P167 Les Plasmaphérèses Répetées Peuventelles Être Source D'anémie ?

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Posters / Transfusion clinique et biologique 12 (2005) $57-S137

L'objectif de ce travail est de determiner les mEcanismes moldculaires responsables des phEnotypes RHD nEgatifs en Etudiant la frEquence chez les sujets RHD n6gatifs de la dElection totale, du pseudogbne et du gbne lybride RHD-CE(3-8)-D. Pour cela 111 donneurs de sang du Sahel Tunisien de phdnotype RHD ndgatif ont 6t6 6tudi6s (96 de ph6notype r r, 11 de ph6notype r'r et quatre de ph6notype r"r). L'extraction d'ADN a 6t6 r6alis6e par la technique de <>.Une PCR multiplex en trois tubes a 6t6 rdalis6e en utilisant cinq couples d'amorces. (exon 7 RHD, exonl0 RHD, intron3exon 4 -intron4 RHD. Intron trois exon quatre insert du pseudogbne, couple d'amorce sp6cifique du g~ne hybride RHD-CE (3-8)-D et un couple d'amorces sp6cifiques de l'exon sept RHCE comme contr61e interne). La ddldtion totale 6tait ~ l'origine de la majorit6 (95 %) du ph6notype RDH n6gatif. Le pseudog~ne 6tait present chez un seul donneur (0,9 %) ainsi que le gbne hybride. 3,6 % des donnettrs de phEnotype RHD ndgatif (r'r:3, r " r : 1) ont apparemment un gbne RHD normal. Ces derniers rEsultats pourraient correspondre soit h l'existence d'autres allbles silencieux RttD-CE (8-9) D ou g~ne RHD silencieux avec mutation soit ~ des faux nEgatifs des techniques sdrologiques utilisEes.

P165 I~TUDE DE 17 PROPOSITUS ATTEINTS OU PORTEURS DE LA THROMBASTHI~NIE DE GLANZMANN : IDENTIFICATION DE 11 NOUVELLES MUTATIONS JALLU V., DUSSEAUX M., BIANCHI F., KAPLAN C. LABORATOIRE D 'IMMUNOLOGIE PLAQUETTAIRE INTS, PARIS, F R A N C E

[email protected] La thrombasthdnie de glanzmann (TG) est un syndrome h6morragique de transmission h6rEditaire autosomale rEcessive associ6e aux mutations des g~nes codant pour les glycoprotEines (GP) lib et IIIa. Nous avons recherch6 les anomalies molEculaires chez 17 personnes. Les exons des g~nes des GP lib et GP IIIa ont 6t6 amplifies par PCR ~ partir de I'ADN gOnomique. Une analyse SSCP a permis d'identifier les amplicons pr6sentant une anomalie moldculaire avant d'en caractdriser les mutations par sEquenqage direct des produits PCR. Chez 7 patients et 2 sujets hEt6rozygotes les 11 mutations identifiEes avaient 6tE ddcrites. Chez les 8 autres patients, 11 nouvelles mutations ont EtE caract6ris6es. Trois sont des mutations faux sens (G21 IA, G629C de la GPIIIa et C2870T de la GPIIb). Leur responsabilit6 darts l'expression d'une TG de type I a Et6 confirm6e par mutagdnbse dirigEe et expression in vitro. Elles bloquent l'expression du complexe GP IIb-IIIa mut6 ~ la surface des cellules COS transfectdes. Le role des mutations G1878C et C1720A de la GP IIb patients n'a pas 6t6 confirm6 in vitro et l'implication d'une mutation G2800T de la GP IIb est en cours d'6tude. Les cinq derni~res mutations identifi6es sont potentiellement impliquEes dans laTG. Ce sont des mutations non-sens (521Cys---~X, 441Tyr--oX de la GP IIb) ou qui affectent un site

d'6pissage (IVS18-2 A--->Get IVS14-1 ~ -14 (dell3) de la GP IIb, IVS2-1 A--+G de la GP IIIa). Chez deux patients h6t6rozygotes obligatoires, la deuxi6me mutation reste h d6terniner. La caractErisation des mutations chez ces patients rev~t un intEr~t essentiel d'une part pour pour le diagnostic ant6natal et d'autre part pour les 6tudes structure-fonction.

Mddecine transfusionnelle P166 HARMONISATION DES CONDUITES A TENIR DEVANT UN RI~SULTAT BIOLOGIQUE ANORMAL DECOUVERT CHEZ UN DONNEUR DE SANG SUR L'EFS CENTRE ATLANTIQUE DELAVAUD E., BARNOUX M., MOUCHET C., ASSAL A., POTIE P., ROMIEUX B. E F S C E N T R E A T L A N T I Q U E , TO U RS

[email protected] La gestion des rdsultats biologiques anolInaux chez les donneurs de sang pr6sentait sur I'EFS-CA de grandes disparit6s rant sur la gestion administrative (mode d'information du donneur, exploitation du logiciel m6dico-technique) que m6dicale (nature de la contre-indication, choix de l'information). L'EFS-CA a donc ddcid6, darts un souci de simplification et d'harmonisation des pratiques m6dicales entre ses sites, de mettre en place un ensemble de logigrammes et de courtiers perrnettant de g6rer les r6sultats biologiques anormaux des donneurs. Cet ensemble de logigramrnes a 6td 6tabli en fonetion du r6f6rentiel national "conduite ~t tenir devant un rdsultat biologique anormal d6couvert chez un donneur de sang". Chaque logigramme d6taille la conduite ?a tenir de chacun des acteurs : • information du m~decin responsable du prdl~vement par le laboratoire de qualification biologique du don, • informations transmises au donneur par un courtier cibl6 +/- le r6sultat d'analyse, • prise en charge m6dicale par I'EFS, • mise ~jour du dossier informatique du donneur (contreindication mddicale si n6cessaire) assurant tragabilit6 et sdcurit6. Des modifications ont dues atre effectu6es sur le syst6me informatique mEdico-technique (medinfo) afin que la raise en 6vidence d'une anomalie biologique au niveau de la QBD et son 6ventuel contr61e dEclenchent l'Edition d'un rEsultat d' analyse et d'un courrier adapt6s. Les rdsultats attendus du ddploiement de ces modes operatoires sont, en plus de l'harmonisation des pratiques m6dicales, un gain important en temps de gestion de ces dossiers.

P167 LES PLASMAPHl~Rl~SES RI~PETI~ES PEUVENTELLES I~TRE SOURCE D'ANI~MIE ?

Posters / Transfusion clinique et biologique 12 (2005) $57 S137

SAILLIOL A.*, YVETOT J.*, EMILE L.**, DE JAUREGUIBERRY J. P.**, NIEL L.***, JOUSSEMET M.*** * CTSA SITE D E TOULON, TOULON ARMEES, FRANCE ; ** IliA SAINTE A., TOULON ARMEES, FRANCE ; *** CTSA, CLAMART, FRANCE

sts @sainteanne.org Deux de nos donneurs r6guliers en plasmaphdr~ses (12 ~ 15 dons par an) ont pr6sent6 une an6mie microcytaire ferriprive qui s'est aggrav6e progressivement. Darts un premier temps, l'interrogatoire a essay6 de retrouvet une 6tiologie mais en l'absence d'arguments, ces donneurs ont 6t6 adress6s en consultation de gastro-ent6rologie. Toutes les explorations fonctionnelles pratiqu6es s'6tant rdvdldes n6gatives, nous avons suspect6 le r61e des plasmaph6r~ses bien qu'il soit classique de dire que les rdserves de fer ne sont pas plasmatiques. Pour aller plus loin sur ce dernier point, nous avons rdalis6 une enqu~te prospective portant sur une cohorte de 100 donneurs de plasma, appari6s en fige, sexe et rdgime alimentaire mais diffdrents sur la quarttit6 de plasma pr61ev6e sur un an. Le premier sous groupe correspondait aux dons inf6rieurs ou 6gaux ~ 1 800 ml/an, le deuxibme sous-groupe aux donneurs sup6rieurs ou 6gaux 3 600 ml/an. A l'issue, il semble que les plasmaph6rbses ne soient pas la source d'une carence martiale. Nous avons donc imagin6 une dernibre hypothbse: la technique de centrifugation pourrait fragiliser anormalement des h6maties d6j~ porteuses d'une anomalie de membrane.

P168 I~LECTROPHORESE DES PROTI~INES SI~RIQUES CHEZ LES DONNEURS DE PLASMA : TROIS ANS DE SUIVI EN FRANCHE-COMTI~ BARISIEN C.*, POUTHIER F.*, COFFE C.**, SEILLES E.*, SAAS P.* * ETABLISSEMENT F R A N ~ A I S D U SANG B O U R G O G N E FRANCHE-COMTE SITE D E B E S A N C O N FRANCE ; ** ETABLISSEMENT F R A N ~ A I S D U SANG B O U R G O G N E FRANCHE-COMTE, FRANCE

fabienne.pouthier @efs.sante.fr Les BP de prdlbvement imposent, une fois par an, une 61ectrophorbse des prot6ines sdriques(EPP) chez les donneurs de plasma. Nous avons fait une analyse des r6sultats de I'EPP sur trois ann6es. La population 6tudi6e porte sur 1397 donneurs ayant fait au moins un don de plasma (fige moyen 40ans, sexe ratio H/F : 2,95, nombre moyen de dons de plasma : 5,3). Les critbres d'identification de notre population sont: sexe, nature du don (plasma seul ou non), hombre de don, age. Une anomalie de I'EPP a 6t6 d6tect6e chez 108 donneurs, 98 (7 %) prdsentaient une anomalie quantitative des diffdrentes fractions et/ou des immunoglobulines (Ig) et 10 (0,7 %), une anomalie qualitative des Ig (compos6 monoclona]).

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L'analyse statistique(Logiciel Epi info 6) 61imine comme facteur de risque, le sexe, le don de plasma seul, le nombre, la frrquence des dons. Un compos6 monoclonal est significativement associ6 ~ 1' age des donneurs (>50 ans). Les anomalies quantitatives n'ont pas de support pathologique, et se normalisent lors des contrrles ultrrieurs; la srlection mrdicale des donneurs, permettant d'61iminer la plupart des pathologies responsables. Chez 9 donneurs ayant un compos6 monoclonal, le diagnostic est une gammapathie monoclonale de signification indrterminde imposant un suivi rrgulier. Une maladie de Waldenstrrm a 6t6 drcouverte chez le dernier donneur 1 an aprbs. A 1' avenir, de nouveaux tests biologiques (dosage des chaines libres) pourraient distinguer, parmi ces gammapathies, celles qui sont ~ risque d'rvolution maligne (S. Vincent Rajkumar, et al BJH 127, 308-310). Ces rrsultats remettent en cause l'intrr& de cet examen sprcifique au don de plasma.

P169 UTILISATION D'UNE TECHNIQUE NON COMMERCIALE POUR LE TITRAGE DES ANTICORPS ANTITI~TANIQUES SUR LES PLASMAS DESTINIES AU LFB CHUTEAU C., LEBRAS M., GUERINEAU A., DUFOSSET D., ESSEAU D., BIDET M-L., FOLLEA G. EFS PAYS DE LA LOIRE - SITE NANTES, NANTES, FRANCE

claude.chuteau @efs.sante.fr Objet : t~valuation d'une technique non commerciale pour le drpistage et le titrage des anticorps antitrtaniqnes sur les plasmas destinds au LFB, ~ la place de trousses commerciales prates ~ l'emploi. Vrrification de la cohrrence des titres obtenus avec un rractif d'origine commercial et 6tude de cofit. Matrriels et m~thode : Prrparation de microplaques Elisa <>avec une solution d'anatoxine trtanique (lnstitut Pasteur Bruxelles). Technique ELISA automatisre : distribution des srrums dilurs au 1/200 par un automate Microlab AT 2+ et gestion sur FAME (Hamilton). Etude comparative avec la trousse Diagast sur 40 srrums. Rrsultats : Les titres obtenns avec notre technique sont comparables avec ceux obtenus avec le rractif utilis6 en rrfrrence (moyennes respectives 6,95 et 6,55 UI/1). La rrpartition des plasmas en fonction des catrgories d'acceptation du LFB (8-20, > 20 UI/1) est superposable. L'rtude de cofit montre un prix de revient de l'ordre de 0,35 C HT/test, tr~s infrrieur an cofit de la technique commerciale. Le temps technicien est identique pour ce qui concerne la rralisation du test, mais est augment6 du temps de prrparation des supports de traction Conclusion : Cette 6valuation de notre mrthode de titrage utilisre depuis de nombreuses annres a permis de vrrifier le maintien de ses performances. Son faible prix de revient permet un haut niveau de drpistage des plasmas, en respect avec