Mesure de la vitesse de sédimentation en cas de myélome actif : sensibilité du Ves-Matic® et du Roller® par rapport à la méthode de Westergren

Communications affichées immunoglobulines de souris par traitement du sérum dans un tube HBT® (Heterophilic Blocking Tube). Trois techniques immunométriques non isotopiques mettent en évidence de la Tg (valeurs comprises entre 438 et 780 ␮g/L), alors que la technique IRMA, considérée comme la technique de référence, rend un résultat inférieur au seuil de détection. Expertise.— Nous avons contacté le fabricant du kit de dosage IRMA qui a accepté de réaliser une expertise du sérum. La technique CisBio Thyroglobuline® IRMA met en jeu quatre anticorps monoclonaux de capture et un seul anticorps de révélation. En utilisant un autre anticorps de révélation, la société CisBio a montré la présence de Tg à un taux élevé, en accord avec les techniques non isotopiques. Conclusion.— L’expertise a permis de conclure à la mise en défaut de la technique IRMA pour le dosage de la Tg de ce patient qui sera donc suivi au laboratoire par une technique immunométrique non isotopique. La non-reconnaissance de la Tg par l’anticorps de révélation du kit est probable. Cet incident a fait l’objet d’une déclaration à l’AFSSAPS de la part du fabricant. doi:10.1016/j.immbio.2011.03.037

Mise au point du dosage de la témocilline par HPLC pour l’étude de la stabilité de poches de perfusions C. Rolin , J.D. Hecq , D. Vanbeckbergen , L. Galanti Cliniques universitaires UCL Mont-Godinne, 1, avenue Therasse, 5530 Yvoir, Belgique Introduction.— La préparation à l’avance des solutions injectables par une unité centralisée permet d’améliorer la délivrance de ces injectables. Cela requiert l’étude de la stabilité du principe actif nécessitant une collaboration entre le laboratoire et la pharmacie pour la mise au point du dosage de ce principe actif. Le but de notre étude est de mettre au point le dosage de la témocilline, antibiotique utilisé principalement dans le traitement des septicémies. Méthodes.— Le système de chromatographie liquide à haute pression (Alliance, model 2690, Waters Association) se compose d’une reverse colonne C18 (Grom-Sil 80 ODS-7pH, 4 ␮m 150 mm × 4 mm), d’une phase mobile constitué de 15 % d’acétonitrile et 85 % d’acétate d’ammonium à pH = 4 avec de l’acide acétique. La détection est réalisée par un détecteur DAD (model 996, Waters Association) à 235 nm, le débit est fixé à 1,0 ml/min et la température de la colonne à 30 ◦ C. Le volume d’échantillon testé est de 10 ␮l. La stabilité de la témocilline (20 mg/ml) a été étudiée dans 10 poches injectables (5 dans le NaCl 0,9 % et 5 dans le glucose 5 %), conservées à 4 ◦ C, sur une période de 30 jours. Les solutions de témocilline sont considérées comme stables si l’intervalle de confiance inférieure à 95 % de la droite commune de régression estimée reste supérieur à 90 % du produit initial selon les recommandations de la FDA. Résultats.— Le coefficient de variation pour la reproductibilité intra-essai (n = 10) est de 3,96 % (0,25 mg/ml), 3,03 % (0,50 mg/ml) et 1,75 % (1,00 mg/ml) et de 3,18 % (0,125 mg/ml), 1,89 % (0,50 mg/ml) et 2,34 % (1,00 mg/ml) pour la reproductibilité inter-essai (n = 16). L’analyse de la régression linéaire de l’aire sous le pic montre un coefficient r2 > 0,999 pour des concentrations de 0,125 à 1,50 mg/ml. Afin de confirmer la stabilité dans le temps de la témocilline en perfusion, il est nécessaire d’exclure l’interférence éventuelle de produits de dégradation. Nous avons ainsi préparé les solutions initiales (pH 7,01) et des solutions acides (pH 2,68) en ajoutant HCL 12 M et alcalines (pH 12,33) en ajoutant NaOH 5 M. Chaque solution a été dégradée en chauffant à 100 ◦ C pendant 60 min. L’analyse des pics chromatographiques de chacune des solutions (initiale, alcaline ou acide avec ou sans chauffage) montre une séparation des produits de dégradation de la molécule native, permettant de confirmer l’absence d’interférence de ces produits sur la concentration de la molécule analysée.

101 Conclusion.— La témocilline peut facilement être dosée par HPLC de manière fiable, permettant la validation de préparation centralisée de perfusions. doi:10.1016/j.immbio.2011.03.038

Mesure de la vitesse de sédimentation en cas de myélome actif : sensibilité du Ves-Matic® et du Roller® par rapport à la méthode de Westergren C. Rolin , H. Mekouar , X. Hernandez , Y. Cornet , F. Mullier , B. Chatelain Cliniques universitaires UCL Mont-Godinne, 1, Avenue Therasse, 5530 Yvoir, Belgique Introduction.— La vitesse de sédimentation (VS) est influencée par la présence d’immunoglobulines à forte dose. L’évaluation de la sensibilité de la méthode de mesure de la VS, dans le cas des myélomes, est d’un grand intérêt aussi bien pour le laboratoire que pour le clinicien. Le but de cette étude est de comparer la VS obtenue par deux automates, basés sur la mesure optique, par rapport à la méthode de référence chez des patients atteints de myélome actif. Méthodes.— Le Roller® 20 de chez ALIFAX-Italie et VES-MATIC® 200 de chez DIESSE-Italie ont été évalués pour la mesure de la VS. La méthode de Westergren a été utilisée conformément aux recommandations du « Clinical and Laboratory Standards Institute » (CLSI). La VS de 48 échantillons de patients atteints de myélome actif a été mesurée sur les deux automates ainsi que par la méthode de référence. L’analyse statistique des résultats est effectuée en utilisant MedCalc® . Résultats.— La régression de Passing et Bablock met en évidence une corrélation acceptable entre le VES-Matic et la méthode de Westergren (y = -1,9022 + 0,7439 x ; r = 0,76) ; la distribution de Blant et Altman montre une distribution homogène des biais. Concernant le Roller® 20, la corrélation avec la méthode de Westergren n’est pas satisfaisante (y = 0,3333 + 0,3333x ; r = 0,60), le biais moyen observé est de 96 %. Une courbe ROC a été établie afin d’évaluer la sensibilité au myélome de chacune des méthodes de mesure. L’étude de l’aire sous la courbe (AUC) met en évidence une absence de différence statistiquement significative entre le VES-Matic et la méthode de Westergren, contrairement à la différence entre l’AUC du Roller® et celle du Westergren, qui n’est pas statistiquement significative. Conclusion.— Une bonne corrélation clinique est retrouvée entre le VES-Matic et la méthode de Westergren. Le Roller® 20 rend des résultats de VS différents de ceux obtenus avec la méthode de référence. Une bonne connaissance des limitations des automates utilisés reste indispensable avant chaque changement de technique et ce dans le but d’assurer une bonne qualité des résultats rendus. doi:10.1016/j.immbio.2011.03.039

Influence du nombre de patients sélectionnés pour la vérification des valeurs de référence des paramètres de chimie courante C. Rolin , L. Galanti Cliniques universitaires UCL Mont-Godinne, 1, avenue Therasse, 5530 Yvoir, Belgique Introduction.— Les laboratoires adhèrent de plus en plus à des normes de qualité, principalement la norme ISO 15189, lesquelles requièrent la vérification régulière des valeurs de référence. Les valeurs de référence sont en générales proposées par le fabricant de l’automate. La vérification des valeurs de référence proposées nécessitent l’analyse des résultats obtenus chez un certain nombre de sujets normaux, difficile à obtenir. Selon le guide de validation des méthodes en biologie médicale (Cofrac, juin 2004), une population minimum de 100 patients est requise, dans laquelle les valeurs aberrantes sont éliminées. Le but de notre étude est d’évaluer