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P07 Rôle des microRNAs dans la compensation de la masse des cellules - pendant la gestation
Trois « îlots-seuls » et 2 « îlots-après-rein » avaient perdu leur fonction C-peptidique à 5 ans. Neuf patients étaient insulino-indépendants dont 8 avaient une HbA1c - 6,5 % (38 % avec les 2 critères). La moyenne d’HBA1c était de 8,1 ± 1,0 % avant vs. 7,1 ± 1,0 % après greffe (p < 0,01). Résultats : Les moyennes de cholestérol total (1,86±0,37vs.1,76±0,36 g/l), HDL (0,71±0,18vs.0,73±0,27 g/l), LDL (0,98±0,32vs.0,88±0,30 g/l), triglycérides (0,79±0,33vs.0,83±0,34 g/l) et pression artérielle moyenne (124±17/72±7 vs. 127±13/72±8mmHg) ne différaient pas avant vs. après greffe (patients traités par : statine : 28 % vs.65 % ; - 1 antihypertenseur : 38 % vs.75 %). Trois patients dont 2 « îlots-après-rein » avaient des complications macroangiopathiques avant greffe (2 pontages fémoraux dont 1 avec amputation, 1 stent coronarien). Le nombre d’événements cardiovasculaires clinique pendant ces 5 ans était nul. Avant vs. après greffe, le dépistage était anormal dans : échodoppler carotidien : 37 % vs 52 % des cas ; membres inférieurs : 36 % vs 85 % (22 vs 25 % hors médiacalcose simple), recherche d’ischémie : 14 % (avec coronarographie normale hormis 1 calcification) vs 19 % (dont 3 confirmées en coronarographie, stentées). Conclusion : La greffe n’a induit aucun événement cardiovasculaire aigu clinique chez ces 21 patients atteints d’un diabète ancien, dont 8 greffés rénaux au prix du dépistage systématique et du traitement des complications macroangiopathiques silencieuses.
Résultats : Les AGCC induisent une augmentation de la tolérance au glucose à jeun, et une meilleure sensibilité à l’insuline (aire sous la courbe : 6 157 ± 96 pour le propionate et 6 051 ± 133 pour le butyrate vs 6 888 ± 78 pour le régime standard hyperglucidique ; P < 0,05). L’activité de la glucose-6 phosphatase (G6Pase) intestinale est augmentée par les AGCC (6,22 ± 0,67 U/g de tissu pour le propionate et 5,30 ± 1,07 U/g pour le butyrate vs 3,56 ± 0,14 U/g sous régime standard ; P < 0,01 et P < 0,05 respectivement), mais pas l’activité hépatique. Une induction des gènes (ARNm) de la NGI et du métabolisme du propionate (G6Pase, phosphoénolpyruvate carboxykinase et méthylmalonyl-coA mutase) est également observée. Discussion : Ces résultats suggèrent que le propionate et le butyrate pourraient exercer leurs effets bénéfiques sur l’homéostasie glucidique via l’induction de la NGI, ce qui pourrait notamment impliquer une signalisation via les récepteurs GPR41 et GPR43.
PO5 L’alimentation, un moyen pour moduler la génération
Introduction : La résistance à l’insuline associée à la gestation ou à l’obésité conduit à un accroissement des besoins en insuline qui est compensé par une augmentation de la masse des cellules - pancréatiques. Les microARNs sont de petits ARNs non-codants qui régulent l’expression génique. Ce projet vise à identifier quelles sont les fonctions des microARNs dans l’expansion compensatoire de la masse des cellules - observée pendant la gestation. Matériels et méthodes : Nous avons réalisé un microarray pour mesurer le niveau des microARNs dans les îlots de rattes au 14e jour de gestation et de rattes contrôles. Nous avons ensuite testé le rôle fonctionnel des microARNs identifiés, sur la sécrétion d’insuline, la prolifération et la survie de cellules dissociées issues d’îlots de rats et humains. Résultats : Quatre microARNs ont un niveau significativement modifié dans les îlots des rattes gestantes. Parmis eux, le miR-338-3p, qui est diminué dans les îlots pendant la gestation, est également réduit dans les îlots des souris db/db et des souris rendues obèses suite à un régime hyperlipidique. Le traitement d’îlots de rats et humains avec de l’estradiol ou du GLP-1, entraîne la diminution du miR-338-3p par une voie cAMP-dépendante. La transfection des cellules - de rats et humaines avec un oligonucléotide antisense qui bloque spécifiquement l’activité du miR-338-3p conduit à des changements d’expression de gènes reflétant les modifications géniques observées pendant la gestation. De plus, la réduction du miR-338-3p favorise la prolifération et la survie des cellules sans affecter la sécrétion d’insuline en réponse au glucose. Conclusion : Ces données suggèrent une implication de miR-338-3p dans les mécanismes compensatoires de la masse des cellules - se produisant lors d’un contexte de résistance à l’insuline. Cette étude pourrait fournir de nouveaux outils visant à promouvoir la régénération et la survie des cellules - pour prévenir et traiter le diabète.
de thrombine, étape clé du phénomène de thrombose C. Sanchez1, M. Poggi1, P. E. Morange1, S. Tanguy2, C. Defoort3, J. C. Martin3, A Dutour1, M. Grino1, M. C. Alessi1 1
INSERM UMR 626, Marseille ; CNRS TIMC-IMAG UMR 5525, Grenoble ; INRA UMR 1260, Marseille.
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Objectif : L’association entre l’obésité et la pathologie thrombotique est partiellement expliquée par un état d’hypercoagulabilité dont les déterminants méritent d’être mieux caractérisés. Dans ce but nous avons mesuré l’effet de modifications de l’alimentation sur la génération de thrombine (GT), enzyme clé de la thrombose, d’une part chez le rat atteint ou non de syndrome métabolique (SM) et d’autre part dans une population à risque cardiovasculaire modéré. Patients et méthodes : Animaux : 170 rats ± SM (Boullu-Ciocca S, et al. 2008), ont reçu une alimentation standard (STD) ou riche en graisses (HFD, saindoux) ± agoniste du récepteur au GLP-1 : Byetta). Patients (cohorte Médi-RIVAGE) : 65 individus ont suivi pendant 3 mois un régime méditerranéen ou issu des recommandations de l’American Heart Association. Résultats : Chez le rat, 4 semaines après le sevrage, le STD diminue significativement la GT, contrairement au HFD qui la maintient élevée. À l’âge adulte (16 semaines) l’HFD augmente la GT, indépendamment du SM, du poids, de l’intolérance au glucose et de l’insulino-résistance. La GT est corrélée au poids du foie, aux concentrations circulantes de triglycérides et de cholestérol et faiblement aux taux de facteur VII. Après l’arrêt du HFD, 4 semaines suffisent pour normaliser la GT, indépendamment du poids et des paramètres métaboliques. Le Byetta diminue le poids, améliore l’état métabolique sans modifier la GT. Chez l’homme, la GT est, comme attendu, associée aux taux de facteurs de l’hémostase mais également, et de manière indépendante, à des marqueurs nutritionnels. Le suivi des recommandations nutritionnelles diminue significativement la GT (21 %). Cette réduction n’est associée ni à celles des facteurs hémostatiques ni au SM mais à celles de marqueurs nutritionnels. Conclusion : Les recommandations alimentaires (diminutions de l’apport en graisses saturées) diminuent significativement la GT indépendamment de l’obésité et l’insulino-résistance. L’intervention nutritionnelle est à considérer dans la prise en charge du risque thrombotique.
PO6 Effet d’un régime enrichi en acides gras à courte chaîne sur l’induction de la néoglucogenèse intestinale F. De Vadder1, D. Goncalves1, 2, A. Duchampt1, G. Mithieux1 1
INSERM U855, Lyon ; Université Lyon 1, Lyon.
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Introduction : Les fibres alimentaires solubles sont des prébiotiques bénéfiques à l’homéostasie glucidique, sans que les mécanismes impliqués soient bien compris à l’heure actuelle. Dégradées au niveau du côlon par la flore bactérienne, elles génèrent des acides gras à courte chaîne (AGCC) : acétate, propionate et butyrate, dont certains peuvent être des substrats de la néoglucogenèse. La néoglucogenèse intestinale (NGI) induit satiété et sensibilité à l’insuline. Nous avons émis l’hypothèse que les AGCC pourraient exercer leurs effets bénéfiques en partie via la NGI. Matériels et méthodes : Des rats sont nourris pendant 2 semaines avec des régimes enrichis en AGCC (5 % de la densité calorique). Ils subissent à 10 jours des tests de tolérance au glucose et à l’insuline. Ils sont ensuite euthanasiés et la néoglucogenèse intestinale est caractérisée.
SFD
Diabète – Nice 2012
PO7 Rôle des microRNAs dans la compensation de la masse des cellules - pendant la gestation C. Jacovetti1, A. Abderrahmani2, R Regazzi1 1 Département de Biologie Cellulaire et de Morphologie, Faculté de Biologie et de Médecine, Université de Lausanne, Lausanne, Suisse ; Institut Européen de Génomique du Diabète, Université de Lille, Nord de France, Lille.
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PO8 Implication de l’histone déméthylase phf2 au développement de la stéatose hépatique au court de physiopathologie de l’obésité et du diabète de type 2 J. Bricambert, C. Postic, J. Girard, R Dentin institut Cochin, INSERM U1016, CNRS UMR8104, Université Paris V, Paris.
Introduction : Au court de l’obésité et du diabète de type 2, l’accumulation de lipides dans le foie, est responsable d’une altération des signaux de l’insuline. Le facteur de transcription ChREBP (Carbohydrate Responsive Element Binding Protein) est impliqué dans le développement de cette stéatose en contrôlant l’expression des gènes de la glycolyse et de la lipogenèse. Cependant, les mécanismes moléculaires régulant son activité restent partiellement élucidés. Dans un crible protéomique visant à caractériser de nouveaux partenaires d’interaction à ChREBP nous avons identifié l’histone déméthylase phf2 (plant homeodomain finger 2) qui est un important régulateur de la production hépatique de glucose. Matériels et méthodes : Notre objectif a été de déterminer le rôle de phf2 au développement de la stéatose hépatique via le contrôle de l’activité transactivatrice de ChREBP. Résultats : Nos résultats montrent que phf2 est un coactivateur transcriptionnel des gènes de la glycolyse et de la lipogenèse, favorisant le développement de la stéatose hépatique. Dans des hépatocytes en culture primaire, nous avons montré que l’activité histone déméthylase de phf2 est stimulée par l’insuline via sa phosphorylation par akt. De plus, phf2 est recruté sur le promoteur des gènes de la glycolyse et de la lipogenèse en réponse au glucose et à l’insuline. Son recrutement et son activation au court de la réalimentation permet la déméthylation de la forme diméthylée de la lysine 9 de l’histone H3 (H3K9me2) sur le promoteur de ces gènes cibles, permettant alors le recrutement de ChREBP et du complexe d’initiation de la transcription pour activé la synthèse d’acide gras. In vivo, l’activité de phf2 est augmentée dans le foie de souris db/db, corrélant le développement de la stéatose hépatique. Diabetes Metab 2012, 38, A22-A31
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Résultats : Les AGCC induisent une augmentation de la tolérance au glucose à jeun, et une meilleure sensibilité à l’insuline (aire sous la courbe : 6 157 ± 96 pour le propionate et 6 051 ± 133 pour le butyrate vs 6 888 ± 78 pour le régime standard hyperglucidique ; P < 0,05). L’activité de la glucose-6 phosphatase (G6Pase) intestinale est augmentée par les AGCC (6,22 ± 0,67 U/g de tissu pour le propionate et 5,30 ± 1,07 U/g pour le butyrate vs 3,56 ± 0,14 U/g sous régime standard ; P < 0,01 et P < 0,05 respectivement), mais pas l’activité hépatique. Une induction des gènes (ARNm) de la NGI et du métabolisme du propionate (G6Pase, phosphoénolpyruvate carboxykinase et méthylmalonyl-coA mutase) est également observée. Discussion : Ces résultats suggèrent que le propionate et le butyrate pourraient exercer leurs effets bénéfiques sur l’homéostasie glucidique via l’induction de la NGI, ce qui pourrait notamment impliquer une signalisation via les récepteurs GPR41 et GPR43.
PO5 L’alimentation, un moyen pour moduler la génération
Introduction : La résistance à l’insuline associée à la gestation ou à l’obésité conduit à un accroissement des besoins en insuline qui est compensé par une augmentation de la masse des cellules - pancréatiques. Les microARNs sont de petits ARNs non-codants qui régulent l’expression génique. Ce projet vise à identifier quelles sont les fonctions des microARNs dans l’expansion compensatoire de la masse des cellules - observée pendant la gestation. Matériels et méthodes : Nous avons réalisé un microarray pour mesurer le niveau des microARNs dans les îlots de rattes au 14e jour de gestation et de rattes contrôles. Nous avons ensuite testé le rôle fonctionnel des microARNs identifiés, sur la sécrétion d’insuline, la prolifération et la survie de cellules dissociées issues d’îlots de rats et humains. Résultats : Quatre microARNs ont un niveau significativement modifié dans les îlots des rattes gestantes. Parmis eux, le miR-338-3p, qui est diminué dans les îlots pendant la gestation, est également réduit dans les îlots des souris db/db et des souris rendues obèses suite à un régime hyperlipidique. Le traitement d’îlots de rats et humains avec de l’estradiol ou du GLP-1, entraîne la diminution du miR-338-3p par une voie cAMP-dépendante. La transfection des cellules - de rats et humaines avec un oligonucléotide antisense qui bloque spécifiquement l’activité du miR-338-3p conduit à des changements d’expression de gènes reflétant les modifications géniques observées pendant la gestation. De plus, la réduction du miR-338-3p favorise la prolifération et la survie des cellules sans affecter la sécrétion d’insuline en réponse au glucose. Conclusion : Ces données suggèrent une implication de miR-338-3p dans les mécanismes compensatoires de la masse des cellules - se produisant lors d’un contexte de résistance à l’insuline. Cette étude pourrait fournir de nouveaux outils visant à promouvoir la régénération et la survie des cellules - pour prévenir et traiter le diabète.
de thrombine, étape clé du phénomène de thrombose C. Sanchez1, M. Poggi1, P. E. Morange1, S. Tanguy2, C. Defoort3, J. C. Martin3, A Dutour1, M. Grino1, M. C. Alessi1 1
INSERM UMR 626, Marseille ; CNRS TIMC-IMAG UMR 5525, Grenoble ; INRA UMR 1260, Marseille.
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Objectif : L’association entre l’obésité et la pathologie thrombotique est partiellement expliquée par un état d’hypercoagulabilité dont les déterminants méritent d’être mieux caractérisés. Dans ce but nous avons mesuré l’effet de modifications de l’alimentation sur la génération de thrombine (GT), enzyme clé de la thrombose, d’une part chez le rat atteint ou non de syndrome métabolique (SM) et d’autre part dans une population à risque cardiovasculaire modéré. Patients et méthodes : Animaux : 170 rats ± SM (Boullu-Ciocca S, et al. 2008), ont reçu une alimentation standard (STD) ou riche en graisses (HFD, saindoux) ± agoniste du récepteur au GLP-1 : Byetta). Patients (cohorte Médi-RIVAGE) : 65 individus ont suivi pendant 3 mois un régime méditerranéen ou issu des recommandations de l’American Heart Association. Résultats : Chez le rat, 4 semaines après le sevrage, le STD diminue significativement la GT, contrairement au HFD qui la maintient élevée. À l’âge adulte (16 semaines) l’HFD augmente la GT, indépendamment du SM, du poids, de l’intolérance au glucose et de l’insulino-résistance. La GT est corrélée au poids du foie, aux concentrations circulantes de triglycérides et de cholestérol et faiblement aux taux de facteur VII. Après l’arrêt du HFD, 4 semaines suffisent pour normaliser la GT, indépendamment du poids et des paramètres métaboliques. Le Byetta diminue le poids, améliore l’état métabolique sans modifier la GT. Chez l’homme, la GT est, comme attendu, associée aux taux de facteurs de l’hémostase mais également, et de manière indépendante, à des marqueurs nutritionnels. Le suivi des recommandations nutritionnelles diminue significativement la GT (21 %). Cette réduction n’est associée ni à celles des facteurs hémostatiques ni au SM mais à celles de marqueurs nutritionnels. Conclusion : Les recommandations alimentaires (diminutions de l’apport en graisses saturées) diminuent significativement la GT indépendamment de l’obésité et l’insulino-résistance. L’intervention nutritionnelle est à considérer dans la prise en charge du risque thrombotique.
PO6 Effet d’un régime enrichi en acides gras à courte chaîne sur l’induction de la néoglucogenèse intestinale F. De Vadder1, D. Goncalves1, 2, A. Duchampt1, G. Mithieux1 1
INSERM U855, Lyon ; Université Lyon 1, Lyon.
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Introduction : Les fibres alimentaires solubles sont des prébiotiques bénéfiques à l’homéostasie glucidique, sans que les mécanismes impliqués soient bien compris à l’heure actuelle. Dégradées au niveau du côlon par la flore bactérienne, elles génèrent des acides gras à courte chaîne (AGCC) : acétate, propionate et butyrate, dont certains peuvent être des substrats de la néoglucogenèse. La néoglucogenèse intestinale (NGI) induit satiété et sensibilité à l’insuline. Nous avons émis l’hypothèse que les AGCC pourraient exercer leurs effets bénéfiques en partie via la NGI. Matériels et méthodes : Des rats sont nourris pendant 2 semaines avec des régimes enrichis en AGCC (5 % de la densité calorique). Ils subissent à 10 jours des tests de tolérance au glucose et à l’insuline. Ils sont ensuite euthanasiés et la néoglucogenèse intestinale est caractérisée.
SFD
Diabète – Nice 2012
PO7 Rôle des microRNAs dans la compensation de la masse des cellules - pendant la gestation C. Jacovetti1, A. Abderrahmani2, R Regazzi1 1 Département de Biologie Cellulaire et de Morphologie, Faculté de Biologie et de Médecine, Université de Lausanne, Lausanne, Suisse ; Institut Européen de Génomique du Diabète, Université de Lille, Nord de France, Lille.
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PO8 Implication de l’histone déméthylase phf2 au développement de la stéatose hépatique au court de physiopathologie de l’obésité et du diabète de type 2 J. Bricambert, C. Postic, J. Girard, R Dentin institut Cochin, INSERM U1016, CNRS UMR8104, Université Paris V, Paris.
Introduction : Au court de l’obésité et du diabète de type 2, l’accumulation de lipides dans le foie, est responsable d’une altération des signaux de l’insuline. Le facteur de transcription ChREBP (Carbohydrate Responsive Element Binding Protein) est impliqué dans le développement de cette stéatose en contrôlant l’expression des gènes de la glycolyse et de la lipogenèse. Cependant, les mécanismes moléculaires régulant son activité restent partiellement élucidés. Dans un crible protéomique visant à caractériser de nouveaux partenaires d’interaction à ChREBP nous avons identifié l’histone déméthylase phf2 (plant homeodomain finger 2) qui est un important régulateur de la production hépatique de glucose. Matériels et méthodes : Notre objectif a été de déterminer le rôle de phf2 au développement de la stéatose hépatique via le contrôle de l’activité transactivatrice de ChREBP. Résultats : Nos résultats montrent que phf2 est un coactivateur transcriptionnel des gènes de la glycolyse et de la lipogenèse, favorisant le développement de la stéatose hépatique. Dans des hépatocytes en culture primaire, nous avons montré que l’activité histone déméthylase de phf2 est stimulée par l’insuline via sa phosphorylation par akt. De plus, phf2 est recruté sur le promoteur des gènes de la glycolyse et de la lipogenèse en réponse au glucose et à l’insuline. Son recrutement et son activation au court de la réalimentation permet la déméthylation de la forme diméthylée de la lysine 9 de l’histone H3 (H3K9me2) sur le promoteur de ces gènes cibles, permettant alors le recrutement de ChREBP et du complexe d’initiation de la transcription pour activé la synthèse d’acide gras. In vivo, l’activité de phf2 est augmentée dans le foie de souris db/db, corrélant le développement de la stéatose hépatique. Diabetes Metab 2012, 38, A22-A31
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