Étude comparative analytique de deux méthodes de dosage des IgE spécifiques : ENEA System II® de CIS bio versus Immuno-Cap-Rast de Pharmacia

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comparative analytique de deux m6thodes de dosage des IgE sp6cifiques: ENEASystem II®de CIS bio versusImmuno-Cap-Rastde Pharmacia I. L A C R O I X , S. M O U L I N , F. D E W I L D E et J. S A I N T E - L A U D Y

Introduction De nombreuses m6thodes (1,2) permettent aujourd'hui la recherche des IgE sp6cifiques circulantes chez l'homme. Nous pr6sentons ici une 6tude analytique comparative entre la technique Immuno-Cap-Rast Pharmacia (1) (technique radioimmunologique) et la technique ENEA (Efficient New Enzymatic Allergy) System II ® (2) de CIS bio (technique immuno-enzymatique) pour les allerg6nes les plus fr6quemment rencontr6s lors de l'exploration de l'allergie respiratoire : d l , d2, e l , e2, g3, g6, h l .

I. Mat6riel et m6thodes

*

Les r~sultats rendus par les deux syst~mes de dosage des IgE sp~cifiques ~tudi~s sont exprim~s en classes, comme indiqu~ par chacun des fabricants. Les classes 4-5-6 Cap Pharmacia sont trait~es comme une seule classe (classe 4) de fagon obtenir le m~me nombre de classes.

• Recherche des lgE sp6cifiques par la t e c h n i q u e ENEA (2) Cette m~thode immuno-enzymatique est bas~e sur l'utilisation de : - un support solide, ou ACE (allergie chambre enzymatique), chambre en forme de U tapiss~e d'allerg~nes ; - un conjugu~ anti-lgE marqu~ par l'ur~ase ; - un substrat ur~e/bromocresol pourpre ; - la g a m m e est calibr~e d'apr~s le standard international de I'OMS, dispose d'une standardisation par famille d'allerg~nes, chacune ~tant m~morisable et permettant la d~finition de 4 classes de positivit~ (tableau II). TABLEAU I

1. S61ection d e s 6chantillons Cette ~tude comparative a ~t~ effectu~e sur 1 108 des s~rums d'adulte ou d'enfant regus au laboratoire pour des dosages d'IgE sp~cifiques pratiqu~s le jour m~me par la technique Immuno-Cap-Rast. Ces s~rums ont ~t~ ensuite test~s par la m~thode ENEA apr~s un d~lai maximum de conservation de 2 mois & - 20 °C.

2. Recherche des IgE sp~cifiques par la m6thode CapoRast Cette m~thode RIA est bas~e sur l'utilisation de : - une phase solide ou Immuno CAP, mousse de cellulose activ~e au bromure de cyanog~ne, sur laquelle sont fixes les allerg~nes ; - un traceur radioactif & l'iode 125, constitu~ d'un m~lange d'anticorps anti-lgE polyclonaux et monoclonaux ; - une g a m m e standard de 0,35 ~ 100 kUl/l calibr~e d'apr~s le standard de I'OMS de sp~cificit~ bouleau et permettant la d~finition de 6 classes de positivit~ (1) (tableau I). Les s6rums sont distribu~s par un automate Tecan 8000. Les phases d'incubation et d'ajout de r~actifs et de solution de lavage sont g~r~es sur les "Autocap". La lecture des r~sultats s'effectue apr~s comptage de la radioactivit~ sur des compteurs de radioactivit~ gamma. Le temps moyen d'analyse est de 5 heures pour 4 0 0 tests sur 210 s~rums. Le seuil de positivit~ est fix~ ~ 0,35 kUl/l. Revue frangaise des laboratoires, janvier 1996, N ° 281

0 1 2 3 4 5 6

< 0,35 0,35 - 0,70 0,7 - 3,5 3,5- 17,5 17,5 - 50,0 50,0 - 100,0 > 100,0

TABLEAU !I 0 1 2 3 4

< 0,35 0,35 - 0,70 0,7 - 3,5 3,5- 17,5 > 17,5

* Laboratoire Cerba 95066 VAL-D'OISE CEDEX 9 TIRF=S A P A R T M. F. B O U R O C[S bio international B.P. 3 2 - 9 1 1 9 2 GIF-SUR-YVETTE CEDEX

73

TABLEAU VI Epithelium de chien : e2

T A B L E A U I!i D e r m a t o p h a g o i d e s pteronyssinus : d l Pharmacia

o~

<

=~ <

0

1

2

3

0

83

19

6

1 2

12 1

4 3

8 20

3 4

0 0

0 0

Total

96

26

Pharmacia

4

Total

3

0

111

2 10

0 0

26 34

2 0

11 2

34 58

47 60

36

28

92

278

~

~:

0

1

0

71

1

6

2

0

4

0

108

6 10

1 5

1 3

17 21 11

o

0 2

5 0

4 3

2 8

Total

77

32

30

17

14

TABLEAU IV D e r m a t o p h a g o i d e s f a r i n a e : d2

T A B L E A U VII Dactyle pelotonn~ : g3

Pharmacia

Pharmacia

1 3

2 3

3 0

4 1

Total 38

0

0 36

1

18

5

9

2

0

34

1

15

2 3

2 0

2 0

10 3

15 7

4 16

33 26

~

2

N

3

4 To~l

0 51

0 10

0 25

3 27

16 37

19 150

4 Total

1

2

10 5

1 13

3 1 1

0

1

14

o 0

0 0

0 0

51

16

28

1

33

14 0

8 12

22 12

33

22

150

Pharmacia

1

2

3

4

Total

13 1 10 0 0 24

12 2 15 7 0 36

1 1 4 14 4 24

0 0 0 4 22 26

62 8 29 25 26 150

0

~

~

0 1

13 I0

2

1

3

o

4 Total

0 24

test~s

- Dermatophagoides pteronyssinus - Dermatophagoides farinae - ~pithelium de chat - epithelium de chien - dactyle pelotonne - phleole des pres - poussiere de maison Greer

sur sur sur sur sur sur sur

278 150 150 170 150 90 120

echantiUons echantillons echantillons echantillons echantillons echantillons echantillons

Les resultats sont presentes pour chaque allergene sous forme de tableau crois& Pour les 278 serums testes en d l , 176 sont classes de maniere identique, 90 presentent un &cart d'une classe, soit une exactitude de 96 %, 9 sont discordants & 2 classes d'ecart, 3 ~ 3 classes d'ecart (tableau III).

Total

17

Pharmacia 0

170

48 35

TABLEAU Vili P h l 6 o l e d e s pr6s : g 6

36 4 0 0 0 40

4

13

0 1

TABLEAU V Epithelium de chat : e l

2. R sultats

74

9

3 3

0

Le temps moyen d'analyse est de 4 heures pour 4 5 0 tests sur 60 serums. Le systeme effectue une gestion automatique de la distribution des &chantillons, des reactifs, de la solution de lavage, de la lecture des r&sultats et de la gestion des stocks d'allerg&nes.

-dl - d2 - eI - e2 - g3 - g6 - hl

24

3

0 31

• Allerg&nes

3

4

0

0 .m 1 ~ 2 3 4 Total

4

Total

2

1 2

2 0

3 0

4 0

Total 15

4 4 0 0 10

3 11 3 0 17

0 4 16 0 20

0 0 5 14 19

17 20 24 14 90

TABLEAU IX P o u s s i ~ r e d e m a i s o n gr~er : H1

Pharmacia

.m (3

1

<

3 4

Total

0

1

2

3

4

Total

20 13

6 0

1 6

0 0

0 0

27 19

0 0 0 33

4 1 1 12

22 12 0 41

5 14 9 28

0 2 4 6

31 29 14 120

Pour les 150 serums testes en d2, l'exactitude est de 90 % : 69 patients se trouvent dans la m&me classe et 69 ont 1 classe d'ecart. O n peut noter 11 serums discordants & 2 classes, 1 discordant & 4 classes (tableau IV). Pour e l , 88 patients sont classes de maniere identique et 48 une classe d'ecart, soit une exactitude de 9 1 % . 13 patients discordent & 2 classes d'ecart, 1 & 3 classes (tableau V). Pour e2, 96 patients sont classes identiquement et 54 presentent un ecart d'une classe (exactitude 88 %). 13 patients discordent & 2 classes d'ecart et 7 & 3 classes (tableau VI). En ce qui concerne les pollens, on note 97 % d'exactitude pour g3 (81 identiques, 64 & 1 classe, 3 & 2 classes, 2 & 3 classes) et 99 % pour g6 (58 identiques, 31 & 1 classe, 1 & 2 classes) (tableaux VII et VIII). Pour h l , l'exactitude est de 98 % (60 identiques, 57 & 1 classe, 2 A 2 classes, 1 & 3 classes) (tableau IX). Revue frangaise des laboratoires, janvier 1996, N ° 281

Sur l'ensemble des allerg&nes testes, l'exactitude cumulee est de 94 % sur 1 108 tests effectues. Les serums trouves discordants & 2 classes ou plus sont positifs dans 59 cas par la technique Pharmacia (5,3 % des tests), et dans 8 cas par la technique ENEA (0,7 %).

3. Discussion La recherche des IgE specifiques circulantes represente encore aujourd'hui un examen de base de l'exploration in vitro de l'allergie. Precedee obligatoirement d'anamnese orientee, cette recherche peut representer une aide efficace au diagnostic sachant qu'une recherche positive ne signe pas obligatoirement une allergie clinique mais peut n'&tre que le stigmate d'une sensibilisation immunologique et que, a contrario, une recherche negative n'exclut pas une allergie clinique vraie.

Revue frangaise des laboratoires, janvier 1996, N ° 281

La technique ENEA (2) permet une approche entierement automatisee de l'allergie (4 heures pour 450 tubes sur 60 serums). Cette &tude correlative preliminaire vis-&-vis du Cap radioimmunologique est en faveur de la bonne fiabilite de cette m&thode et se poursuivra par l'etude d'autres allergenes respiratoires et alimentaires.

BIBUOGRAPHIE

1. E W A N P.W., COOTE D. - Evaluation of a capsulated hydrophilic carrier polymer (the Immuno Cap) for measurement of specific IgE antibodies. Allergy, 1990, 4 5 : 22-29. 2. PLEBANI M., FAGGIAN D., B O R G H E S T A N F. - Full automation in allergy testing : measurement of specific IgE by the E N A System. Allergy, 1995, 5 0 : 229-233.

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