Gram-positive anaerobes inhibiting at the same concentration of 4 mg/ml 145/ 145 strains (100 %) versus 115/145 for IMP (79.3 %). Against 316 anaerobic strains, the carbapenem doripenem had an MIC50 of 0.25 mg/ml and an MIC90 of 2 mg/ml. Results were similar to those for imipenem (MIC50 of 0.125 mg/ml and MIC90 of 4 mg/ml). If we consider the resistant breakpoints of the two carbapenems as defined by EUCAST, the resistance rate for doripenem (MIC > 4 mg/ml) 1.6 % is similar to that of imipenem (MIC > 8 mg/ml) 1.3 %.
* Auteur correspondant. Adresse e-mail : [email protected] (L. Dubreuil). 0369-8114/$ – see front matter ß 2010 Elsevier Masson SAS. Tous droits re´serve´s. doi:10.1016/j.patbio.2010.03.006
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Conclusion. – Thus independently of the PK/PD parameters the two carbapenems demonstrated very close activity; doripenem was more potent on Gram-positive anaerobes and slightly less potent against Gramnegative anaerobes mainly the B. fragilis group. Further clinical studies are needed to assess its usefulness in patients. ß 2010 Elsevier Masson SAS. All rights reserved.
Le doripe´ne`me est un nouveau carbape´ne`me synthe´tique qui re´siste a` l’hydrolyse de la de´hydropeptidase re´nale. Il posse`de un spectre d’activite´ large semblable a` celui de l’imipe´ne`me sur les cocci a` Gram positif et ne´gatif, et a` celui du me´rope´ne`me sur les bacilles a` Gram ne´gatif. Il inclut quelques souches d’ente´robacte´ries ou de Pseudomonas re´sistantes aux autres carbape´ne`mes [1–2]. Associant une activite´ sur les anae´robies, il apparaıˆt comme candidat potentiel pour le traitement des infections mixtes [3–8]. Le but de cette e´tude est de de´terminer la sensibilite´ des anae´robies stricts au doripe´ne`me sur des souches isole´es d’hoˆpitaux franc¸ais et de la comparer aux mole´cules de re´fe´rence. 1. Mate´riel et me´thodes
pre´pare´ (2 a` 3 mL) e´tait de´pose´ sur les boıˆtes de Petri a` l’aide d’un re´plicateur a` teˆtes multiples de type Steers (Mast Systems, London, UK) et permettait d’obtenir un inoculum final de 105 UFC par spot d’inoculation sur la ge´lose. A` la fin de chaque se´rie d’essais, deux boıˆtes sans antibiotique e´taient inocule´es. Une des boıˆtes e´tait incube´e en anae´robiose et servait de te´moin de croissance pour les anae´robies stricts, l’autre boıˆte incube´e en ae´robiose permettait la de´tection d’une e´ventuelle contamination des souches lors des manipulations. Les boıˆtes de Petri e´taient incube´es a` 35–36 8C pendant 48 heures en chambre anae´robie (Don Whitley, AES, France). La CMI e´tait la plus faible concentration d’antibiotique pour laquelle on observe l’absence de toute culture visible. 1.5. Controˆle de qualite´ Dans chaque se´rie de mesure des CMI, les souches de re´fe´rence de la norme M11 A7 du CLSI e´taient : B. fragilis ATCC 25285, B. thetaiotaomicron ATCC 29741 Egghertella lenta ATCC 43055 et C. difficile ATCC 700057.
1.1. Souches 1.6. De´tection de b-lactamase Elles e´taient isole´es durant l’anne´e 2008, a` partir de pre´le`vements pathologiques humains (he´mocultures, liquides pe´ritone´aux, pus, biopsies osseuses ou cutane´es, pre´le`vements gyne´cologiques, etc.) ; seules les souches de Clostridium difficile e´taient isole´es a` partir de selles de patients diarrhe´iques. Les 316 isolats cliniques se re´partissaient ainsi : Bacteroides du groupe fragilis (127 dont 98 B. fragilis), Prevotella spp. (34), Fusobacterium spp. (8), Veillonella parvula (2), Clostridium spp. (78 dont 47 C. difficile, 25 C. perfringens), Eubacterium spp. (4), Propionibacterium acnes (12), cocci a` Gram positif (51 dont 19 Anaerococcus prevotii, six Finegoldia magna et six Parvimonas [Micromonas] micros). Les souches e´taient identifie´es selon les me´thodes classiques [9–10], puis conserve´es en bouillon de Rosenow a` 20 8C. 1.2. Mesure des CMI des antibiotiques Les concentration minimale inhibitrice (CMI) des antibiotiques e´taient mesure´es par une me´thode de dilution en ge´lose selon la norme M11A7 du Clinical and Laboratory Standards Institute [11] (CLSI [anciennement National Committee for Clinical Laboratory Standards [NCCLS]]). 1.3. Solutions antibiotiques et pre´paration des boıˆtes de Petri La poudre titre´e de doripe´ne`me obtenue aupre`s du laboratoire Janssen-Cilag e´tait dissoute en eau distille´e. Les autres antibiotiques achete´s a` la socie´te´ Sigma e´taient dissous en fonction des recommandations de chaque fabriquant. Une solution me`re de 512 mg/L de chacun des antibiotiques a` e´tudier e´tait ainsi pre´pare´e. Des dilutions successives au demi e´taient re´alise´es en eau distille´e selon les recommandations de Ericsson et Sherris [12]. Chacune des concentrations d’antibiotiques pre´pare´es e´tait ensuite incorpore´e dans la ge´lose Brucella (Difco) additionne´e de 5 % de sang de mouton de´fibrine´ de fac¸on a` permettre la croissance des anae´robies plus exigeants. Les gammes de concentrations e´taient les suivantes : amoxicilline de 64 a` 0,06 mg/L, amoxicilline + acide clavulanique ou co-amoxiclav de 64 a` 0,06 mg/L, pipe´racilline de 128 a` 0,06 mg/L, pipe´racilline + tazobactam) de 64 a` 0,06 mg/L, imipe´ne`me de 64 a` 0,03 mg/L, doripe´ne`me de 64 a` 0,03 mg/L, me´tronidazole de 64 a` 0,06 mg/L et clindamycine de 64 a` 0,06 mg/L. L’acide clavulanique e´tait utilise´ a` la concentration fixe de 2 mg/L et le tazobactam a` la concentration fixe de 4 mg/L. Dans les associations avec un inhibiteur de ß-lactamase, les CMI de l’association correspondaient a` la concentration de ß-lactamine associe´e. Enfin une boıˆte de Petri contenant 8 mg/L d’amoxicilline et 4 mg/L d’acide clavulanique e´tait ajoute´e pour calculer le taux de souches re´sistantes a` cette association selon la concentration critique du CLSI. Toutes les solutions e´taient pre´pare´es extemporane´ment, le stockage des boıˆtes e´tait proscrit. 1.4. Pre´paration de l’inoculum bacte´rien et ensemencement des boıˆtes de Petri Les souches e´taient de´congele´es puis repique´es en bouillon de Rosenow. L’inoculum e´tait obtenu par dilution du bouillon de Rosenow en bouillon Brucella (Difco) de fac¸on a` obtenir un trouble identique a` celui du tube 0,5 de la gamme de McFarland. L’inoculum e´tait d’environ 7,5 107 a` 108 UFC/mL. Pour les souches de croissance difficile on ajoutait : he´mine (5 mg/L), me´nadione (0,1 mg/L), sodium bicarbonate (1 g/L) et 0,1 mL de sang laque´ par tube de 10 mL. L’inoculum ainsi
Elle e´tait re´alise´e a` l’aide d’un disque de nitroce´phine (BioMe´rieux1) sur les bacte´ries a` Gram positif principalement Fusobacterium et sur les Clostridium. Elle n’e´tait pas faite sur les Bacteroides du groupe fragilis qui posse`dent soit une ce´phalosporinase chromosomique (cepA), soit un ge`ne codant pour une carbape´ne`mase (cfiA). 1.7. Interpre´tation des CMI et cate´gorisation des souches Les taux de re´sistance ont e´te´ calcule´s aux concentrations critiques du CLSI. En l’absence de concentration critique pour le doripe´ne`me nous avons calcule´ les taux de re´sistance des deux carbape´ne`mes a` l’aide des concentrations critiques European Committee on antimicrobial susceptibility testing (EUCAST) (mars 2009) a` savoir pour l’imipe´ne`me (anae´robie) souche re´sistante si CMI est supe´rieur a` 8 mg/L (identique a` celle du CLSI) et pour doripe´ne`me (concentration non spe´cifique d’espe`ce) souche re´sistante si CMI est supe´rieur a` 4 mg/L.
2. Re´sultats et discussion 2.1. De´termination des CMI 2.1.1. Bacteroides du groupe fragilis Le doripe´ne`me posse´dait une bonne activite´ sur les Bacteroides du groupe fragilis (Tableau 1). A` la concentration de 1 mg/L, il inhibait 104/127 souches (81,9 %). Doripe´ne`me et imipe´ne`me a` la concentration de 4 mg/L inhibaient respectivement 122 (96 %) et 126 (99 %) souches. Plus de 96 % des souches e´taient re´sistantes a` l’amoxicilline par production de ß-lactamase. La re´sistance a` l’imipe´ne`me, par production de carbape´ne`mase, qui associe une re´sistance croise´e a` l’ensemble des ß-lactamines e´tait rare et n’avait pas e´te´ trouve´e dans cette e´tude. Aucune re´sistance au me´tronidazole, a` l’association pipe´racilline + tazobactam. Vingtdeux souches (14,2 %) e´taient re´sistantes a` l’association amoxicilline + acide clavulanique (co-amoxiclav) mais restaient sensibles a` l’imipe´ne`me. La re´sistance isole´e a` co-amoxiclav augmente depuis quelques anne´es [17,20]. Le me´canisme de re´sistance e´tait ˆ a` une augmentation de la production de probablement du ß-lactamase ou/et un de´faut de porine, comme nous l’avons de´montre´ pre´ce´demment [13–14]. Quarante-cinq (35,4 %) des souches de B. fragilis e´taient re´sistantes a` la clindamycine. Le taux de re´sistance a` la clindamycine e´tait de 55 % pour les autres membres du groupe versus 29,6 % pour B. fragilis stricto sensu.
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La re´sistance a` la clindamycine continue d’augmenter en France [15–20]. Nos re´sultats concernant le doripe´ne`me sont identiques a` ceux de Wexler et al. [3], Liu et al. [7], Snydman et al. [8]. Cependant, Goldstein et al. [4], Credito et al. [5] ont rapporte´ des valeurs de CMI plus basses ; ces diffe´rences peuvent s’expliquer par une e´pide´miologie diffe´rente ou le faible nombre de souches e´tudie´es. Lorsque les CMI de imipe´ne`me sont e´leve´es (> 16 mg/L), la re´sistance croise´e aux carbape´ne`mes associe la pre´sence d’une carbape´ne`mase code´e par le ge`ne cfiA et posse`de un promoteur efficace apporte´ par une se´quence d’insertion telle IS942 [21–23]. Lorsque le promoteur est faible, la carbape´ne`mase est dite silencieuse [24], les CMI de imipe´ne`me sont le plus souvent dans une gamme de 1 a` 4 mg/L [22]. Nous avions se´lectionne´ arbitrairement, 12 souches de Bacteroides dont les CMI de doripe´ne`me e´taient e´gales ou supe´rieures a` 2 mg/L. Les CMI des deux carbape´ne`mes n’ont varie´ d’au moins trois dilutions en
pre´sence de 20 mmol d’EDTA (re´sultats non indique´s) que dans deux cas ; cela sugge`re que la pre´sence de carbape´ne`mase silencieuse est rare et que d’autres me´canismes sont en cause. Wexler et al. [3] remarquaient a` partir de trois souches de B. fragilis inhibe´e par 8 mg/L ou plus de doripe´ne`me qu’une surexpression de pompes d’efflux contribuait a` la re´sistance du doripe´ne`me sans affecter l’imipe´ne`me. 2.2. Autres anae´robies a` Gram ne´gatif Environ 76,4 % des souches de Prevotella produisaient une ß-lactamase et e´taient re´sistantes a` l’amoxicilline. Toutes les souches de Prevotella e´taient inhibe´es par 4 mg/L de doripe´ne`me. Les valeurs des CMI50 et CMI90 sont identiques a` celles de Liu et al. [7]. Aucune re´sistance a` pipe´racilline + tazobactam, aux deux carbape´ne`mes n’e´tait observe´e tandis que quatre souches (11,8 %) e´taient re´sistantes a` la clindamycine.
Tableau 1 Activite´ du doripe´ne`me et autres antibiotiques sur les anae´robies a` Gram ne´gatif. Microorganisme
Nombre
Antibiotique
CMI en mg/L E´cart des CMI
CMI50
CMI90
Bacteroides fragilis
98
Amoxicilline Co-amoxiclav Pipe´racilline Pipe´racilline + tazobactam Imipe´ne`me Doripe´ne`me Clindamycine Me´tronidazole
0,25–> 64 0,06–>64 0,5–>128 0,06–32 0,03–8 0,03–32 0,06–>64 0,06–4
64 0,25 16 0,25 0,25 0,5 0,5 1
> 64 32 > 128 4 2 2 > 64 2
Autres Bacteroides du groupe fragilis
29
Amoxicilline Co-amoxiclav Pipe´racilline Pipe´racilline + tazobactam Imipe´ne`me Doripe´ne`me Clindamycine Me´tronidazole
0,06–> 64 0,06–> 64 0,125–> 128 0,06–16 0,03–4 0,06–16 0,06–>64 0,06–2
>64 1 32 2 0,5 0,5 >64 0,5
> 64 32 > 128 8 1 2 > 64 1
127
Amoxicilline Co-amoxiclav Pipe´racilline Pipe´racilline + tazobactam Imipe´ne`me Doripe´ne`me Clindamycine Me´tronidazole
0,06–> 64 0,06–> 64 0,125–> 128 0,06–32 0,03–8 0,03–32 0,06–>64 0,06–4
64 0,5 16 0,5 0,25 0,5 0,5 1
> 64 32 > 128 4 2 2 > 64 2
35
Amoxicilline Co-amoxiclav Pipe´racilline Pipe´racilline + tazobactam Imipe´ne`me Doripe´ne`me Clindamycine Me´tronidazole
0,06–> 64 0,06–32 0,5–> 128 0,06–4 0,03–2 0,03–4 0,06–> 64 0,125–2
16 0,125 8 0,5 0,12 0,25 0,25 0,5
> 64 4 64 2 0,5 0,5 1 1
8
Amoxicilline Co-amoxiclav Pipe´racilline Pipe´racilline + tazobactam Imipe´ne`me Doripe´ne`me Clindamycine Me´tronidazole
0,06–16 0,06–0,5 0,06–32 0,06–4 0,03–0,5 0,03–0,125 0,06–> 64 0,06–2
171
Amoxicilline Co-amoxiclav Pipe´racilline Pipe´racilline + tazobactam Imipe´ne`me Doripe´ne`me Clindamycine Me´tronidazole
0,06–> 64 0,06–> 64 0,06–> 128 0,06–64 0,03–8 < 0,03–32 0,06–>64 0,06–4
32 0,25 16 0,5 0,125 0,25 0,5 0,5
> 64 32 > 128 4 2 2 > 64 2
Bacteroides du groupe fragilis
Prevotella spp.
Fusobacterium spp.
Ensemble des anae´robies a` Gram ne´gatif
L. Dubreuil et al. / Pathologie Biologie 59 (2011) 102–107
Les isolats de Fusobacterium e´taient sensibles a` toutes les ß-lactamines sauf une souche de Fusobacterium necrophorum productrice de ß-lactamase et re´sistante a` l’amoxicilline. Une souche de Fusobacterium nucleatum e´tait re´sistante a` la clindamycine. Vis-a`-vis des anae´robies a` Gram ne´gatif producteurs de ß-lactamase le doripe´ne`me e´tait tre`s actif (CMI 0,125 mg/L). 2.3. Anae´robies a` Gram ne´gatif Les taux de re´sistance aux antibiotiques sur l’ensemble des souches e´tait : clindamycine (29,2 %) pipe´racilline (27,5 %) co-
105
amoxiclav (11,6 %), doripe´ne`me (2,9 %). Aucune souche re´sistante a` pipe´racilline + tazobactam, imipe´ne`me et me´tronidazole. 2.3.1. C. perfringens C. perfringens e´tait sensible aux pe´nicillines seules ou associe´es aux inhibiteurs de ß-lactamase. Toutes les souches e´taient sensibles au me´tronidazole, a` doripe´ne`me et imipe´ne`me. Une souche e´tait re´sistante a` la clindamycine. Doripe´ne`me e´tait plus actif que l’imipe´ne`me. Les valeurs obtenues e´taient similaires a` celles rencontre´s dans la litte´rature [5,8].
Tableau 2 Activite´ du doripe´ne`me et autres antibiotiques sur les anae´robies a` Gram positif. Microorganisme
Nombre
Antibiotique
CMI en mg/L E´cart des CMI
CMI50
CMI90
Clostridium difficile
41
Amoxicilline Co-amoxiclav Pipe´racilline Pipe´racilline + tazobactam Imipe´ne`me Doripe´ne`me Clindamycine Me´tronidazole
0,5–4 0,06–1 8–64 4–64 2–16 0,5–4 0,06–> 64 0,125–2
1 1 16 16 8 2 8 0,25
2 2 32 32 8 2 64 0,5
C. perfringens
25
Amoxicilline Co-amoxiclav Pipe´racilline Pipe´racilline + tazobactam Imipe´ne`me Doripe´ne`me Clindamycine Me´tronidazole
0,06–4 0,06–> 64 0,06–16 0,06–4 0,03–0,5 0,03–0,5 0,06–16 0,125–2
0,06 0,06 0,125 0,06 0,125 <0,03 0,06 0,5
0,5 0,5
Amoxicilline Co-amoxiclav Pipe´racilline Pipe´racilline + tazobactam Imipe´ne`me Doripe´ne`me Clindamycine Me´tronidazole
0,25–16 0,06–2 0,5–> 128 0,06–64 0,125–4 0,125–4 0,06–> 64 0,06–0,5
0,5 0,5
Autres Clostridium
12
4 2 0,5 0,25 2 1
2 1 0,25 0,25 1 0,25
16 1 16 16 2 2 16 0,25
Propionibacterium acnes
12
Amoxicilline Co-amoxiclav Pipe´racilline Pipe´racilline + tazobactam Imipe´ne`me Doripe´ne`me Clindamycine Me´tronidazole
0,06 0,06 0,125–0,5 0,25 0,03 0,03 0,06 > 64
0,06 0,06 0,5 0,25 0,03 0,03 0,06 > 64
0,06 0,06 0,5 0,25 0,03 0,03 0,06 > 64
Anaerococcus prevotii
19
Amoxicilline Co-amoxiclav Pipe´racilline Pipe´racilline + tazobactam Imipe´ne`me Doripe´ne`me Clindamycine Me´tronidazole
0,06–1 0,06–0,25 0,06–8 0,06–8 0,03–0,25 0,03–1 0,06–>64 0,06–4
0,125 0,06 0,125 0,06 0,06 0,06 0,25 0,5
0,5 0,25 4 0,25 0,125 0,125 8 1
Autres cocci a` Gram positif
32
Amoxicilline Co-amoxiclav Pipe´racilline Pipe´racilline + tazobactam Imipe´ne`me Doripe´ne`me Clindamycine Me´tronidazole
0,06–2 0,06–1 0,06–16 0,06–16 0,03–1 0,03–1 0,06–> 64 0,06–64
0,125 0,06 0,125 0,06 0,03 0,06 0,125 0,5
0,25 0,25 4 1 0,5 0,25 2 2
145
Amoxicilline Co-amoxiclav Pipe´racilline Pipe´racilline + tazobactam Imipe´ne`me Doripe´ne`me Clindamycine Me´tronidazole
0,06–16 0,06–2 0,06–>128 0,06–64 0,03–16 0,03–4 0,06–>64 0,06–>64
0,25 0,125 0,5 0,25 0,125 0,125 0,5 0,5
Ensemble des anae´robies a` Gram positif
2 1 32 16 8 2 16 8
L. Dubreuil et al. / Pathologie Biologie 59 (2011) 102–107
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Tableau 3 Activite´ du doripe´ne`me et autres antibiotiques sur l’ensemble des anae´robies. Microorganisme
Ensemble des anae´robies
Nombre
316
Antibiotique
CMI en mg/L
Amoxicilline Co-amoxiclav Pipe´racilline Pipe´racilline + tazobactam Imipe´ne`me Doripe´ne`me Clindamycine Me´tronidazole
2.3.2. C. difficile Toutes les souches de C. difficile sont naturellement re´sistantes a` l’imipe´ne`me (CMI de 2 a` 16 mg/L) (Tableau 2). De nombreuses souches e´taient re´sistantes a` la clindamycine (58,5 %). Aucune re´sistance n’e´tait observe´e avec les pe´nicillines, le doripe´ne`me et le me´tronidazole. La CMI modale pour doripe´ne`me est de 2 mg/L dans la plupart des e´tudes [5,6,8]. 2.4. Autres Clostridia Parmi les autres espe`ces, les re´sistances e´taient observe´es plus fre´quemment au sein du groupe RIC (C. ramosum, C. innocuum et C. clostridioforme). Dans cette e´tude, la production de ß-lactamase e´tait de´tecte´e pour une souche de C. clostridioforme et de C. ramosum. Ces deux souches e´taient re´sistantes a` amoxicilline, pipe´racilline mais sensibles au me´tronidazole, a` imipe´ne`me, doripe´ne`me et aux diffe´rentes associations de pe´nicillines et d’inhibiteurs de ß-lactamase. Une souche de C. innocuum e´tait re´sistante a` la clindamycine. Toutes ces souches e´taient inhibe´es par 4 mg/L de doripe´ne`me. 2.5. Propionibacterium acnes Toutes les souches de Propionibacterium acnes e´taient re´sistantes au me´tronidazole (re´sistance naturelle) mais tre`s sensibles aux autres antibiotiques. Le doripe´ne`me e´tait tre`s actif sur les propionibacte´ries (CMI 0,03 mg/L) (Tableau 2). 2.6. Cocci anae´robie a` Gram positif (CAGP) La taxonomie est en perpe´tuelle e´volution. Peptostreptococcus anaerobius demeure le seul repre´sentant du genre Peptostreptococcus. Peptostreptococcus magnus et Peptostreptococcus micros sont renomme´s respectivement Finegoldia magna and Micromonas (Parvimonas) micros. La plupart des autres espe`ces appartiennent aux genres Anaerococcus et Peptinophilus. Par simplification, Anaerococcus, Peptinophilus et Peptostreptococcus sont regroupe´s sous le terme de CAGP. Les souches de CAGP e´taient sensibles a` toutes les ß-lactamines. Cinq souches (8,8 %) e´taient re´sistantes a` la clindamycine et une souche de Peptoniphilus asaccharolyticus e´tait re´sistante au me´tronidazole avec des re´sultats semblables a` ceux obtenus lors d’e´tudes multicentriques europe´ennes [25]. L’activite´ du doripe´ne`me e´tait semblable a` celle de l’imipe´ne`me sur Anaerococcus prevotii mais le doripe´ne`me e´tait plus actif que l’imipe´ne`me sur les autres espe`ces de CAGP. 2.7. Ensemble des anae´robies a` Gram positif Les 145 souches e´taient toutes inhibe´es par co-amoxyclav, pipe´racilline + tazobactam et doripe´ne`me. La re´sistance a` l’imipe´ne`me s’observait uniquement parmi les souches de C. difficile.
E´cart des CMI
CMI50
CMI90
0,06–> 64 0,06–> 64 0,06–>128 0,06–64 0,03–16 < 0,03–32 0,06–> 64 0,06–> 64
2 0,25 8 0,5 0,125 0,25 0,5 0,5
> 64 4 > 128 16 4 2 > 64 2
La re´sistance a` la clindamycine survenait dans 22,8 % des cas. Le doripe´ne`me apparaıˆt plus actif que l’imipe´ne`me vis-a`-vis de ces anae´robies a` Gram positif inhibant a` la concentration de 4 mg/L 145/145 souches (100 %) versus 115/145 pour l’imipe´ne`me a` cette meˆme concentration (79,3 %). 2.8. Ensemble des anae´robies (316 souches) Aux concentrations respectives de 1 mg/L et 4 mg/L doripe´ne`me et imipe´ne`me inhibaient 80,7 et 98,4 % versus 81 % et 90,1 % des souches e´tudie´es. Si l’on conside`re les concentrations critiques de l’EUCAST, le taux de re´sistance du doripe´ne`me (CMI > 4 mg/L) 1,6 % e´tait semblable a` celui de l’imipe´ne`me (CMI > 8 mg/L) 1,3 %. Ainsi, inde´pendamment des parame`tres pharmacodynamiques les deux carbape´ne`mes ont de´montre´ des activite´s tre`s similaires (Tableau 3) ; le doripe´ne`me e´tait plus actif sur les anae´robies a` Gram positif et le´ge`rement moins actif sur les anae´robies a` Gram ne´gatif dont les Bacteroides du groupe fragilis. 3. Conclusion Le doripe´ne`me posse`de une excellente activite´ sur les 316 anae´robies e´tudie´s et cela au regard des valeurs de la CMI50 = 0,25 mg/L et de la CMI90 = 2 mg/L. Ces re´sultats sont similaires a` ceux obtenus avec l’imipe´ne`me (CMI50 = 0,125 mg/L et CMI90 = 4 mg/L). Le doripe´ne`me est donc aussi actif que l’imipe´ne`me sur les souches productrices de ß-lactamase de Bacteroides du groupe fragilis, Prevotella, Fusobacterium et Clostridia. Les taux de re´sistance sur l’ensemble des anae´robies de cette e´tude sont : clindamycine (26,2 %), pipe´racilline (15,5 %), co-amoxiclav (6,3 %), me´tronidazole (4,1 %) doripe´ne`me (1,6 %) et imipe´ne`me (1,3 %). L’activite´ in vitro du doripe´ne`me semble approprie´ pour traiter les infections mixtes. Des e´tudes cliniques devront affirmer son utilite´ chez les patients. Conflit d’inte´reˆt Ce travail a e´te´ finance´ par le laboratoire Janssen-Cilag. Le docteur Miara est salarie´ de ce laboratoire pharmaceutique. Re´fe´rences [1] Anderson DL. Doripenem. Drugs Today 2006;42:399–402. [2] Jones RN, Huynh HK, Biedenbach DJ. Comparative activity of doripenem against drug-resistant clinical pathogens. Antimicrob Agents Chemother 2005;52:71–4. [3] Wexler HA, Engel AE, Glass D, Li C. In vitro activities of doripenem and comparator against 364 anaerobic isolates. Antimicrob Agents Chemother 2005;49:4413–7. [4] Goldstein EJC, Citron DM, Merriam CV, Warren YA, Tyrrell KM, Fernandez HT. In vitro activities of doripenem and six comparator drugs against 423 aerobic and anaerobic bacteria isolates from infected diabetic foot wounds. Antimicrob Agents Chemother 2008;52:761–6.
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Article original
Activite´ du doripe´ne`me sur les bacte´ries anae´robies strictes Activity of doripenem against anaerobic bacteria L. Dubreuil a,*, C. Neut a, S. Mahieux a, C. Muller-Serieys b, H. Jean-Pierre c, H. Marchandin c, C.J. Soussy d, A. Miara e a
Hoˆpital de Tourcoing, faculte´ de pharmacie, universite´ de Lille 2, BP 83 rue du Professeur-Laguesse, 59006 Lille cedex, France Hoˆpital Bichat–Claude-Bernard, 46, rue Henri-Huchard, 75018 Paris, France CHU Arnaud-de-Villeneuve, 191, avenue du Doyen-Gaston-Giraud, 34090 Montpellier, France d Hoˆpital Henri*-Mondor, 51, avenue du Mare´chal de Lattre-de-Tassigny, 94010 Cre´teil, France e Laboratoire Janssen-Cilag, 1, rue Camille-Desmoulins, 92130 Issy-les-Moulineaux, France b c
I N F O A R T I C L E
R E´ S U M E´
Historique de l’article : Rec¸u le 20 fe´vrier 2010 Accepte´ le 5 mars 2010 Disponible sur Internet le 26 mai 2010
But de l’e´tude. – L’activite´ du doripe´ne`me a e´te´ de´termine´e sur 316 souches anae´robies strictes et compare´e a` celle de l’association amoxicilline + acide clavulanique, pipe´racilline + tazobactam, imipe´ne`me, clindamycine et me´tronidazole. Me´thode. – Les concentration minimale inhibitrice (CMI) ont e´te´ de´termine´es par une me´thode de dilution en ge´lose selon la norme M11A7 du CLSI. Re´sultats. – A` la concentration de 4 mg/ml, doripe´ne`me et imipe´ne`me inhibent 122 (96 %) et 126 (99 %) souches de Bacteroides du groupe fragilis. En revanche, doripe´ne`me apparaıˆt plus actif que imipe´ne`me sur les anae´robies a` Gram positif puisqu’il inhibe a` la meˆme concentration de 4 mg/ml, 145/145 souches (100 %) versus 115/145 pour imipe´ne`me (79,3 %). Sur les 316 isolats anae´robies, avec le nouveau carbape´ne`me doripe´ne`me, la CMI50 est de 0,25 mg/ml et la CMI90 de 2 mg/ml. Ces re´sultats sont similaires a` ceux de l’imipe´ne`me (CMI50 = 0,125 mg/ml et CMI90 = 4 mg/ml). Si l’on conside`re les concentrations critiques de´finies par European Committee on antimicrobial susceptibility testing (EUCAST), le taux de re´sistance pour doripe´ne`me (CMI > 4 mg/ml) 1,6 % est quasi-identique a` celui de imipe´ne`me (CMI > 8 mg/ml) 1,3 %. Conclusion. – Inde´pendamment des parame`tres PK/PD, les deux carbape´ne`mes ont des activite´s identiques ; doripe´ne`me est plus actif sur les anae´robies a` Gram positif et le´ge`rement moins actif sur les anae´robies a` Gram ne´gatif dont essentiellement les Bacteroides du groupe fragilis. Des e´tudes cliniques devront de´montrer son utilite´ en clinique. ß 2010 Elsevier Masson SAS. Tous droits re´serve´s.
Mots cle´s : Anae´robies stricts Doripe´ne`me
A B S T R A C T
Keywords: Anaerobes Doripenem
Aims of the study. – This study examines the activity of doripenem, a new carbapenem compound compared with amoxicillin-clavulanic acid, piperacillin + tazobactam, imipenem, clindamycin and metronidazole against 316 anaerobes. Methods. – Inoculum preparation and agar dilution method were performed according to the CLSI method for anaerobes (M11A7). Results. – At a concentration of 4 mg/ml doripenem and imipenem (IMP) inhibited 122 (96 %) and 126 (99 %) strains of the Bacteroides fragilis group, respectively. In contrast, doripenem appeared more potent than IMP against Gram-positive anaerobes inhibiting at the same concentration of 4 mg/ml 145/ 145 strains (100 %) versus 115/145 for IMP (79.3 %). Against 316 anaerobic strains, the carbapenem doripenem had an MIC50 of 0.25 mg/ml and an MIC90 of 2 mg/ml. Results were similar to those for imipenem (MIC50 of 0.125 mg/ml and MIC90 of 4 mg/ml). If we consider the resistant breakpoints of the two carbapenems as defined by EUCAST, the resistance rate for doripenem (MIC > 4 mg/ml) 1.6 % is similar to that of imipenem (MIC > 8 mg/ml) 1.3 %.
* Auteur correspondant. Adresse e-mail : [email protected] (L. Dubreuil). 0369-8114/$ – see front matter ß 2010 Elsevier Masson SAS. Tous droits re´serve´s. doi:10.1016/j.patbio.2010.03.006
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Conclusion. – Thus independently of the PK/PD parameters the two carbapenems demonstrated very close activity; doripenem was more potent on Gram-positive anaerobes and slightly less potent against Gramnegative anaerobes mainly the B. fragilis group. Further clinical studies are needed to assess its usefulness in patients. ß 2010 Elsevier Masson SAS. All rights reserved.
Le doripe´ne`me est un nouveau carbape´ne`me synthe´tique qui re´siste a` l’hydrolyse de la de´hydropeptidase re´nale. Il posse`de un spectre d’activite´ large semblable a` celui de l’imipe´ne`me sur les cocci a` Gram positif et ne´gatif, et a` celui du me´rope´ne`me sur les bacilles a` Gram ne´gatif. Il inclut quelques souches d’ente´robacte´ries ou de Pseudomonas re´sistantes aux autres carbape´ne`mes [1–2]. Associant une activite´ sur les anae´robies, il apparaıˆt comme candidat potentiel pour le traitement des infections mixtes [3–8]. Le but de cette e´tude est de de´terminer la sensibilite´ des anae´robies stricts au doripe´ne`me sur des souches isole´es d’hoˆpitaux franc¸ais et de la comparer aux mole´cules de re´fe´rence. 1. Mate´riel et me´thodes
pre´pare´ (2 a` 3 mL) e´tait de´pose´ sur les boıˆtes de Petri a` l’aide d’un re´plicateur a` teˆtes multiples de type Steers (Mast Systems, London, UK) et permettait d’obtenir un inoculum final de 105 UFC par spot d’inoculation sur la ge´lose. A` la fin de chaque se´rie d’essais, deux boıˆtes sans antibiotique e´taient inocule´es. Une des boıˆtes e´tait incube´e en anae´robiose et servait de te´moin de croissance pour les anae´robies stricts, l’autre boıˆte incube´e en ae´robiose permettait la de´tection d’une e´ventuelle contamination des souches lors des manipulations. Les boıˆtes de Petri e´taient incube´es a` 35–36 8C pendant 48 heures en chambre anae´robie (Don Whitley, AES, France). La CMI e´tait la plus faible concentration d’antibiotique pour laquelle on observe l’absence de toute culture visible. 1.5. Controˆle de qualite´ Dans chaque se´rie de mesure des CMI, les souches de re´fe´rence de la norme M11 A7 du CLSI e´taient : B. fragilis ATCC 25285, B. thetaiotaomicron ATCC 29741 Egghertella lenta ATCC 43055 et C. difficile ATCC 700057.
1.1. Souches 1.6. De´tection de b-lactamase Elles e´taient isole´es durant l’anne´e 2008, a` partir de pre´le`vements pathologiques humains (he´mocultures, liquides pe´ritone´aux, pus, biopsies osseuses ou cutane´es, pre´le`vements gyne´cologiques, etc.) ; seules les souches de Clostridium difficile e´taient isole´es a` partir de selles de patients diarrhe´iques. Les 316 isolats cliniques se re´partissaient ainsi : Bacteroides du groupe fragilis (127 dont 98 B. fragilis), Prevotella spp. (34), Fusobacterium spp. (8), Veillonella parvula (2), Clostridium spp. (78 dont 47 C. difficile, 25 C. perfringens), Eubacterium spp. (4), Propionibacterium acnes (12), cocci a` Gram positif (51 dont 19 Anaerococcus prevotii, six Finegoldia magna et six Parvimonas [Micromonas] micros). Les souches e´taient identifie´es selon les me´thodes classiques [9–10], puis conserve´es en bouillon de Rosenow a` 20 8C. 1.2. Mesure des CMI des antibiotiques Les concentration minimale inhibitrice (CMI) des antibiotiques e´taient mesure´es par une me´thode de dilution en ge´lose selon la norme M11A7 du Clinical and Laboratory Standards Institute [11] (CLSI [anciennement National Committee for Clinical Laboratory Standards [NCCLS]]). 1.3. Solutions antibiotiques et pre´paration des boıˆtes de Petri La poudre titre´e de doripe´ne`me obtenue aupre`s du laboratoire Janssen-Cilag e´tait dissoute en eau distille´e. Les autres antibiotiques achete´s a` la socie´te´ Sigma e´taient dissous en fonction des recommandations de chaque fabriquant. Une solution me`re de 512 mg/L de chacun des antibiotiques a` e´tudier e´tait ainsi pre´pare´e. Des dilutions successives au demi e´taient re´alise´es en eau distille´e selon les recommandations de Ericsson et Sherris [12]. Chacune des concentrations d’antibiotiques pre´pare´es e´tait ensuite incorpore´e dans la ge´lose Brucella (Difco) additionne´e de 5 % de sang de mouton de´fibrine´ de fac¸on a` permettre la croissance des anae´robies plus exigeants. Les gammes de concentrations e´taient les suivantes : amoxicilline de 64 a` 0,06 mg/L, amoxicilline + acide clavulanique ou co-amoxiclav de 64 a` 0,06 mg/L, pipe´racilline de 128 a` 0,06 mg/L, pipe´racilline + tazobactam) de 64 a` 0,06 mg/L, imipe´ne`me de 64 a` 0,03 mg/L, doripe´ne`me de 64 a` 0,03 mg/L, me´tronidazole de 64 a` 0,06 mg/L et clindamycine de 64 a` 0,06 mg/L. L’acide clavulanique e´tait utilise´ a` la concentration fixe de 2 mg/L et le tazobactam a` la concentration fixe de 4 mg/L. Dans les associations avec un inhibiteur de ß-lactamase, les CMI de l’association correspondaient a` la concentration de ß-lactamine associe´e. Enfin une boıˆte de Petri contenant 8 mg/L d’amoxicilline et 4 mg/L d’acide clavulanique e´tait ajoute´e pour calculer le taux de souches re´sistantes a` cette association selon la concentration critique du CLSI. Toutes les solutions e´taient pre´pare´es extemporane´ment, le stockage des boıˆtes e´tait proscrit. 1.4. Pre´paration de l’inoculum bacte´rien et ensemencement des boıˆtes de Petri Les souches e´taient de´congele´es puis repique´es en bouillon de Rosenow. L’inoculum e´tait obtenu par dilution du bouillon de Rosenow en bouillon Brucella (Difco) de fac¸on a` obtenir un trouble identique a` celui du tube 0,5 de la gamme de McFarland. L’inoculum e´tait d’environ 7,5 107 a` 108 UFC/mL. Pour les souches de croissance difficile on ajoutait : he´mine (5 mg/L), me´nadione (0,1 mg/L), sodium bicarbonate (1 g/L) et 0,1 mL de sang laque´ par tube de 10 mL. L’inoculum ainsi
Elle e´tait re´alise´e a` l’aide d’un disque de nitroce´phine (BioMe´rieux1) sur les bacte´ries a` Gram positif principalement Fusobacterium et sur les Clostridium. Elle n’e´tait pas faite sur les Bacteroides du groupe fragilis qui posse`dent soit une ce´phalosporinase chromosomique (cepA), soit un ge`ne codant pour une carbape´ne`mase (cfiA). 1.7. Interpre´tation des CMI et cate´gorisation des souches Les taux de re´sistance ont e´te´ calcule´s aux concentrations critiques du CLSI. En l’absence de concentration critique pour le doripe´ne`me nous avons calcule´ les taux de re´sistance des deux carbape´ne`mes a` l’aide des concentrations critiques European Committee on antimicrobial susceptibility testing (EUCAST) (mars 2009) a` savoir pour l’imipe´ne`me (anae´robie) souche re´sistante si CMI est supe´rieur a` 8 mg/L (identique a` celle du CLSI) et pour doripe´ne`me (concentration non spe´cifique d’espe`ce) souche re´sistante si CMI est supe´rieur a` 4 mg/L.
2. Re´sultats et discussion 2.1. De´termination des CMI 2.1.1. Bacteroides du groupe fragilis Le doripe´ne`me posse´dait une bonne activite´ sur les Bacteroides du groupe fragilis (Tableau 1). A` la concentration de 1 mg/L, il inhibait 104/127 souches (81,9 %). Doripe´ne`me et imipe´ne`me a` la concentration de 4 mg/L inhibaient respectivement 122 (96 %) et 126 (99 %) souches. Plus de 96 % des souches e´taient re´sistantes a` l’amoxicilline par production de ß-lactamase. La re´sistance a` l’imipe´ne`me, par production de carbape´ne`mase, qui associe une re´sistance croise´e a` l’ensemble des ß-lactamines e´tait rare et n’avait pas e´te´ trouve´e dans cette e´tude. Aucune re´sistance au me´tronidazole, a` l’association pipe´racilline + tazobactam. Vingtdeux souches (14,2 %) e´taient re´sistantes a` l’association amoxicilline + acide clavulanique (co-amoxiclav) mais restaient sensibles a` l’imipe´ne`me. La re´sistance isole´e a` co-amoxiclav augmente depuis quelques anne´es [17,20]. Le me´canisme de re´sistance e´tait ˆ a` une augmentation de la production de probablement du ß-lactamase ou/et un de´faut de porine, comme nous l’avons de´montre´ pre´ce´demment [13–14]. Quarante-cinq (35,4 %) des souches de B. fragilis e´taient re´sistantes a` la clindamycine. Le taux de re´sistance a` la clindamycine e´tait de 55 % pour les autres membres du groupe versus 29,6 % pour B. fragilis stricto sensu.
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L. Dubreuil et al. / Pathologie Biologie 59 (2011) 102–107
La re´sistance a` la clindamycine continue d’augmenter en France [15–20]. Nos re´sultats concernant le doripe´ne`me sont identiques a` ceux de Wexler et al. [3], Liu et al. [7], Snydman et al. [8]. Cependant, Goldstein et al. [4], Credito et al. [5] ont rapporte´ des valeurs de CMI plus basses ; ces diffe´rences peuvent s’expliquer par une e´pide´miologie diffe´rente ou le faible nombre de souches e´tudie´es. Lorsque les CMI de imipe´ne`me sont e´leve´es (> 16 mg/L), la re´sistance croise´e aux carbape´ne`mes associe la pre´sence d’une carbape´ne`mase code´e par le ge`ne cfiA et posse`de un promoteur efficace apporte´ par une se´quence d’insertion telle IS942 [21–23]. Lorsque le promoteur est faible, la carbape´ne`mase est dite silencieuse [24], les CMI de imipe´ne`me sont le plus souvent dans une gamme de 1 a` 4 mg/L [22]. Nous avions se´lectionne´ arbitrairement, 12 souches de Bacteroides dont les CMI de doripe´ne`me e´taient e´gales ou supe´rieures a` 2 mg/L. Les CMI des deux carbape´ne`mes n’ont varie´ d’au moins trois dilutions en
pre´sence de 20 mmol d’EDTA (re´sultats non indique´s) que dans deux cas ; cela sugge`re que la pre´sence de carbape´ne`mase silencieuse est rare et que d’autres me´canismes sont en cause. Wexler et al. [3] remarquaient a` partir de trois souches de B. fragilis inhibe´e par 8 mg/L ou plus de doripe´ne`me qu’une surexpression de pompes d’efflux contribuait a` la re´sistance du doripe´ne`me sans affecter l’imipe´ne`me. 2.2. Autres anae´robies a` Gram ne´gatif Environ 76,4 % des souches de Prevotella produisaient une ß-lactamase et e´taient re´sistantes a` l’amoxicilline. Toutes les souches de Prevotella e´taient inhibe´es par 4 mg/L de doripe´ne`me. Les valeurs des CMI50 et CMI90 sont identiques a` celles de Liu et al. [7]. Aucune re´sistance a` pipe´racilline + tazobactam, aux deux carbape´ne`mes n’e´tait observe´e tandis que quatre souches (11,8 %) e´taient re´sistantes a` la clindamycine.
Tableau 1 Activite´ du doripe´ne`me et autres antibiotiques sur les anae´robies a` Gram ne´gatif. Microorganisme
Nombre
Antibiotique
CMI en mg/L E´cart des CMI
CMI50
CMI90
Bacteroides fragilis
98
Amoxicilline Co-amoxiclav Pipe´racilline Pipe´racilline + tazobactam Imipe´ne`me Doripe´ne`me Clindamycine Me´tronidazole
0,25–> 64 0,06–>64 0,5–>128 0,06–32 0,03–8 0,03–32 0,06–>64 0,06–4
64 0,25 16 0,25 0,25 0,5 0,5 1
> 64 32 > 128 4 2 2 > 64 2
Autres Bacteroides du groupe fragilis
29
Amoxicilline Co-amoxiclav Pipe´racilline Pipe´racilline + tazobactam Imipe´ne`me Doripe´ne`me Clindamycine Me´tronidazole
0,06–> 64 0,06–> 64 0,125–> 128 0,06–16 0,03–4 0,06–16 0,06–>64 0,06–2
>64 1 32 2 0,5 0,5 >64 0,5
> 64 32 > 128 8 1 2 > 64 1
127
Amoxicilline Co-amoxiclav Pipe´racilline Pipe´racilline + tazobactam Imipe´ne`me Doripe´ne`me Clindamycine Me´tronidazole
0,06–> 64 0,06–> 64 0,125–> 128 0,06–32 0,03–8 0,03–32 0,06–>64 0,06–4
64 0,5 16 0,5 0,25 0,5 0,5 1
> 64 32 > 128 4 2 2 > 64 2
35
Amoxicilline Co-amoxiclav Pipe´racilline Pipe´racilline + tazobactam Imipe´ne`me Doripe´ne`me Clindamycine Me´tronidazole
0,06–> 64 0,06–32 0,5–> 128 0,06–4 0,03–2 0,03–4 0,06–> 64 0,125–2
16 0,125 8 0,5 0,12 0,25 0,25 0,5
> 64 4 64 2 0,5 0,5 1 1
8
Amoxicilline Co-amoxiclav Pipe´racilline Pipe´racilline + tazobactam Imipe´ne`me Doripe´ne`me Clindamycine Me´tronidazole
0,06–16 0,06–0,5 0,06–32 0,06–4 0,03–0,5 0,03–0,125 0,06–> 64 0,06–2
171
Amoxicilline Co-amoxiclav Pipe´racilline Pipe´racilline + tazobactam Imipe´ne`me Doripe´ne`me Clindamycine Me´tronidazole
0,06–> 64 0,06–> 64 0,06–> 128 0,06–64 0,03–8 < 0,03–32 0,06–>64 0,06–4
32 0,25 16 0,5 0,125 0,25 0,5 0,5
> 64 32 > 128 4 2 2 > 64 2
Bacteroides du groupe fragilis
Prevotella spp.
Fusobacterium spp.
Ensemble des anae´robies a` Gram ne´gatif
L. Dubreuil et al. / Pathologie Biologie 59 (2011) 102–107
Les isolats de Fusobacterium e´taient sensibles a` toutes les ß-lactamines sauf une souche de Fusobacterium necrophorum productrice de ß-lactamase et re´sistante a` l’amoxicilline. Une souche de Fusobacterium nucleatum e´tait re´sistante a` la clindamycine. Vis-a`-vis des anae´robies a` Gram ne´gatif producteurs de ß-lactamase le doripe´ne`me e´tait tre`s actif (CMI 0,125 mg/L). 2.3. Anae´robies a` Gram ne´gatif Les taux de re´sistance aux antibiotiques sur l’ensemble des souches e´tait : clindamycine (29,2 %) pipe´racilline (27,5 %) co-
105
amoxiclav (11,6 %), doripe´ne`me (2,9 %). Aucune souche re´sistante a` pipe´racilline + tazobactam, imipe´ne`me et me´tronidazole. 2.3.1. C. perfringens C. perfringens e´tait sensible aux pe´nicillines seules ou associe´es aux inhibiteurs de ß-lactamase. Toutes les souches e´taient sensibles au me´tronidazole, a` doripe´ne`me et imipe´ne`me. Une souche e´tait re´sistante a` la clindamycine. Doripe´ne`me e´tait plus actif que l’imipe´ne`me. Les valeurs obtenues e´taient similaires a` celles rencontre´s dans la litte´rature [5,8].
Tableau 2 Activite´ du doripe´ne`me et autres antibiotiques sur les anae´robies a` Gram positif. Microorganisme
Nombre
Antibiotique
CMI en mg/L E´cart des CMI
CMI50
CMI90
Clostridium difficile
41
Amoxicilline Co-amoxiclav Pipe´racilline Pipe´racilline + tazobactam Imipe´ne`me Doripe´ne`me Clindamycine Me´tronidazole
0,5–4 0,06–1 8–64 4–64 2–16 0,5–4 0,06–> 64 0,125–2
1 1 16 16 8 2 8 0,25
2 2 32 32 8 2 64 0,5
C. perfringens
25
Amoxicilline Co-amoxiclav Pipe´racilline Pipe´racilline + tazobactam Imipe´ne`me Doripe´ne`me Clindamycine Me´tronidazole
0,06–4 0,06–> 64 0,06–16 0,06–4 0,03–0,5 0,03–0,5 0,06–16 0,125–2
0,06 0,06 0,125 0,06 0,125 <0,03 0,06 0,5
0,5 0,5
Amoxicilline Co-amoxiclav Pipe´racilline Pipe´racilline + tazobactam Imipe´ne`me Doripe´ne`me Clindamycine Me´tronidazole
0,25–16 0,06–2 0,5–> 128 0,06–64 0,125–4 0,125–4 0,06–> 64 0,06–0,5
0,5 0,5
Autres Clostridium
12
4 2 0,5 0,25 2 1
2 1 0,25 0,25 1 0,25
16 1 16 16 2 2 16 0,25
Propionibacterium acnes
12
Amoxicilline Co-amoxiclav Pipe´racilline Pipe´racilline + tazobactam Imipe´ne`me Doripe´ne`me Clindamycine Me´tronidazole
0,06 0,06 0,125–0,5 0,25 0,03 0,03 0,06 > 64
0,06 0,06 0,5 0,25 0,03 0,03 0,06 > 64
0,06 0,06 0,5 0,25 0,03 0,03 0,06 > 64
Anaerococcus prevotii
19
Amoxicilline Co-amoxiclav Pipe´racilline Pipe´racilline + tazobactam Imipe´ne`me Doripe´ne`me Clindamycine Me´tronidazole
0,06–1 0,06–0,25 0,06–8 0,06–8 0,03–0,25 0,03–1 0,06–>64 0,06–4
0,125 0,06 0,125 0,06 0,06 0,06 0,25 0,5
0,5 0,25 4 0,25 0,125 0,125 8 1
Autres cocci a` Gram positif
32
Amoxicilline Co-amoxiclav Pipe´racilline Pipe´racilline + tazobactam Imipe´ne`me Doripe´ne`me Clindamycine Me´tronidazole
0,06–2 0,06–1 0,06–16 0,06–16 0,03–1 0,03–1 0,06–> 64 0,06–64
0,125 0,06 0,125 0,06 0,03 0,06 0,125 0,5
0,25 0,25 4 1 0,5 0,25 2 2
145
Amoxicilline Co-amoxiclav Pipe´racilline Pipe´racilline + tazobactam Imipe´ne`me Doripe´ne`me Clindamycine Me´tronidazole
0,06–16 0,06–2 0,06–>128 0,06–64 0,03–16 0,03–4 0,06–>64 0,06–>64
0,25 0,125 0,5 0,25 0,125 0,125 0,5 0,5
Ensemble des anae´robies a` Gram positif
2 1 32 16 8 2 16 8
L. Dubreuil et al. / Pathologie Biologie 59 (2011) 102–107
106
Tableau 3 Activite´ du doripe´ne`me et autres antibiotiques sur l’ensemble des anae´robies. Microorganisme
Ensemble des anae´robies
Nombre
316
Antibiotique
CMI en mg/L
Amoxicilline Co-amoxiclav Pipe´racilline Pipe´racilline + tazobactam Imipe´ne`me Doripe´ne`me Clindamycine Me´tronidazole
2.3.2. C. difficile Toutes les souches de C. difficile sont naturellement re´sistantes a` l’imipe´ne`me (CMI de 2 a` 16 mg/L) (Tableau 2). De nombreuses souches e´taient re´sistantes a` la clindamycine (58,5 %). Aucune re´sistance n’e´tait observe´e avec les pe´nicillines, le doripe´ne`me et le me´tronidazole. La CMI modale pour doripe´ne`me est de 2 mg/L dans la plupart des e´tudes [5,6,8]. 2.4. Autres Clostridia Parmi les autres espe`ces, les re´sistances e´taient observe´es plus fre´quemment au sein du groupe RIC (C. ramosum, C. innocuum et C. clostridioforme). Dans cette e´tude, la production de ß-lactamase e´tait de´tecte´e pour une souche de C. clostridioforme et de C. ramosum. Ces deux souches e´taient re´sistantes a` amoxicilline, pipe´racilline mais sensibles au me´tronidazole, a` imipe´ne`me, doripe´ne`me et aux diffe´rentes associations de pe´nicillines et d’inhibiteurs de ß-lactamase. Une souche de C. innocuum e´tait re´sistante a` la clindamycine. Toutes ces souches e´taient inhibe´es par 4 mg/L de doripe´ne`me. 2.5. Propionibacterium acnes Toutes les souches de Propionibacterium acnes e´taient re´sistantes au me´tronidazole (re´sistance naturelle) mais tre`s sensibles aux autres antibiotiques. Le doripe´ne`me e´tait tre`s actif sur les propionibacte´ries (CMI 0,03 mg/L) (Tableau 2). 2.6. Cocci anae´robie a` Gram positif (CAGP) La taxonomie est en perpe´tuelle e´volution. Peptostreptococcus anaerobius demeure le seul repre´sentant du genre Peptostreptococcus. Peptostreptococcus magnus et Peptostreptococcus micros sont renomme´s respectivement Finegoldia magna and Micromonas (Parvimonas) micros. La plupart des autres espe`ces appartiennent aux genres Anaerococcus et Peptinophilus. Par simplification, Anaerococcus, Peptinophilus et Peptostreptococcus sont regroupe´s sous le terme de CAGP. Les souches de CAGP e´taient sensibles a` toutes les ß-lactamines. Cinq souches (8,8 %) e´taient re´sistantes a` la clindamycine et une souche de Peptoniphilus asaccharolyticus e´tait re´sistante au me´tronidazole avec des re´sultats semblables a` ceux obtenus lors d’e´tudes multicentriques europe´ennes [25]. L’activite´ du doripe´ne`me e´tait semblable a` celle de l’imipe´ne`me sur Anaerococcus prevotii mais le doripe´ne`me e´tait plus actif que l’imipe´ne`me sur les autres espe`ces de CAGP. 2.7. Ensemble des anae´robies a` Gram positif Les 145 souches e´taient toutes inhibe´es par co-amoxyclav, pipe´racilline + tazobactam et doripe´ne`me. La re´sistance a` l’imipe´ne`me s’observait uniquement parmi les souches de C. difficile.
E´cart des CMI
CMI50
CMI90
0,06–> 64 0,06–> 64 0,06–>128 0,06–64 0,03–16 < 0,03–32 0,06–> 64 0,06–> 64
2 0,25 8 0,5 0,125 0,25 0,5 0,5
> 64 4 > 128 16 4 2 > 64 2
La re´sistance a` la clindamycine survenait dans 22,8 % des cas. Le doripe´ne`me apparaıˆt plus actif que l’imipe´ne`me vis-a`-vis de ces anae´robies a` Gram positif inhibant a` la concentration de 4 mg/L 145/145 souches (100 %) versus 115/145 pour l’imipe´ne`me a` cette meˆme concentration (79,3 %). 2.8. Ensemble des anae´robies (316 souches) Aux concentrations respectives de 1 mg/L et 4 mg/L doripe´ne`me et imipe´ne`me inhibaient 80,7 et 98,4 % versus 81 % et 90,1 % des souches e´tudie´es. Si l’on conside`re les concentrations critiques de l’EUCAST, le taux de re´sistance du doripe´ne`me (CMI > 4 mg/L) 1,6 % e´tait semblable a` celui de l’imipe´ne`me (CMI > 8 mg/L) 1,3 %. Ainsi, inde´pendamment des parame`tres pharmacodynamiques les deux carbape´ne`mes ont de´montre´ des activite´s tre`s similaires (Tableau 3) ; le doripe´ne`me e´tait plus actif sur les anae´robies a` Gram positif et le´ge`rement moins actif sur les anae´robies a` Gram ne´gatif dont les Bacteroides du groupe fragilis. 3. Conclusion Le doripe´ne`me posse`de une excellente activite´ sur les 316 anae´robies e´tudie´s et cela au regard des valeurs de la CMI50 = 0,25 mg/L et de la CMI90 = 2 mg/L. Ces re´sultats sont similaires a` ceux obtenus avec l’imipe´ne`me (CMI50 = 0,125 mg/L et CMI90 = 4 mg/L). Le doripe´ne`me est donc aussi actif que l’imipe´ne`me sur les souches productrices de ß-lactamase de Bacteroides du groupe fragilis, Prevotella, Fusobacterium et Clostridia. Les taux de re´sistance sur l’ensemble des anae´robies de cette e´tude sont : clindamycine (26,2 %), pipe´racilline (15,5 %), co-amoxiclav (6,3 %), me´tronidazole (4,1 %) doripe´ne`me (1,6 %) et imipe´ne`me (1,3 %). L’activite´ in vitro du doripe´ne`me semble approprie´ pour traiter les infections mixtes. Des e´tudes cliniques devront affirmer son utilite´ chez les patients. Conflit d’inte´reˆt Ce travail a e´te´ finance´ par le laboratoire Janssen-Cilag. Le docteur Miara est salarie´ de ce laboratoire pharmaceutique. Re´fe´rences [1] Anderson DL. Doripenem. Drugs Today 2006;42:399–402. [2] Jones RN, Huynh HK, Biedenbach DJ. Comparative activity of doripenem against drug-resistant clinical pathogens. Antimicrob Agents Chemother 2005;52:71–4. [3] Wexler HA, Engel AE, Glass D, Li C. In vitro activities of doripenem and comparator against 364 anaerobic isolates. Antimicrob Agents Chemother 2005;49:4413–7. [4] Goldstein EJC, Citron DM, Merriam CV, Warren YA, Tyrrell KM, Fernandez HT. In vitro activities of doripenem and six comparator drugs against 423 aerobic and anaerobic bacteria isolates from infected diabetic foot wounds. Antimicrob Agents Chemother 2008;52:761–6.
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