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Utilisation d'un vecteur rétroviral pour le transfert de gènes dans des cellules myélinisantes afin de développer des stratégies thérapeutiques dans les dysmyélinisations
Comple rendu de r~union
394
Suivi longitudinal du statut en acides gras polyi n s a t u r 6 s ( A G P I ) c h e z le n o u r r i s s o n c h o l e s t a tique avant e| apr~s transp|antation h~patique (TH) M Chambon ~. A Lachaux i V Chirouze 2, A Lapillonne~, V Ft~urnier L M itermier~ : H~¢patogastroent~rtd:,~gi,, ' et nutrition t~diatriques, h~pital ~douard-Herriot. Lyon; Imedex. Chapc'most; Zn~onatalogie. hfipital ~.douard-Herriot, Lyon. France Les nourrissou~ cnolestatiques, aprb~s hEpatoportoent,5,'ostomie (HPE) p<~ur atr6sie des votes b iliaires extra-h6patiques (AVBEH). prEsentent une carence en AGPI secondaire :~ la I|ia~,iD~olptlOlliil:,idiqt~e. Object~+; chez des nourrissons atteints de cholestase s6v0re par AVBEH. nous avons 6tudiE de faqon lungitudinale et prospective t'influence de la TH et des apports parent6raux en at;des gras esseotiels (AGE) sur le statut en AGPI (acide arachidonique IAAI : C20:4n-6 ; acide docosa-bexa+noique IDHAI: C22:6n-3). Matdriel et mdthodes: 6 nourrissons pr+mntant une AVBEH avec chulesta.se s,~v0re (bilirubine totale < 250/.tmol/I, 3 mois apr+s HPE) ont ,5t6 suivis des le diagnostic puts avant et apr~'s TH. tin dosage des AGPI des membrenes drythrocytaires a EtE rEalisE tous les 3 nots. Une nutrition parent6rale (NP) a 6t6 ins~aur6e en p~riode pr6-TH (lip;des = 2 g/kg/j). La TH a 6t6 r6alisee ~t 9.2 ± 1,4 nots. Rdsuhats (exprim6s en pourcentage des AG totaux, moyeune ,,: SD) :
,~ge (moist 1,5~. 8-11 Apr~s NP t~ mois post-TH
Acide linolEique
AA
9001 ± 1,68 6.16 ± 2.~9 IO43 ± 3.24 9,32 ± O,6t~
16,67 ± 0.39 14,26 :~ 0.38" 15.06 ± O,80 20.22 ± i,O7"
6tudides out ErE les forraes li6es ~ I'X. dL'eg h des mutatiuns du gone des protdolipoprotEiues (PLP): maladie de Pelizaeus. Merzbaeher et parapl6gie stafique li6e h I'X. Nous nous proposons d'&ndier, A partir d'un mutant PLP murin (sum'is jirnpy), diffdrentes strat6gies de r6paration de la my61ine utilisant la uansplantatkm de cellules t~y61iuisantes p~riph~riqaes (cellules de Schwann) corrigdes ou non pat Iransfert d'un gone PI,P norreal. Pour cette approche° une premiXre 6tape de raise au point d'une technique de tran,~fert de gOne darts les cellules myElinisantes 6tail indispensable. Au cours de ce travail, nous avons choisi de tester un t6trovirus dear6 du virus de Friend (FOCH) du fail de sa capacit6, h F6tat sanvage. ~ induire ehez la souris des tu.,teurs gliales. Grace h I'utilisation d'une lign~:e de cellules productriees de r6trovirus recombinant FOCH contenant ~C g~lie i.~C ~il ;~zi.~tZ,nCe ~ la n6omyel,e (FNCH-~6o), nou5 avons pu d6montrer que ce virus recombinant 6tail capable d'infecter 40% d'ure li/.zn6e continue de cellules de Sehwann my61inisantes (MSC80). avec une expression conserv6e pendant Its 4 mois tcst6~+.Par la suite, des constructions contenant le gbne baet6rien de la fl-galactosidase avec un signal de local;sat;on nuclc~aire (nlsLacZ) ont t~t6 r6alis6es et des lignes productrices de virions reeombinants nlsLacZ ont 6t6 ~tablies. Ces lign6es ser~nt utilis6es pour infecter des ceUules de Schwann non mut6e~ qui seront ensure trallsplant~es dons le cerveau de la Sralris jimpy. Deux constructions (eDNA Pl,P seql oa avec son promoteur) seront ensure transfect6es dons des cultures de Schwann ~'LP mut6es afir, de suivre I'expression du transg0ne in vitro. Ces cellules seront par la suite transplant6es dans le cerveau de souris jimpy pour suivre leur devenir et leur capacit6 de re,-ny61inisatiou du SNC.
DH.4 5,89± 1,18 2.36 ± O.28" 3,43 ± I,10 3.90 ± 0.59**
* p < O,01 : 1.5-4 vs 8-11 et 8-11 vs 6+ mob; post-TH; ** p < 0.O5 : 8- I 1 v:; 6 mois post-TH.
Conclusions: la earenee en AGPI est pr6coce et intense dans ies cholestases sEv0res. Elle s'aceentue jusqu'~t la TH mats se corrige rapidement apr0s eellc.ei. La pr6vention de eette earence pourrait 6ire rEalis6e par un apport en AGE iutraveineux pr6c+;ce cow..m,e le sugg0re l'augmentation des taux d'AGPI aprf:s raise en NP.
Utilisation d'un vecteur r~trovirai pour le transfert de g~nes dans des cellules my~linisantes afin de d6velopper des strat6gies th6rapentiqu~ darts les dysnly61inisations F Cailloux L N Dumey~. O Cohen-HaguenauerL O BoespflugTanguy I Inserm U384. Clermont-Ferrand : 2 UTGT. hfipital SaintLouis, Par;z, France Parrot les nombreuses maladies g,.:.nEtitp~cssusceptibles d'affecter la substance blanche du syst~me nerveux ce,,tral (SNC), les troubles de formatio, de son principal constituant, la my61in¢. repr~sement an groupe h~t~rog~:ne regroup6 sous le terme de dysmy61inisations. Ces maladies se caractErisem par une mort pr,2r:latur~e des ceJItlles mytHinisantes du SNC (oligodendroeytes) dtmt I'originc peut (:Ire acquise ou h~r~ditaire. Les mieux
R61e n e u r o t r o p h i q u e potent;el de la f i b r e d e R e i s s n e r a u c o u r s d u d 6 v e l o p p e m e n t d u syst~me n e r v e u x central H Monneric,O Boespflug-Tanguy,B Dastuguc,A Meiniel Inserm U384. facuhd de mddecine. Clermo, lt-Ferrand, France L'organe sous-commissural (OSC) est un d6riv6 du toit dienc6phalique, dont les celluleq ~pendymaires tr0s sp6,ciali~es :~cr~tent des glycoprut6ines dons la eavit6 ventriculaire; celles-ci s'agr~gent p<,ar former la fibre de Reissner (RF, qui s'6tend du truisi0me vent.,icule jusqu'a I'extr6mit~ caudate de la moelle 6pini0re; I'OSC et la fibre de Reissner repr6sentent une structure constante dons le cervera de tous les vert6br6s. De plus, cette s~cr6tion apparalt tr0s t/~'t au cours de I'ontogen0se (3 jtmrs et demi chez I'embryon de poulet), sugg6rant un rOle posaible dans les processus d6vcloppementaux. Des experiences de destruction m6canique de I'OSC de plusieurs esp0ces de vert6br6s oat conduit ~ des dgformations de I'axe vert6bral. D'autre part, chez le rat, la dysplasie de I'OSC induite par les rayons X y provoque une hydroc6phalie, et chez des souris CWSfldL ayant une hydroc6phalie spontange, I'OSC est absent. N~mmoins, aucune relation de cause ~ effet n'a 6t6 raise en ~videnee entre I'absence d'OSC el I'apparitiou d'une hydrocgphalie. Pour 6tudier le r61e de ees glycoprut~ines, nous avons at;Its6 un mod01e in vitro de cultures primoires de cellules dissoci~s d'h6misph~:res c6r6braux d'embr),ous de p3ulet. L'additiou de la fibre de Reissner sur des cultures mixtes glie-neurones augmente de 45% la survie des neurunes, eomme le montre I'6volution du nombre et de la surface des amas neuronaux. Le m6me effet est retronvE avec la solution d'ineubation de la fibre, dans laquelle la pr6sence de mat6riel soluble spEcifique de la fibre a EtE mise en 6vidence grfice ~ I'utilisatlon d'anticorps polyclonaux dirigc~s contre la fibre de Reb-~ner. Cet effet est dependant de la dose de materiel soluble administr6e, el est partiellemeut inhib6 par I'adj(mction
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Suivi longitudinal du statut en acides gras polyi n s a t u r 6 s ( A G P I ) c h e z le n o u r r i s s o n c h o l e s t a tique avant e| apr~s transp|antation h~patique (TH) M Chambon ~. A Lachaux i V Chirouze 2, A Lapillonne~, V Ft~urnier L M itermier~ : H~¢patogastroent~rtd:,~gi,, ' et nutrition t~diatriques, h~pital ~douard-Herriot. Lyon; Imedex. Chapc'most; Zn~onatalogie. hfipital ~.douard-Herriot, Lyon. France Les nourrissou~ cnolestatiques, aprb~s hEpatoportoent,5,'ostomie (HPE) p<~ur atr6sie des votes b iliaires extra-h6patiques (AVBEH). prEsentent une carence en AGPI secondaire :~ la I|ia~,iD~olptlOlliil:,idiqt~e. Object~+; chez des nourrissons atteints de cholestase s6v0re par AVBEH. nous avons 6tudiE de faqon lungitudinale et prospective t'influence de la TH et des apports parent6raux en at;des gras esseotiels (AGE) sur le statut en AGPI (acide arachidonique IAAI : C20:4n-6 ; acide docosa-bexa+noique IDHAI: C22:6n-3). Matdriel et mdthodes: 6 nourrissons pr+mntant une AVBEH avec chulesta.se s,~v0re (bilirubine totale < 250/.tmol/I, 3 mois apr+s HPE) ont ,5t6 suivis des le diagnostic puts avant et apr~'s TH. tin dosage des AGPI des membrenes drythrocytaires a EtE rEalisE tous les 3 nots. Une nutrition parent6rale (NP) a 6t6 ins~aur6e en p~riode pr6-TH (lip;des = 2 g/kg/j). La TH a 6t6 r6alisee ~t 9.2 ± 1,4 nots. Rdsuhats (exprim6s en pourcentage des AG totaux, moyeune ,,: SD) :
,~ge (moist 1,5~. 8-11 Apr~s NP t~ mois post-TH
Acide linolEique
AA
9001 ± 1,68 6.16 ± 2.~9 IO43 ± 3.24 9,32 ± O,6t~
16,67 ± 0.39 14,26 :~ 0.38" 15.06 ± O,80 20.22 ± i,O7"
6tudides out ErE les forraes li6es ~ I'X. dL'eg h des mutatiuns du gone des protdolipoprotEiues (PLP): maladie de Pelizaeus. Merzbaeher et parapl6gie stafique li6e h I'X. Nous nous proposons d'&ndier, A partir d'un mutant PLP murin (sum'is jirnpy), diffdrentes strat6gies de r6paration de la my61ine utilisant la uansplantatkm de cellules t~y61iuisantes p~riph~riqaes (cellules de Schwann) corrigdes ou non pat Iransfert d'un gone PI,P norreal. Pour cette approche° une premiXre 6tape de raise au point d'une technique de tran,~fert de gOne darts les cellules myElinisantes 6tail indispensable. Au cours de ce travail, nous avons choisi de tester un t6trovirus dear6 du virus de Friend (FOCH) du fail de sa capacit6, h F6tat sanvage. ~ induire ehez la souris des tu.,teurs gliales. Grace h I'utilisation d'une lign~:e de cellules productriees de r6trovirus recombinant FOCH contenant ~C g~lie i.~C ~il ;~zi.~tZ,nCe ~ la n6omyel,e (FNCH-~6o), nou5 avons pu d6montrer que ce virus recombinant 6tail capable d'infecter 40% d'ure li/.zn6e continue de cellules de Sehwann my61inisantes (MSC80). avec une expression conserv6e pendant Its 4 mois tcst6~+.Par la suite, des constructions contenant le gbne baet6rien de la fl-galactosidase avec un signal de local;sat;on nuclc~aire (nlsLacZ) ont t~t6 r6alis6es et des lignes productrices de virions reeombinants nlsLacZ ont 6t6 ~tablies. Ces lign6es ser~nt utilis6es pour infecter des ceUules de Schwann non mut6e~ qui seront ensure trallsplant~es dons le cerveau de la Sralris jimpy. Deux constructions (eDNA Pl,P seql oa avec son promoteur) seront ensure transfect6es dons des cultures de Schwann ~'LP mut6es afir, de suivre I'expression du transg0ne in vitro. Ces cellules seront par la suite transplant6es dans le cerveau de souris jimpy pour suivre leur devenir et leur capacit6 de re,-ny61inisatiou du SNC.
DH.4 5,89± 1,18 2.36 ± O.28" 3,43 ± I,10 3.90 ± 0.59**
* p < O,01 : 1.5-4 vs 8-11 et 8-11 vs 6+ mob; post-TH; ** p < 0.O5 : 8- I 1 v:; 6 mois post-TH.
Conclusions: la earenee en AGPI est pr6coce et intense dans ies cholestases sEv0res. Elle s'aceentue jusqu'~t la TH mats se corrige rapidement apr0s eellc.ei. La pr6vention de eette earence pourrait 6ire rEalis6e par un apport en AGE iutraveineux pr6c+;ce cow..m,e le sugg0re l'augmentation des taux d'AGPI aprf:s raise en NP.
Utilisation d'un vecteur r~trovirai pour le transfert de g~nes dans des cellules my~linisantes afin de d6velopper des strat6gies th6rapentiqu~ darts les dysnly61inisations F Cailloux L N Dumey~. O Cohen-HaguenauerL O BoespflugTanguy I Inserm U384. Clermont-Ferrand : 2 UTGT. hfipital SaintLouis, Par;z, France Parrot les nombreuses maladies g,.:.nEtitp~cssusceptibles d'affecter la substance blanche du syst~me nerveux ce,,tral (SNC), les troubles de formatio, de son principal constituant, la my61in¢. repr~sement an groupe h~t~rog~:ne regroup6 sous le terme de dysmy61inisations. Ces maladies se caractErisem par une mort pr,2r:latur~e des ceJItlles mytHinisantes du SNC (oligodendroeytes) dtmt I'originc peut (:Ire acquise ou h~r~ditaire. Les mieux
R61e n e u r o t r o p h i q u e potent;el de la f i b r e d e R e i s s n e r a u c o u r s d u d 6 v e l o p p e m e n t d u syst~me n e r v e u x central H Monneric,O Boespflug-Tanguy,B Dastuguc,A Meiniel Inserm U384. facuhd de mddecine. Clermo, lt-Ferrand, France L'organe sous-commissural (OSC) est un d6riv6 du toit dienc6phalique, dont les celluleq ~pendymaires tr0s sp6,ciali~es :~cr~tent des glycoprut6ines dons la eavit6 ventriculaire; celles-ci s'agr~gent p<,ar former la fibre de Reissner (RF, qui s'6tend du truisi0me vent.,icule jusqu'a I'extr6mit~ caudate de la moelle 6pini0re; I'OSC et la fibre de Reissner repr6sentent une structure constante dons le cervera de tous les vert6br6s. De plus, cette s~cr6tion apparalt tr0s t/~'t au cours de I'ontogen0se (3 jtmrs et demi chez I'embryon de poulet), sugg6rant un rOle posaible dans les processus d6vcloppementaux. Des experiences de destruction m6canique de I'OSC de plusieurs esp0ces de vert6br6s oat conduit ~ des dgformations de I'axe vert6bral. D'autre part, chez le rat, la dysplasie de I'OSC induite par les rayons X y provoque une hydroc6phalie, et chez des souris CWSfldL ayant une hydroc6phalie spontange, I'OSC est absent. N~mmoins, aucune relation de cause ~ effet n'a 6t6 raise en ~videnee entre I'absence d'OSC el I'apparitiou d'une hydrocgphalie. Pour 6tudier le r61e de ees glycoprut~ines, nous avons at;Its6 un mod01e in vitro de cultures primoires de cellules dissoci~s d'h6misph~:res c6r6braux d'embr),ous de p3ulet. L'additiou de la fibre de Reissner sur des cultures mixtes glie-neurones augmente de 45% la survie des neurunes, eomme le montre I'6volution du nombre et de la surface des amas neuronaux. Le m6me effet est retronvE avec la solution d'ineubation de la fibre, dans laquelle la pr6sence de mat6riel soluble spEcifique de la fibre a EtE mise en 6vidence grfice ~ I'utilisatlon d'anticorps polyclonaux dirigc~s contre la fibre de Reb-~ner. Cet effet est dependant de la dose de materiel soluble administr6e, el est partiellemeut inhib6 par I'adj(mction