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Le facteur de transcription E2F1 contrôle le métabolisme du cholestérol via PCSK9 et participe au développement de la fibrose hépatique
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Congrès SFD 2017 – Lille
Les auteurs déclarent ne pas avoir d’intérêt direct ou indirect (financier ou en nature) avec un organisme privé, industriel ou commercial en relation avec le sujet présenté.
CO-4 Effet des dépôts de graisse ectopique sur la fonction cardiaque Ines Abdesselam(1) 1
NORT et CRMBM, Marseille, France.
*Auteur correspondant : [email protected]
Introduction Les dépôts de graisse ectopique tels que la stéatose myocardique et la graisse épicardique ont été associés à des altérations cardiovasculaires. Récemment, la stéatose hépatique a été retrouvée indépendamment associée à la fonction diastolique alors que la stéatose myocardique n’y était pas indépendamment associée. Peu d’études ont néanmoins évalué l’effet des trois dépôts en même temps. L’objectif de cette étude est de les étudier ensemble, et de déterminer s’ils sont associés aux paramètres de la fonction cardiaque, en plus des facteurs de risque déjà connus. Nous tenterons aussi de déterminer quel dépôt est le plus associé à la fonction cardiaque. Patients et Méthodes Cette étude a été réalisée sur une large cohorte de 119 sujets incluant des sujets obèses, des sujets diabétiques et des sujets contrôles. La moyenne d’âge de la population est de 45 ± 13 ans et l’IMC de 34,4 ± 10,0 kg/m2, et comprend 47 % de patients DT2 et 64 % de patients obèses. De plus, 5 % des patients ont un antécédent d’atteinte coronaire. Une IRM à 3T a été réalisée et comprenait : une évaluation de la fonction cardiaque (méthode Simpson), et une mesure du tissu adipeux épicardique (TAE) sur des coupes petit-axe, (séquence bSSFP) : ainsi qu’une quantification de l’accumulation des triglycérides dans le myocarde (CTGM) et dans le foie (CTGH) par spectroscopie de résonance magnétique proton 1H-MRS (séquence de type PRESS). Résultats Le CTGM, le CTGH et le TAE, augmentent avec l’IMC (r = 0,19 p = 0,04 ; r = 0,33 p = 0,002 ; r = 0,50 p < 0,0001 respectivement), et le diabète de type2 (r = 0,33, p = 0,0003 ; r = 0,52 p < 0,0001 ; r = 0,21 p = 0,02 respectivement). Cependant, ces trois dépôts ne sont pas liés entre eux. De plus, seul le MTGC est influencé par l’âge (r = 0,18 ; p < 0,0001). En analyse univariée, le volume télédiastolique indexé à la surface corporelle est inversement corrélé au CTGH (r = – 0,22 p = 0,02) et CTGM (r = – 0,24 p = 0,02). Le volume de battement indexé (SVi) est inversement corrélé au CTGM (r = – 0,23 p = 0,01), et le temps de remplissage du ventricule gauche (tPFR) est négativement corrélé au CTGH (r = – 0,30 p = 0,007). L’index de remodelage ventriculaire (LVm/EDV) est positivement corrélé au CTGM, CTGH et TAE (r = 0,19 p = 0,04 : r = 0,30 p = 0,007 : r = 0,31 p = 0,0006). L’analyse en régression multiple (avec les paramètres de la fonction cardiaque comme variable dépendante et l’âge, le sexe, l’IMC, le DT2 et les différents dépôts de graisse, comme variables indépendantes) montre que le sexe feminin, l’âge, et l’IMC sont négativement associés à l’EDVi, au SVi, et au LVm/EDV. Seul le CTGM est également indépendamment associé à ces paramètres (ß = – 0,18 p = 0,04 : ß = – 0,23 p = 0,02 : ß = – 0,30 p = 0,0006 respectivement). La fonction diastolique évaluée grâce au tPFR tend à être indépendamment associée au CTGH mais reste statistiquement non significative. Conclusions Ces résultats montrent que la stéatose myocardique est un paramètre indépendamment associé aux paramètres de la fonction cardiaque, même après ajustement aux facteurs de risques traditionnels. Par contre, le lien entre stéatose hépatique, tissu adipeux épicardique et fonction cardiaque disparaît après ajustement à l’IMC, au sexe et au DT2. Nos résultats suggèrent que l’accumulation de dérivés lipidiques dans le myocarde pourrait influer de façon locale la fonction cardiaque et avoir une importance physiopathologique dans la cardiomyopathie liée à l’obésité ou au diabète. Mots-Clés Obésité, Risque cardiovasculaire, Tissu adipeux Les auteurs déclarent ne pas avoir d’intérêt direct ou indirect (financier ou en nature) avec un organisme privé, industriel ou commercial en relation avec le sujet présenté.
CO-5 Concentrations plasmatiques de PCSK9 et incidence des évènements cardiovasculaires dans le diabète de type 2 Petra El Khoury(1), Ronan Roussel(2), Frédéric Fumeron(3), Gilberto Velho(2), Marie-Paule Jacob(1), Marianne Abi Fadel(4), Sandy El Bitar(1), Yoimna Ghaleb(1), Gabriel Steg(1), Louis Potier(2), Michel Marre(1), Catherine Boileau(2), Mathilde Varret(1), Boris Hansel(2)
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déficient en acides gras essentiels (huile de coco hydrogéné). L’absence de PPARbeta dans les hépatocytes inhibe la capacité du foie à réguler la biosynthèse des acides gras insaturés via la voie des désaturases (Scd1, Fads2) et élongases (Elovl6, Elovl5) qui est stimulée lors d’une carence alimentaire. Discussions : En conclusion, notre étude permet de mieux connaître les fonctions hépatocytaires de PPARbeta dans des conditions physiologiques et physiopathologiques. De plus, nos travaux identifient PPARbeta comme le premier récepteur aux acides gras agissant comme régulateur circadien de l’homéostasie des lipides en réponse aux variations qualitatives des apports alimentaires. Cette flexibilité hépatique est essentielle et dépend de PPARbeta, elle est perdue lors de l’obésité et du diabète de type 2. Mots-Clés Métabolisme des lipides, Pathologie hépatique, Obésité
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INSERM U1148, Paris, France, INSERM U1138, Paris, France, Hôpital Bichat-Claude Bernard, Paris, France, 4 Pharmacy’s School Dean at Beirut St Joseph University (USJ), Beyruth, Lebanon. 2 3
*Auteur correspondant : [email protected]
Introduction Le risque événements cardiovasculaires (CV) est élevé dans le diabète de type 2, en particulier quand il s’associe à une atteinte rénale. Les concentrations plasmatiques de proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 (PCSK9), une protéine sécrétée, impliquée dans le métabolisme du cholestérol, qui est la cible de médicaments hypolipémiants innovants et puissants, ont été associées avec la survenue événements cardiovasculaires dans une population âgée suédoise indépendamment des facteurs de risque classiques. Cependant, la valeur pronostique de PCSK9 est inconnue dans le diabète. Nous avons étudié l’association du PCSK9 plasmatique avec la survenue événements CV chez des diabétiques de type 2 albuminuriques. Patients et Méthodes La population était constituée de participants français (n = 2 912) à l’essai DIABHYCAR. Les concentrations plasmatiques de PCSK9 à l’inclusion ont été mesurées par immunofluorescence. Le critère principal comprenait les événements CV majeurs (« critère composite CV majeur ») : décès CV, infarctus du myocarde (IDM) non fatals, accidents vasculaires cérébraux ischémique (AVC), hospitalisations pour insuffisance cardiaque (IC). Ce « critère composite CV majeur » constitue la composante CV du critère principal, cardiorénal (événements CV majeurs et insuffisance rénale terminale), de DIABHYCAR. Des analyses de critères secondaires (AVC, IDM, Décès CV et « tous événements CV ») ont aussi été effectuées. La relation entre la concentration plasmatique de PCSK9 (analysée en variable continue et en tertiles) a été réalisée en analyse multivariée par un modèle de cox. Résultats À l’inclusion, les concentrations plasmatiques de PCSK9 étaient positivement associées avec la cholestérolémie totale, le LDL-C, le HDL-C, et négativement associées avec l’indice de masse corporel (IMC) et la CRP ultrasensible. Au cours du suivi (médiane : 4,5 ans), 647 événements CV sont survenus et 196 personnes sont décédées de cause CV. En analyse de Cox, après ajustement sur les facteurs de risque cardiométaboliques et les variables associées à PCSK9 à l’inclusion (sexe, âge, IMC, tabagisme, cholestérol total, HDLC, triglycérides, CRP ultrasensible, HbA1c, Pression artérielle systolique, débit de filtration glomérulaire (estimation MDRD), traitements médicamenteux, origine géographique), les concentrations de PCSK9 étaient associées avec l’incidence du critère cardiorénal, HR pour une unité de log (PCSK9) : 1,26 (IC 95 % : 1,05-1,53), du « critère composite CV majeur », HR : 1,28 (1,06 –, 55), de l’IDM, HR : 1,66 (1,05-2,63), et de « tous événements CV », HR : 1,22 (1,04-1,44), Elle n’était pas associée avec la mort CV. Des données similaires étaient observées en analysant les événements CV selon les tertiles de PCSK9. Conclusions Cette étude révèle pour la première fois une association positive significative entre la concentration plasmatique de PCSK9 et l’incidence des événements CV chez des diabétiques de type 2 à très haut risque, indépendamment des autres facteurs de risque y compris les concentrations lipidiques mesurées en routine. Mots-Clés Maladie cardiovasculaire, PCSK9, Maladie coronarienne Les auteurs déclarent avoir un intérêt avec un organisme privé, industriel ou commercial en relation avec le sujet présenté. Précision : Boris HANSEL a reçu des honoraires de la part des laboratoires A mgen et Sanofi pour sa participation à une conférence et à un groupe de travail sur les programme d’apprentissage. Dr. ROUSSEL reports grants from A mgen, grants from sanofi
CO-6 Le facteur de transcription E2F1 contrôle le métabolisme du cholestérol via PCSK9 et participe au développement de la fibrose hépatique Pierre-Damien Denechaud(1), Qiuwen Lai(1), Cédric Le May(2), Albert Giralt(1), Bertrand Cariou(2), Lluis Fajas(1) 1
Université de Lausanne, Lausanne, Switzerland, IRT-UN, L’institut duThorax Unité Inserm UMR 1087/CNRS UMR 6291, Nantes, France.
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*Auteur correspondant : [email protected]
Introduction Ces vingt dernières années, la stéatose hépatique non alcoolique (NAFLD) et la stéato-hépatite non alcoolique (NASH) représentent la cause numéro une de maladie hépatique dans les pays occidentaux. Le foie est un organe central pour le métabolisme du cholestérol dont l’accumulation hépatique pourrait conduire au développement de la NASH. Dans notre laboraDiabetes Metab 2017, 43, A1-A36
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toire, nous travaillons sur les rôles métaboliques du facteur de transcription E2F1, principalement connue pour son rôle dans le contrôle du cycle cellulaire. Nous avons ainsi pu mettre en évidence son importance dans l’homéostasie du cholestérol et le développement de la fibrose hépatique, via la régulation de PCSK9. Matériels et Méthodes Afin d’évaluer l’importance de E2F1 sur le métabolisme du cholestérol, nous avons étudié les souris invalidées pour E2F1. L’influence d’un excès de cholestérol a été déterminée en soumettant ces souris à un régime de type athérogénique, riche en cholestérol. L’analyse du ChIP-seq de E2F1 en hépatocytes nous a permis de déterminer ses cibles directes qui ont été validé par des études de promoteurs en cellule. L’importance de PCSK9 dans le phénotype hépatique de E2F1 a été déterminée en ré-exprimant PCSK9 (via un adénovirus) dans le foie des souris E2F1-/-. Nous avons également étudié les souris PCSK9-/- sous régime riche en cholestérol. Les modèles cellulaires d’hépatocytes de souris et de lignée HepG2 invalidés pour E2F1 nous ont permis de déterminer les mécanismes cellulaires mis en jeu. Résultats Les souris E2F1-/- présentent une diminution du cholestérol plasmatique ainsi qu’une augmentation du cholestérol hépatique. Nous avons montré que la délétion de E2F1, chez la souris et dans les modèles cellulaires d’hépatocytes utilisés, conduit à une réduction de l’expression de PCSK9. En effet, E2F1 contrôle directement l’expression de PCSK9 au niveau de son promoteur. Ainsi, en accord avec le rôle de PCSK9, nous avons observé une augmentation du récepteur aux LDL conduisant à une capture plus importante de LDLcholestérol par les hépatocytes de souris E2F1-/- que les hépatocytes de souris contrôle. De manière intéressante, les souris E2F1-/- nourries sur un régime riche en cholestérol pendant 5 semaines développent une stéatose et une fibrose hépatique plus importante que les souris contrôle. Ce phénotype est prévenu en ré-exprimant PCSK9 dans le foie des souris E2F1-/-. Actuellement, nous déterminons si l’invalidation de PCSK9, à elle seule, peut également conduire à un développement précoce de la fibrose hépatique grâce au modèle de souris PCSK9-/-. Conclusions En résumé, notre étude révèle un nouveau rôle métabolique du facteur du cycle cellulaire E2F1 dans le métabolisme du cholestérol et dans le développement de la fibrose hépatique en réponse à un régime riche en cholestérol. Non seulement nous décrivons un nouveau régulateur de PCSK9 dont des inhibiteurs ont été récemment développés pour le traitement de l’hypercholestérolémie chez l’homme, mais également nous mettons en évidence, pour la première fois, les problèmes hépatiques potentielles qui pourraient résulter de cette inhibition. Mots-Clés Pathologie hépatique, Hypercholestérolémie, Métabolisme des lipides Les auteurs déclarent ne pas avoir d’intérêt direct ou indirect (financier ou en nature) avec un organisme privé, industriel ou commercial en relation avec le sujet présenté.
CO-7 Dédifférenciation de la cellule bêta pancréatique humaine Marc Diedisheim(1), Masaya Oshima(1), Olivier Albagli(1), Fabrice Chimienti(2), Raphaël Scharfmann(1) 1
INSERM U1016 UMR CNRS 8104, Institut Cochin, Université Paris Descartes, Paris, France, Cardiovascular and Metabolic Diseases, Innovative Medicines and Early Development Biotech Unit AstraZeneca R&D, Molndal, Sweden.
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*Auteur correspondant : [email protected]
Introduction Le diabète de type 2 résulte en partie de la diminution de la masse fonctionnelle de cellules bêta pancréatiques. Ce phénomène résulte d’une diminution de la sécrétion d’insuline par la cellule bêta et d’une diminution du nombre de cellules par mort cellulaire. Un troisième facteur possible serait la dédifférenciation cellulaire : les cellules bêta resteraient présentes, mais leur production d’insuline s’effondrerait. Si ce phénomène est avéré chez la souris, il n’existe que quelques arguments très indirects chez l’Homme. La modélisation de ce phénomène dans des cellules bêta humaines est primordiale pour mieux appréhender le développement du diabète de type 2. Matériels et Méthodes Nous avons modélisé le phénomène de dédifférenciation dans la lignée de cellules bêta humaines EndoC-βH1 à partir d’un screen de molécules. Nous avons étudié à grande échelle les voies de signalisation impliquées par la technique RNA Seq, et avons ensuite étudié le phénotype cellulaire des cellules dédifférenciées, puis confirmé ces observations sur plusieurs préparations enrichies en ilots pancréatiques, prélevés sur des individus en état de mort cérébrale. Enfin nous avons étudié si la dédifférenciation protégeait les cellules bêta de stress cellulaires. Résultats Nous avons identifié qu’un traitement des cellules EndoC-βH1 par le fibroblast growth factor 2 (FGF2) diminuait de manière drastique la production d’insuline sans modification significative du nombre de cellules, ainsi qu’un effondrement de l’expression de plusieurs gènes spécifiques de la cellule bêta : facteur de transcription de l’insuline MAFA, transporteur de glucose GLUT2, transporteur de zinc ZnT8. Parallèlement, nous avons identifié une induction majeure de marqueurs normalement absents d’une cellule bêta :
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© 2017. Elsevier Masson SAS. Tous droits réservés.
autre hormone pancréatique (somatostatine x10), facteurs de transcription propres aux progéniteurs pancréatiques et cellules canalaires (HES1 x50, SOX9 x100, c-MYC x10, NEUROG3 x200). Ces resultats sont en ligne avec avec ceux obtenus en NGS (next generation Sequencing). Nous avons confirmé ces résultats obtenus en ARNm au niveau protéique pour plusieurs de ces marqueurs. Nous avons également reproduit une partie de ces résultats sur des ilots pancréatiques humaines : un traitement par FGF2 durant 72h effondre l’expression de MAFA, et induit une co-expression de SOX9 dans des cellules endocrines, comme en témoigne l’apparition de cellules doubles positives chromogranine A – SOX9, marquages absents dans les ilots contrôles. Enfin, nous avons démontré que la dédifférenciation suite au traitement par FGF2 protégeait les cellules EndoC-βH1 du stress cellulaire induit par RANKL, par l’intermédiaire d’une sécrétion d’OPG (TNFRSF11B). Conclusions Nous avons développé un modèle robuste de dédifférenciation de cellules bêta pancréatiques humaines, permettant d’affirmer cette dédifférenciation et d’étudier les mécanismes impliqués. À terme, ce projet devrait nous permettre d’identifier de nouvelles molécules et de nouvelles voies de signalisation impliquées dans le maintien de la production de l’insuline par les cellules bêta pancréatiques humaines. Ces découvertes permettront d’avancer dans la compréhension de la physiopathogénie du diabète de type 2, et éventuellement de définir des candidats à une nouvelle classe thérapeutique anti-diabétique. Mots-Clés Ilot pancréatique, Insuline, Pancréas Les auteurs déclarent ne pas avoir d’intérêt direct ou indirect (financier ou en nature) avec un organisme privé, industriel ou commercial en relation avec le sujet présenté.
CO-8 Le transfert de microRNAs par les exosomes des cellules immunitaires aux cellules bêta pancréatiques contribue au développement du diabète de type 1 Claudiane Guay(1) 1
Université de Lausanne, Lausanne, Switzerland.
*Auteur correspondant : [email protected]
Introduction Le diabète de type 1 est déclenché par l’infiltration des îlots de Langerhans par des lymphocytes qui induisent la mort des cellules bêta. Les lymphocytes relâchent des cytokines pro-inflammatoires, mais aussi des exosomes dont le contenu en microRNAs est transféré sous forme active à d’autres cellules. Puisque pendant les premières phases de la maladie les lymphocytes et les cellules bêta sont en étroite proximité, nous avons émis l’hypothèse que le transfert de microRNAs des lymphocytes aux cellules bêta contribuerait au dysfonctionnement des cellules insulinosécrétrices et au développement du diabète. Matériels et Méthodes Les exosomes ont été isolées par ultra-centrifugation à partir du milieu de culture de cellules T (Jurkat ou lymphocytes T de souris NOD). Ces microvésicules ont été utilisées pour étudier le transfert de microRNAs des cellules immunitaires aux cellules bêta, ainsi que leur impact fonctionnel. Pour les expériences in vivo, nous avons généré un virus AAV exprimant sous le contrôle du promoteur à insuline un transcrit capable de séquestrer et d’inhiber l’action des microRNAs d’intérêt dans les cellules bêta. Résultats Nous avons observé que l’expression de 3 microRNAs caractéristiques des cellules T, miR-142-3p, miR-142-5p et miR-155, est augmentée dans les îlots de souris NOD durant la progression de l’insulite. Ces microRNAs sont relâchés dans les exosomes des cellules T et peuvent être transférés aux cellules bêta. L’incubation des îlots en présence des exosomes des cellules T conduit à une induction de l’apoptose des cellules bêta, sans affecter les cellules alpha. Cette augmentation de la mort cellulaire a pu être reproduite en surexprimant directement les microRNAs d’intérêts dans les cellules bêta ou, à l’opposée, être prévenue en transfectant les cellules receveuses avec des antimiRs inhibant miR-142-3p/-5p ou miR-155. Afin de déterminer la relevance de ce phénomène pour le développement du diabète de type 1, nous avons injecté des souris NOD pré-diabétiques avec l’AAV capable d’inhiber l’action des microRNAs transférés dans les cellules bêta. L’inactivation de ces microRNAs a permis de diminuer l’inflammation et le recrutement des lymphocytes T dans les îlots de souris NOD âgées de 8 et 32 semaines et, en parallèle, de réduire l’incidence du diabète. Conclusions Les résultats obtenus indiquent que le transfert de microRNAs des cellules T aux cellules bêta conduit au dysfonctionnement des cellules insulinosécrétrices dans le contexte du diabète de type 1. Ils supportent aussi le concept que le transfert des microRNAs via les exosomes constitue un nouveau mécanisme de communication intercellulaire. Mots-Clés Micro-ARN, Ilot pancréatique, Exosomes Les auteurs déclarent ne pas avoir d’intérêt direct ou indirect (financier ou en nature) avec un organisme privé, industriel ou commercial en relation avec le sujet présenté.
Congrès SFD 2017 – Lille
Les auteurs déclarent ne pas avoir d’intérêt direct ou indirect (financier ou en nature) avec un organisme privé, industriel ou commercial en relation avec le sujet présenté.
CO-4 Effet des dépôts de graisse ectopique sur la fonction cardiaque Ines Abdesselam(1) 1
NORT et CRMBM, Marseille, France.
*Auteur correspondant : [email protected]
Introduction Les dépôts de graisse ectopique tels que la stéatose myocardique et la graisse épicardique ont été associés à des altérations cardiovasculaires. Récemment, la stéatose hépatique a été retrouvée indépendamment associée à la fonction diastolique alors que la stéatose myocardique n’y était pas indépendamment associée. Peu d’études ont néanmoins évalué l’effet des trois dépôts en même temps. L’objectif de cette étude est de les étudier ensemble, et de déterminer s’ils sont associés aux paramètres de la fonction cardiaque, en plus des facteurs de risque déjà connus. Nous tenterons aussi de déterminer quel dépôt est le plus associé à la fonction cardiaque. Patients et Méthodes Cette étude a été réalisée sur une large cohorte de 119 sujets incluant des sujets obèses, des sujets diabétiques et des sujets contrôles. La moyenne d’âge de la population est de 45 ± 13 ans et l’IMC de 34,4 ± 10,0 kg/m2, et comprend 47 % de patients DT2 et 64 % de patients obèses. De plus, 5 % des patients ont un antécédent d’atteinte coronaire. Une IRM à 3T a été réalisée et comprenait : une évaluation de la fonction cardiaque (méthode Simpson), et une mesure du tissu adipeux épicardique (TAE) sur des coupes petit-axe, (séquence bSSFP) : ainsi qu’une quantification de l’accumulation des triglycérides dans le myocarde (CTGM) et dans le foie (CTGH) par spectroscopie de résonance magnétique proton 1H-MRS (séquence de type PRESS). Résultats Le CTGM, le CTGH et le TAE, augmentent avec l’IMC (r = 0,19 p = 0,04 ; r = 0,33 p = 0,002 ; r = 0,50 p < 0,0001 respectivement), et le diabète de type2 (r = 0,33, p = 0,0003 ; r = 0,52 p < 0,0001 ; r = 0,21 p = 0,02 respectivement). Cependant, ces trois dépôts ne sont pas liés entre eux. De plus, seul le MTGC est influencé par l’âge (r = 0,18 ; p < 0,0001). En analyse univariée, le volume télédiastolique indexé à la surface corporelle est inversement corrélé au CTGH (r = – 0,22 p = 0,02) et CTGM (r = – 0,24 p = 0,02). Le volume de battement indexé (SVi) est inversement corrélé au CTGM (r = – 0,23 p = 0,01), et le temps de remplissage du ventricule gauche (tPFR) est négativement corrélé au CTGH (r = – 0,30 p = 0,007). L’index de remodelage ventriculaire (LVm/EDV) est positivement corrélé au CTGM, CTGH et TAE (r = 0,19 p = 0,04 : r = 0,30 p = 0,007 : r = 0,31 p = 0,0006). L’analyse en régression multiple (avec les paramètres de la fonction cardiaque comme variable dépendante et l’âge, le sexe, l’IMC, le DT2 et les différents dépôts de graisse, comme variables indépendantes) montre que le sexe feminin, l’âge, et l’IMC sont négativement associés à l’EDVi, au SVi, et au LVm/EDV. Seul le CTGM est également indépendamment associé à ces paramètres (ß = – 0,18 p = 0,04 : ß = – 0,23 p = 0,02 : ß = – 0,30 p = 0,0006 respectivement). La fonction diastolique évaluée grâce au tPFR tend à être indépendamment associée au CTGH mais reste statistiquement non significative. Conclusions Ces résultats montrent que la stéatose myocardique est un paramètre indépendamment associé aux paramètres de la fonction cardiaque, même après ajustement aux facteurs de risques traditionnels. Par contre, le lien entre stéatose hépatique, tissu adipeux épicardique et fonction cardiaque disparaît après ajustement à l’IMC, au sexe et au DT2. Nos résultats suggèrent que l’accumulation de dérivés lipidiques dans le myocarde pourrait influer de façon locale la fonction cardiaque et avoir une importance physiopathologique dans la cardiomyopathie liée à l’obésité ou au diabète. Mots-Clés Obésité, Risque cardiovasculaire, Tissu adipeux Les auteurs déclarent ne pas avoir d’intérêt direct ou indirect (financier ou en nature) avec un organisme privé, industriel ou commercial en relation avec le sujet présenté.
CO-5 Concentrations plasmatiques de PCSK9 et incidence des évènements cardiovasculaires dans le diabète de type 2 Petra El Khoury(1), Ronan Roussel(2), Frédéric Fumeron(3), Gilberto Velho(2), Marie-Paule Jacob(1), Marianne Abi Fadel(4), Sandy El Bitar(1), Yoimna Ghaleb(1), Gabriel Steg(1), Louis Potier(2), Michel Marre(1), Catherine Boileau(2), Mathilde Varret(1), Boris Hansel(2)
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déficient en acides gras essentiels (huile de coco hydrogéné). L’absence de PPARbeta dans les hépatocytes inhibe la capacité du foie à réguler la biosynthèse des acides gras insaturés via la voie des désaturases (Scd1, Fads2) et élongases (Elovl6, Elovl5) qui est stimulée lors d’une carence alimentaire. Discussions : En conclusion, notre étude permet de mieux connaître les fonctions hépatocytaires de PPARbeta dans des conditions physiologiques et physiopathologiques. De plus, nos travaux identifient PPARbeta comme le premier récepteur aux acides gras agissant comme régulateur circadien de l’homéostasie des lipides en réponse aux variations qualitatives des apports alimentaires. Cette flexibilité hépatique est essentielle et dépend de PPARbeta, elle est perdue lors de l’obésité et du diabète de type 2. Mots-Clés Métabolisme des lipides, Pathologie hépatique, Obésité
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INSERM U1148, Paris, France, INSERM U1138, Paris, France, Hôpital Bichat-Claude Bernard, Paris, France, 4 Pharmacy’s School Dean at Beirut St Joseph University (USJ), Beyruth, Lebanon. 2 3
*Auteur correspondant : [email protected]
Introduction Le risque événements cardiovasculaires (CV) est élevé dans le diabète de type 2, en particulier quand il s’associe à une atteinte rénale. Les concentrations plasmatiques de proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 (PCSK9), une protéine sécrétée, impliquée dans le métabolisme du cholestérol, qui est la cible de médicaments hypolipémiants innovants et puissants, ont été associées avec la survenue événements cardiovasculaires dans une population âgée suédoise indépendamment des facteurs de risque classiques. Cependant, la valeur pronostique de PCSK9 est inconnue dans le diabète. Nous avons étudié l’association du PCSK9 plasmatique avec la survenue événements CV chez des diabétiques de type 2 albuminuriques. Patients et Méthodes La population était constituée de participants français (n = 2 912) à l’essai DIABHYCAR. Les concentrations plasmatiques de PCSK9 à l’inclusion ont été mesurées par immunofluorescence. Le critère principal comprenait les événements CV majeurs (« critère composite CV majeur ») : décès CV, infarctus du myocarde (IDM) non fatals, accidents vasculaires cérébraux ischémique (AVC), hospitalisations pour insuffisance cardiaque (IC). Ce « critère composite CV majeur » constitue la composante CV du critère principal, cardiorénal (événements CV majeurs et insuffisance rénale terminale), de DIABHYCAR. Des analyses de critères secondaires (AVC, IDM, Décès CV et « tous événements CV ») ont aussi été effectuées. La relation entre la concentration plasmatique de PCSK9 (analysée en variable continue et en tertiles) a été réalisée en analyse multivariée par un modèle de cox. Résultats À l’inclusion, les concentrations plasmatiques de PCSK9 étaient positivement associées avec la cholestérolémie totale, le LDL-C, le HDL-C, et négativement associées avec l’indice de masse corporel (IMC) et la CRP ultrasensible. Au cours du suivi (médiane : 4,5 ans), 647 événements CV sont survenus et 196 personnes sont décédées de cause CV. En analyse de Cox, après ajustement sur les facteurs de risque cardiométaboliques et les variables associées à PCSK9 à l’inclusion (sexe, âge, IMC, tabagisme, cholestérol total, HDLC, triglycérides, CRP ultrasensible, HbA1c, Pression artérielle systolique, débit de filtration glomérulaire (estimation MDRD), traitements médicamenteux, origine géographique), les concentrations de PCSK9 étaient associées avec l’incidence du critère cardiorénal, HR pour une unité de log (PCSK9) : 1,26 (IC 95 % : 1,05-1,53), du « critère composite CV majeur », HR : 1,28 (1,06 –, 55), de l’IDM, HR : 1,66 (1,05-2,63), et de « tous événements CV », HR : 1,22 (1,04-1,44), Elle n’était pas associée avec la mort CV. Des données similaires étaient observées en analysant les événements CV selon les tertiles de PCSK9. Conclusions Cette étude révèle pour la première fois une association positive significative entre la concentration plasmatique de PCSK9 et l’incidence des événements CV chez des diabétiques de type 2 à très haut risque, indépendamment des autres facteurs de risque y compris les concentrations lipidiques mesurées en routine. Mots-Clés Maladie cardiovasculaire, PCSK9, Maladie coronarienne Les auteurs déclarent avoir un intérêt avec un organisme privé, industriel ou commercial en relation avec le sujet présenté. Précision : Boris HANSEL a reçu des honoraires de la part des laboratoires A mgen et Sanofi pour sa participation à une conférence et à un groupe de travail sur les programme d’apprentissage. Dr. ROUSSEL reports grants from A mgen, grants from sanofi
CO-6 Le facteur de transcription E2F1 contrôle le métabolisme du cholestérol via PCSK9 et participe au développement de la fibrose hépatique Pierre-Damien Denechaud(1), Qiuwen Lai(1), Cédric Le May(2), Albert Giralt(1), Bertrand Cariou(2), Lluis Fajas(1) 1
Université de Lausanne, Lausanne, Switzerland, IRT-UN, L’institut duThorax Unité Inserm UMR 1087/CNRS UMR 6291, Nantes, France.
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*Auteur correspondant : [email protected]
Introduction Ces vingt dernières années, la stéatose hépatique non alcoolique (NAFLD) et la stéato-hépatite non alcoolique (NASH) représentent la cause numéro une de maladie hépatique dans les pays occidentaux. Le foie est un organe central pour le métabolisme du cholestérol dont l’accumulation hépatique pourrait conduire au développement de la NASH. Dans notre laboraDiabetes Metab 2017, 43, A1-A36
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toire, nous travaillons sur les rôles métaboliques du facteur de transcription E2F1, principalement connue pour son rôle dans le contrôle du cycle cellulaire. Nous avons ainsi pu mettre en évidence son importance dans l’homéostasie du cholestérol et le développement de la fibrose hépatique, via la régulation de PCSK9. Matériels et Méthodes Afin d’évaluer l’importance de E2F1 sur le métabolisme du cholestérol, nous avons étudié les souris invalidées pour E2F1. L’influence d’un excès de cholestérol a été déterminée en soumettant ces souris à un régime de type athérogénique, riche en cholestérol. L’analyse du ChIP-seq de E2F1 en hépatocytes nous a permis de déterminer ses cibles directes qui ont été validé par des études de promoteurs en cellule. L’importance de PCSK9 dans le phénotype hépatique de E2F1 a été déterminée en ré-exprimant PCSK9 (via un adénovirus) dans le foie des souris E2F1-/-. Nous avons également étudié les souris PCSK9-/- sous régime riche en cholestérol. Les modèles cellulaires d’hépatocytes de souris et de lignée HepG2 invalidés pour E2F1 nous ont permis de déterminer les mécanismes cellulaires mis en jeu. Résultats Les souris E2F1-/- présentent une diminution du cholestérol plasmatique ainsi qu’une augmentation du cholestérol hépatique. Nous avons montré que la délétion de E2F1, chez la souris et dans les modèles cellulaires d’hépatocytes utilisés, conduit à une réduction de l’expression de PCSK9. En effet, E2F1 contrôle directement l’expression de PCSK9 au niveau de son promoteur. Ainsi, en accord avec le rôle de PCSK9, nous avons observé une augmentation du récepteur aux LDL conduisant à une capture plus importante de LDLcholestérol par les hépatocytes de souris E2F1-/- que les hépatocytes de souris contrôle. De manière intéressante, les souris E2F1-/- nourries sur un régime riche en cholestérol pendant 5 semaines développent une stéatose et une fibrose hépatique plus importante que les souris contrôle. Ce phénotype est prévenu en ré-exprimant PCSK9 dans le foie des souris E2F1-/-. Actuellement, nous déterminons si l’invalidation de PCSK9, à elle seule, peut également conduire à un développement précoce de la fibrose hépatique grâce au modèle de souris PCSK9-/-. Conclusions En résumé, notre étude révèle un nouveau rôle métabolique du facteur du cycle cellulaire E2F1 dans le métabolisme du cholestérol et dans le développement de la fibrose hépatique en réponse à un régime riche en cholestérol. Non seulement nous décrivons un nouveau régulateur de PCSK9 dont des inhibiteurs ont été récemment développés pour le traitement de l’hypercholestérolémie chez l’homme, mais également nous mettons en évidence, pour la première fois, les problèmes hépatiques potentielles qui pourraient résulter de cette inhibition. Mots-Clés Pathologie hépatique, Hypercholestérolémie, Métabolisme des lipides Les auteurs déclarent ne pas avoir d’intérêt direct ou indirect (financier ou en nature) avec un organisme privé, industriel ou commercial en relation avec le sujet présenté.
CO-7 Dédifférenciation de la cellule bêta pancréatique humaine Marc Diedisheim(1), Masaya Oshima(1), Olivier Albagli(1), Fabrice Chimienti(2), Raphaël Scharfmann(1) 1
INSERM U1016 UMR CNRS 8104, Institut Cochin, Université Paris Descartes, Paris, France, Cardiovascular and Metabolic Diseases, Innovative Medicines and Early Development Biotech Unit AstraZeneca R&D, Molndal, Sweden.
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*Auteur correspondant : [email protected]
Introduction Le diabète de type 2 résulte en partie de la diminution de la masse fonctionnelle de cellules bêta pancréatiques. Ce phénomène résulte d’une diminution de la sécrétion d’insuline par la cellule bêta et d’une diminution du nombre de cellules par mort cellulaire. Un troisième facteur possible serait la dédifférenciation cellulaire : les cellules bêta resteraient présentes, mais leur production d’insuline s’effondrerait. Si ce phénomène est avéré chez la souris, il n’existe que quelques arguments très indirects chez l’Homme. La modélisation de ce phénomène dans des cellules bêta humaines est primordiale pour mieux appréhender le développement du diabète de type 2. Matériels et Méthodes Nous avons modélisé le phénomène de dédifférenciation dans la lignée de cellules bêta humaines EndoC-βH1 à partir d’un screen de molécules. Nous avons étudié à grande échelle les voies de signalisation impliquées par la technique RNA Seq, et avons ensuite étudié le phénotype cellulaire des cellules dédifférenciées, puis confirmé ces observations sur plusieurs préparations enrichies en ilots pancréatiques, prélevés sur des individus en état de mort cérébrale. Enfin nous avons étudié si la dédifférenciation protégeait les cellules bêta de stress cellulaires. Résultats Nous avons identifié qu’un traitement des cellules EndoC-βH1 par le fibroblast growth factor 2 (FGF2) diminuait de manière drastique la production d’insuline sans modification significative du nombre de cellules, ainsi qu’un effondrement de l’expression de plusieurs gènes spécifiques de la cellule bêta : facteur de transcription de l’insuline MAFA, transporteur de glucose GLUT2, transporteur de zinc ZnT8. Parallèlement, nous avons identifié une induction majeure de marqueurs normalement absents d’une cellule bêta :
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autre hormone pancréatique (somatostatine x10), facteurs de transcription propres aux progéniteurs pancréatiques et cellules canalaires (HES1 x50, SOX9 x100, c-MYC x10, NEUROG3 x200). Ces resultats sont en ligne avec avec ceux obtenus en NGS (next generation Sequencing). Nous avons confirmé ces résultats obtenus en ARNm au niveau protéique pour plusieurs de ces marqueurs. Nous avons également reproduit une partie de ces résultats sur des ilots pancréatiques humaines : un traitement par FGF2 durant 72h effondre l’expression de MAFA, et induit une co-expression de SOX9 dans des cellules endocrines, comme en témoigne l’apparition de cellules doubles positives chromogranine A – SOX9, marquages absents dans les ilots contrôles. Enfin, nous avons démontré que la dédifférenciation suite au traitement par FGF2 protégeait les cellules EndoC-βH1 du stress cellulaire induit par RANKL, par l’intermédiaire d’une sécrétion d’OPG (TNFRSF11B). Conclusions Nous avons développé un modèle robuste de dédifférenciation de cellules bêta pancréatiques humaines, permettant d’affirmer cette dédifférenciation et d’étudier les mécanismes impliqués. À terme, ce projet devrait nous permettre d’identifier de nouvelles molécules et de nouvelles voies de signalisation impliquées dans le maintien de la production de l’insuline par les cellules bêta pancréatiques humaines. Ces découvertes permettront d’avancer dans la compréhension de la physiopathogénie du diabète de type 2, et éventuellement de définir des candidats à une nouvelle classe thérapeutique anti-diabétique. Mots-Clés Ilot pancréatique, Insuline, Pancréas Les auteurs déclarent ne pas avoir d’intérêt direct ou indirect (financier ou en nature) avec un organisme privé, industriel ou commercial en relation avec le sujet présenté.
CO-8 Le transfert de microRNAs par les exosomes des cellules immunitaires aux cellules bêta pancréatiques contribue au développement du diabète de type 1 Claudiane Guay(1) 1
Université de Lausanne, Lausanne, Switzerland.
*Auteur correspondant : [email protected]
Introduction Le diabète de type 1 est déclenché par l’infiltration des îlots de Langerhans par des lymphocytes qui induisent la mort des cellules bêta. Les lymphocytes relâchent des cytokines pro-inflammatoires, mais aussi des exosomes dont le contenu en microRNAs est transféré sous forme active à d’autres cellules. Puisque pendant les premières phases de la maladie les lymphocytes et les cellules bêta sont en étroite proximité, nous avons émis l’hypothèse que le transfert de microRNAs des lymphocytes aux cellules bêta contribuerait au dysfonctionnement des cellules insulinosécrétrices et au développement du diabète. Matériels et Méthodes Les exosomes ont été isolées par ultra-centrifugation à partir du milieu de culture de cellules T (Jurkat ou lymphocytes T de souris NOD). Ces microvésicules ont été utilisées pour étudier le transfert de microRNAs des cellules immunitaires aux cellules bêta, ainsi que leur impact fonctionnel. Pour les expériences in vivo, nous avons généré un virus AAV exprimant sous le contrôle du promoteur à insuline un transcrit capable de séquestrer et d’inhiber l’action des microRNAs d’intérêt dans les cellules bêta. Résultats Nous avons observé que l’expression de 3 microRNAs caractéristiques des cellules T, miR-142-3p, miR-142-5p et miR-155, est augmentée dans les îlots de souris NOD durant la progression de l’insulite. Ces microRNAs sont relâchés dans les exosomes des cellules T et peuvent être transférés aux cellules bêta. L’incubation des îlots en présence des exosomes des cellules T conduit à une induction de l’apoptose des cellules bêta, sans affecter les cellules alpha. Cette augmentation de la mort cellulaire a pu être reproduite en surexprimant directement les microRNAs d’intérêts dans les cellules bêta ou, à l’opposée, être prévenue en transfectant les cellules receveuses avec des antimiRs inhibant miR-142-3p/-5p ou miR-155. Afin de déterminer la relevance de ce phénomène pour le développement du diabète de type 1, nous avons injecté des souris NOD pré-diabétiques avec l’AAV capable d’inhiber l’action des microRNAs transférés dans les cellules bêta. L’inactivation de ces microRNAs a permis de diminuer l’inflammation et le recrutement des lymphocytes T dans les îlots de souris NOD âgées de 8 et 32 semaines et, en parallèle, de réduire l’incidence du diabète. Conclusions Les résultats obtenus indiquent que le transfert de microRNAs des cellules T aux cellules bêta conduit au dysfonctionnement des cellules insulinosécrétrices dans le contexte du diabète de type 1. Ils supportent aussi le concept que le transfert des microRNAs via les exosomes constitue un nouveau mécanisme de communication intercellulaire. Mots-Clés Micro-ARN, Ilot pancréatique, Exosomes Les auteurs déclarent ne pas avoir d’intérêt direct ou indirect (financier ou en nature) avec un organisme privé, industriel ou commercial en relation avec le sujet présenté.