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Modele experimental pour l'evaluation de la sensibilite des bacteries intracellulaires aux antibiotiques
MOdecine e t M a l a d i e s I n f e c t i e u s e s -
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MODELE EXPERIMENTAL POUR L'EVALUATION DE LA SENSIBILITE DES BACTERIES INTRACELLULAIRES AUX ANTIBIOTIQUES* par P. BROUQUI**, D. R A O U L T * * * et H. GALLAIS**
La d6termination de la sensibilit6 des bact6ries intracellulaires aux antibiotiques n6cessitait la mise au point d'un syst6me de culture de ces bact6ries sur tissu cellulaire proche des cellules habituellement infect6es darts l'organisme. Nous avons choisi d'utiliser des macrophages murins en lign6e continue P 388 D1. Ces macrophages ont 6t6 infect6s suivant un protocole diff6rent selon la bact~rie choisie. Lorsque le niveau d'infection est proche de 50 % de cellules infect6es, ces cellules sont r6parties g raison de 104 cellules dans chaque puits d'une microplaque g 96 trous. Chaque puits sera alors compl6t6 en milieu de culture (MEM, 10 % s6rum de veau foetal, 1 ~ 5 % de L-glutamine) contenant diff6rentes concentrations d'antibiotiques. Les puits sont pr61ev6s t o u s l e s jours, et les cellules sont fix6es sur lame et color6es. Cent cellules sont observ6es au microscope, et le niveau d'infection est donnd par le rapport : cellules infect6es sur cellules saines. Ainsi on a pu tester l'efficacit6 des antibiotiques sur Coxiella burnetii, Rickettsia conorii, R. rickettsii, et r6cemment sur Ehrlichia sennetsu. Tous ces germes sont particuli6rement sensibles aux cyclines et aux quinolones ftuor6es. Ce mod61e permet de connaitre la sensibilit6 aux antibiotiques des germes intracellulaires stricts, mais pourrait 6tre appliqu6 aux intracellulaires facultatifs. Ceci permettrait de comparer l'activit6 des antibiotiques sur la fraction extracellulaire par rapport ~ la fraction intracellulaire et de mieux comprendre leur m6canisme d'action.
* Communication prdsentde au XXXIX~me Congr~s de la Socidtg de Pathologie ln£ectieuse de Langue Fzanqaise, tenu ~t Paris le 8 dgcembre 1989, sous le titre : <
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MODELE EXPERIMENTAL POUR L'EVALUATION DE LA SENSIBILITE DES BACTERIES INTRACELLULAIRES AUX ANTIBIOTIQUES* par P. BROUQUI**, D. R A O U L T * * * et H. GALLAIS**
La d6termination de la sensibilit6 des bact6ries intracellulaires aux antibiotiques n6cessitait la mise au point d'un syst6me de culture de ces bact6ries sur tissu cellulaire proche des cellules habituellement infect6es darts l'organisme. Nous avons choisi d'utiliser des macrophages murins en lign6e continue P 388 D1. Ces macrophages ont 6t6 infect6s suivant un protocole diff6rent selon la bact~rie choisie. Lorsque le niveau d'infection est proche de 50 % de cellules infect6es, ces cellules sont r6parties g raison de 104 cellules dans chaque puits d'une microplaque g 96 trous. Chaque puits sera alors compl6t6 en milieu de culture (MEM, 10 % s6rum de veau foetal, 1 ~ 5 % de L-glutamine) contenant diff6rentes concentrations d'antibiotiques. Les puits sont pr61ev6s t o u s l e s jours, et les cellules sont fix6es sur lame et color6es. Cent cellules sont observ6es au microscope, et le niveau d'infection est donnd par le rapport : cellules infect6es sur cellules saines. Ainsi on a pu tester l'efficacit6 des antibiotiques sur Coxiella burnetii, Rickettsia conorii, R. rickettsii, et r6cemment sur Ehrlichia sennetsu. Tous ces germes sont particuli6rement sensibles aux cyclines et aux quinolones ftuor6es. Ce mod61e permet de connaitre la sensibilit6 aux antibiotiques des germes intracellulaires stricts, mais pourrait 6tre appliqu6 aux intracellulaires facultatifs. Ceci permettrait de comparer l'activit6 des antibiotiques sur la fraction extracellulaire par rapport ~ la fraction intracellulaire et de mieux comprendre leur m6canisme d'action.
* Communication prdsentde au XXXIX~me Congr~s de la Socidtg de Pathologie ln£ectieuse de Langue Fzanqaise, tenu ~t Paris le 8 dgcembre 1989, sous le titre : <
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