Collection et congélation des cellules souches sanguines au cours des leucémies aiguës non lymphoblastiques

Revue

Fran~aise

de Transfusion

Tome

XXIX

N ° 3 --

--

et I m m u n o - h 6 m a t o l o g i e

193

1986

Collection et cong61ation

des cellules souches sanguines au cours des leuc~mies aigu~s

non lymphoblastiques par J. Reiffers *, G. Vdzon **, Ph. Bernard ***,

A. Sarrat***, G. Marit**, B. David*, J. Chevaleyre **, A. Broustet * et J. Moulinier ** • Service des Maladies du Sang, CHR BORDEAUX, H6pital Haut-L6v6que. • * Centre Rdgional de Transfusion Sanguine de BORDEAUX.

• ** Laboratoire d'Hdmobiologie - CHR BORDEAUX, H6pital Haut-Ldv6que.

INTRODUCTION

A pr6sence dans le sang de p r & u r s e u r s hdmatopoi6tiques est connue depuis plusieurs ann6es chez 1animal et chez l h o m m e [1]. La capacit6 h6matopoi6tique des p r 6 c u r s e u r s sanguins a p u 6tre d6montr6e dans diff6rentes esp6ces anirnales [2, 3, 4] et chez l ' h o m m e dans la leucdmie mydloide c h r o n i q u e (L.M.C.) [5, 6]. Nous avons r 6 c e m m e n t m o n t r 6 que les cellules souches sanguines pr61evdes pendant la r6mission chez u n malade atteint de leuc6mie aigu~ n o n l y m p h o b l a s t i q u e (LANL) 6taient capables de r e s t a u r e r l'h6matopoi6se apr~s Cyclophosphamide (120 m g / k g ) et irradiation corporelle totale

L

Manuscrit re~u le 7-4-1986. -- Accept6 le 16-6-1986.

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REIFFERS

J. et coll.

(1 000 rad) [7, 8]. Ceci a r 6 c e m m e n t 6t6 confirm6 p a r KORaLINC c o l l . chez u n rnalade p r 6 s e n t a n t u n lyrnphorne de B u r k i t t [9] et p a r JUTTNER et co11. chez deux m a l a d e s atteints de LANL [10]. I1 p a r a i t donc possible d'utiliser les cellules souches sanguines en vue d ' a u t o g r e f f e p o u r le traiternent des h6rnopathies rnalignes. Chez u n s u j e t n o r m a l , ou chez u n rnalade atteint de LANL en r6mission, le h o m b r e de cellules souches sanguines circulantes est h a b i t u e l l e m e n t trbs h a s ; il est alors difficile de coUecter p a r cytaph6r~se un h o m b r e de cellules mononuc166es o u de p r 6 c u r s e u r s h6matopo~6tiques 6quivalent ~t celui r6cup6r6 dans u n pr61~vement de rnoelle osseuse r6alis6 en vue d'autogreffe. Cet obstacle p e u t 6tre c o n t o u r n 6 : dans les LANL, u n e c h i m i o t h 6 r a p i e intensive est suivie, apr6s la p h a s e d'aplasie, d ' u n e p6riode de r6g6n6ration rn6dullaire d u r a n t laquelle il existe u n e ~ recirculation ~ i m p o r t a n t e de pr6curseurs h6rnatopo~6tiques [11, 12]. Des cytaph6r6ses effectu6es p e n d a n t cette p6riode pr6cise devraient p e r r n e t t r e de collecter des cellules h6rnatopoi6tiques en quantit6 suffisante p o u r autogreffe. Nous r a p p o r t o n s ici n o t r e exp6rience de la collection de pr6curseurs granulo-rnonocytaires (CFM-GM) chez des m a l a d e s atteints de LANL. Les r6sultats confirrnent que l'on p e u t collecter ~ p a r t i r du sang u n nornbre v r a i s e r n b l a b l e m e n t suffisant de ceUules souches p o u r la r6alisation d ' u n e autogreffe. Ceci ne p o u r r a c e p e n d a n t 6tre d6rnontr6 que p a r la c o n s t a t a t i o n d ' u n e r e c o n s t i t u t i o n h6matopo~6tique c o m p l e t e et d u r a b l e chez plusieurs m a l a d e s greff6s avec des cellules sanguines apr~s u n c o n d i t i o n n e m e n t 6radicateur. et

MATERIEL ET M E T H O D E S

Malades (Tableau l) Une collection de cellules souches sanguines a 6t6 r6alis6e chez douze rnalades (8 h o m m e s , 4 femrnes) atteints de LANL d6finis selon les crit6res du g r o u p e rnorphologiques FAB. L'hge rn6dian des patients est de 23 arts (14-50 ans). La collection des cellules souches sanguines a 6t6 r6alis6e en prernibre r6mission c o m p l e t e (9 patients) ou en deuxi6me r6mission cornp16te (3 patients). Dix rnalades o n t 6t6 pr61ev6s p e n d a n t la p6riode de r6g6n6ration m6duUaire cons6cutive h une seule cure de chirnioth6rapie d ' i n d u c t i o n (6 rnalades), de consolidation (1 patient) ou d'intensification t a r d i v e (3 malades) d~s que les leucocytes 6taient sup6rieurs h 1 500 p a r rnrn 3 et les p l a q u e t t e s ~ 100 000 p a r m m 3. Deux a u t r e s p a t i e n t s ont 6t6 pr61ev6s au c o u r s de la prerni6re ann6e de rdmission complete, plus d ' u n

COLLECTION ET CONGELATION DES CELLULES SOUCHES SANGUINES

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mois aprbs la p h a s e de r6g6n6ration m6dullaire cons6cutive h une dernibre cure de chimioth6rapie.

Cytaph6r~ses Chez deux malades, les cellules souches sanguines ont 6t6 collect6es au m o y e n d'un s 6 p a r a t e u r de cellules h flux discontinu ( H a e m o n e t i c s Mod61e 30) selon u n e technique tr~s p r o c h e de celle utilis6e chez les m a l a d e s atteints de LMC [13]. Ces deux m a l a d e s ont b6n6fici6 de six h sept cytaph6r6ses r6alis6es en trois semaines, de 18 h 39 j o u r s apr~s la fin d'une c h i m i o t h 6 r a p i e d'intensification tardive de type DAT [8]. Les pr616vements ont 6t6 r6alis6s h l'aide d ' u n bol de centrifugation de 225 m l en utilisant I'ACD-A c o m m e anticoagulant. Le d6bit de sang r6g16 e n t r e 50 et 60 m l / r n n est diminu6 h 35 m l / m n lorsque la couche leuco-plaquettaire atteint une distance de 1 c m p a r r a p p o r t ~t l'orifice de sortie. Le pr61~vem e n t est alors d6riv6 dans une poche de recueil c o n t e n a n t 60 ml d'ACD-A. La collecte de la couche p l a q u e t t a i r e se fait p e n d a n t 45 secondes aprbs que l'on ait constat6 un r o s i s s e m e n t de la t u b u l u r e de collecte. Chaque s6ance de pr61bvement c o m p o r t e 8 cycles et d u r e environ 2 h 3 heures. P o u r les dix a u t r e s patients, la collection des p r 6 c u r s e u r s h6matopoi6tiques a 6t6 faite sur u n s 6 p a r a t e u r de cellules h flux continu (CS 3000). Cinq (3 patients) ou six (7 patients) cytaph6rbses ont 6t6 r6alis6es sur une p6riode de 10 ~t 29 j o u r s (m6diane = 11 jours) soit en m o y e n n e u n e cytaph6r~se tous les 2,5 jours. Les pr61bvements sont faits avec un p r o g r a m m e a u t o m a t i q u e de collecte de lymphocytes (lymphaph6rbse) destin6 h recueillir les cellules mononuc166es. L ' a n t i c o a g u l a n t utilis6 est I'ACD-A. La c h a m b r e de s6paration est celle destin6e h la collecte des granulocytes. Le d6bit de pr61bvement est de 50 m l / m n et la vitesse de centrifugation de 1 400 t o u r s / r a n . Le seuil de d6tecteur d ' i n t e r f a c e est de 150. Le v o l u m e de sang trait6 est de 9 /t 10 litres. A la fin de l'op6ration, les cellules recueillies sont r e m i s e s en suspension dans du p l a s m a autologue.

Cong61ation et stockage Quel que soit le s 6 p a r a t e u r de cellules utilis6 p o u r la collection des cellules souches, les techniques de cong61ation ont 6t6 trbs voisines de celles p r 6 c 6 d e m m e n t d6crites p o u r la c r y o p r 6 s e r v a t i o n des cellules sanguines pr61ev6es chez les m a l a d e s atteints de leuc6mie my61oide c h r o n i q u e [13]. Les concentr6s cellulaires sont centrifug6s

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RE1FFERS

Y. et coll.

(I 000 t o u r s / r a n ) & 4 ° p o u r 61iminer les plaquettes et, sans subir de modification p o u r Eliminer les granulocytes et les globules rouges, ils sont remis en suspension dans du p l a s m a isologue avant d'Etre diluEs volume h volume avec une solution de DMSO h 20 %. Aprbs a d j o n c t i o n du c r y o p r o t e c t e u r , la suspension cellulaire est transfErEe dans des ampoules de polypropyl~ne (5 ml) qui sont placEes dans l'enceinte d ' u n p r o g r a m m a t e u r a u t o m a t i q u e de congElation (Nicool 416). La congElation est rEalisEe h une vitesse de 2° C p a r m n jusqu'& - - 4 0 ° puis de 5° C p a r m n pusqu'& - - 1 4 0 °. Les tubes sont ensuite conserves dans l'azote liquide.

T e c h n i q u e s de culture La quantification des prdcurseurs granulo-monocytaires (CFU-GM) a 6t6 rdalisde darts le sang du malade avant c h a q u e cytaphEr~se (11 patients) et sur les concentrds leucocytaires avant et apr~s congdlation. Apr~s Elimination des hEmaties par sedimentation en gelatine (Plasmion®, Roger Bellon) les leucocytes n o n sdpards sont cultivds en simple souche d'Agar avec u n milieu conditionn6 d'origine placentaire. Pour chaque 6chantillon, six boites sont prEpardes, trois conten a n t 8 X 10a cellules, trois 1 X 105 cellules. Les colonies sont comptees au 10¢ j o u r de culture. La viabilit6 des cellules nuclddes ddcongeldes a dtd apprdcide p a r le test au T r y p a n Bleu.

Tdmoins Les rEsultats des cytaphErEses ont Et6 c o m p a r e s /~ ceux observes chez des donneurs volontaires a y a n t eu une cytaphEr~se h l'aide d ' u n s @ a r a t e u r de cellules ~t flux continu (10 cas) ou discontinu (11 cas).

RESULTATS Sujets n o r m a u x Onze sujets n o r m a u x ont bEnEficial d ' u n e collection de cellules souches hdmatopoidtiques sur H a e m o n e t i c s H 30. Le taux m o y e n de CFU-GM circulantes avant cytaphdr~ses est de 96,8 -_- 79,4 p a r m l ; le h o m b r e m o y e n de CFU-GM o b t e n u p a r cytaphEr~se est de 2,2 X lOs +- 2,2. Une cytaphEr~se a 6galement 6td rdalisde chez dix sujets n o r m a u x en utilisant le p r o g r a m m e <~lymphaphEr~se ~

C O L L E C T I O N E T C O N G E L A T I O N DES C E L L U L E S SOUCHES S A N G U I N E S

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du s 6 p a r a t e u r CS 3000. Avant cytaph6r6se, le taux m o y e n de CFU-GM circulants est de 87,3 --- 8,8 et le h o m b r e m o y e n de CFU-GM o b t e n u apr~s chaque cytaph6r~se est de 2 × 10 ~ -+ 2,2. P o u r u n adulte de 70 kg, le n o m b r e de CFU-GM o b t e n u serait donc voisin de 0,3 X 10~/ kg quel que soit le type de s 6 p a r a t e u r utilis6. Patients

Deux m a l a d e s ont b6n6fici6 de six et sept cytaph6r6ses sur H a e m o n e t i c s H 30 p e r m e t t a n t de recueillir u n taux de 7,7 et 7,8 × 108 cellules nucM6es p a r k i l o g r a m m e . Le h o m b r e total de CFU-GM collectds a 6t6 6valu6 apr6s d6congdlation des buffy-coats pr6c6demm e n t cryopr6serv6s. I1 est r e s p e c t i v e m e n t de 128,5 X 104/kg et de 9,3 × 104/kg soit p a r cytaph6r6se u n h o m b r e rnoyen de 21,3 et 1,3 × 104/kg. Cependant, c o m m e cela a 6t6 r d c e m m e n t r a p p o r t 6 , la plus g r a n d e p a r t i e des p r d c u r s e u r s g r a n u l o - m o n o c y t a i r e s (97 % et 80 %) a 6t6 pr61ev6e au cours des trois p r e m i e r e s cytaph6r~ses, soit e n t r e le 18~ et le 27 ~ j o u r s apr~s la fin de la c h i m i o t h d r a p i e [7] (Tab. I). Chez les huit m a l a d e s ayant bdn6fici6 de cytaph6r6ses sur CS 3000 l'issue d'une c h i m i o t h 6 r a p i e aplasiante, le h o m b r e total de cellules nucld6es et de p r d c u r s e u r s CFU-GM a 6t6 calculd avant cong61ation des buffy-coats. I1 est en m o y e n n e de 9,5 X 108/kg et de 60,9 × 104/kg. Le h o m b r e m o y e n p a r cytaph6r~se est r e s p e c t i v e m e n t de 1,65 × 108/ kg et de 10,8 × 104/kg. Le n o m b r e de cellules nuc166es pr61ev6es ne varie pas b e a u c o u p d ' u n e cytaph6rbse h l'autre, m a i s les pr6curseurs sont p a r f o i s collect6s de fagon tr~s diff6rente d'une c y t a p h 6 r & e h l ' a u t r e (Tab. II). L'6valuation des p r 6 c u r s e u r s CFU-GM a 6t6 faite apr~s d6cong61ation des buffy-coats chez six des huit m a l a d e s prdc6dents et c o m m e on l'a vu chez les ~ deux m a l a d e s pr61ev6s sur H a e m o n e t i c s H 30. Aprbs ddcongdlation, le n o m b r e m o y e n de CFU-GM collect~s p a r m a l a d e est de 38,5 × 10*/kg (5,3 - - 128) et p a r cytaph6r~se de 6,7 × 104/kg. Chez les m a l a d e s pr61ev6s en r6mission h distance de toute chimioth6rapie, le h o m b r e total de ceilules nuc166es est de 8,4 et 6,2 × 108/kg mais le h o m b r e de CFU-GM est faible, r e s p e c t i v e m e n t de 1,8 et 1,5 × 104/kg. Le n o m b r e m o y e n de CFU-GM o b t e n u p a r cytaph6r~se (0,3 et 0,25 × lOS/kg) n ' e s t p a s diff6rent de celui observ6 chez les sujets t6moins. Les rdsultats o b t e n u s aprbs d6cong61ation des p r o d u i t s de cytaph6r6se ont dt6 c o m p a r d s ~ ceux observ6s a v a n t cong61ation chez huit m a l a d e s dont les prdl~vements ont 6t6 effectu6s sur s 6 p a r a t e u r

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COLLECTION ET CONGELATION DES CELLULES SOUCHES SANGU1NES

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TABLEAUII Variation du nombre des CFU-GM recueilli par cytaphdr~se chez trois patients prdlevds dans les m~mes conditions : 5 cytaphdr~ses en 10 jours apr~s une m~me chimiothdrapie d'induction.

CY'rAPHI~R~SES N° 1

N° 2

N° 3

N° 4

N° 5

TOTAL

20,4 (8 %)

44,9 (18 %)

37,2 (15 %)

89,7 (35 %)

62,3 (24 %)

254,5 (100 %)

16,7 (12 %)

30,5 (22 %)

4,0 (3 %)

25,5 (18 %)

61,8 (45 O/o)

138,5 (100 %)

102,1 (37 %)

40,7 (15 %)

60,5 (22 %)

32,1 (12 %)

38,4 (14 %)

273,8 (100 % )

CS 3000. Apr6s ddcongdlation, le p o u r c e n t a g e de r d c u p 6 r a t i o n en cellules nucld6es est de 88 % (80 - - 96). La viabilit6 des cellules ddconge16es est en m o y e n n e de 86 % (66 - - 94) (29 tests).

DISCUSSION Les r d s u l t a t s q u e n o u s a v o n s o b t e n u s p o u r la collection des p r d c u r s e u r s CFU-GM chez les s u j e t s n o r m a u x s o n t a n a l o g u e s h ceux r e t r o u v d s p a r d ' a u t r e s a u t e u r s . U n h o m b r e m o y e n voisin de 2 × 105 CFU-GM (soit p r o c h e de 0,3 × 10~/kg) est o b t e n u darts c h a q u e p r o d u i t de c y t a p h d r 6 s e quel que soit le t y p e de s 6 p a r a t e u r de cellules utilisC Avec u n s 6 p a r a t e u r ~ flux d i s c o n t i n u , N ' G u y e n et P e r t h u i s o n t p u recueillir u n t a u x m o y e n de 1,9 × 105 CFU-GM p a r c o n c e n t r 6 t a n d i s q u e ABBOUD et co11. o b t e n a i e n t u n t a u x plus 61ev6 (15 X 105) qui p e u t & r e expliqu~ p a r t i e l l e m e n t p a r u n e f o r t e c o n c e n t r a t i o n de CFU-GM dans le s a n g a v a n t c y t a p h 6 r ~ s e (240 CFU-GM/ml) [14, 15]. Le s d p a r a t e u r /~ flux c o n t i n u de t y p e AMINCO a 6t6 utilis6 p a r p l u s i e u r s 6quipes diffdrentes avec des r d s u l t a t s assez voisin v a r i a n t de 2 h 8,7 × 105 CFU-GM p a r c o n c e n t r 6 [11, 16, 17]. Ces rdsultats ne s o n t d o n c p a s tr~s d i f f d r e n t s de ceux o b s e r v d s avec u n sdparat e u r de cellules g flux d i s c o n t i n u . Le s d p a r a t e u r ~ flux c o n t i n u de t y p e CS 3000 ( p r o g r a m m e l y m p h a p h d r ~ s e ) n ' a p a s e n c o r e 6t6 largem e n t utilis6 m a i s ses r d s u l t a t s ne s e m b l e n t p a s tr~s diffdrents de ceux o b s e r v 6 s avec d ' a u t r e s t y p e s de s 6 p a r a t e u r s cellules [18].

200

REIFFERS

Y. et coll.

Si la collection des cellules souches chez les d o n n e u r s sains a d6jh fait l'objet de n o m b r e u s e s publications, peu de donn6es sont h l'heure actuelle disponibles chez les malades p r 6 s e n t a n t une h6mopathie rnaligne. Lorsque les cytaph6r6ses sont r6alis6es chez u n patient en r4mission, h distance de route chimioth6rapie, nos r6sultats prdliminaires p o r t a n t sur deux patients semblent indiquer que l'on doit pouvoir recueillir u n n o m b r e de CFU-GM dquivalent h celui recueilli chez les donneurs sains. En s u p p o s a n t que la capacit6 h6matopoi4tique des cellules souches sanguines est 6quivalente celle des cellules m6dullaires, il faudrait donc 20 /t 30 cytaph6r~ses p o u r obtenir un taux de 10~ CFU-GM/kg habituellement consid6r6 c o m m e n4cessaire p o u r une autogreffe l o r s q u ' o n utilise un greffon m6dullaire n o n manipul6 [19]. A la suite des 6tudes de RICI~MAN et coll. chez les patients recevant une chimioth6rapie p o u r u n c a r c i n o m e rnammaire ou ovarien [20], To et coll. ont d 4 m o n t r 6 qu'il existait chez les patients atteints de LANL une tr6s forte recirculation des p r 6 c u r s e u r s CFUGM 2 h 3 semaines apr6s la fin de la chimiothdrapie intensive d ' i n d u c t i o n [11]. Ces r6sultats ont r d c e m m e n t 4t6 confirm6s p a r n o t r e groupe [12]. II n'est pas rare d ' o b s e r v e r un taux de CFU-GM 20 ~t 30 fois supdrieur ~ ce qui est not4 chez les sujets normaux. Cette recirculation des CFU-GM est transitoire (15 j o u r s environ) et paratt d ' a u t a n t plus i m p o r t a n t e que la chimioth6rapie administr6e pr4alablement a 6t6 intensive, e n t r a i n a n t une aplasie profonde, mais n o n obligatoirement longue. Une recirculation analogue est observ4e chez les malades b6n6ficiant p e n d a n t la rdmission d'une chimiothdrapie d'intensification tardive [12]. Par contre, elle est b e a u c o u p moins nette chez les malades dont la rdmission complete n'est obtenue qu'apr~s deux cures de chimioth6rapie d ' i n d u c t i o n [21]. Les cytaph6r~ses r6alis6es p e n d a n t la phase de recirculafion p e r m e t t e n t de r4colter un g r a n d n o m b r e de prog6niteurs hdmatopoidtiques. Le n o m b r e m o y e n de progdniteurs CFU-GM que nous avons o b t e n u p a r cytaphdr~se (6,7 × 104/kg) et calcul6 apr~s d6cong61ation des buffy-coats est environ 20 fois supdrieur ~ celui observ6 chez des donneurs n o r m a u x (0,3 × 104/kg). I1 est 16g6rement infdrieur au chiffre indiqu6 p a r To et coll. qui ont recueilli p a r cytaphdr6se un taux de 11 +- 2 × 104 CFU-GM/kg chez des patients atteints de LANL prdlevds au sortir d ' u n e chimioth4rapie d'induction, la diffdrence s'expliquant p r o b a b l e m e n t par le fait que les rdsultats de To et coll. ont dt6 calcul6s sur des produits frais et non apr6s ddcong61ation c o m m e dans n o t r e dtude. Par malade, le n o m b r e m o y e n de CFU-GM recueilli p a r 5 ~t 7 cytaphdr~ses est de 38,5 × 104/ kg et au moins dquivalent h celui qui est habituellement o b t e n u apr6s prdl~vement de moelle osseuse en vue de greffe [19].

COLLECTION" E T C O N G E L A T I O N DES C E L L U L E S SOUCHES S A N G U 1 N E S

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Enfin, les cellules sanguines ne s e m b l e n t pas plus fragiles aux ph4nom~nes de cong61ation-d6cong61ation que les cellules m6dullaires. Le p o u r c e n t a g e de viabilit6 est 61ev4 (en m o y e n n e 86 %). La capacit6 h 6 m a t o p o i 6 t i q u e des p r 6 c u r s e u r s sanguins dfcongel4s a 6t6 d 6 m o n t r 6 e chez l ' h o m m e dans la leuc6mie my61oide c h r o n i q u e [5, 6] et plus r 6 c e m m e n t chez des m a l a d e s atteints de l y m p h o m e m a l i n [9] ou de leuc4mie aigu~ [10]. I1 s e m b l e donc que les cellules souches sanguines p u i s s e n t ~tre utilis4es p o u r r 6 p a r e r l'h4motopoi~se aprbs u n t r a i t e m e n t supra-16thal c o m p o r t a n t une chimioth6rapie m a s s i v e et u n e i r r a d i a t i o n corporelle totale. J. REIFFERS,

Service des Maladies du Sang, Centre Francois Magendie, Groupe Hospitalier Sud, Avenue de Magellan 33604 P~SSAC RESUME Une collection de cellules souches sanguines a 6t6 r6alis6e chez 12 m a l a d e s atteints de leuc6mie aigu8 non l y m p h o b l a s t i q u e h l'aide d ' u n s 6 p a r a t e u r de cellules h flux continu (10 malades) ou discontinu (2 malades). Chez 10 des 12 malades, u n total de cinq h sept cytaph6r~ses a 4t6 r4alis6 sur u n e p6riode m 6 d i a n e de 11 j o u r s p e n d a n t la p h a s e de r6g4n6ration m6dullaire suivant u n e aplasie p r o f o n d e induite p a r une chimioth6rapie lourde. Le h o m b r e m o y e n de p r 6 c u r s e u r s granulo-monocytaires recueillis p a r cytaph6r6se est de 6,7 × 104/kg. I1 est p a r m a l a d e de 38,5 × 104/kg et 6quivalent celui o b t e n u lors d ' u n pr41~vement m6dullaire en vue d ' u n e greffe de moelle. Les cytaphgr~ses r4alis4es dans les conditions ainsi d6finies p e r m e t t e n t donc de collecter u n n o m b r e suffisant de CFU-GM p o u r la rdalisation d'une greffe autologue. SUMMARY Blood-derived h e m o p o i e t i c s t e m cells w e r e collected using a continuous (10 patients) or a semi-continuous flow s e p a r a t o r (2 patients) in s o m e patients w i t h acute non-lymphocytic leukemia. For ten out of those patients, five to seven l e u k a p h e r e s e s w e r e p e r f o r m e d during a s h o r t period (median = 11 days) of m a r r o w recovery following severe aplasia induced b y an intensive chemotherapy. The m e a n n u m b e r of CFU-GM cells collected p e r leuka-

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p h e r e s i s a n d p e r p a t i e n t r e s p e c t i v e l y w a s 6.7 × 104/kg a n d 38.5 × 104/ kg. T h i s l a t t e r n u m b e r w a s s i m i l a r t o t h a t o b t a i n e d d u r i n g a marrow harvest performed for a bone marrow transplantation, s u g g e s t i n g t h a t h i g h n u m b e r s o f h e m o p o i e t i c s t e m c e l l s c a n b e coll e c t e d f r o m t h e p e r i p h e r a l b l o o d in l e u k e m i c p a t i e n t s a n d u s e d f o r autologous transplantation.

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