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Vitamines et biofacteurs Symposium Satellite du Colloque international de Pont-à-Mousson « Biologie ProspectiveNancy, 18–19 septembre 1992
Nutr. Clin. M r t a b o l . 1992 ; 6 : 115-122
RI SUM[ S DES COMMUNICATIONS
Vitamines et biofacteurs Symposium Satellite du Colloque international de Pont-~-Mousson <
Nancy, 18-19 septembre 1992
Influence of vitamins and biofactors on cadmium bioavailability.
the best known proteins of this class. All these proteins share a commun tridimensional structural pattem: eight stranded antiparallel f3-sheets bordered on one side by an a-helix constituting a hydrophobic pocket. Despite abundant data, the biological role of ~3-1actoglobulin, which is found in the milk of several mammalian species, is not well understood. Said et al. [7] reported the presence of a receptor for 13-1actoglobulin-like proteins at the brush border membrane of the enterocytes. There is also evidence of substantial intestinal passage, in humans, of this resistant to acid proteolysis protein [8]. These observations indicate that 13-1actoglobulin may cross different membranery interfaces. It is known that, in vitro, 13-1actoglobulin binds tightly one retinol molecule per monomer [9]. According to recent observations this stoichiometry may be doubled when the f3-1actoglobulin is in "molten globule state" which may be induced to some extent by the medium polarity changes [10].
Rambeck WA, Kapl D, Weiser H* Institute of Animal Physiology, Veterinary Faculty, University Munich and *Hoffmann-La Roche Ltd, Department VRD/F, Basel.
The major route of human cadmium exposure is through food. The concentration of this toxic heavy metal in the soil cannot be reduced significantly within a short period of time. However, it is a promising possibility to lower the cadmium accumulation in the human food chain by vitamins and biofactors which are added to the diet of meat supplying animals. In order to lower the cadmium burden, we studied the influence of different dietary components in chicken, quails and partially in pigs. While the effect of vitamin B6, vitamin E and manganese was small or nonexistant, the addition of dietary calcium, zinc, iron, selenium, vitamin D and especially vitamin C reduced the cadmium burden in liver, kidney and in other organs. A dramatic increase of the pollutant was observed when the diet was supplemented with copper. This is of special interest in commercial pig fattening where copper is added to improve feed conversion. Addition of 1000 ppm of vitamin C, however reduces Cd-retention in the organs and in muscle to normal. In general, we observed in all animal species that combining various dietary factors may lower in cadmium accumulation by a factor of 20. These results indicate the tremendous effect of vitamins on cadmium content in meat.
A number of biological processes, including vision, require vitamin A. Animals cannot synthesize carotenoids, but can convert them into vitamin A, in the intestinal mucosa [11]. In addition, carotenoids and retinoids might exert significant anti-neoplasmic action [12]. Retinoic acid is derived from retinol. It has been demonstrated during the past three years that retinoic acid is, between others, one of the key morphogen molecules in the developing embryos [13], responsible for orientation of posterior/anterior limb division axis. Retinoic acid and its derivatives are effective in several dermatological and cosmetic treatments. Retinoids and 13-carotene are quite susceptible to oxidation and to isomerization induced by air, oxygen, heat and light. These hydrophobic molecules might be sheltered against oxidation reactions in complexes with proteins. The dairy industry produces large amounts of [3-1actoglobulin which could be engineered in order to bind and protect a wide range of lipophilic molecules.
Binding of retinoids and 13-carotene to 13-1actoglobulin.
Studied retinoids share common structural pattern of cyclohexenyl ring with an isoprenoid chain. They differ only by the isoprenoid chain end: alcohol function in retinol, esterified by acetate in retinyl acetate and a carboxylic group in retinoic acid. Retinol and retinoic acid bind to native BLG with practically the same affinities. Apparently, the end groups of these two ligands are not essential in their binding by BLG. In fact, as it has been shown before [14, 15], non polar interactions and most likely the structural constraints imposed by the conjugation of the cyclohexenyl ring double bond with the vicinal C=C double bond system of the isoprenoid chain are essential for the retinoid recognition by BLG and a complex
Dufour E, Haerfl6 T Institut National de la Recherche Agronomique, B.P. 527, 44026 Nantes Cedex 03.
Recent progress in structural studies of small globular proteins, named lipocalins, interacting with hydrophobic ligands suggest that these proteins can be classified in the "superfamily" of hydrophobic molecule transporters [1]. Retinol binding protein [2], bilin binding protein [3], insecticyanin [4] and 13-1actoglobulin [5, 6] are 115
RI~SUMI~SDES COMMUNICATIONS formation. It was demonstrated that BLG binds [3-ionone with slightly.weaker affinity (K'a = 6 x 10 7 M), but in applied conditions it does not bing c~-ionone at all [15]. Cogan e t al [14] found that human retinol binding protein binds retinoids with similar affinities: K'd = 1.9 × 10-7 M for retinol, K'd = 2.1 × 10-7 M for retinoic acid and K'd = 2.2 × 10-7M for retinyl acetate. In applied conditions, retinoic acid and retinol bind to BLG with even higher affinities than to human retinol binding protein. Retinyl acetate displays approximatively the same binding affinity to BLG as to retinol binding protein. It is known that alcohol dehydrogenase can rapidly oxidate the retinol molecule when it is bound to BLG, but not when it is bound to refinol binding protein [9]. This fact suggests that in the former case, the retinol tail is protruding outside, since it is sensitive to dehydrogenase action [16]. The terminus of retinyl acetate isoprenoid tail is bulkier and more hydrophobic. All these ligands, except [3-carotene interact with BLG at ratio 1/1. At the first sight observed [3-carotene/BLG ratio of 1/2 is surprising. The solvent exposure of a part of retinol isoprenoid chain, when bound BLG [9], could explain the 1/2 stoicbSometry of [3-carotene/BLG complex. This tetraterpen has two [3-ionone cycles, joined by an isoprenoid chain, which may interact distally with two BLG molecules. The chemical modifications of BLG don't increase significantly the affinity of the derivatives for B-carotene. But they induce a twofold decrease of the ligand/protein ratio, reaching 1/1 stoichiometry for [3-carotene/MetBLG and [3-carotene/N-ethyllysyl BLG complexes. At least three phenomena could be at the origin of these changes: (i) the surface hydrophobicity increase might boost the binding of J3-earotene to modified BLG, (ii) esterification or alkylation of BLG amino acid sidechains, as well as the induced secondary structure changes, could prevent the binding of one [3-carotene molecule with two BLG molecules and (iii) the second [3-ionone ring of [3-carotene might bind to the same modified BLG molecule.
Assimilation of cobalamins Gu~ant JL. Laboratoire de Bioehimie Nutritionnelle, INSERM U 308, Facult6 de M6decine, 54500 Vandceuvre-I~s-Nancy Cedex.
Cobalamin (Cbl, vitamin B12) contained in dietary samples is not in a free state. It is combined with extracellular carriers of, intracellular proteins. Gastric chyme activity and pepsin help to free cobalamin from its food protein medium. Cbl released in gastric chyme is in the presence of two carrier proteins, haptocorrin and intrinsic factor (IF). Haptocorrin accounts for 10-40 % of vitamin B12 binding capacity in the gastric juice and its affinity for Cbl at pH 2 is 50 times greater than that of IF. Allen e t a l were the first to show that haptocorrin was broken down in vitro in the presence of bovine proteases. These results were then confirmed with duodenal liquid and pancreatic juice. IF remains intact in the presence of proteases in vitro and in vivo. The different behavior of haptocorrin and IF in the presence of proteases may be explained by the role of the carbohydrate core in protecting both glycoproteins. Degradation by exoglycosidases causes a loss in the vitamin B12 binding capacity of saturated IF and haptocorrin. It is therefore justifiable to assume that the carbohydrate core has at least an indirect effect in the vitamin binding site, for both IF and haptocorrin. Bile excretion of Cbl has been demonstrated after parenteral injection of labeled Cbl. The enterohepatie cycle has been demonstrated in animals, especially hog rats, baboons and rabbits. Bile cobalamin is excreted as bound to haptocorrin. Several arguments appear to confirm the existence of an enterohepatic cycle of vitamin B12 in man. Haptocorrin in the bile is degraded by pancreatic enzymes, causing a transfer of biliary Cbl to IF. The presence of unsaturated and biologically active IF has indeed been detected in the intestinal liquid as far as the distal ileum, indicating possible uptake of the biliary Cbl-IF complex in the ileum. Not only Cbl but also analogs are excreted in bile. Analogs are secreted in combined form with haptocorrin at a concentration of about 1 nmol/1 and there is a negative correlation between serum and bile concentrations of corrinoids in humans. The ileo-colic stage comprises an intraluminal stage and the uptake of IF in the distal ileon enterocytes via a specific receptor. This receptor is found also in colon carcinoma cells such as HT 29 and Ca Co2. It is present in the whole intestine before 25 weeks of gestational age. The exteriorized part of the membrane pig receptor can be removed in the presence of papain. It combines with IF-Cbl under the same conditions as the complete receptor. The association constant of IF-Cbl complexes on the receptor varies from 0.3 x 109 hY 1 to 13 x 101° M -1, depending on the species. Calcium may combine in vitro on the receptor and on IF and it would appear that very low concentrations of calcium are necessary for the two molecules to combine. Purification of the receptor has been carried out using ileal mucosal homogenates from pigs, dogs, guinea pigs, rats and also humans following a facultative solubilization of the membrane proteins in the presence of Triton X-100. The receptor is asymmetrical, with a friction ratio of 1.5-2. During SDS-PAGE electrophoresis, the receptor displays two subunits, ct and [3, the molecular mass of which varies according to the species and method of purification. The monomer of the porcine receptor has a molecular mass of about 270 kDa. Calcium seems to be involved in the oligomerization of the receptor. Wheat germ agglutinin (WGA) inhibits formation of the IF-receptor complex with an inhibition constant of 1.9 ~tmol/1. WGA binds only with the 75 kDa subunit. This subunit therefore possesses the IF binding site.
In all the cases, except one, the chemical modifications of BLG enhance the binding affinity of the ligands to the protein. The structural changes induced by the chemical modifications, especially in the case of MetBLG [15], do not disassemble the structure of the binding site. The chemical modifications of BLG, increasing its surface hydrophobicity and modulating slightly its secondary structure, could change ligand/protein stoichiometry as it was observed in the case of J3-carotene/BLG complex. Modification of BLG structure by chemical treatments or by changing the dielectric constant of the medium, opening up a second binding site for retinol [10], may be one of the possible ways to alter or broaden BLG binding properties.
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VITAM1NES ET BIOFACTEURS
Many authors have assumed that the IF-Cbl complex penetrates the cell, with separation of Cbl and IF occuring subsequently. Others assume that IF remains attached to the receptor while Cbl penetrates the cell. Using radioantography, we have demonstrated internalization in the enterocyte of IF labeled with 125I and incubated in vivo in guinea pig ileum loops. The tracer was located mainly in endosomes of the apical cytoplasm and invaginations of the lateral membrane suggesting a transcytosis. Dissociation of the IFCbl complex could occur as a result of degradation by lysosomal enzymes including exoglycosidases. Cbl passage at the basal pole of the enterocyte appears to occur through combination with transcobalamin. Ileal enteroeyte and colon carcinoma cells, but not normal colon epithelial cells, synthezise transcobalamin. The transfer of labeled Cbl to transcobalamin in enterocytes of guinea pig has been demonstrated a membrane receptor enable the Cbl-transcobalamin complex to pass into the humoral com16artment at the basal membrane of the enterocyte.
transcobalamin, holo-TC and holo-haptocorrin, holo-HC) and cobalamin unsaturated binding proteins (apo-transcobalamin, apo-TC and apo-haptocorrin, apo-HC) were examined together with the TC isopeptide pattern.
Patients and methods: HIV infected male patients (n = 20, aged 32-62 years) with P-Cobalamins below 200 pmol/1 were studied. Apo-TC and apo-HC were determined by the QUSO technique [1]. Holo-TC and holo-HC were calculated after determination of the substance concentration of cobalamin following QUSO precipitation [2]. The TC phenotypes were determined by isoelectric focusing [3].
Results: These are given as range and (median) with interval of reference in [brackets]. Low substance concentrations of holo-TC (37-88 (47.5); [75-475] pmol/0 and holo-HC (64-184 (135.5); [200-550] pmol/1) were found. The substance concentration of both apo-TC (480-1730 (1025); [400-930] pmol/1) and apo-HC (70-800 (235); [90-275] pmol/1) were increased. The frequency of TC phenotype X and the overall distribution of the TC phenotypes were significantly different from the reference population (p < 0.05).
Interactions m6taboliques entre folates et ph6nytoi'ne chez le rat en r6gime normal ou suppl6ment6 en acide folique
Conelusions: 1 ) L o w P-Cobalamins does not reflect a low concentration of TC or HC. 2) The increased frequency of TC phenotype X is without connection to the cobalamin deficiency in these patients, since there is no difference between the binding of cobalamin or the binding to the TC receptor of the individual TC isopeptides [4].
Ladjimi H, Gounelle J-C. Laboratoire de Physiologie, Facult6 de Pharmacie, Universite Paris XI, 92296 Chb.tenay-Malabry.
References
La n6cessit6 d'une suppl6mentation folique de sujets trait6s /~ la ph6nyto'fne de m~me que le m6canisme de l'interaction folate-phdnyto'ine sont toujours sujets/t discussion. Des rats t6moins ou trait6s /l la ph6nytoine sont suppl6ment6s ou non par une dose de charge d'acide folique. Les principaux m6tabolites tissulaires de cette vitamine sont s6par6s et dos6s par une technique chromatographique pr6c6demment mise au point (Gounelle et Coll., Anal. Biochem. 1989 ; 176 : 406-411). Les tissus 6tudids sont la muqueuse intestinale, le sang total, le foie et le cerveau.
[1] [2] [3] [4]
GimsingP. Clin. Chem. 1989; 35:1 447. Nexo E. SeandZ Clin. Lab. Invest. 1981; 41: 465. HansonM. Electrophoresis 1987;8: 221. Hansen M. Biochim. Biophys. Acta. 1987;926: 359.
Cobalamin (Cbl)- and receptor- binding properties of deglycosylated rat intrinsic factor (IF),
Cette suppl6mentation a permis d'observer, chez les t6moins, nne augmentation de la teneur du t6trahydrofolate dans la muqueuse intestinale, du m6thylfolate dans le sang total, du THF et surtout du 5-CH3THF dans le fissu hOpatique. Cette augmentation des folates dans le sang total et dans le tissu h6patique ne s'accompagne pas d'une 616vation proportionnelle de la concentration de ces d6riv6s dans le cervean. Les r6sultats obtenus dans la muqueuse intestinale montrent que le traitement ~t la DPH entra~ne une accumulation des folates intestinaux surtout sous forme m6thyl6e alors que les folates du sang total, du foie et du cerveau ne sont pas modifi6s. Donc, ce traitement par voie intrap6riton6ale ne laisse pas apparaitre d'effets prononc6s de cet anticonvulsivant sur le statut folique des diff6rents organes 6tudi6s. La faible concentration h6patique et c6r6brale de la DPH observ6e chez les rats suppl6ment6s en acide folique laisse sugg6rer l'existence d'une interaction m6tabolique entre la vitamine et la drogue ; celle-ci pourrait jouer un r61e important dans l'effet anticonvulsivant de la DPH.
Dugu~ B, Griisbeck R. Minerval Institute, Tukholmankatu 2, 00250 Helsinki, Finland.
IF is a glycoprotein that binds Cbl and promotes its absorption into ileal enterocytes by receptor-mediated endocytosis. The functional role of the carbohydrate moiety in IF has recently been debated: Gu6ant et al suggested that the carbohydrates participate in the Cbl binding site of IF (BBA 1988; 957: 390-398) whereas Gordon e t al reported that glycosylation is not required for ligand or receptor binding (Am. J. Physiol. 1991; 260: G736-G742). Gastric secretion was collected from rat stomach by carbachol stimulation (20 ug/Kg), and kept in 0.02 M Tris buffer pH 7.4 containing 0.15 M NaC1, 10 mM NAN3, 3 mM PMSF, 10 ug/ml lenpeptin, 0.11 mg/ml antitrypsin, 0.11 mg/ml aprotinin, Pepsin was inactivated by raising the pH to 10.0 for 20 min followed by neutralisation. The gastric juice was saturated or not with [57Co]Cbl and incubated with exoglycosidases (neuraminidase, c~L fucosidase, N-acetyl D glucosaminidase, c~ mannosidase, 13galactosidase at the concentrations of 0.2, 1,10, 10 and 30 units/mg of protein, respectively) for 16 h at pH 5.5 and 37 ° C. The binding affinity for Cbl and rat intestinal receptor were measured at pH 7.4. IF lost 73% of its Cbl-binding capacity, but no significant change was noticed in the Ka (0.97 _+ 0.21 and 0.77 _+ 0.10 n M "-1 for the deglycosylated IF and the control, respectively). The deglycosylated IF-Cbl complex attached to the rat intestinal receptor with similar affinity as the control (0.78 + 0.07 vs 0.61 + 0.13 nM 1), but the apparent activity o f the receptor decreased with 30%. We conclude that the carbohydrate moiety does not affect the affinity of IF-Cbl for its receptor but that its removal decreases the amount of IF-Cbl bound. However, traces of protease activity were detected and may be responsible for the loss of Cbl-binding capacity.
Cobalamin binding proteins in patients with HIV infection Hansen M 1, Gimsing p2, Nexe E 3. 1 Department of Haematology, Herlev Hospital, University of Copenhagen. 2 Department of Haematology, Rigshospitalet, University of Copenhagen. "j Department of Clinical Chemistry, KH University Hospital of Aarhus, Aarhus Denmark.
Aim: P-Cobalamins are decreased in around 30% of patients with HIV infection. The cobalamin saturated binding proteins (holo-
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RI~SUMt~S DES COMMUNICATIONS
Effects of Iron complexes on cellular transport of calcium,
forms that are equally well recognized in the assay system to be used. Secondly, an assay with a well-known and suitable specificity and sensitivity should be chosen. Thirdly, a suitable calibration standard should be defined, and finally, possible influences of the matrix in which the vitamin is present should be considered. The above mentioned points will be exemplified with data on vitamin B]2.
Anghileri L.J, Biophysics Laboratory, Medicine Faculty, University of Nancy
Quantitation of vitamin B12 (cobalamins) in plasma is of considerable clinical interest since cobalamin deficiency is a relatively common disease [1]. In order to quantitate P-cobalamins at least 4 different forms of cobalamins must be extracted from 2 different binding proteins and converted to one form of cobalamin, cyanocobalamin. Extraction has been performed employing an extreme pH and/or heating. Our knowledge concerning the efficiency of the extraction is limited, especially for samples other than plasma [21.
In previous publications we have shown that calcium homeostatis of the cell, both in vitro and in vivo [1-4], is modified by ferric lactate. The involvement of low molecular weight ligands in transport and binding of iron by the cells has been reported by several authors, and among those ligands ATP is the most important low molecular weight ligand complexing iron which is implicated in cellular processes [5]. To establish the mechanism or mechanisms involved in ferric lactate action we have studied the effects of albumin, deferoxarnine and ATP on the in vitro ferric lactate-induced enhancement of 45Ca-uptake by Ehrlich carcinoma ascites cells. The competitive binding of iron to albumin and deferoxamine results in a drastic lowering of 45Ca-uptake enhancement. On the other hand, ATP provokes an increase of the ferric lactate effect, with a maximum value at equimolar concentrations. Since ATP alone does not modify 45Ca-uptake by the cells, the possible role of iron-ATP complex formation and a subsequent impairment of the cells Ca 2+pump is inferred. This hypothesis seems supported by the transfer of iron from ferric lactate to ATP and to albumin, demonstrated by electrophoresis. The impairment of the Ca2+-~ump in this case might be similar to the one provoked by La 3 , by blocking the CaZ+-pump phosphorylated protein which performs the ATPhydrolysis needed for the pump functioning. This reported complexed iron-calcium transport relationship might be of importance for the explanation of the cellular events taking place during liver iron-overload which leads to cirrhosis and liver cancer, as well as for the interpretation of the role played by iron accumulation in the neurodegenerative processes found in Parkinson's and Alzheimer's diseases.
Since plasma cobalamins is present in picomolar concentrations the assay, principles employed has been either growth of microorganisms or competition for protein binding between labelled cobalamin and cobalamin in the sample. While the latter principle is almost exclusively employed for quantitation of cobalamins in human samples the former is still in use for quantitation of cobalamins in dietary samples. The specificity of the assays are relatively well explored, both for microbiological assays and for protein binding assays. Only the microorganism O. M a l h a m e n s i s and the binding protein intrinsic factor are considered to be specific for cobalamins. Other microorganisms and binding proteins recognize a spectrum of corrins as well as cobalamins [3]. The preparation of calibration standards is simple. All endogenous active forms of cobalamin can be converted to cyanocobalamin. This compound is commercially available and its concentration can be determined with considerable accuracy by spectral analysis of an aliquot converted to dicyanocobalamin [4]. The substance concentration of cobalamins measured with various methods varies more than a factor 2, and a considerable variation is observed, also when comparable methodologies are employed [5]. The most likely explanation for this discrepancy is variations in the extraction procedure employed.
References [1] Anghileri LJ. Effects if Fe3+-tumor cell interaction on CaZ+-uptakeby Ehrlichascitestumor cells. Cell Calcium 1991 ; 12 : 371-74. [2] AnghileriLJ, Maleki P, Robert J. Changes in calciumuptake by liver induced by ferric lactate. Arch. Biochem.Biophys. 1992 ; 292 : 529-33. [3] AnghileriLJ. Effects of complexed iron and aluminumon brain calcium to be publishedin Vol. 13, 1992of NeuroToxicology(USA). [4] Anghileri LJ. Soft tissues calcification induced by iron complexes, to be pubfishedin CalcifiedTissue International(USA). [5] Weaver J, Pollack S. Low molecular weight iron isolated from guinea pig reticulocytes as AMP-Fe and ATP-Fe complexes. Biochem. J. t989 ; 261 : 787-92.
In conclusion, quantitation of vitamins is of importance in order to ensure a diet that contain the minimal daily requirement of the vitamins and in order to diagnose possible deficiencies of the vitamin. Ideally comparable methodologies should be employed for quantitation of the vitamins in dietary samples and in human sampies, and ideally the methods should be optimized and standardized concerning extraction of the vitamin, calibration of the assay, and specificity of the methods employed. Though it should be possible to reach this ideal situtation, at least for some of the of vitamins, there is still a long way to go.
Quantitation of vitamins References
Nexu E. Department of Clinical Chemistry KH University of Aarhus, N~rrebrogade 44, 8000 Aarhus C, Denmark
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Vitamins are supplied with the diet, absorbed and transported through the blood stream in order to act as coenzymes in a diverse spectrum of reactions. Sufficient supply of vitamins is thus of importance in order to maintain health. Because of that quantitation of the vitamins is of relevance both to ensure sufficient dietary supply and to diagnose possible deficiencies. The analytic procedure for quantitation of vitamins involves several important steps. First, the sample needs to be pretreated in order to ensure that all vitamins are liberated and converted to
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VITAMINES ET BIOFACTEURS
Mdthodes biologiques d'(~valuation des ~l(~ments traces mindraux
mais indispensable car elles sont g6n6ralement tr6s diff6rentes de celles des adultes.
Nabet-Belleville F.
L'6tablissement de valeurs usuelles chez les personnes ag6es audel/l de 60-70 ans pr6sente 6galement des difficult6s (mais est 6galement indispensable) car dans ce cas, il faut d6finir une <>.
Laboratoire de Biochimie B Unite Lionnois, CHU de Nancy - H6pital Central 29, avenue de Lattre de Tassigny - F-54000 Nancy
- Variations des valeurs statistiques en fonction de la population
6tudi6e (variations des valeurs usuelles de s616nium en fonction de la localisation, du chrome en fonction du degr6 de raffinage des aliments disponibles,...).
Commengant & comprendre, au moins pour certains des 616ments traces min6raux, leurs r61es physiologiques, on perqoit les implications qu'ils pourraient avoir en pathologie si leur statut dans l'organisme n'est pas ad6quat. Le chrome, le zinc, le mangan6se sont impliqu6s dans le m6tabolisme des glucides et des lipides et participeraient ainsi aux maladies de la nutrition comme le diab6te, l'art6rioscl6rose .... Des apports appropri6s en 616ments traces pourraient ~tre un 616ment d'un vieillissement harmonieux.
D6termination des valeurs-seuil en dessous desquelles des sympt6mes, m6me frustes, de carence risquent d'apparaRre. - Valeurs ~tpartir desquelles une suppl6mentation est ~t envisager. Bien que de nombreux probl6mes restent ~ r6soudre, la d6termination d'un statut ad6quat en 616ments traces s'inscrit dans les recherches nutritionnelles actuelles.
Toutes les recherches cliniques entreprises sur les 616ments traces min6raux requi6rent plusieurs pr6alables : 1. Que les biologistes mettent ~ la disposition des cliniciens des techniques de dosage fiables et sensibles permettant de mettre en 6vidence une carence m~me partielle (par exemple, les techniques propos6es pour le dosage du Cr s6rique ont des seuils de d6tection qui recoupent les valeurs consid6r6es comme normales, donc dans ces conditions une carence ne peut 6tre mise en 6vidence).
Dosage du retinol et de I'alpha-tocoph~rol plasmatique par C.L.H.P.
Pour les laboratoires de biologie classiques, le hombre des m6thodes disponibles est finalement limit& Des techniques colorim6tdques sont utilisables pour le fer, 6ventuellement le cuivre et le zinc, fluorim6triques pour le s616nium urinaire. Ces techniques moins sp6cifiques permettent de traiter un grand nombre d'6chantillons ~t moindre cofit. Cependant les techniques les plus utilis6es sont la spectrom6trie d'absorption atomique avec flamme (de 10 ~ 100 ~tg/1), avec four (0,1 ~ 10 Ixg/1) ou ICP (1 ~ 100 ~tg/1).
Gani~re-Monteil C, Kergueris M F , Pineau A, Blanehard B, A z o u l a y C, L a r o u s s e C. Laboratoire de Pharmacologie Clinique, CHU, 44035 Nantes Cedex, France.
Le r6tinol (Vit A) et l'alpha-tocoph6rol (Vit E), fractions actives des vitamines A et E, sont dos6es par d6tection U.V. ~t 280 nm apr6s C.L.H.P. en phase invers6e (C18). L'addition d'ac6tonitrile dans la phase mobile (ac6tonitrile-m6thanol-eau, 64,5-33-2,5) 6vite les pics parasites et permet une analyse en 8 minutes. L'extraction liquide-liquide se fait dans l'hexane. Apr6s 6vaporation ~t sec, le r6sidu est repris dans un m61ange 6ther-m6thanol (25-75).La gamme d'6talonnage est r6alis6e par surcharge plasmatique. Le r6tinyl ac6tate est l'6talon interne. La stabilit6 des produits impose de traiter l'6chantillon toujours ~ l'abri de la lumi6re.
L'analyse des 616ments traces n6cessite pour 6tre interpr6table des pr6cautions importantes pour ne pas introduire de contamination tant au niveau du pr616vement qu'en cours du dosage. 2. Avoir un ou des marqueurs appropri6s du statut de l'organisme en 616ments traces ~t 6valuer. Ce ou ces marqueurs doivent pouvoir ~tre dos6s sur des pr61bvements facilement accessibles et non invasifs. En pratique, on dose l'616ment trace lui-m~me dans le s6rum (ou le plasma), le sang total, les globules rouges, quelquefois dans les leucocytes ou les plaquettes. Les dosages sur biopsie sont r6serv6s des diagnostics plus particuliers (exemple, biopsie h6patique pour dosage du cuivre dans la maladie de Wilson, biopsie de peau pour des carences en zinc dans les 16sions dermatologiques).
Les crit6res de qualit6 sont : - Pourcentage de r6cup6ration : proche de 100 % pour Vit A et Vit E.
Le dosage des 616ments traces dans les fluides biologiques cit6s dolt, pour 6tre utile au diagnostic de carence, ~tre un bon reflet du statut de l'organisme en cet 616ment ce qui n'est pas toujours vrai.
- Limites de d6tection :Vit A = 0,015 mg/l, Vit E = 0,030 rag/1. - Lin6arit6 satisfaisante jusqu'~t 2 mg/1 pour Vit A et 20 mg/1 pour Vit E.
Le dosage des 616ments traces dans les urines n'est ~tmon avis pas suffisamment exploit& S'il est de peu d'int6r6t pour le diagnostic d'une earence, il pourrait apporter des arguments 6tiologiques. De plus, ces dosages seraient tr~s utiles pour la d6tection de suppl6mentations <
- S61ectivit6 : aucune interf6rence. Reproductibilit6 satisfaisante.
- Stabilit6 des pr61~vements h l'abri de la lumi6re : ~t - 20 °C : 1 mois,/t 4 °C : 24 h pour Vit A, 48 h pour Vit E. - Stabilit6 de l'6talonnage : La pr6paration d'une solution 6talon
3. Etablissement de valeurs de r6f6rence et des limites au-dessus et an-dessous desquelles on peut consid6rer que le statut de l'organisme en 616ment trace consid6r6 n'est pas ad6quat.
contenant h la lois Vit A et Vit E permet une meilleure stabilit6 de Vit A. Les taux plasmatiques ont 6t6 d6termin6s dans une population t6moin en fonction de l'~ge :
Les valeurs usuelles sont des valeurs statistiques &ablies dans des populations partieuli~res. L'6tablissement de ces donn6es se heurte des difficult6s :
adultes : Vit A : 0,63 + 0,17 rag/1 -Vit E : 9,61 + 3,10 mg/1 (n = 29)
- Choix de la population et 61imination de facteurs pouvant modifier les concentrations des 61Orients traces (alcool, tabac, m&licaments,...).
5 h 15 ans : Vit A : 0,41 _+0,18 mg/l - Vit E : 6,87 + 2,37 mg/1 (n = 29) < ~ 5 ans :Vit A : 0,37 + 0,17 mg/l - Vit E : 6,94 + 2,40 mg/1 (11= 29)
En s'adressant aux Centres de Transfusion ou de M6decine Pr6ventive, il est relativement facile d'avoir un 6chantillormage d'une population adulte. L'6tablissement de valeurs de r6f6rence chez les enfants, surtout chez les jeunes enfants, cst beaucoup plus difficile
Ce dosage permet, en particulier, un suivi r6gulier des patients atteints de mucoviscidose, pathologie responsable d'une carence en r6tinol et alpha-tocoph6rol.
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RI~SUMI~S D E S C O M M U N I C A T I O N S
Statuts biologiques en r~tinol et en b6ta-carot~ne. Variations en fonction du sexe, de I'&ge, et de i'alimentation (enquC~te Val-de-Marne)
Determination of B6 vitamins in children serum by paired-ions HPLC with post-column fluorescent derivatization Depasse F, Moussa F, Libes C, Aymard P.
Potier de Courcy G, Preziosi P, Christid~s J-P, Hercberg S.
Laboratoire de Biochimie, H6pital Armand Trousseau 26, avenue du Dr Arnold Netter - 75571 Paris Cedex 12
n~though vitamin B6 is a well known important nutrition compont, very few informations concerning its levels in serum are available. Furthermore, to our knowledge, only adult status was assessed. On the other hand, a lot of studies used microbiological assay, which does not measure all metabolites. In order to determine pediatric reference values for B6 vitaminers in serum, we developped a paired-ions HPLC method with fluorescent post-column derivatization adapted from Sampson et al. and Coburn et aL Briefly, after proteins and lipids extraction, 0,1 ml of serum spiked with 4-deoxypyridoxine (dPN) used as an internal standard are separated on a C18 column and ehited with a binary linear gradient. Post-column derivatization is performed to enhance fluorescence. Seven components are separated: PyridoxalPhosphate (PLP), 4-Pyridoxic Acid (4PA), Pyridoxamine-Phosphate (PMP), Pyridoxal (PL), Pyridoxine (PN), dPN, and Pyridoxamine (PM). Reference values were determined in 12 outpatients' clinic children without renal, liver, neurological or haematological impairment aged 1 to 17 years (reed : 8,9 years). These values (n = 12) : PLP : 106 +_48 umol/l, 4PA : 56 _+29 nmol/1, PMP : 11 + 7 nmol/1, PL : 74 _+22 nmol/1, PN : 87 + 36 nmol/1 and PM : 77 :t: 55 umol/1 agree with those of literature (Sampson et al., Driskell et al.). This work is now to be completed with data relative to age and sex classes.
CNAM/ISTA, 2, rue Conte, 75141 Paris
Son r61e possible dans la prrvention du cancer conf~re au I%carotrne un intrr~t sprcifique par rapport ~t sa valeur de prrcurseur de la vitamine A. L'rvaluation, sur une population reprrsentative d'on drpartement de la r6gion parisienne (n = 493 H ; 584 F), du statut en rrtinol et en [~-carotrne (valeurs srriques et apport alimentaire) montre que les niveaux moyens de rrtinol srrique (mrdiane) sont toujours infrrieurs chez les femmes/t l'~ge adulte : 25 % de ~ valeurs bassses >> vs 1 % chez les hommes entre 25 et 50 ans (reals anctme valeur dans la zone de carence), alors que les apports en rrtinol sont faibles en moyenne mais peu diffdrents selon l'gge et le sexe. Par centre, le statut biologique, de m~me que les apports en densit6 nutritioonelle, du J3-cardtrne sont dans l'ensemble supdrieurs clans le sexe frminin. Ces dormres, ainsi que les corrrlations obtenues avec l'alimentation et avec d'autres facteurs, tels que la consommation d'alcool et de tabac ou la contraception orale, eonfirment que le statut en rrtinol peut Ctre sous drpendance hormonale alors que la valeur du 13-carotrne srrique pourrait traduire une diffrrence de comportement, notamment alimentaire. Ces rrsultats soulignent l'intrrSt d'individualiser, dans les 6tudes de population, le statut en J3-carotrne du statut en rrtinol.
Aspects actuels de la carence vitaminique D en Meurthe-et-Moselle (MM)
Microm~thode de dosage de la phylloquinone (VK1) dans le lait maternel et les aliments lactds didtdtiques (ALD)
Vidailhet M, Claudon R, Kaiffer M, Burlet C.
Moussa F 1, Girardet j.p2, Tounian p2, Lompret V t, Fontaine J-L 2, Aymard p1.
P6diatrie 3, H0pital d'Enfants - 54511 Nancy, France
L'&ude rrtrospective a concern6 les enfants (0 & 15 ans) hospitalisrs dans 2 hrpitaux, l'un du Sud (Nancy), l'autre du Nord (MontSaint-Martin) du drpartement MM sur 5 ans (1986-90). Deux des critrres suivants sont exigrs : mauvaise prophylaxie, clinique ou radiologie typiques, hypocaleiurie, augmentation des phosphatases alcalines, 25 (OH) D srrique infrrieure ~t 6 ng/mL. 91 cas ont 6t6 relevrs dent 40 ~tNancy. Rapportre au hombre d'enfants hospitalisrs, la frrquence est de 0,38 % ~ Nancy, voisine de celle observre dans d'autres CHU frangais (Lyon, Rouen). Si cette prrvalence hospitali~re est beaucoup plus faible que celle des ann6es 50 (15 50 %), elle est tr~s excessive par rapport ~t celle d'autres pays industrialisrs comme les USA. Elle est meme 10 fois plus forte Mont-Saint-Martin, o/1 elle concerne 3,8 % des hospitalis6s (crise 6conomique, fort pourcentage d'immigrrs). Certaines donnres classiques sont retrouvres : prrpondrranee chez le gargon (71%), les immigrrs ( 4 1 % ) , surtout maghrrbins (33 %), prrdominance hivemale et printanirre (60 %), croissance le plus souvent normale (rachitisme floride). Certaines donnres sont plus originales : prrcocit6 des manifestations cliniques (50 % avant 8 mois ; fr6quence maximale entre 3 et 5 mois). Une hypocalcrmie est frrquente (46 %), surtout h Nancy (73 %) off elle est ~t l'erigine du diagnostic 1 fois sur 3. Cette frrquence excessive du rachitisme, la prrcocit6 des formes actuellement observ6es, la gravit6 possible de l'hypocale6mie soulignent l'int6r~t d'une prophylaxie drbutre durant la grossesse pour un meilleur statut vitaminiqne D drs la naissance et de l'adoption d'une prophylaxie diffrrente, basre sur one supplrmentation des laits et laitages comme au Canada et anx USA.
~ Laboratoire de Biochimie, 2Service de Gastroent~rologie et Nutrition P~diatriques H6pital A. Trousseau, 26, avenue du Dr. A-Netter, 75012 Paris
La d6termination de la pbylloquinone dans le lait maternel et les ALD est nrcessaire ~t l'rtude des besoins en cette vitamine chez le nouveau-nr. Aussi, de nombreuses mrthodes de dosage de la VK1 dans les laits d'origine humaine ou animale ont 6t6 publires. Cependant, ces mrthodes sont longues et fastidieuses car elles nrcessitent, toutes sans exception, deux 6tapes chromatographiques, au moins. En eutre, les rrsultats publids, ne sont pas concordants. Ces difficult6s sont lires/t la faible teneur en VK1 des produits analysrs, d'une part, et/t leur riehesse en lipides, d'autre part. Nous proposons une technique de dosage de la VK1 darts les laits et les ALD, par CLHP en une seule 6tape~ Hautement sensible (limite de drtection : 10 pg de VK1 par injection, pour tm rapport signal/bruit de fond 6gal/t 3), la micromrthode preposre ne nrcessite qu'on faible volume de prise d'essai (20/~ 50 Ixl), ce qui rrduit la quantit6 de lipides ~t traiter et, par cons6quent, simplifie les 6tapes d'extraction et de purification. Les rrsultats obtenus g l'aide de cette micromrthode sent de 0,40 & 5,50 ng/mL de VK1 (reed. = 1,45 ng/mL, n = 34) pour les laits maternels, de 2,50 /~ 8,20 ng/mL (n = 6) pour les laits frais du commerce et de 6,80 ~t 13,00 ng/mL (n = 8) pour les ALD non supplrmentrs en cette vitamine. Ces rrsultats sent comparables ceux rapportrs par Haroon et coll., qui utilisent dans leur mrthode trois 6tapes chromatographiques pour one prise d'essai de 5 20 ml de lair. 120
VITAMINES ET BIOFACTEURS
Statut nutritionnel en folates : r(~sultats d'~tudes faites sur la population fran(~aise
complexes pauvres en riboflavine, un d6ficit nutritionnel en vitamine B2 pourrait expliquer cette acidurie 6thymalonique et adipique retrouv6e chez 24 % des enfants inclus dans cette 6tude.
Potier de Courcy G, Christides J-P.
Evaluation de I'dtat nutritionnel vitaminique en Bourgogne
ISTA : CNAM, 2, rue Cont& F-75141 Paris
La valeur des folates &ythrocytaires reste le meilleur indicateur du statut en folates d'une population. Une valeur inf6rieure 100 ng/ml traduit une situation ~ haut risque de d6ficience alors qu'au-del~t de 200 ng/ml, la zone optimale est atteinte. Entre 100 et 150 ng/ml, le risque existe mais est consid6r6e comme mod6r6. Plusieurs 6tudes portant sur des populations vivant en France, dont certaines repr6sentatives, nous permettent, grace a la mesure du statut en folates de disposer d6jh d'uue 6valuation des groupes ~t risque, d'autant plus que nous obtenons un bon degr6 de corr61ation entre les valeurs biologiques et l'apport alimentaire. Pour une population franqaise moyenne repr6sentative (enqu~te Val-de-Marne), les valeurs m6dianes des folates s6riques sont de 5,2 ng/ml pour les deux sexes et celles des folates &ythrocytaires de 177 ng/ml (n = 328) pour les femmes de 18 & 50 ans et de 194 ng/ml pour les hommes du m~me age. Les groupes &risque de d6ficience semblent 8tre en France : - le jeune enfant au sortir de l'alimentation lact6e, - les adolescentes et les femmes jeunes, dont plus d'un quart sont d6ficience latente ; estimation confirm6e sur cette population par le niveau d'apport alimentaire en folates, - les femmes enceintes, dont la baisse syst6matique du statut en folates au cours de la grossesse, quelle que soit la situation socio6conomique, se traduit par une augmentation moyenne de la pr6valence des risques de d6ficience &l'accouchement en post partum, la personne ag6e institutionnalis6e.
Costa de Carvahlo M-J, Guilland J-C, Fuchs F, Moreau D, Boggio V. Laboratoire de Physiologie, Faculte de M~decine, 21033 Dijon Cedex
Un 6chantillon de 335 sujets (155 hommes d'age moyen = 42,6 + 10,7 ans et 180 femmes d'glge moyen = 43,3 _+ 10,9 ans) a 6t6 recrut6 parmi des consultants du Centre d'Examens de Sant6 de Dijon (r6gion Bourgogne). L'apport vitaminique B1, B2, B6, C, A et E de la ration a 6t6 6valu6 par la m6thode du < qui consiste ~t noter, au fur et ~ mesure et jour aprbs jour, pendant 7 jours, la nature et la quantit6 d'aliments consomm6s. L'6valuation du statut vitaminique biochimique a 6t6 fond6e sur la d6termination de 2 types de param~tres : le taux de vitamines circulantes (B1, B6, C, A, E, B12 et folates) et les coefficients d'activation aETK (B1), aEGR (B2), ~tEGOT (B6). Les risques de d6ficience d'apport vitaminique ont 6t6 6valu6s par r6f6rence aux apports conseill6s pour la France en utilisant l'approche statistique de Anderson et Beaton. Le pourcentage de sujets dont les apports 6talent inf6fieurs & leurs propres besoins 6tait, respectivement chez les hommes et chez les femmes, de : 43 % et 49 % pour B1, 25 % et 24 % pour B2, 74 % et 85 % pour B6, 26 % et 30 % pour C, 17 % et 8 % pour A e t 48 % et 64 % pour E. Les risques ~levks oufaibles (entre parentheses) de d6ficience biochimique 6valu6s en fonction des valeurs seuils-limites ont 6t6, respectivement pour les hommes et les femmes, 6gaux ~t : 0,7 % (19,4 %) et 2,2 % (26,7 %) (ctETK) et 7,8 % (12,9 %) et 7,2 % (26,7 %) (TPP 6rythrocytaire) pour B1 ; 1,0 % (18,7 %) et 1,1% (23,3 %) (etEGR) pour B2 ; 30,7 % et 34,1% (aEGOT) et 20 % et 21,2 % (PLP plasmatique) pour B6 ; 0 % (3,2 %) et 2,8 % (7,8 %) pour A , 1,3 % et 0,6 % pour E ; 0 % (20 %) et 0 % (7,8 %) pour C ; 0 % et 0 % pour B~2 et folates. Les r6sultats obtenus met-tent en 6vidence que : 1. La fr6quence de risque de d6ficience vitaminique est toujours plus 61ev6e si on se r6f~re aux apports vitaminiques, ceci pose le probl6me de la validit6 des enqu&es alimentaires visant &mesurer les apports vitaminiques. 2. La fr6quence de risque 61ev6 de d6ficience vitaminique biochimique est faible (saul pour la B6), alors que la fr6quence de risque faible de d6ficience vitaminique est importante. Une telle constatation fait craindre, si l'on consid~re qu'il s'agit d'un module de consommation occidental, propre aux pays riches, << industrialis6s >>, une potentialit6, ~ plus ou moins long terme, de risque confirm6 de d6ficience vitaminique biochimique.
Acidurie dthylmalonique et adipique dans la malnutrition marastique Feillet F, Tang J, Lefebvre E, Vidailhet M. Service de P6diatrie III, Laboratoire de recherche nutritionnelle en p6diatrie, Nancy
Nous avons ~tudi6 les acides organiques urinaires dans une populaiton de 38 enfants mauritaniens malnutris (35 marasmes et 3 kwashiorkors marastiques). Parall61ement ont 6t6 6tudi6s des param~'tres nutritionncls, anthropom6triques (indice de Quetelet et rapport PB/PC) et biologiques (albumine (ALB) et transthyr6tine (TTR)) et inflammatoires (C r6active prot6ine et orosomuco'ide). Nous avons mis en 6vidence chez 9 enfants (24 %) une acidurie &hylmalonique (AEM), adipique (AAD) et sub6rique ; AEM : 35 + 9 mmol/mol cr6at (norme : 12 + 6), adipique 57 + 27 mmol/mol cr6at (norme : 6 + 4), sub6rique 58 + 33 mmol/mol cr6at (norme : 15 + 6). I1 s'y associe une excr6tion excessive d'autre acides dicarboxyliques ; nous avons retrouv6 du d6hydrosub&ique dans 4 cas, du glutarique dans 2 cas et de l'azela'ique dans un cas. I1 y a une corr61ation positive entre les prot6ines nutritionnelles et I'AAD (ALB : p = 0,008 et TTR : p = 0,01). La m~me tendance est retrouv6e pour I ' A E M et l'acide sub6rique mais de f a ; o n non significafive. Ces anomalies des acides organiques semblent objectiver un dysfonctionnement des Acyl CoA d6shydrog6nases. La pr6sence de ces anomalies chez 25 % d'une population marastique et la bonne 6volution de ces enfants apr~s renutrition (comprenant tree vitaminoth6rapie) perrnet d'exclure une enzymopathie cong6nitale. La vitamine B; &ant le principal cofacteur de ces d6shydrog6nases et le r6gime de ces enfants, principalement & base de sucres
Evaluation de I'~tat nutritionnel vitaminique B1, B2, B6, C, A et E de personnes &g~es en service de long s~jour. Effets d'une supplementation vitaminique sur le statut vitaminique biochimique Asciutti-Moura LS 1, Guilland JC 1, Fuchs F l, Richard D 2. 1 Laboratoire de Physiologie, Facult6 de M~decine, 21033 Di on Cedex. 2 Serv ce de Long Se our, Centre G6riatrique de Champmaillot, Dijon.
L'6tat nutritionnel vitaminique B1, B2, B6, C, A, et E a 6t6 6tudi6 chez 84 sujets ag6s (31 hommes d'age moyen = 77,2 + 9,6 ans et
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VITAMINES ET BIOFACTEURS
Statut nutritionnel en folates : r(~sultats d'~tudes faites sur la population fran(~aise
complexes pauvres en riboflavine, un d6ficit nutritionnel en vitamine B2 pourrait expliquer cette acidurie 6thymalonique et adipique retrouv6e chez 24 % des enfants inclus dans cette 6tude.
Potier de Courcy G, Christides J-P.
Evaluation de I'dtat nutritionnel vitaminique en Bourgogne
ISTA : CNAM, 2, rue Cont& F-75141 Paris
La valeur des folates &ythrocytaires reste le meilleur indicateur du statut en folates d'une population. Une valeur inf6rieure 100 ng/ml traduit une situation ~ haut risque de d6ficience alors qu'au-del~t de 200 ng/ml, la zone optimale est atteinte. Entre 100 et 150 ng/ml, le risque existe mais est consid6r6e comme mod6r6. Plusieurs 6tudes portant sur des populations vivant en France, dont certaines repr6sentatives, nous permettent, grace a la mesure du statut en folates de disposer d6jh d'uue 6valuation des groupes ~t risque, d'autant plus que nous obtenons un bon degr6 de corr61ation entre les valeurs biologiques et l'apport alimentaire. Pour une population franqaise moyenne repr6sentative (enqu~te Val-de-Marne), les valeurs m6dianes des folates s6riques sont de 5,2 ng/ml pour les deux sexes et celles des folates &ythrocytaires de 177 ng/ml (n = 328) pour les femmes de 18 & 50 ans et de 194 ng/ml pour les hommes du m~me age. Les groupes &risque de d6ficience semblent 8tre en France : - le jeune enfant au sortir de l'alimentation lact6e, - les adolescentes et les femmes jeunes, dont plus d'un quart sont d6ficience latente ; estimation confirm6e sur cette population par le niveau d'apport alimentaire en folates, - les femmes enceintes, dont la baisse syst6matique du statut en folates au cours de la grossesse, quelle que soit la situation socio6conomique, se traduit par une augmentation moyenne de la pr6valence des risques de d6ficience &l'accouchement en post partum, la personne ag6e institutionnalis6e.
Costa de Carvahlo M-J, Guilland J-C, Fuchs F, Moreau D, Boggio V. Laboratoire de Physiologie, Faculte de M~decine, 21033 Dijon Cedex
Un 6chantillon de 335 sujets (155 hommes d'age moyen = 42,6 + 10,7 ans et 180 femmes d'glge moyen = 43,3 _+ 10,9 ans) a 6t6 recrut6 parmi des consultants du Centre d'Examens de Sant6 de Dijon (r6gion Bourgogne). L'apport vitaminique B1, B2, B6, C, A et E de la ration a 6t6 6valu6 par la m6thode du < qui consiste ~t noter, au fur et ~ mesure et jour aprbs jour, pendant 7 jours, la nature et la quantit6 d'aliments consomm6s. L'6valuation du statut vitaminique biochimique a 6t6 fond6e sur la d6termination de 2 types de param~tres : le taux de vitamines circulantes (B1, B6, C, A, E, B12 et folates) et les coefficients d'activation aETK (B1), aEGR (B2), ~tEGOT (B6). Les risques de d6ficience d'apport vitaminique ont 6t6 6valu6s par r6f6rence aux apports conseill6s pour la France en utilisant l'approche statistique de Anderson et Beaton. Le pourcentage de sujets dont les apports 6talent inf6fieurs & leurs propres besoins 6tait, respectivement chez les hommes et chez les femmes, de : 43 % et 49 % pour B1, 25 % et 24 % pour B2, 74 % et 85 % pour B6, 26 % et 30 % pour C, 17 % et 8 % pour A e t 48 % et 64 % pour E. Les risques ~levks oufaibles (entre parentheses) de d6ficience biochimique 6valu6s en fonction des valeurs seuils-limites ont 6t6, respectivement pour les hommes et les femmes, 6gaux ~t : 0,7 % (19,4 %) et 2,2 % (26,7 %) (ctETK) et 7,8 % (12,9 %) et 7,2 % (26,7 %) (TPP 6rythrocytaire) pour B1 ; 1,0 % (18,7 %) et 1,1% (23,3 %) (etEGR) pour B2 ; 30,7 % et 34,1% (aEGOT) et 20 % et 21,2 % (PLP plasmatique) pour B6 ; 0 % (3,2 %) et 2,8 % (7,8 %) pour A , 1,3 % et 0,6 % pour E ; 0 % (20 %) et 0 % (7,8 %) pour C ; 0 % et 0 % pour B~2 et folates. Les r6sultats obtenus met-tent en 6vidence que : 1. La fr6quence de risque de d6ficience vitaminique est toujours plus 61ev6e si on se r6f~re aux apports vitaminiques, ceci pose le probl6me de la validit6 des enqu&es alimentaires visant &mesurer les apports vitaminiques. 2. La fr6quence de risque 61ev6 de d6ficience vitaminique biochimique est faible (saul pour la B6), alors que la fr6quence de risque faible de d6ficience vitaminique est importante. Une telle constatation fait craindre, si l'on consid~re qu'il s'agit d'un module de consommation occidental, propre aux pays riches, << industrialis6s >>, une potentialit6, ~ plus ou moins long terme, de risque confirm6 de d6ficience vitaminique biochimique.
Acidurie dthylmalonique et adipique dans la malnutrition marastique Feillet F, Tang J, Lefebvre E, Vidailhet M. Service de P6diatrie III, Laboratoire de recherche nutritionnelle en p6diatrie, Nancy
Nous avons ~tudi6 les acides organiques urinaires dans une populaiton de 38 enfants mauritaniens malnutris (35 marasmes et 3 kwashiorkors marastiques). Parall61ement ont 6t6 6tudi6s des param~'tres nutritionncls, anthropom6triques (indice de Quetelet et rapport PB/PC) et biologiques (albumine (ALB) et transthyr6tine (TTR)) et inflammatoires (C r6active prot6ine et orosomuco'ide). Nous avons mis en 6vidence chez 9 enfants (24 %) une acidurie &hylmalonique (AEM), adipique (AAD) et sub6rique ; AEM : 35 + 9 mmol/mol cr6at (norme : 12 + 6), adipique 57 + 27 mmol/mol cr6at (norme : 6 + 4), sub6rique 58 + 33 mmol/mol cr6at (norme : 15 + 6). I1 s'y associe une excr6tion excessive d'autre acides dicarboxyliques ; nous avons retrouv6 du d6hydrosub&ique dans 4 cas, du glutarique dans 2 cas et de l'azela'ique dans un cas. I1 y a une corr61ation positive entre les prot6ines nutritionnelles et I'AAD (ALB : p = 0,008 et TTR : p = 0,01). La m~me tendance est retrouv6e pour I ' A E M et l'acide sub6rique mais de f a ; o n non significafive. Ces anomalies des acides organiques semblent objectiver un dysfonctionnement des Acyl CoA d6shydrog6nases. La pr6sence de ces anomalies chez 25 % d'une population marastique et la bonne 6volution de ces enfants apr~s renutrition (comprenant tree vitaminoth6rapie) perrnet d'exclure une enzymopathie cong6nitale. La vitamine B; &ant le principal cofacteur de ces d6shydrog6nases et le r6gime de ces enfants, principalement & base de sucres
Evaluation de I'~tat nutritionnel vitaminique B1, B2, B6, C, A et E de personnes &g~es en service de long s~jour. Effets d'une supplementation vitaminique sur le statut vitaminique biochimique Asciutti-Moura LS 1, Guilland JC 1, Fuchs F l, Richard D 2. 1 Laboratoire de Physiologie, Facult6 de M~decine, 21033 Di on Cedex. 2 Serv ce de Long Se our, Centre G6riatrique de Champmaillot, Dijon.
L'6tat nutritionnel vitaminique B1, B2, B6, C, A, et E a 6t6 6tudi6 chez 84 sujets ag6s (31 hommes d'age moyen = 77,2 + 9,6 ans et
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R~SUMES DES COMMUNICATIONS
Multivitamin mineral supplementation in the elderly. Effects on vitamin blood levels
53 femmes d'fige moyen = 84,2 + 7,9 alas) vivant en institution. L'apport alimentaire en macronutriments et en vitamines a 6t6 6valu6 par une mtthede d'enqutte alimentaire de type prospectif pendant 5 jours constcutifs. L'apport en vitamine C a 6t6 d6termin6 l'aide de tables de composition des aliments et par dosage direct de cette vitamine dans tousles aliments consommts.
Herbeth B 1-2, Lemoine A 3, Chavanee M 4, Potier-de-Courcy G 5, Zittoun j6. 1 Centre de M6decine Pr6ventive, 2, avenue du Doyen Jacques Parisot, 54501 Vandoeuvre-Les-Nancy, France. 2 INSERM U 115, Faculte de Medecine, 54500 Vandoeuvre-Les-Nancy. 3 Centre Hospitalier de Nevers, 1, avenue Colbert, 58020 Nevers, France. 4 INSERM U169, 16, avenue PauI-Vaillant Couturier, 94807 Villejuif. s ISTNA, 2, rue Cont6, 75003 Paris, France. 6 H6pital H. Mondor, Laboratoire d'Hematologie, 94000 Creteil, France,
L'tvaluation du statut vitaminique biochimique a 6t6 fondte sur l'estimation de la concentration des vitamines circulantes (pour B1, C, A e t E), sur la dttermination d'activitts enzymafiques dtpendant de la vitamine envisagte (etETK pour BI, etEGR pour 132, c~EGOT pour B6). Pour la B1, on s'est 6galement rtftr6 A la pyruvictmie et it Findice du Mttabolisme des Carbohydrates ou <~CMI )> 2 heures apr~s une surcharge en glucose et pour la vitamine A au RDR test.
Despite the many questions being raised about multivitamin use in the elderly, it has not been well proven that consuming an oral multivitamin alters vitamin blood levels in the aged. To address this question, we conducted a randomized, double-blind trial of daily multivitamin-mineral supplementation in 203 non institutionalized ambulatory elderly persons (over 60 years of age). Blood vitamin levels were measured at baseline, and at two and four months of supplementation in both placebo and treated groups : plasma alpha-tocopherol, retinol, ascorbic acid and vitamin BI2, plasma and erythrocyte, folate basal activities and in vitro coenzyme stimulation index of vitamin B-dependent enzymes in erythrocyte, respectively transketolase (ETK) for B1, glutatbionreductase (EGR) for 132 and glutamate oxaloacetate aminotransferase (EGOT) for B6. At baseline the placebo and treated groups were similar with respect to age, sex, weight, smoking and medical history, drug use, daily vitamin intake and blood vitamin levels. The change from baseline to two months was significantly greater in the supplemented group for plasma alpha-tocopherol, ascorbic acid, vitamin B12, plasma and erythrocyte folate, erythrocyte basal activity of ETK, EGR and EGOT and coefficient activation of the three above enzymes. This was also true at four months, except for plasma ascorbic acid. The difference between placebo and vitamin groups was not statistically significant for vitamin A. Great storage pool of retinol could explain this discrepancy. Multivitamin supplementation may be of value for providing better vitamins E, C, B1, B2, B6, B12 and folates status.
Au plan des apports vitaminiques, les valeurs inftrieures ~t 50 % des apports conseillts (AC) pour la population fran~aise, exprirotes en % de la population 6tudite, reprtsentent respectivement chez les hommes et les femmes, 84 % et 89 % pour C (en tenant compte des valeurs obtenues par dosage), 68 % et 64 % pour B6, 29 % et 23 % pour B1, 42 % et 42 % pour E. Les pourcentages de risque 61ev6 de carence biologique sont, par ordre dtcroissant, respectivement pour les hommes et les femmes : 50 % et 58 % pour B6 (c~EGOT > 1,80), 42,9 % et 30,4 % pour A (RDR test > 14 %), 29 % et 1 5 , 1 % pour C (ascorbtmie < 0,20 mg/100 ml), 29 % et 15,1% pour BI (oc ETK > 1,20). La suppltmentation vitaminique it dose supraphysiologique (2 g 5 lois les AC) pendant un mois a corrig6 partiellement (C, B1) ou totalement (132, B6, E) les dtviations des paramttres du statut vitaminique biochimique. Ces effets favorables de la suppltmentation permettent d'entrevoir une dtmarche prtventive et curative de la malnutrition vitaminique et de ses constquences fonctionnelles darts cette trancbe de la population figte.
Plasma retinol and alpha-tocopherol levels in alcoholics before and after a withdrawal cure
R61e de la suppl6mentation en vitamine A et E dans la fibrog6n6se hdpatique d'un sujet atteint d'hypobdtalipoprotdin6mie familiale (HBLF)
Leeomte E 1, Herbeth B 1-2, Artur y1, Pirollet P.3, Paille F 3. 1Centre de Medecine Preventive, 2 avenue du Doyen Jacques Parisot, 54501 Vandoeuvre-les-Nancy, Cedex 1, France. 21NSERM U.115, 54500 Vandoeuvre-les-Nancy, France. aCentre d'Alcoologie, CHR, 54000 Nancy, France.
Gay G*, Roche JF*, Seoazec JY**, Bouma ME**, Feldman G**. * Service de M6decine Interne, H6pital St-Nicolas, Verdun, France. Laboratoire de Biologie cellulaire, INSERM U237, Facult6 de M6decine Xavier Bichat, Paris.
Despite an abundant literature about nutritional status of alcoholic patients, little is known about the effects of a withdrawal cure on the plasma levels of retinol and alpha-tocopheroL This study was conducted in 120 male alcoholics without evidence of severe liver disease, before and 21 says after admission in an alcoholism treatment unit, and in 658 healthy control men of the same age (25-60 years).
L'hypobttalipoprottintmie (HBL) est une anomalie congtnitale du transport et du mttabolisme des lipides secondaire it une mutation ou une dtl&ion du gtne de l'apoprot'eine B. Dans la forme homozygote, le tableau clinique complet associe un syndrome de malabsorption, un dtficit strique total en apolipoprottine B (apo B) et en LDL, des troubles neurologiques de dtmytlinisation attributs it l'absence de vitamines liposolubles. Des observations de fibrose et de cirrhose htpatique ont 6t6 rapport6es et le r61e toxique des triglyctrides It cha~me moyenne (TCM) suspectt. Nous rapportons l'observation d'une jeune femme de 21 ans, prtsentant une HBL homozygote qui dtveloppe une fibrose htpatique alors que les TCM ont 6t6 adrninistrts sur une courte durte inftrieure it un tools, tandis qu'une suppltmentation au long cours est institute en vitamine A (15000 UI/j) et vitamine E (alpha-tocopherol 1,5 g/l). La biopsie htpatique initiale montrait une sttatose htpatique, deux ans plus tard apparaissait une fibrose htpatique avec 616vation des taux tissulaires de vitamine A (ll00 ~tg/g) et E, alors que les tanx striques restaient effondrts (vitamine A : 700 mg/1 - vitamine E : l mg/1). Le rble toxique de la suppltmentation en vitamine A dolt 6tre envisag6 et faire proposer la surveillance rtgulitre des tests htpatiques, 6ventuellement complttts par un contr61e histologique.
Plasma retinol and t~-tocopherol were determined by a HPLC method, Before abstinence, ~t-tocopherol concentrations were lower in the alcoholics than in the control (p <_0.001), whereas retinol levels were similar in the two groups. After the 21 days abstinence period retinol levels decreased among alcoholics (p < 0.001) and were lower than control values (p >_0.001). No change of plasma ct-tocopherol was noticed, concentrations remaining under the control values. Moreover, after the abstinence period, plasma lipids, which are associated in fat soluble vitamin transportation, were significantly altered : triglyceride and apolipoprotein B concentration increased whereas apolipoprotein A decreased. After adjustement for plasma lipid levels, the drop of retinol concentration after the withdrawal cure remained significant (p < 0.05). this could indicate the resumption of vitamin A hepatic storage after the depression due to the previous alcoholisation period.
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RI SUM[ S DES COMMUNICATIONS
Vitamines et biofacteurs Symposium Satellite du Colloque international de Pont-~-Mousson <
Nancy, 18-19 septembre 1992
Influence of vitamins and biofactors on cadmium bioavailability.
the best known proteins of this class. All these proteins share a commun tridimensional structural pattem: eight stranded antiparallel f3-sheets bordered on one side by an a-helix constituting a hydrophobic pocket. Despite abundant data, the biological role of ~3-1actoglobulin, which is found in the milk of several mammalian species, is not well understood. Said et al. [7] reported the presence of a receptor for 13-1actoglobulin-like proteins at the brush border membrane of the enterocytes. There is also evidence of substantial intestinal passage, in humans, of this resistant to acid proteolysis protein [8]. These observations indicate that 13-1actoglobulin may cross different membranery interfaces. It is known that, in vitro, 13-1actoglobulin binds tightly one retinol molecule per monomer [9]. According to recent observations this stoichiometry may be doubled when the f3-1actoglobulin is in "molten globule state" which may be induced to some extent by the medium polarity changes [10].
Rambeck WA, Kapl D, Weiser H* Institute of Animal Physiology, Veterinary Faculty, University Munich and *Hoffmann-La Roche Ltd, Department VRD/F, Basel.
The major route of human cadmium exposure is through food. The concentration of this toxic heavy metal in the soil cannot be reduced significantly within a short period of time. However, it is a promising possibility to lower the cadmium accumulation in the human food chain by vitamins and biofactors which are added to the diet of meat supplying animals. In order to lower the cadmium burden, we studied the influence of different dietary components in chicken, quails and partially in pigs. While the effect of vitamin B6, vitamin E and manganese was small or nonexistant, the addition of dietary calcium, zinc, iron, selenium, vitamin D and especially vitamin C reduced the cadmium burden in liver, kidney and in other organs. A dramatic increase of the pollutant was observed when the diet was supplemented with copper. This is of special interest in commercial pig fattening where copper is added to improve feed conversion. Addition of 1000 ppm of vitamin C, however reduces Cd-retention in the organs and in muscle to normal. In general, we observed in all animal species that combining various dietary factors may lower in cadmium accumulation by a factor of 20. These results indicate the tremendous effect of vitamins on cadmium content in meat.
A number of biological processes, including vision, require vitamin A. Animals cannot synthesize carotenoids, but can convert them into vitamin A, in the intestinal mucosa [11]. In addition, carotenoids and retinoids might exert significant anti-neoplasmic action [12]. Retinoic acid is derived from retinol. It has been demonstrated during the past three years that retinoic acid is, between others, one of the key morphogen molecules in the developing embryos [13], responsible for orientation of posterior/anterior limb division axis. Retinoic acid and its derivatives are effective in several dermatological and cosmetic treatments. Retinoids and 13-carotene are quite susceptible to oxidation and to isomerization induced by air, oxygen, heat and light. These hydrophobic molecules might be sheltered against oxidation reactions in complexes with proteins. The dairy industry produces large amounts of [3-1actoglobulin which could be engineered in order to bind and protect a wide range of lipophilic molecules.
Binding of retinoids and 13-carotene to 13-1actoglobulin.
Studied retinoids share common structural pattern of cyclohexenyl ring with an isoprenoid chain. They differ only by the isoprenoid chain end: alcohol function in retinol, esterified by acetate in retinyl acetate and a carboxylic group in retinoic acid. Retinol and retinoic acid bind to native BLG with practically the same affinities. Apparently, the end groups of these two ligands are not essential in their binding by BLG. In fact, as it has been shown before [14, 15], non polar interactions and most likely the structural constraints imposed by the conjugation of the cyclohexenyl ring double bond with the vicinal C=C double bond system of the isoprenoid chain are essential for the retinoid recognition by BLG and a complex
Dufour E, Haerfl6 T Institut National de la Recherche Agronomique, B.P. 527, 44026 Nantes Cedex 03.
Recent progress in structural studies of small globular proteins, named lipocalins, interacting with hydrophobic ligands suggest that these proteins can be classified in the "superfamily" of hydrophobic molecule transporters [1]. Retinol binding protein [2], bilin binding protein [3], insecticyanin [4] and 13-1actoglobulin [5, 6] are 115
RI~SUMI~SDES COMMUNICATIONS formation. It was demonstrated that BLG binds [3-ionone with slightly.weaker affinity (K'a = 6 x 10 7 M), but in applied conditions it does not bing c~-ionone at all [15]. Cogan e t al [14] found that human retinol binding protein binds retinoids with similar affinities: K'd = 1.9 × 10-7 M for retinol, K'd = 2.1 × 10-7 M for retinoic acid and K'd = 2.2 × 10-7M for retinyl acetate. In applied conditions, retinoic acid and retinol bind to BLG with even higher affinities than to human retinol binding protein. Retinyl acetate displays approximatively the same binding affinity to BLG as to retinol binding protein. It is known that alcohol dehydrogenase can rapidly oxidate the retinol molecule when it is bound to BLG, but not when it is bound to refinol binding protein [9]. This fact suggests that in the former case, the retinol tail is protruding outside, since it is sensitive to dehydrogenase action [16]. The terminus of retinyl acetate isoprenoid tail is bulkier and more hydrophobic. All these ligands, except [3-carotene interact with BLG at ratio 1/1. At the first sight observed [3-carotene/BLG ratio of 1/2 is surprising. The solvent exposure of a part of retinol isoprenoid chain, when bound BLG [9], could explain the 1/2 stoicbSometry of [3-carotene/BLG complex. This tetraterpen has two [3-ionone cycles, joined by an isoprenoid chain, which may interact distally with two BLG molecules. The chemical modifications of BLG don't increase significantly the affinity of the derivatives for B-carotene. But they induce a twofold decrease of the ligand/protein ratio, reaching 1/1 stoichiometry for [3-carotene/MetBLG and [3-carotene/N-ethyllysyl BLG complexes. At least three phenomena could be at the origin of these changes: (i) the surface hydrophobicity increase might boost the binding of J3-earotene to modified BLG, (ii) esterification or alkylation of BLG amino acid sidechains, as well as the induced secondary structure changes, could prevent the binding of one [3-carotene molecule with two BLG molecules and (iii) the second [3-ionone ring of [3-carotene might bind to the same modified BLG molecule.
Assimilation of cobalamins Gu~ant JL. Laboratoire de Bioehimie Nutritionnelle, INSERM U 308, Facult6 de M6decine, 54500 Vandceuvre-I~s-Nancy Cedex.
Cobalamin (Cbl, vitamin B12) contained in dietary samples is not in a free state. It is combined with extracellular carriers of, intracellular proteins. Gastric chyme activity and pepsin help to free cobalamin from its food protein medium. Cbl released in gastric chyme is in the presence of two carrier proteins, haptocorrin and intrinsic factor (IF). Haptocorrin accounts for 10-40 % of vitamin B12 binding capacity in the gastric juice and its affinity for Cbl at pH 2 is 50 times greater than that of IF. Allen e t a l were the first to show that haptocorrin was broken down in vitro in the presence of bovine proteases. These results were then confirmed with duodenal liquid and pancreatic juice. IF remains intact in the presence of proteases in vitro and in vivo. The different behavior of haptocorrin and IF in the presence of proteases may be explained by the role of the carbohydrate core in protecting both glycoproteins. Degradation by exoglycosidases causes a loss in the vitamin B12 binding capacity of saturated IF and haptocorrin. It is therefore justifiable to assume that the carbohydrate core has at least an indirect effect in the vitamin binding site, for both IF and haptocorrin. Bile excretion of Cbl has been demonstrated after parenteral injection of labeled Cbl. The enterohepatie cycle has been demonstrated in animals, especially hog rats, baboons and rabbits. Bile cobalamin is excreted as bound to haptocorrin. Several arguments appear to confirm the existence of an enterohepatic cycle of vitamin B12 in man. Haptocorrin in the bile is degraded by pancreatic enzymes, causing a transfer of biliary Cbl to IF. The presence of unsaturated and biologically active IF has indeed been detected in the intestinal liquid as far as the distal ileum, indicating possible uptake of the biliary Cbl-IF complex in the ileum. Not only Cbl but also analogs are excreted in bile. Analogs are secreted in combined form with haptocorrin at a concentration of about 1 nmol/1 and there is a negative correlation between serum and bile concentrations of corrinoids in humans. The ileo-colic stage comprises an intraluminal stage and the uptake of IF in the distal ileon enterocytes via a specific receptor. This receptor is found also in colon carcinoma cells such as HT 29 and Ca Co2. It is present in the whole intestine before 25 weeks of gestational age. The exteriorized part of the membrane pig receptor can be removed in the presence of papain. It combines with IF-Cbl under the same conditions as the complete receptor. The association constant of IF-Cbl complexes on the receptor varies from 0.3 x 109 hY 1 to 13 x 101° M -1, depending on the species. Calcium may combine in vitro on the receptor and on IF and it would appear that very low concentrations of calcium are necessary for the two molecules to combine. Purification of the receptor has been carried out using ileal mucosal homogenates from pigs, dogs, guinea pigs, rats and also humans following a facultative solubilization of the membrane proteins in the presence of Triton X-100. The receptor is asymmetrical, with a friction ratio of 1.5-2. During SDS-PAGE electrophoresis, the receptor displays two subunits, ct and [3, the molecular mass of which varies according to the species and method of purification. The monomer of the porcine receptor has a molecular mass of about 270 kDa. Calcium seems to be involved in the oligomerization of the receptor. Wheat germ agglutinin (WGA) inhibits formation of the IF-receptor complex with an inhibition constant of 1.9 ~tmol/1. WGA binds only with the 75 kDa subunit. This subunit therefore possesses the IF binding site.
In all the cases, except one, the chemical modifications of BLG enhance the binding affinity of the ligands to the protein. The structural changes induced by the chemical modifications, especially in the case of MetBLG [15], do not disassemble the structure of the binding site. The chemical modifications of BLG, increasing its surface hydrophobicity and modulating slightly its secondary structure, could change ligand/protein stoichiometry as it was observed in the case of J3-carotene/BLG complex. Modification of BLG structure by chemical treatments or by changing the dielectric constant of the medium, opening up a second binding site for retinol [10], may be one of the possible ways to alter or broaden BLG binding properties.
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VITAM1NES ET BIOFACTEURS
Many authors have assumed that the IF-Cbl complex penetrates the cell, with separation of Cbl and IF occuring subsequently. Others assume that IF remains attached to the receptor while Cbl penetrates the cell. Using radioantography, we have demonstrated internalization in the enterocyte of IF labeled with 125I and incubated in vivo in guinea pig ileum loops. The tracer was located mainly in endosomes of the apical cytoplasm and invaginations of the lateral membrane suggesting a transcytosis. Dissociation of the IFCbl complex could occur as a result of degradation by lysosomal enzymes including exoglycosidases. Cbl passage at the basal pole of the enterocyte appears to occur through combination with transcobalamin. Ileal enteroeyte and colon carcinoma cells, but not normal colon epithelial cells, synthezise transcobalamin. The transfer of labeled Cbl to transcobalamin in enterocytes of guinea pig has been demonstrated a membrane receptor enable the Cbl-transcobalamin complex to pass into the humoral com16artment at the basal membrane of the enterocyte.
transcobalamin, holo-TC and holo-haptocorrin, holo-HC) and cobalamin unsaturated binding proteins (apo-transcobalamin, apo-TC and apo-haptocorrin, apo-HC) were examined together with the TC isopeptide pattern.
Patients and methods: HIV infected male patients (n = 20, aged 32-62 years) with P-Cobalamins below 200 pmol/1 were studied. Apo-TC and apo-HC were determined by the QUSO technique [1]. Holo-TC and holo-HC were calculated after determination of the substance concentration of cobalamin following QUSO precipitation [2]. The TC phenotypes were determined by isoelectric focusing [3].
Results: These are given as range and (median) with interval of reference in [brackets]. Low substance concentrations of holo-TC (37-88 (47.5); [75-475] pmol/0 and holo-HC (64-184 (135.5); [200-550] pmol/1) were found. The substance concentration of both apo-TC (480-1730 (1025); [400-930] pmol/1) and apo-HC (70-800 (235); [90-275] pmol/1) were increased. The frequency of TC phenotype X and the overall distribution of the TC phenotypes were significantly different from the reference population (p < 0.05).
Interactions m6taboliques entre folates et ph6nytoi'ne chez le rat en r6gime normal ou suppl6ment6 en acide folique
Conelusions: 1 ) L o w P-Cobalamins does not reflect a low concentration of TC or HC. 2) The increased frequency of TC phenotype X is without connection to the cobalamin deficiency in these patients, since there is no difference between the binding of cobalamin or the binding to the TC receptor of the individual TC isopeptides [4].
Ladjimi H, Gounelle J-C. Laboratoire de Physiologie, Facult6 de Pharmacie, Universite Paris XI, 92296 Chb.tenay-Malabry.
References
La n6cessit6 d'une suppl6mentation folique de sujets trait6s /~ la ph6nyto'fne de m~me que le m6canisme de l'interaction folate-phdnyto'ine sont toujours sujets/t discussion. Des rats t6moins ou trait6s /l la ph6nytoine sont suppl6ment6s ou non par une dose de charge d'acide folique. Les principaux m6tabolites tissulaires de cette vitamine sont s6par6s et dos6s par une technique chromatographique pr6c6demment mise au point (Gounelle et Coll., Anal. Biochem. 1989 ; 176 : 406-411). Les tissus 6tudids sont la muqueuse intestinale, le sang total, le foie et le cerveau.
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GimsingP. Clin. Chem. 1989; 35:1 447. Nexo E. SeandZ Clin. Lab. Invest. 1981; 41: 465. HansonM. Electrophoresis 1987;8: 221. Hansen M. Biochim. Biophys. Acta. 1987;926: 359.
Cobalamin (Cbl)- and receptor- binding properties of deglycosylated rat intrinsic factor (IF),
Cette suppl6mentation a permis d'observer, chez les t6moins, nne augmentation de la teneur du t6trahydrofolate dans la muqueuse intestinale, du m6thylfolate dans le sang total, du THF et surtout du 5-CH3THF dans le fissu hOpatique. Cette augmentation des folates dans le sang total et dans le tissu h6patique ne s'accompagne pas d'une 616vation proportionnelle de la concentration de ces d6riv6s dans le cervean. Les r6sultats obtenus dans la muqueuse intestinale montrent que le traitement ~t la DPH entra~ne une accumulation des folates intestinaux surtout sous forme m6thyl6e alors que les folates du sang total, du foie et du cerveau ne sont pas modifi6s. Donc, ce traitement par voie intrap6riton6ale ne laisse pas apparaitre d'effets prononc6s de cet anticonvulsivant sur le statut folique des diff6rents organes 6tudi6s. La faible concentration h6patique et c6r6brale de la DPH observ6e chez les rats suppl6ment6s en acide folique laisse sugg6rer l'existence d'une interaction m6tabolique entre la vitamine et la drogue ; celle-ci pourrait jouer un r61e important dans l'effet anticonvulsivant de la DPH.
Dugu~ B, Griisbeck R. Minerval Institute, Tukholmankatu 2, 00250 Helsinki, Finland.
IF is a glycoprotein that binds Cbl and promotes its absorption into ileal enterocytes by receptor-mediated endocytosis. The functional role of the carbohydrate moiety in IF has recently been debated: Gu6ant et al suggested that the carbohydrates participate in the Cbl binding site of IF (BBA 1988; 957: 390-398) whereas Gordon e t al reported that glycosylation is not required for ligand or receptor binding (Am. J. Physiol. 1991; 260: G736-G742). Gastric secretion was collected from rat stomach by carbachol stimulation (20 ug/Kg), and kept in 0.02 M Tris buffer pH 7.4 containing 0.15 M NaC1, 10 mM NAN3, 3 mM PMSF, 10 ug/ml lenpeptin, 0.11 mg/ml antitrypsin, 0.11 mg/ml aprotinin, Pepsin was inactivated by raising the pH to 10.0 for 20 min followed by neutralisation. The gastric juice was saturated or not with [57Co]Cbl and incubated with exoglycosidases (neuraminidase, c~L fucosidase, N-acetyl D glucosaminidase, c~ mannosidase, 13galactosidase at the concentrations of 0.2, 1,10, 10 and 30 units/mg of protein, respectively) for 16 h at pH 5.5 and 37 ° C. The binding affinity for Cbl and rat intestinal receptor were measured at pH 7.4. IF lost 73% of its Cbl-binding capacity, but no significant change was noticed in the Ka (0.97 _+ 0.21 and 0.77 _+ 0.10 n M "-1 for the deglycosylated IF and the control, respectively). The deglycosylated IF-Cbl complex attached to the rat intestinal receptor with similar affinity as the control (0.78 + 0.07 vs 0.61 + 0.13 nM 1), but the apparent activity o f the receptor decreased with 30%. We conclude that the carbohydrate moiety does not affect the affinity of IF-Cbl for its receptor but that its removal decreases the amount of IF-Cbl bound. However, traces of protease activity were detected and may be responsible for the loss of Cbl-binding capacity.
Cobalamin binding proteins in patients with HIV infection Hansen M 1, Gimsing p2, Nexe E 3. 1 Department of Haematology, Herlev Hospital, University of Copenhagen. 2 Department of Haematology, Rigshospitalet, University of Copenhagen. "j Department of Clinical Chemistry, KH University Hospital of Aarhus, Aarhus Denmark.
Aim: P-Cobalamins are decreased in around 30% of patients with HIV infection. The cobalamin saturated binding proteins (holo-
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RI~SUMt~S DES COMMUNICATIONS
Effects of Iron complexes on cellular transport of calcium,
forms that are equally well recognized in the assay system to be used. Secondly, an assay with a well-known and suitable specificity and sensitivity should be chosen. Thirdly, a suitable calibration standard should be defined, and finally, possible influences of the matrix in which the vitamin is present should be considered. The above mentioned points will be exemplified with data on vitamin B]2.
Anghileri L.J, Biophysics Laboratory, Medicine Faculty, University of Nancy
Quantitation of vitamin B12 (cobalamins) in plasma is of considerable clinical interest since cobalamin deficiency is a relatively common disease [1]. In order to quantitate P-cobalamins at least 4 different forms of cobalamins must be extracted from 2 different binding proteins and converted to one form of cobalamin, cyanocobalamin. Extraction has been performed employing an extreme pH and/or heating. Our knowledge concerning the efficiency of the extraction is limited, especially for samples other than plasma [21.
In previous publications we have shown that calcium homeostatis of the cell, both in vitro and in vivo [1-4], is modified by ferric lactate. The involvement of low molecular weight ligands in transport and binding of iron by the cells has been reported by several authors, and among those ligands ATP is the most important low molecular weight ligand complexing iron which is implicated in cellular processes [5]. To establish the mechanism or mechanisms involved in ferric lactate action we have studied the effects of albumin, deferoxarnine and ATP on the in vitro ferric lactate-induced enhancement of 45Ca-uptake by Ehrlich carcinoma ascites cells. The competitive binding of iron to albumin and deferoxamine results in a drastic lowering of 45Ca-uptake enhancement. On the other hand, ATP provokes an increase of the ferric lactate effect, with a maximum value at equimolar concentrations. Since ATP alone does not modify 45Ca-uptake by the cells, the possible role of iron-ATP complex formation and a subsequent impairment of the cells Ca 2+pump is inferred. This hypothesis seems supported by the transfer of iron from ferric lactate to ATP and to albumin, demonstrated by electrophoresis. The impairment of the Ca2+-~ump in this case might be similar to the one provoked by La 3 , by blocking the CaZ+-pump phosphorylated protein which performs the ATPhydrolysis needed for the pump functioning. This reported complexed iron-calcium transport relationship might be of importance for the explanation of the cellular events taking place during liver iron-overload which leads to cirrhosis and liver cancer, as well as for the interpretation of the role played by iron accumulation in the neurodegenerative processes found in Parkinson's and Alzheimer's diseases.
Since plasma cobalamins is present in picomolar concentrations the assay, principles employed has been either growth of microorganisms or competition for protein binding between labelled cobalamin and cobalamin in the sample. While the latter principle is almost exclusively employed for quantitation of cobalamins in human samples the former is still in use for quantitation of cobalamins in dietary samples. The specificity of the assays are relatively well explored, both for microbiological assays and for protein binding assays. Only the microorganism O. M a l h a m e n s i s and the binding protein intrinsic factor are considered to be specific for cobalamins. Other microorganisms and binding proteins recognize a spectrum of corrins as well as cobalamins [3]. The preparation of calibration standards is simple. All endogenous active forms of cobalamin can be converted to cyanocobalamin. This compound is commercially available and its concentration can be determined with considerable accuracy by spectral analysis of an aliquot converted to dicyanocobalamin [4]. The substance concentration of cobalamins measured with various methods varies more than a factor 2, and a considerable variation is observed, also when comparable methodologies are employed [5]. The most likely explanation for this discrepancy is variations in the extraction procedure employed.
References [1] Anghileri LJ. Effects if Fe3+-tumor cell interaction on CaZ+-uptakeby Ehrlichascitestumor cells. Cell Calcium 1991 ; 12 : 371-74. [2] AnghileriLJ, Maleki P, Robert J. Changes in calciumuptake by liver induced by ferric lactate. Arch. Biochem.Biophys. 1992 ; 292 : 529-33. [3] AnghileriLJ. Effects of complexed iron and aluminumon brain calcium to be publishedin Vol. 13, 1992of NeuroToxicology(USA). [4] Anghileri LJ. Soft tissues calcification induced by iron complexes, to be pubfishedin CalcifiedTissue International(USA). [5] Weaver J, Pollack S. Low molecular weight iron isolated from guinea pig reticulocytes as AMP-Fe and ATP-Fe complexes. Biochem. J. t989 ; 261 : 787-92.
In conclusion, quantitation of vitamins is of importance in order to ensure a diet that contain the minimal daily requirement of the vitamins and in order to diagnose possible deficiencies of the vitamin. Ideally comparable methodologies should be employed for quantitation of the vitamins in dietary samples and in human sampies, and ideally the methods should be optimized and standardized concerning extraction of the vitamin, calibration of the assay, and specificity of the methods employed. Though it should be possible to reach this ideal situtation, at least for some of the of vitamins, there is still a long way to go.
Quantitation of vitamins References
Nexu E. Department of Clinical Chemistry KH University of Aarhus, N~rrebrogade 44, 8000 Aarhus C, Denmark
[1] ChanarinI. The MegaloblasticAnemias.Oxford, Blackwell ScientificPublications, 1979. [2] Nexo E. Cobalamin assays. In : Cobalaminand related binding proteins in clinical nutrition, Gurant JL and Nicolas JP (eds.), Amsterdam, Elsevier, 1990, 81-94. [3] Nexo E, Olesen H. Quantitationof Cobalaminsin Human Serum. In : B]2, vol. 2, Dolphin,D (ed), John Wiley & Sons, Inc., 1982, 88-104. [4] Nexo E, Tibbling G, Weber T et al. Preparationof calibrationstandards for quantitation of cobalamins in plasma, a NORD-KEM project. Scand. J. Clin. Lab. Invest. 1989 ; 49 (suppl. 194) : 35-36. [5] VerwilgbenRL. Proposed serum standard for human serum vitamin B]2 assay. Brit. J. Haemet. 1986 ; 64 : 809-811.
Vitamins are supplied with the diet, absorbed and transported through the blood stream in order to act as coenzymes in a diverse spectrum of reactions. Sufficient supply of vitamins is thus of importance in order to maintain health. Because of that quantitation of the vitamins is of relevance both to ensure sufficient dietary supply and to diagnose possible deficiencies. The analytic procedure for quantitation of vitamins involves several important steps. First, the sample needs to be pretreated in order to ensure that all vitamins are liberated and converted to
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VITAMINES ET BIOFACTEURS
Mdthodes biologiques d'(~valuation des ~l(~ments traces mindraux
mais indispensable car elles sont g6n6ralement tr6s diff6rentes de celles des adultes.
Nabet-Belleville F.
L'6tablissement de valeurs usuelles chez les personnes ag6es audel/l de 60-70 ans pr6sente 6galement des difficult6s (mais est 6galement indispensable) car dans ce cas, il faut d6finir une <
Laboratoire de Biochimie B Unite Lionnois, CHU de Nancy - H6pital Central 29, avenue de Lattre de Tassigny - F-54000 Nancy
- Variations des valeurs statistiques en fonction de la population
6tudi6e (variations des valeurs usuelles de s616nium en fonction de la localisation, du chrome en fonction du degr6 de raffinage des aliments disponibles,...).
Commengant & comprendre, au moins pour certains des 616ments traces min6raux, leurs r61es physiologiques, on perqoit les implications qu'ils pourraient avoir en pathologie si leur statut dans l'organisme n'est pas ad6quat. Le chrome, le zinc, le mangan6se sont impliqu6s dans le m6tabolisme des glucides et des lipides et participeraient ainsi aux maladies de la nutrition comme le diab6te, l'art6rioscl6rose .... Des apports appropri6s en 616ments traces pourraient ~tre un 616ment d'un vieillissement harmonieux.
D6termination des valeurs-seuil en dessous desquelles des sympt6mes, m6me frustes, de carence risquent d'apparaRre. - Valeurs ~tpartir desquelles une suppl6mentation est ~t envisager. Bien que de nombreux probl6mes restent ~ r6soudre, la d6termination d'un statut ad6quat en 616ments traces s'inscrit dans les recherches nutritionnelles actuelles.
Toutes les recherches cliniques entreprises sur les 616ments traces min6raux requi6rent plusieurs pr6alables : 1. Que les biologistes mettent ~ la disposition des cliniciens des techniques de dosage fiables et sensibles permettant de mettre en 6vidence une carence m~me partielle (par exemple, les techniques propos6es pour le dosage du Cr s6rique ont des seuils de d6tection qui recoupent les valeurs consid6r6es comme normales, donc dans ces conditions une carence ne peut 6tre mise en 6vidence).
Dosage du retinol et de I'alpha-tocoph~rol plasmatique par C.L.H.P.
Pour les laboratoires de biologie classiques, le hombre des m6thodes disponibles est finalement limit& Des techniques colorim6tdques sont utilisables pour le fer, 6ventuellement le cuivre et le zinc, fluorim6triques pour le s616nium urinaire. Ces techniques moins sp6cifiques permettent de traiter un grand nombre d'6chantillons ~t moindre cofit. Cependant les techniques les plus utilis6es sont la spectrom6trie d'absorption atomique avec flamme (de 10 ~ 100 ~tg/1), avec four (0,1 ~ 10 Ixg/1) ou ICP (1 ~ 100 ~tg/1).
Gani~re-Monteil C, Kergueris M F , Pineau A, Blanehard B, A z o u l a y C, L a r o u s s e C. Laboratoire de Pharmacologie Clinique, CHU, 44035 Nantes Cedex, France.
Le r6tinol (Vit A) et l'alpha-tocoph6rol (Vit E), fractions actives des vitamines A et E, sont dos6es par d6tection U.V. ~t 280 nm apr6s C.L.H.P. en phase invers6e (C18). L'addition d'ac6tonitrile dans la phase mobile (ac6tonitrile-m6thanol-eau, 64,5-33-2,5) 6vite les pics parasites et permet une analyse en 8 minutes. L'extraction liquide-liquide se fait dans l'hexane. Apr6s 6vaporation ~t sec, le r6sidu est repris dans un m61ange 6ther-m6thanol (25-75).La gamme d'6talonnage est r6alis6e par surcharge plasmatique. Le r6tinyl ac6tate est l'6talon interne. La stabilit6 des produits impose de traiter l'6chantillon toujours ~ l'abri de la lumi6re.
L'analyse des 616ments traces n6cessite pour 6tre interpr6table des pr6cautions importantes pour ne pas introduire de contamination tant au niveau du pr616vement qu'en cours du dosage. 2. Avoir un ou des marqueurs appropri6s du statut de l'organisme en 616ments traces ~t 6valuer. Ce ou ces marqueurs doivent pouvoir ~tre dos6s sur des pr61bvements facilement accessibles et non invasifs. En pratique, on dose l'616ment trace lui-m~me dans le s6rum (ou le plasma), le sang total, les globules rouges, quelquefois dans les leucocytes ou les plaquettes. Les dosages sur biopsie sont r6serv6s des diagnostics plus particuliers (exemple, biopsie h6patique pour dosage du cuivre dans la maladie de Wilson, biopsie de peau pour des carences en zinc dans les 16sions dermatologiques).
Les crit6res de qualit6 sont : - Pourcentage de r6cup6ration : proche de 100 % pour Vit A et Vit E.
Le dosage des 616ments traces dans les fluides biologiques cit6s dolt, pour 6tre utile au diagnostic de carence, ~tre un bon reflet du statut de l'organisme en cet 616ment ce qui n'est pas toujours vrai.
- Limites de d6tection :Vit A = 0,015 mg/l, Vit E = 0,030 rag/1. - Lin6arit6 satisfaisante jusqu'~t 2 mg/1 pour Vit A et 20 mg/1 pour Vit E.
Le dosage des 616ments traces dans les urines n'est ~tmon avis pas suffisamment exploit& S'il est de peu d'int6r6t pour le diagnostic d'une earence, il pourrait apporter des arguments 6tiologiques. De plus, ces dosages seraient tr~s utiles pour la d6tection de suppl6mentations <
- S61ectivit6 : aucune interf6rence. Reproductibilit6 satisfaisante.
- Stabilit6 des pr61~vements h l'abri de la lumi6re : ~t - 20 °C : 1 mois,/t 4 °C : 24 h pour Vit A, 48 h pour Vit E. - Stabilit6 de l'6talonnage : La pr6paration d'une solution 6talon
3. Etablissement de valeurs de r6f6rence et des limites au-dessus et an-dessous desquelles on peut consid6rer que le statut de l'organisme en 616ment trace consid6r6 n'est pas ad6quat.
contenant h la lois Vit A et Vit E permet une meilleure stabilit6 de Vit A. Les taux plasmatiques ont 6t6 d6termin6s dans une population t6moin en fonction de l'~ge :
Les valeurs usuelles sont des valeurs statistiques &ablies dans des populations partieuli~res. L'6tablissement de ces donn6es se heurte des difficult6s :
adultes : Vit A : 0,63 + 0,17 rag/1 -Vit E : 9,61 + 3,10 mg/1 (n = 29)
- Choix de la population et 61imination de facteurs pouvant modifier les concentrations des 61Orients traces (alcool, tabac, m&licaments,...).
5 h 15 ans : Vit A : 0,41 _+0,18 mg/l - Vit E : 6,87 + 2,37 mg/1 (n = 29) < ~ 5 ans :Vit A : 0,37 + 0,17 mg/l - Vit E : 6,94 + 2,40 mg/1 (11= 29)
En s'adressant aux Centres de Transfusion ou de M6decine Pr6ventive, il est relativement facile d'avoir un 6chantillormage d'une population adulte. L'6tablissement de valeurs de r6f6rence chez les enfants, surtout chez les jeunes enfants, cst beaucoup plus difficile
Ce dosage permet, en particulier, un suivi r6gulier des patients atteints de mucoviscidose, pathologie responsable d'une carence en r6tinol et alpha-tocoph6rol.
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RI~SUMI~S D E S C O M M U N I C A T I O N S
Statuts biologiques en r~tinol et en b6ta-carot~ne. Variations en fonction du sexe, de I'&ge, et de i'alimentation (enquC~te Val-de-Marne)
Determination of B6 vitamins in children serum by paired-ions HPLC with post-column fluorescent derivatization Depasse F, Moussa F, Libes C, Aymard P.
Potier de Courcy G, Preziosi P, Christid~s J-P, Hercberg S.
Laboratoire de Biochimie, H6pital Armand Trousseau 26, avenue du Dr Arnold Netter - 75571 Paris Cedex 12
n~though vitamin B6 is a well known important nutrition compont, very few informations concerning its levels in serum are available. Furthermore, to our knowledge, only adult status was assessed. On the other hand, a lot of studies used microbiological assay, which does not measure all metabolites. In order to determine pediatric reference values for B6 vitaminers in serum, we developped a paired-ions HPLC method with fluorescent post-column derivatization adapted from Sampson et al. and Coburn et aL Briefly, after proteins and lipids extraction, 0,1 ml of serum spiked with 4-deoxypyridoxine (dPN) used as an internal standard are separated on a C18 column and ehited with a binary linear gradient. Post-column derivatization is performed to enhance fluorescence. Seven components are separated: PyridoxalPhosphate (PLP), 4-Pyridoxic Acid (4PA), Pyridoxamine-Phosphate (PMP), Pyridoxal (PL), Pyridoxine (PN), dPN, and Pyridoxamine (PM). Reference values were determined in 12 outpatients' clinic children without renal, liver, neurological or haematological impairment aged 1 to 17 years (reed : 8,9 years). These values (n = 12) : PLP : 106 +_48 umol/l, 4PA : 56 _+29 nmol/1, PMP : 11 + 7 nmol/1, PL : 74 _+22 nmol/1, PN : 87 + 36 nmol/1 and PM : 77 :t: 55 umol/1 agree with those of literature (Sampson et al., Driskell et al.). This work is now to be completed with data relative to age and sex classes.
CNAM/ISTA, 2, rue Conte, 75141 Paris
Son r61e possible dans la prrvention du cancer conf~re au I%carotrne un intrr~t sprcifique par rapport ~t sa valeur de prrcurseur de la vitamine A. L'rvaluation, sur une population reprrsentative d'on drpartement de la r6gion parisienne (n = 493 H ; 584 F), du statut en rrtinol et en [~-carotrne (valeurs srriques et apport alimentaire) montre que les niveaux moyens de rrtinol srrique (mrdiane) sont toujours infrrieurs chez les femmes/t l'~ge adulte : 25 % de ~ valeurs bassses >> vs 1 % chez les hommes entre 25 et 50 ans (reals anctme valeur dans la zone de carence), alors que les apports en rrtinol sont faibles en moyenne mais peu diffdrents selon l'gge et le sexe. Par centre, le statut biologique, de m~me que les apports en densit6 nutritioonelle, du J3-cardtrne sont dans l'ensemble supdrieurs clans le sexe frminin. Ces dormres, ainsi que les corrrlations obtenues avec l'alimentation et avec d'autres facteurs, tels que la consommation d'alcool et de tabac ou la contraception orale, eonfirment que le statut en rrtinol peut Ctre sous drpendance hormonale alors que la valeur du 13-carotrne srrique pourrait traduire une diffrrence de comportement, notamment alimentaire. Ces rrsultats soulignent l'intrrSt d'individualiser, dans les 6tudes de population, le statut en J3-carotrne du statut en rrtinol.
Aspects actuels de la carence vitaminique D en Meurthe-et-Moselle (MM)
Microm~thode de dosage de la phylloquinone (VK1) dans le lait maternel et les aliments lactds didtdtiques (ALD)
Vidailhet M, Claudon R, Kaiffer M, Burlet C.
Moussa F 1, Girardet j.p2, Tounian p2, Lompret V t, Fontaine J-L 2, Aymard p1.
P6diatrie 3, H0pital d'Enfants - 54511 Nancy, France
L'&ude rrtrospective a concern6 les enfants (0 & 15 ans) hospitalisrs dans 2 hrpitaux, l'un du Sud (Nancy), l'autre du Nord (MontSaint-Martin) du drpartement MM sur 5 ans (1986-90). Deux des critrres suivants sont exigrs : mauvaise prophylaxie, clinique ou radiologie typiques, hypocaleiurie, augmentation des phosphatases alcalines, 25 (OH) D srrique infrrieure ~t 6 ng/mL. 91 cas ont 6t6 relevrs dent 40 ~tNancy. Rapportre au hombre d'enfants hospitalisrs, la frrquence est de 0,38 % ~ Nancy, voisine de celle observre dans d'autres CHU frangais (Lyon, Rouen). Si cette prrvalence hospitali~re est beaucoup plus faible que celle des ann6es 50 (15 50 %), elle est tr~s excessive par rapport ~t celle d'autres pays industrialisrs comme les USA. Elle est meme 10 fois plus forte Mont-Saint-Martin, o/1 elle concerne 3,8 % des hospitalis6s (crise 6conomique, fort pourcentage d'immigrrs). Certaines donnres classiques sont retrouvres : prrpondrranee chez le gargon (71%), les immigrrs ( 4 1 % ) , surtout maghrrbins (33 %), prrdominance hivemale et printanirre (60 %), croissance le plus souvent normale (rachitisme floride). Certaines donnres sont plus originales : prrcocit6 des manifestations cliniques (50 % avant 8 mois ; fr6quence maximale entre 3 et 5 mois). Une hypocalcrmie est frrquente (46 %), surtout h Nancy (73 %) off elle est ~t l'erigine du diagnostic 1 fois sur 3. Cette frrquence excessive du rachitisme, la prrcocit6 des formes actuellement observ6es, la gravit6 possible de l'hypocale6mie soulignent l'int6r~t d'une prophylaxie drbutre durant la grossesse pour un meilleur statut vitaminiqne D drs la naissance et de l'adoption d'une prophylaxie diffrrente, basre sur one supplrmentation des laits et laitages comme au Canada et anx USA.
~ Laboratoire de Biochimie, 2Service de Gastroent~rologie et Nutrition P~diatriques H6pital A. Trousseau, 26, avenue du Dr. A-Netter, 75012 Paris
La d6termination de la pbylloquinone dans le lait maternel et les ALD est nrcessaire ~t l'rtude des besoins en cette vitamine chez le nouveau-nr. Aussi, de nombreuses mrthodes de dosage de la VK1 dans les laits d'origine humaine ou animale ont 6t6 publires. Cependant, ces mrthodes sont longues et fastidieuses car elles nrcessitent, toutes sans exception, deux 6tapes chromatographiques, au moins. En eutre, les rrsultats publids, ne sont pas concordants. Ces difficult6s sont lires/t la faible teneur en VK1 des produits analysrs, d'une part, et/t leur riehesse en lipides, d'autre part. Nous proposons une technique de dosage de la VK1 darts les laits et les ALD, par CLHP en une seule 6tape~ Hautement sensible (limite de drtection : 10 pg de VK1 par injection, pour tm rapport signal/bruit de fond 6gal/t 3), la micromrthode preposre ne nrcessite qu'on faible volume de prise d'essai (20/~ 50 Ixl), ce qui rrduit la quantit6 de lipides ~t traiter et, par cons6quent, simplifie les 6tapes d'extraction et de purification. Les rrsultats obtenus g l'aide de cette micromrthode sent de 0,40 & 5,50 ng/mL de VK1 (reed. = 1,45 ng/mL, n = 34) pour les laits maternels, de 2,50 /~ 8,20 ng/mL (n = 6) pour les laits frais du commerce et de 6,80 ~t 13,00 ng/mL (n = 8) pour les ALD non supplrmentrs en cette vitamine. Ces rrsultats sent comparables ceux rapportrs par Haroon et coll., qui utilisent dans leur mrthode trois 6tapes chromatographiques pour one prise d'essai de 5 20 ml de lair. 120
VITAMINES ET BIOFACTEURS
Statut nutritionnel en folates : r(~sultats d'~tudes faites sur la population fran(~aise
complexes pauvres en riboflavine, un d6ficit nutritionnel en vitamine B2 pourrait expliquer cette acidurie 6thymalonique et adipique retrouv6e chez 24 % des enfants inclus dans cette 6tude.
Potier de Courcy G, Christides J-P.
Evaluation de I'dtat nutritionnel vitaminique en Bourgogne
ISTA : CNAM, 2, rue Cont& F-75141 Paris
La valeur des folates &ythrocytaires reste le meilleur indicateur du statut en folates d'une population. Une valeur inf6rieure 100 ng/ml traduit une situation ~ haut risque de d6ficience alors qu'au-del~t de 200 ng/ml, la zone optimale est atteinte. Entre 100 et 150 ng/ml, le risque existe mais est consid6r6e comme mod6r6. Plusieurs 6tudes portant sur des populations vivant en France, dont certaines repr6sentatives, nous permettent, grace a la mesure du statut en folates de disposer d6jh d'uue 6valuation des groupes ~t risque, d'autant plus que nous obtenons un bon degr6 de corr61ation entre les valeurs biologiques et l'apport alimentaire. Pour une population franqaise moyenne repr6sentative (enqu~te Val-de-Marne), les valeurs m6dianes des folates s6riques sont de 5,2 ng/ml pour les deux sexes et celles des folates &ythrocytaires de 177 ng/ml (n = 328) pour les femmes de 18 & 50 ans et de 194 ng/ml pour les hommes du m~me age. Les groupes &risque de d6ficience semblent 8tre en France : - le jeune enfant au sortir de l'alimentation lact6e, - les adolescentes et les femmes jeunes, dont plus d'un quart sont d6ficience latente ; estimation confirm6e sur cette population par le niveau d'apport alimentaire en folates, - les femmes enceintes, dont la baisse syst6matique du statut en folates au cours de la grossesse, quelle que soit la situation socio6conomique, se traduit par une augmentation moyenne de la pr6valence des risques de d6ficience &l'accouchement en post partum, la personne ag6e institutionnalis6e.
Costa de Carvahlo M-J, Guilland J-C, Fuchs F, Moreau D, Boggio V. Laboratoire de Physiologie, Faculte de M~decine, 21033 Dijon Cedex
Un 6chantillon de 335 sujets (155 hommes d'age moyen = 42,6 + 10,7 ans et 180 femmes d'glge moyen = 43,3 _+ 10,9 ans) a 6t6 recrut6 parmi des consultants du Centre d'Examens de Sant6 de Dijon (r6gion Bourgogne). L'apport vitaminique B1, B2, B6, C, A et E de la ration a 6t6 6valu6 par la m6thode du <
Acidurie dthylmalonique et adipique dans la malnutrition marastique Feillet F, Tang J, Lefebvre E, Vidailhet M. Service de P6diatrie III, Laboratoire de recherche nutritionnelle en p6diatrie, Nancy
Nous avons ~tudi6 les acides organiques urinaires dans une populaiton de 38 enfants mauritaniens malnutris (35 marasmes et 3 kwashiorkors marastiques). Parall61ement ont 6t6 6tudi6s des param~'tres nutritionncls, anthropom6triques (indice de Quetelet et rapport PB/PC) et biologiques (albumine (ALB) et transthyr6tine (TTR)) et inflammatoires (C r6active prot6ine et orosomuco'ide). Nous avons mis en 6vidence chez 9 enfants (24 %) une acidurie &hylmalonique (AEM), adipique (AAD) et sub6rique ; AEM : 35 + 9 mmol/mol cr6at (norme : 12 + 6), adipique 57 + 27 mmol/mol cr6at (norme : 6 + 4), sub6rique 58 + 33 mmol/mol cr6at (norme : 15 + 6). I1 s'y associe une excr6tion excessive d'autre acides dicarboxyliques ; nous avons retrouv6 du d6hydrosub&ique dans 4 cas, du glutarique dans 2 cas et de l'azela'ique dans un cas. I1 y a une corr61ation positive entre les prot6ines nutritionnelles et I'AAD (ALB : p = 0,008 et TTR : p = 0,01). La m~me tendance est retrouv6e pour I ' A E M et l'acide sub6rique mais de f a ; o n non significafive. Ces anomalies des acides organiques semblent objectiver un dysfonctionnement des Acyl CoA d6shydrog6nases. La pr6sence de ces anomalies chez 25 % d'une population marastique et la bonne 6volution de ces enfants apr~s renutrition (comprenant tree vitaminoth6rapie) perrnet d'exclure une enzymopathie cong6nitale. La vitamine B; &ant le principal cofacteur de ces d6shydrog6nases et le r6gime de ces enfants, principalement & base de sucres
Evaluation de I'~tat nutritionnel vitaminique B1, B2, B6, C, A et E de personnes &g~es en service de long s~jour. Effets d'une supplementation vitaminique sur le statut vitaminique biochimique Asciutti-Moura LS 1, Guilland JC 1, Fuchs F l, Richard D 2. 1 Laboratoire de Physiologie, Facult6 de M~decine, 21033 Di on Cedex. 2 Serv ce de Long Se our, Centre G6riatrique de Champmaillot, Dijon.
L'6tat nutritionnel vitaminique B1, B2, B6, C, A, et E a 6t6 6tudi6 chez 84 sujets ag6s (31 hommes d'age moyen = 77,2 + 9,6 ans et
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VITAMINES ET BIOFACTEURS
Statut nutritionnel en folates : r(~sultats d'~tudes faites sur la population fran(~aise
complexes pauvres en riboflavine, un d6ficit nutritionnel en vitamine B2 pourrait expliquer cette acidurie 6thymalonique et adipique retrouv6e chez 24 % des enfants inclus dans cette 6tude.
Potier de Courcy G, Christides J-P.
Evaluation de I'dtat nutritionnel vitaminique en Bourgogne
ISTA : CNAM, 2, rue Cont& F-75141 Paris
La valeur des folates &ythrocytaires reste le meilleur indicateur du statut en folates d'une population. Une valeur inf6rieure 100 ng/ml traduit une situation ~ haut risque de d6ficience alors qu'au-del~t de 200 ng/ml, la zone optimale est atteinte. Entre 100 et 150 ng/ml, le risque existe mais est consid6r6e comme mod6r6. Plusieurs 6tudes portant sur des populations vivant en France, dont certaines repr6sentatives, nous permettent, grace a la mesure du statut en folates de disposer d6jh d'uue 6valuation des groupes ~t risque, d'autant plus que nous obtenons un bon degr6 de corr61ation entre les valeurs biologiques et l'apport alimentaire. Pour une population franqaise moyenne repr6sentative (enqu~te Val-de-Marne), les valeurs m6dianes des folates s6riques sont de 5,2 ng/ml pour les deux sexes et celles des folates &ythrocytaires de 177 ng/ml (n = 328) pour les femmes de 18 & 50 ans et de 194 ng/ml pour les hommes du m~me age. Les groupes &risque de d6ficience semblent 8tre en France : - le jeune enfant au sortir de l'alimentation lact6e, - les adolescentes et les femmes jeunes, dont plus d'un quart sont d6ficience latente ; estimation confirm6e sur cette population par le niveau d'apport alimentaire en folates, - les femmes enceintes, dont la baisse syst6matique du statut en folates au cours de la grossesse, quelle que soit la situation socio6conomique, se traduit par une augmentation moyenne de la pr6valence des risques de d6ficience &l'accouchement en post partum, la personne ag6e institutionnalis6e.
Costa de Carvahlo M-J, Guilland J-C, Fuchs F, Moreau D, Boggio V. Laboratoire de Physiologie, Faculte de M~decine, 21033 Dijon Cedex
Un 6chantillon de 335 sujets (155 hommes d'age moyen = 42,6 + 10,7 ans et 180 femmes d'glge moyen = 43,3 _+ 10,9 ans) a 6t6 recrut6 parmi des consultants du Centre d'Examens de Sant6 de Dijon (r6gion Bourgogne). L'apport vitaminique B1, B2, B6, C, A et E de la ration a 6t6 6valu6 par la m6thode du <
Acidurie dthylmalonique et adipique dans la malnutrition marastique Feillet F, Tang J, Lefebvre E, Vidailhet M. Service de P6diatrie III, Laboratoire de recherche nutritionnelle en p6diatrie, Nancy
Nous avons ~tudi6 les acides organiques urinaires dans une populaiton de 38 enfants mauritaniens malnutris (35 marasmes et 3 kwashiorkors marastiques). Parall61ement ont 6t6 6tudi6s des param~'tres nutritionncls, anthropom6triques (indice de Quetelet et rapport PB/PC) et biologiques (albumine (ALB) et transthyr6tine (TTR)) et inflammatoires (C r6active prot6ine et orosomuco'ide). Nous avons mis en 6vidence chez 9 enfants (24 %) une acidurie &hylmalonique (AEM), adipique (AAD) et sub6rique ; AEM : 35 + 9 mmol/mol cr6at (norme : 12 + 6), adipique 57 + 27 mmol/mol cr6at (norme : 6 + 4), sub6rique 58 + 33 mmol/mol cr6at (norme : 15 + 6). I1 s'y associe une excr6tion excessive d'autre acides dicarboxyliques ; nous avons retrouv6 du d6hydrosub&ique dans 4 cas, du glutarique dans 2 cas et de l'azela'ique dans un cas. I1 y a une corr61ation positive entre les prot6ines nutritionnelles et I'AAD (ALB : p = 0,008 et TTR : p = 0,01). La m~me tendance est retrouv6e pour I ' A E M et l'acide sub6rique mais de f a ; o n non significafive. Ces anomalies des acides organiques semblent objectiver un dysfonctionnement des Acyl CoA d6shydrog6nases. La pr6sence de ces anomalies chez 25 % d'une population marastique et la bonne 6volution de ces enfants apr~s renutrition (comprenant tree vitaminoth6rapie) perrnet d'exclure une enzymopathie cong6nitale. La vitamine B; &ant le principal cofacteur de ces d6shydrog6nases et le r6gime de ces enfants, principalement & base de sucres
Evaluation de I'~tat nutritionnel vitaminique B1, B2, B6, C, A et E de personnes &g~es en service de long s~jour. Effets d'une supplementation vitaminique sur le statut vitaminique biochimique Asciutti-Moura LS 1, Guilland JC 1, Fuchs F l, Richard D 2. 1 Laboratoire de Physiologie, Facult6 de M~decine, 21033 Di on Cedex. 2 Serv ce de Long Se our, Centre G6riatrique de Champmaillot, Dijon.
L'6tat nutritionnel vitaminique B1, B2, B6, C, A, et E a 6t6 6tudi6 chez 84 sujets ag6s (31 hommes d'age moyen = 77,2 + 9,6 ans et
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R~SUMES DES COMMUNICATIONS
Multivitamin mineral supplementation in the elderly. Effects on vitamin blood levels
53 femmes d'fige moyen = 84,2 + 7,9 alas) vivant en institution. L'apport alimentaire en macronutriments et en vitamines a 6t6 6valu6 par une mtthede d'enqutte alimentaire de type prospectif pendant 5 jours constcutifs. L'apport en vitamine C a 6t6 d6termin6 l'aide de tables de composition des aliments et par dosage direct de cette vitamine dans tousles aliments consommts.
Herbeth B 1-2, Lemoine A 3, Chavanee M 4, Potier-de-Courcy G 5, Zittoun j6. 1 Centre de M6decine Pr6ventive, 2, avenue du Doyen Jacques Parisot, 54501 Vandoeuvre-Les-Nancy, France. 2 INSERM U 115, Faculte de Medecine, 54500 Vandoeuvre-Les-Nancy. 3 Centre Hospitalier de Nevers, 1, avenue Colbert, 58020 Nevers, France. 4 INSERM U169, 16, avenue PauI-Vaillant Couturier, 94807 Villejuif. s ISTNA, 2, rue Cont6, 75003 Paris, France. 6 H6pital H. Mondor, Laboratoire d'Hematologie, 94000 Creteil, France,
L'tvaluation du statut vitaminique biochimique a 6t6 fondte sur l'estimation de la concentration des vitamines circulantes (pour B1, C, A e t E), sur la dttermination d'activitts enzymafiques dtpendant de la vitamine envisagte (etETK pour BI, etEGR pour 132, c~EGOT pour B6). Pour la B1, on s'est 6galement rtftr6 A la pyruvictmie et it Findice du Mttabolisme des Carbohydrates ou <~CMI )> 2 heures apr~s une surcharge en glucose et pour la vitamine A au RDR test.
Despite the many questions being raised about multivitamin use in the elderly, it has not been well proven that consuming an oral multivitamin alters vitamin blood levels in the aged. To address this question, we conducted a randomized, double-blind trial of daily multivitamin-mineral supplementation in 203 non institutionalized ambulatory elderly persons (over 60 years of age). Blood vitamin levels were measured at baseline, and at two and four months of supplementation in both placebo and treated groups : plasma alpha-tocopherol, retinol, ascorbic acid and vitamin BI2, plasma and erythrocyte, folate basal activities and in vitro coenzyme stimulation index of vitamin B-dependent enzymes in erythrocyte, respectively transketolase (ETK) for B1, glutatbionreductase (EGR) for 132 and glutamate oxaloacetate aminotransferase (EGOT) for B6. At baseline the placebo and treated groups were similar with respect to age, sex, weight, smoking and medical history, drug use, daily vitamin intake and blood vitamin levels. The change from baseline to two months was significantly greater in the supplemented group for plasma alpha-tocopherol, ascorbic acid, vitamin B12, plasma and erythrocyte folate, erythrocyte basal activity of ETK, EGR and EGOT and coefficient activation of the three above enzymes. This was also true at four months, except for plasma ascorbic acid. The difference between placebo and vitamin groups was not statistically significant for vitamin A. Great storage pool of retinol could explain this discrepancy. Multivitamin supplementation may be of value for providing better vitamins E, C, B1, B2, B6, B12 and folates status.
Au plan des apports vitaminiques, les valeurs inftrieures ~t 50 % des apports conseillts (AC) pour la population fran~aise, exprirotes en % de la population 6tudite, reprtsentent respectivement chez les hommes et les femmes, 84 % et 89 % pour C (en tenant compte des valeurs obtenues par dosage), 68 % et 64 % pour B6, 29 % et 23 % pour B1, 42 % et 42 % pour E. Les pourcentages de risque 61ev6 de carence biologique sont, par ordre dtcroissant, respectivement pour les hommes et les femmes : 50 % et 58 % pour B6 (c~EGOT > 1,80), 42,9 % et 30,4 % pour A (RDR test > 14 %), 29 % et 1 5 , 1 % pour C (ascorbtmie < 0,20 mg/100 ml), 29 % et 15,1% pour BI (oc ETK > 1,20). La suppltmentation vitaminique it dose supraphysiologique (2 g 5 lois les AC) pendant un mois a corrig6 partiellement (C, B1) ou totalement (132, B6, E) les dtviations des paramttres du statut vitaminique biochimique. Ces effets favorables de la suppltmentation permettent d'entrevoir une dtmarche prtventive et curative de la malnutrition vitaminique et de ses constquences fonctionnelles darts cette trancbe de la population figte.
Plasma retinol and alpha-tocopherol levels in alcoholics before and after a withdrawal cure
R61e de la suppl6mentation en vitamine A et E dans la fibrog6n6se hdpatique d'un sujet atteint d'hypobdtalipoprotdin6mie familiale (HBLF)
Leeomte E 1, Herbeth B 1-2, Artur y1, Pirollet P.3, Paille F 3. 1Centre de Medecine Preventive, 2 avenue du Doyen Jacques Parisot, 54501 Vandoeuvre-les-Nancy, Cedex 1, France. 21NSERM U.115, 54500 Vandoeuvre-les-Nancy, France. aCentre d'Alcoologie, CHR, 54000 Nancy, France.
Gay G*, Roche JF*, Seoazec JY**, Bouma ME**, Feldman G**. * Service de M6decine Interne, H6pital St-Nicolas, Verdun, France. Laboratoire de Biologie cellulaire, INSERM U237, Facult6 de M6decine Xavier Bichat, Paris.
Despite an abundant literature about nutritional status of alcoholic patients, little is known about the effects of a withdrawal cure on the plasma levels of retinol and alpha-tocopheroL This study was conducted in 120 male alcoholics without evidence of severe liver disease, before and 21 says after admission in an alcoholism treatment unit, and in 658 healthy control men of the same age (25-60 years).
L'hypobttalipoprottintmie (HBL) est une anomalie congtnitale du transport et du mttabolisme des lipides secondaire it une mutation ou une dtl&ion du gtne de l'apoprot'eine B. Dans la forme homozygote, le tableau clinique complet associe un syndrome de malabsorption, un dtficit strique total en apolipoprottine B (apo B) et en LDL, des troubles neurologiques de dtmytlinisation attributs it l'absence de vitamines liposolubles. Des observations de fibrose et de cirrhose htpatique ont 6t6 rapport6es et le r61e toxique des triglyctrides It cha~me moyenne (TCM) suspectt. Nous rapportons l'observation d'une jeune femme de 21 ans, prtsentant une HBL homozygote qui dtveloppe une fibrose htpatique alors que les TCM ont 6t6 adrninistrts sur une courte durte inftrieure it un tools, tandis qu'une suppltmentation au long cours est institute en vitamine A (15000 UI/j) et vitamine E (alpha-tocopherol 1,5 g/l). La biopsie htpatique initiale montrait une sttatose htpatique, deux ans plus tard apparaissait une fibrose htpatique avec 616vation des taux tissulaires de vitamine A (ll00 ~tg/g) et E, alors que les tanx striques restaient effondrts (vitamine A : 700 mg/1 - vitamine E : l mg/1). Le rble toxique de la suppltmentation en vitamine A dolt 6tre envisag6 et faire proposer la surveillance rtgulitre des tests htpatiques, 6ventuellement complttts par un contr61e histologique.
Plasma retinol and t~-tocopherol were determined by a HPLC method, Before abstinence, ~t-tocopherol concentrations were lower in the alcoholics than in the control (p <_0.001), whereas retinol levels were similar in the two groups. After the 21 days abstinence period retinol levels decreased among alcoholics (p < 0.001) and were lower than control values (p >_0.001). No change of plasma ct-tocopherol was noticed, concentrations remaining under the control values. Moreover, after the abstinence period, plasma lipids, which are associated in fat soluble vitamin transportation, were significantly altered : triglyceride and apolipoprotein B concentration increased whereas apolipoprotein A decreased. After adjustement for plasma lipid levels, the drop of retinol concentration after the withdrawal cure remained significant (p < 0.05). this could indicate the resumption of vitamin A hepatic storage after the depression due to the previous alcoholisation period.
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