- Email: [email protected]
Les cellules souches hématopoïétiques du sang non mobilisé̊: sélection et capacités de greffe
Abstracts / Transfusion Clinique et Biologique 24(3S) (2017) 322–381 Les auteurs déclarent ne pas avoir de liens d’intérêts. http://dx.doi.org/10.1016/j.tracli.2017.06.299 P178
Cryoconservation de cellules souches et de progéniteurs hématopoïétiques amplifiés ex vivo à partir de cellules CD34+ de sang placentaire
Pascale Duchez ∗ , Laura Rodriguez , Philippe Brunet De La Grange , Zoran Ivanovic EFSAqLi, Bordeaux, France ∗ Auteur correspondant. Adresse e-mail : [email protected] (P. Duchez) Notre protocole d’expansion de cellules CD34+ de sang placentaire permet d’amplifier les progéniteurs engagés (PE) sans diminuer la quantité de cellules souches hématopoïétiques (CSH), assurant ainsi une greffe à court et à long terme. Ce protocole a fait l’objet d’un essai clinique avec des résultats prometteurs, dans un contexte de greffe allogénique adulte. La greffe de cellules de sang placentaire amplifiées ex vivo se confronte au problème de la cryoconservation du produit d’expansion afin d’assurer sa conservation lors du transport et pour une utilisation future. C’est pourquoi nous avons exploré la possibilité de maintenir les propriétés fonctionnelles des CSH et des PE après congélation et décongélation des cellules amplifiées ex vivo en comparant le protocole standard de cryoconservation (albumine humaine–(HSA)/DMSO) avec un protocole inédit basé sur une solution de congélation enrichie (milieu HP01 de grade clinique/DMSO). L’étude de l’indice de viabilité, du nombre de CD34+ et de cellules totales, et du rendement de progéniteurs engagés et de CSH indique que la cryoconservation et la décongélation des cellules amplifiées de sang placentaire par HSA/DMSO réduit de fac¸on significative la quantité de progéniteurs engagés (40 %) et de CSH (diminution drastique de la capacité de greffe de souris NSG). En revanche, le protocole HP01/DMSO améliore la préservation des PE (> 60 %) sans altérer la capacité de greffe des CSH. Ainsi, le maintien fonctionnel des PE et des CSH après amplification ex vivo et cryoconservation est faisable en conditions compatibles avec les exigences de thérapie cellulaire humaine. Déclaration de liens d’intérêts d’intérêts.
Les auteurs déclarent ne pas avoir de liens
http://dx.doi.org/10.1016/j.tracli.2017.06.300 P179
Les cellules souches hématopoïétiques du sang non mobilisé: sélection et capacités de greffe Veronique Lapostolle 1,∗ , Pascale Duchez 2 , Laura Rodriguez 2 , Jean Chevaleyre 2 , Philippe Brunet De La Grange 2 , Zoran Ivanovic 2 1 Université de Bordeaux, Bordeaux, France 2 EFS, Bordeaux, France ∗ Auteur correspondant. Adresse e-mail : [email protected] (V. Lapostolle) Le sang périphérique non mobilisé (SP-NM) contient les cellules souches hématopoïétiques (CSH) capables de reconstitution hématopoïétique à court et long terme. Cette capacité est augmentée après expansion ex vivo. Une expansion ex vivo pourrait compenser le faible nombre initial de CSH recueillies par cytaphérèse sans mobilisation par des facteurs de croissance. Nous avons analysé l’expression de marqueurs membranaires connus pour participer à l’adhésion cellulaire et à l’adressage des CSH et de marqueurs permettant leur enrichissement. Les cellules CD34+ sont isolées à partir de filtres de déleucocytation et analysées pour leur expression en CD34, CD133, CD90, CD45A, CD26 et CD9. Les cellules CD34+ ont été triées et séparées sur la base de leur expression du CXCR4 (neg/low/bright) et du CD133 (neg/pos). L’activité CSH a été déterminée par des essais in vivo de greffe à des souris immunodéficientes (NSG), dans des protocoles de reconstitution hématopoïétique à court et à long terme. Dans la population de CD34+ isolée du SP-NM, les cellules capables de greffe appartiennent à la fraction CD133+ et sont réparties dans les populations CXCR4neg
377
et CXCR4low . Après expansion ex vivo, seule la fraction CD133+ CXCR4low est capable de reconstitution hématopoïétique à court et à long terme. L’absence de capacité de greffe de la population CXCR4bright est probablement due à son expression exclusive de CD26. Ce sont les premiers résultats de caractérisation phénotypique des CSH de SPNM présentant des capacités de reconstitution hématopoïétique à court et à long terme. Ils permettent de concevoir le développement de stratégies d’expansion préalable à la transplantation. Déclaration de liens d’intérêts d’intérêts.
Les auteurs déclarent ne pas avoir de liens
http://dx.doi.org/10.1016/j.tracli.2017.06.301 P180
Exploration des déterminants du rendement transfusionnel érythrocytaire dans un modèle murin Alexandre Morel 1 , Michaël Dussiot 1 , Anaïs Martinez 1 , Martin Colard 1 , Mickaël Marin 2 , Camille Roussel 2 , Alioune Ndour 2 , Caroline Le Van Kim 2 , Pierre Buffet 2 , Olivier Hermine 1 , Pascal Amireault 1,∗ 1 Inserm U1163/CNRS ERL 8254, institut Imagine, Paris, France 2 Inserm UMR-S1134, INTS, Paris, France ∗ Auteur correspondant. Adresse e-mail : [email protected] (P. Amireault) Les études cliniques récentes sont rassurantes quant à une éventuelle morbimortalité liée à l’utilisation de culots globulaires stockés jusqu’à 4 semaines. Cependant, lors du stockage, le globule rouge (GR) subit de multiples modifications morphologiques, biochimiques et moléculaires, nommées lésions de stockage. Celles-ci pourraient être responsables de l’élimination rapide de jusqu’à 25 % des GR en fin de stockage, dans les heures suivant la transfusion, le rendement transfusionnel étant inversement corrélé à la durée de stockage. Nous avons mis en évidence chez l’homme l’accumulation lors du stockage d’une sous-population de GR morphologiquement altérés et de surface projetée réduite, suggérant son élimination rapide par la rate dans les heures suivant la transfusion. Cette hypothèse reste néanmoins à préciser, les mécanismes physiologiques de clairance n’ayant pas été précisément établis. Grâce à un modèle murin de transfusion, nous avons confirmé que le rendement transfusionnel diminue avec la durée de stockage (100 % à J1 vs. 62 % à J14 de stockage). Ce rendement est augmenté lorsque les GR sont transfusés dans une souris receveuse splénectomisée (74 %) ou déplétée en macrophages (79 %). En post-transfusion, les GR « lésés » sont retenus principalement dans la rate, mais aussi dans la moelle osseuse. Ils comprennent notamment une sous-population de GR morphologiquement altérés, similaire à celle observée chez l’homme, qui apparaît pendant le stockage et subit une clairance rapide dans les heures suivant la transfusion. L’augmentation du rendement transfusionnel en absence de rate ou de macrophages suggère que l’état fonctionnel du receveur en est un paramètre déterminant. Déclaration de liens d’intérêts d’intérêts.
Les auteurs déclarent ne pas avoir de liens
http://dx.doi.org/10.1016/j.tracli.2017.06.302 P181
Effet d’un traitement de jouvence sur la lésion de stockage de culots globulaires Mickaël Marin 1 , Camille Roussel 1 , Michaël Dussiot 2 , Alioune Ndour 1 , Olivier Hermine 2 , Yves Colin 1 , Caroline Le Van Kim 1 , Pierre Buffet 1 , Pascal Amireault 1,∗ 1 Inserm UMR-S1134, INTS, Paris, France 2 Inserm U1163/CNRS ERL 8254, institut Imagine, Paris, France ∗ Auteur correspondant. Adresse e-mail : [email protected] (P. Amireault) La conservation des globules rouges (GR) sous forme de concentrés (CGR) est cruciale en transfusion. Ce stockage, jusqu’à 42 jours, s’accompagne d’altérations métaboliques, biochimiques et morphologiques des GR nom-
Cryoconservation de cellules souches et de progéniteurs hématopoïétiques amplifiés ex vivo à partir de cellules CD34+ de sang placentaire
Pascale Duchez ∗ , Laura Rodriguez , Philippe Brunet De La Grange , Zoran Ivanovic EFSAqLi, Bordeaux, France ∗ Auteur correspondant. Adresse e-mail : [email protected] (P. Duchez) Notre protocole d’expansion de cellules CD34+ de sang placentaire permet d’amplifier les progéniteurs engagés (PE) sans diminuer la quantité de cellules souches hématopoïétiques (CSH), assurant ainsi une greffe à court et à long terme. Ce protocole a fait l’objet d’un essai clinique avec des résultats prometteurs, dans un contexte de greffe allogénique adulte. La greffe de cellules de sang placentaire amplifiées ex vivo se confronte au problème de la cryoconservation du produit d’expansion afin d’assurer sa conservation lors du transport et pour une utilisation future. C’est pourquoi nous avons exploré la possibilité de maintenir les propriétés fonctionnelles des CSH et des PE après congélation et décongélation des cellules amplifiées ex vivo en comparant le protocole standard de cryoconservation (albumine humaine–(HSA)/DMSO) avec un protocole inédit basé sur une solution de congélation enrichie (milieu HP01 de grade clinique/DMSO). L’étude de l’indice de viabilité, du nombre de CD34+ et de cellules totales, et du rendement de progéniteurs engagés et de CSH indique que la cryoconservation et la décongélation des cellules amplifiées de sang placentaire par HSA/DMSO réduit de fac¸on significative la quantité de progéniteurs engagés (40 %) et de CSH (diminution drastique de la capacité de greffe de souris NSG). En revanche, le protocole HP01/DMSO améliore la préservation des PE (> 60 %) sans altérer la capacité de greffe des CSH. Ainsi, le maintien fonctionnel des PE et des CSH après amplification ex vivo et cryoconservation est faisable en conditions compatibles avec les exigences de thérapie cellulaire humaine. Déclaration de liens d’intérêts d’intérêts.
Les auteurs déclarent ne pas avoir de liens
http://dx.doi.org/10.1016/j.tracli.2017.06.300 P179
Les cellules souches hématopoïétiques du sang non mobilisé: sélection et capacités de greffe Veronique Lapostolle 1,∗ , Pascale Duchez 2 , Laura Rodriguez 2 , Jean Chevaleyre 2 , Philippe Brunet De La Grange 2 , Zoran Ivanovic 2 1 Université de Bordeaux, Bordeaux, France 2 EFS, Bordeaux, France ∗ Auteur correspondant. Adresse e-mail : [email protected] (V. Lapostolle) Le sang périphérique non mobilisé (SP-NM) contient les cellules souches hématopoïétiques (CSH) capables de reconstitution hématopoïétique à court et long terme. Cette capacité est augmentée après expansion ex vivo. Une expansion ex vivo pourrait compenser le faible nombre initial de CSH recueillies par cytaphérèse sans mobilisation par des facteurs de croissance. Nous avons analysé l’expression de marqueurs membranaires connus pour participer à l’adhésion cellulaire et à l’adressage des CSH et de marqueurs permettant leur enrichissement. Les cellules CD34+ sont isolées à partir de filtres de déleucocytation et analysées pour leur expression en CD34, CD133, CD90, CD45A, CD26 et CD9. Les cellules CD34+ ont été triées et séparées sur la base de leur expression du CXCR4 (neg/low/bright) et du CD133 (neg/pos). L’activité CSH a été déterminée par des essais in vivo de greffe à des souris immunodéficientes (NSG), dans des protocoles de reconstitution hématopoïétique à court et à long terme. Dans la population de CD34+ isolée du SP-NM, les cellules capables de greffe appartiennent à la fraction CD133+ et sont réparties dans les populations CXCR4neg
377
et CXCR4low . Après expansion ex vivo, seule la fraction CD133+ CXCR4low est capable de reconstitution hématopoïétique à court et à long terme. L’absence de capacité de greffe de la population CXCR4bright est probablement due à son expression exclusive de CD26. Ce sont les premiers résultats de caractérisation phénotypique des CSH de SPNM présentant des capacités de reconstitution hématopoïétique à court et à long terme. Ils permettent de concevoir le développement de stratégies d’expansion préalable à la transplantation. Déclaration de liens d’intérêts d’intérêts.
Les auteurs déclarent ne pas avoir de liens
http://dx.doi.org/10.1016/j.tracli.2017.06.301 P180
Exploration des déterminants du rendement transfusionnel érythrocytaire dans un modèle murin Alexandre Morel 1 , Michaël Dussiot 1 , Anaïs Martinez 1 , Martin Colard 1 , Mickaël Marin 2 , Camille Roussel 2 , Alioune Ndour 2 , Caroline Le Van Kim 2 , Pierre Buffet 2 , Olivier Hermine 1 , Pascal Amireault 1,∗ 1 Inserm U1163/CNRS ERL 8254, institut Imagine, Paris, France 2 Inserm UMR-S1134, INTS, Paris, France ∗ Auteur correspondant. Adresse e-mail : [email protected] (P. Amireault) Les études cliniques récentes sont rassurantes quant à une éventuelle morbimortalité liée à l’utilisation de culots globulaires stockés jusqu’à 4 semaines. Cependant, lors du stockage, le globule rouge (GR) subit de multiples modifications morphologiques, biochimiques et moléculaires, nommées lésions de stockage. Celles-ci pourraient être responsables de l’élimination rapide de jusqu’à 25 % des GR en fin de stockage, dans les heures suivant la transfusion, le rendement transfusionnel étant inversement corrélé à la durée de stockage. Nous avons mis en évidence chez l’homme l’accumulation lors du stockage d’une sous-population de GR morphologiquement altérés et de surface projetée réduite, suggérant son élimination rapide par la rate dans les heures suivant la transfusion. Cette hypothèse reste néanmoins à préciser, les mécanismes physiologiques de clairance n’ayant pas été précisément établis. Grâce à un modèle murin de transfusion, nous avons confirmé que le rendement transfusionnel diminue avec la durée de stockage (100 % à J1 vs. 62 % à J14 de stockage). Ce rendement est augmenté lorsque les GR sont transfusés dans une souris receveuse splénectomisée (74 %) ou déplétée en macrophages (79 %). En post-transfusion, les GR « lésés » sont retenus principalement dans la rate, mais aussi dans la moelle osseuse. Ils comprennent notamment une sous-population de GR morphologiquement altérés, similaire à celle observée chez l’homme, qui apparaît pendant le stockage et subit une clairance rapide dans les heures suivant la transfusion. L’augmentation du rendement transfusionnel en absence de rate ou de macrophages suggère que l’état fonctionnel du receveur en est un paramètre déterminant. Déclaration de liens d’intérêts d’intérêts.
Les auteurs déclarent ne pas avoir de liens
http://dx.doi.org/10.1016/j.tracli.2017.06.302 P181
Effet d’un traitement de jouvence sur la lésion de stockage de culots globulaires Mickaël Marin 1 , Camille Roussel 1 , Michaël Dussiot 2 , Alioune Ndour 1 , Olivier Hermine 2 , Yves Colin 1 , Caroline Le Van Kim 1 , Pierre Buffet 1 , Pascal Amireault 1,∗ 1 Inserm UMR-S1134, INTS, Paris, France 2 Inserm U1163/CNRS ERL 8254, institut Imagine, Paris, France ∗ Auteur correspondant. Adresse e-mail : [email protected] (P. Amireault) La conservation des globules rouges (GR) sous forme de concentrés (CGR) est cruciale en transfusion. Ce stockage, jusqu’à 42 jours, s’accompagne d’altérations métaboliques, biochimiques et morphologiques des GR nom-