- Email: [email protected]
P195 Le microbiote tissulaire est sous la dépendance du microbiote intestinal : implication dans le diabète de type 2
SFD
antagonistes spécifiques CB1R (SR141716) ou CB2R (AM630) et totalement annulée par l’injection simultanée des deux composés. Chez les souris obèses, l’effet de l’AEA sur la glycémie postprandiale est amplifié et associé à une surexpression des ARNm CB1R dans l’intestin. Conclusion L’activation du SEC induite par l’AEA diminue la glycémie postprandiale sans altérer le transport du glucose à travers la paroi intestinale mais principalement en réduisant la motilité GI via CB1R et CB2R. Pour préciser l’intérêt thérapeutique de ces résultats, il conviendra de déterminer la localisation et les rôles respectifs de CB1R et CB2R dans les différentes parties du tractus digestif sachant que leur expression peut fortement varier dans des conditions pathologiques. Déclaration d’intérêt Les auteurs déclarent ne pas avoir d’intérêt direct ou indirect (financier ou en nature) avec un organisme privé, industriel ou commercial en relation avec le sujet présenté.
P194 Un régime riche en fructose augmente précocement le métabolisme glucidique cérébral : étude par spectroscopie de résonance magnétique nucléaire chez le rat D. El Hamrani*,1, A.-K. Bouzier-Sore1, H. Gin1, J. Gaitan2, J. Lang2, J.-L. Gallis1, M.-C. Beauvieux1 1
Résonance magnétique des systèmes biologiques, UMR 5536, CNRS, Université de Bordeaux, Bordeaux, France, 2 Institut de chimie et biologie des membranes et des nano-objets, UMR5248, Université de Bordeaux, Pessac, France.
*Auteur correspondant : [email protected]
Déclaration d’intérêt Les auteurs déclarent ne pas avoir d’intérêt direct ou indirect (financier ou en nature) avec un organisme privé, industriel ou commercial en relation avec le sujet présenté.
P196 L’insuline contrôle l’activité de la voie Wnt/b-caténine dans le foie de souris via la SCD1 et la Porcupine M. Moldes*,1, R. Cabrae2, C. Dubuquoy2, L. Morzyglod2, S. Guilmeau2, B. Noblet2, H. Guillou3, B. Fève4, C. Postic2, A. F. Burnol2 1
INSERM UMR S938, UPMC, site Saint-Antoine, Paris, France, Insitut Cochin INSERM U1016, Paris, France, INRA, TOXALIM, Toulouse, France, 4 INSERM UMR S 938, CDR, site Saint-Antoine, Paris, France. 2 3
Introduction La prévalence de l’obésité, du syndrome métabolique et du DT2 serait associée à la consommation accrue de fructose (BrayAG, AdvNutr2013 ; 4) dont les effets métaboliques cérébraux sont peu étudiés. La spectroscopie de RMN étudie le devenir du glucose enrichi ([1-13C] Gluc) selon ses deux voies métaboliques cérébrales induisant un marquage différent des composés du métabolisme intermédiaire : (i) pyruvate déshydrogénase (neurones et astrocytes), (ii) pyruvate carboxylase (astrocytes). Le métabolisme est (i) neuronal si C2/C3 glutamate ≤ 1 ou (ii) astrocytaire si C2/C3 glutamine > 1. Le devenir du [1-13C] Gluc est évalué par RMN chez le rat consommant du fructose. Matériels et méthodes Des rats Wistar (7 sem, 230 g à t0) ont des rations isocaloriques : fructose (HF, 20 % dans l’eau) vs contrôles (CT) (n = 8/groupe). L’alimentation solide est standard en apport « pair-fed ». Après 6 semaines, les rats sont perfusés 1 heure par [1-13C] Gluc (2,19 mmol/h/200 g poids corporel). Après euthanasie (micro-ondes scientifique figeant le métabolisme, Sacron8000), les cerveaux sont prélevés. Les extraits sont analysés par spectroscopie RMN (1H et 13C, Bruker Avance500). Résultats À consommation calorique équivalente, HF ont une prise de poids inférieure (– 16 % à 6 sem) vs CT (p < 0,05, Mann-Whitney). Le ratio glycémie/insulinémie en préperfusion tend à augmenter chez HF (23,1 ± 9,3, m ± ESM) vs CT (8,9 ± 1,6). Le ratio C2/C3 glutamate est similaire mais C2/C3 glutamine augmente de 23,4 % chez HF vs CT (1,08 ± 0,08 ; p = 0,02). Le pourcentage de 13C incorporé dans un métabolite sur une position carbonée augmente chez HF vs CT (+1947 %, p < 0,05) pour glutamate (C3-C4), glutamine (C3-C4), GABA (C3-C2). Conclusion Le fructose en apport normocalorique sur une courte durée n’induit ni surpoids ni insulinorésistance significative mais augmente déjà (i) le métabolisme astrocytaire du Gluc et (ii) l’enrichissement spécifique de neurotransmetteurs en faveur d’un accroissement du métabolisme intermédiaire. Le fructose a des transporteurs cérébraux GLUT5 spécifiques (DouardV, AmJPhysiol2008 ; 295) mais son effet sur la compartimentation métabolique du Gluc est inédit. IREB grants.
Introduction La voie Wnt/β-caténine joue un rôle essentiel dans le foie contrôlant le métabolisme azoté et glucidique. Elle est activée par la liaison de ligands Wnts, qui subissent plusieurs modifications post-traductionnelles, notamment des acylations nécessaires à leur sécrétion et action sur leurs récepteurs. En particulier, ils sont palmitoléylés par la protéine Porcupine, une acyltransférase localisée dans le RE. Cependant, la régulation de cette voie par les hormones régulant le métabolisme glucidolipidique reste à déterminer. L’objectif de cette étude a donc été de déterminer l’influence des hormones régulant le métabolisme glucidolipidique, et notamment, l’insuline sur l’activation de la voie Wnt/β-caténine dans le foie. Matériels et méthodes L’activité de la voie Wnt/β-caténine a été étudiée par des approches de gène rapporteur, RT-qPCR et Western Blot, in vitro, dans des cultures primaires d’hépatocytes de souris et, in vivo, dans le foie de souris soumises à des manipulations nutritionnelles (jeune/réalimentation), des inhibiteurs pharmacologiques, ou géniques (souris invalidées pour le récepteur de l’insuline hépatique). Résultats Au cours de cette étude, nous montrons que la voie Wnt/β-caténine est activée par l’insuline dans le foie de souris renourries. Des analyses in vitro dans des cultures primaires d’hépatocytes et in vivo dans un modèle de souris invalidées pour le récepteur à l’insuline dans le foie, montrent qu’en absence d’un signal insulinique efficace, l’expression des gènes cibles de la voie Wnt/β-caténine est diminuée. Ce processus implique la voie PI3K/mTORC1 et l’induction de la lipogenèse. En effet, l’enzyme SCD1, qui désature le palmitate en palmitoléate, est nécessaire à l’activation de la voie Wnt/β-caténine. De plus ce processus implique également l’action de l’acyltransférase Porcupine qui acyle les ligands Wnt avec le palmitoléate. Conclusion En conclusion, l’insuline joue un rôle déterminant dans l’induction de la voie Wnt/β-caténine dans le foie des souris renourries. Les protéines SCD1 et Porcupine participent à ce nouveau mécanisme d’activation des ligands Wnt.
Déclaration d’intérêt Les auteurs déclarent ne pas avoir d’intérêt direct ou indirect (financier ou en nature) avec un organisme privé, industriel ou commercial en relation avec le sujet présenté.
Déclaration d’intérêt Les auteurs déclarent ne pas avoir d’intérêt direct ou indirect (financier ou en nature) avec un organisme privé, industriel ou commercial en relation avec le sujet présenté.
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Le microbiote tissulaire est sous la dépendance du microbiote intestinal : implication dans le diabète de type 2
Impact de nutriments prébiotiques de type inuline sur la glycémie : mise en évidence de nouvelles cibles thérapeutiques
B. Coupé*,1, A.-C. Brunet1, B. Lelouvier1, F. Servant1, C. Chabo, C. SchusterKlein2, B. Guardiola2, J. Amar1, M. Courtney1, R. Burcelin1
A. Neyrinck*,1, P. Theulier1, A. Jouret1, B. Taminiau2, G. Daube2, R. Frederick1, P. Cani1, N. Delzenne1
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A82
taines sont traitées par un mélange symbiotique (HFD4S). Le gène bactérien 16SADN est séquencé et quantifié dans le tissu adipeux, le foie et la muqueuse intestinale. Le transcriptome correspondant à ces tissus est analysé par microarrays. Résultats La composition du microbiote tissulaire est une signature spécifique de chaque tissu. Le régime diabétogène modifie de façon précoce (HFD1) et à long terme (HFD4) la composition du microbiote tissulaire. Nous montrons que les symbiotiques modifient considérablement la composition du microbiote tissulaire qui est donc sous la dépendance du microbiote intestinal. Le transcriptome de chaque tissu est également dépendant des changements du microbiote tissulaire. Des interactomes moléculaire microbiote-transcriptome sont identifiés. Conclusion Le microbiote tissulaire est sous la dépendance du microbiote intestinal définissant un axe intestin-tissu qui ouvre ainsi la voie à des traitements des maladies métaboliques (diabète de type 2 et obésité). L’identification moléculaire des interactomes définira les cibles précises à contrôler.
VAIOMER, INSERM, Labège, France, Servier, Suresnes, France.
*Auteur correspondant : [email protected]
2
Université catholique de Louvain, Bruxelles, Belgique, Université de Liège, Liège, Belgique.
*Auteur correspondant : [email protected]
*Auteur correspondant : [email protected]
Introduction L’obésité et le diabète de type 2 sont caractérisés par une inflammation chronique à bas bruit notamment dans le tissu adipeux et le foie. La présence de composé bactérien sanguin (LPS, peptidoglycane) dont des bactéries vivantes ont été identifiées et caractérisent un « microbiote tissulaire » qui pourrait être à l’origine de l’inflammation et des dysfonctionnements organiques correspondants. Les objectifs de notre étude sont (i) de déterminer la distribution et la composition du microbiote tissulaire au cours de l’installation d’un diabète de type 2, (ii) d’identifier si ce microbiote tissulaire est dépendant du microbiote intestinal et (iii) de déterminer les interactions moléculaires avec le transcriptome. Matériels et méthodes Des souris mâles C57BL6/J âgées de 8 semaines sont nourries d’un régime standard (NC) ou gras pendant 1 (HFD1) ou 4 semaines (HFD4). Cer-
Introduction L’administration de nutriments prébiotiques (fructanes) diminue la glycémie dans différents modèles murins d’obésité et chez l’homme, un effet ayant abouti à une allégation de santé par l’EFSA (Autorité européenne de sécurité des aliments). Le mécanisme moléculaire impliqué dans cet effet demeure inconnu. Nous avons testé l’hypothèse d’un effet potentiel de l’inuline sur la digestion des glucides alimentaires et avons mis en relation cet effet avec la modulation du microbiote intestinal. Matériels et méthodes Des souris à jeun ont été gavées soit avec une solution de saccharose contenant de l’inuline (Fibruline® 5 %), soit avec du saccharose seul. Un test de tolérance orale au saccharose (TTOS) a été appliqué également chez des souris nourries durant 20 jours avec l’inuline (5 % dans un régime stan-
© 2015. Elsevier Masson SAS. Tous droits réservés.
antagonistes spécifiques CB1R (SR141716) ou CB2R (AM630) et totalement annulée par l’injection simultanée des deux composés. Chez les souris obèses, l’effet de l’AEA sur la glycémie postprandiale est amplifié et associé à une surexpression des ARNm CB1R dans l’intestin. Conclusion L’activation du SEC induite par l’AEA diminue la glycémie postprandiale sans altérer le transport du glucose à travers la paroi intestinale mais principalement en réduisant la motilité GI via CB1R et CB2R. Pour préciser l’intérêt thérapeutique de ces résultats, il conviendra de déterminer la localisation et les rôles respectifs de CB1R et CB2R dans les différentes parties du tractus digestif sachant que leur expression peut fortement varier dans des conditions pathologiques. Déclaration d’intérêt Les auteurs déclarent ne pas avoir d’intérêt direct ou indirect (financier ou en nature) avec un organisme privé, industriel ou commercial en relation avec le sujet présenté.
P194 Un régime riche en fructose augmente précocement le métabolisme glucidique cérébral : étude par spectroscopie de résonance magnétique nucléaire chez le rat D. El Hamrani*,1, A.-K. Bouzier-Sore1, H. Gin1, J. Gaitan2, J. Lang2, J.-L. Gallis1, M.-C. Beauvieux1 1
Résonance magnétique des systèmes biologiques, UMR 5536, CNRS, Université de Bordeaux, Bordeaux, France, 2 Institut de chimie et biologie des membranes et des nano-objets, UMR5248, Université de Bordeaux, Pessac, France.
*Auteur correspondant : [email protected]
Déclaration d’intérêt Les auteurs déclarent ne pas avoir d’intérêt direct ou indirect (financier ou en nature) avec un organisme privé, industriel ou commercial en relation avec le sujet présenté.
P196 L’insuline contrôle l’activité de la voie Wnt/b-caténine dans le foie de souris via la SCD1 et la Porcupine M. Moldes*,1, R. Cabrae2, C. Dubuquoy2, L. Morzyglod2, S. Guilmeau2, B. Noblet2, H. Guillou3, B. Fève4, C. Postic2, A. F. Burnol2 1
INSERM UMR S938, UPMC, site Saint-Antoine, Paris, France, Insitut Cochin INSERM U1016, Paris, France, INRA, TOXALIM, Toulouse, France, 4 INSERM UMR S 938, CDR, site Saint-Antoine, Paris, France. 2 3
Introduction La prévalence de l’obésité, du syndrome métabolique et du DT2 serait associée à la consommation accrue de fructose (BrayAG, AdvNutr2013 ; 4) dont les effets métaboliques cérébraux sont peu étudiés. La spectroscopie de RMN étudie le devenir du glucose enrichi ([1-13C] Gluc) selon ses deux voies métaboliques cérébrales induisant un marquage différent des composés du métabolisme intermédiaire : (i) pyruvate déshydrogénase (neurones et astrocytes), (ii) pyruvate carboxylase (astrocytes). Le métabolisme est (i) neuronal si C2/C3 glutamate ≤ 1 ou (ii) astrocytaire si C2/C3 glutamine > 1. Le devenir du [1-13C] Gluc est évalué par RMN chez le rat consommant du fructose. Matériels et méthodes Des rats Wistar (7 sem, 230 g à t0) ont des rations isocaloriques : fructose (HF, 20 % dans l’eau) vs contrôles (CT) (n = 8/groupe). L’alimentation solide est standard en apport « pair-fed ». Après 6 semaines, les rats sont perfusés 1 heure par [1-13C] Gluc (2,19 mmol/h/200 g poids corporel). Après euthanasie (micro-ondes scientifique figeant le métabolisme, Sacron8000), les cerveaux sont prélevés. Les extraits sont analysés par spectroscopie RMN (1H et 13C, Bruker Avance500). Résultats À consommation calorique équivalente, HF ont une prise de poids inférieure (– 16 % à 6 sem) vs CT (p < 0,05, Mann-Whitney). Le ratio glycémie/insulinémie en préperfusion tend à augmenter chez HF (23,1 ± 9,3, m ± ESM) vs CT (8,9 ± 1,6). Le ratio C2/C3 glutamate est similaire mais C2/C3 glutamine augmente de 23,4 % chez HF vs CT (1,08 ± 0,08 ; p = 0,02). Le pourcentage de 13C incorporé dans un métabolite sur une position carbonée augmente chez HF vs CT (+1947 %, p < 0,05) pour glutamate (C3-C4), glutamine (C3-C4), GABA (C3-C2). Conclusion Le fructose en apport normocalorique sur une courte durée n’induit ni surpoids ni insulinorésistance significative mais augmente déjà (i) le métabolisme astrocytaire du Gluc et (ii) l’enrichissement spécifique de neurotransmetteurs en faveur d’un accroissement du métabolisme intermédiaire. Le fructose a des transporteurs cérébraux GLUT5 spécifiques (DouardV, AmJPhysiol2008 ; 295) mais son effet sur la compartimentation métabolique du Gluc est inédit. IREB grants.
Introduction La voie Wnt/β-caténine joue un rôle essentiel dans le foie contrôlant le métabolisme azoté et glucidique. Elle est activée par la liaison de ligands Wnts, qui subissent plusieurs modifications post-traductionnelles, notamment des acylations nécessaires à leur sécrétion et action sur leurs récepteurs. En particulier, ils sont palmitoléylés par la protéine Porcupine, une acyltransférase localisée dans le RE. Cependant, la régulation de cette voie par les hormones régulant le métabolisme glucidolipidique reste à déterminer. L’objectif de cette étude a donc été de déterminer l’influence des hormones régulant le métabolisme glucidolipidique, et notamment, l’insuline sur l’activation de la voie Wnt/β-caténine dans le foie. Matériels et méthodes L’activité de la voie Wnt/β-caténine a été étudiée par des approches de gène rapporteur, RT-qPCR et Western Blot, in vitro, dans des cultures primaires d’hépatocytes de souris et, in vivo, dans le foie de souris soumises à des manipulations nutritionnelles (jeune/réalimentation), des inhibiteurs pharmacologiques, ou géniques (souris invalidées pour le récepteur de l’insuline hépatique). Résultats Au cours de cette étude, nous montrons que la voie Wnt/β-caténine est activée par l’insuline dans le foie de souris renourries. Des analyses in vitro dans des cultures primaires d’hépatocytes et in vivo dans un modèle de souris invalidées pour le récepteur à l’insuline dans le foie, montrent qu’en absence d’un signal insulinique efficace, l’expression des gènes cibles de la voie Wnt/β-caténine est diminuée. Ce processus implique la voie PI3K/mTORC1 et l’induction de la lipogenèse. En effet, l’enzyme SCD1, qui désature le palmitate en palmitoléate, est nécessaire à l’activation de la voie Wnt/β-caténine. De plus ce processus implique également l’action de l’acyltransférase Porcupine qui acyle les ligands Wnt avec le palmitoléate. Conclusion En conclusion, l’insuline joue un rôle déterminant dans l’induction de la voie Wnt/β-caténine dans le foie des souris renourries. Les protéines SCD1 et Porcupine participent à ce nouveau mécanisme d’activation des ligands Wnt.
Déclaration d’intérêt Les auteurs déclarent ne pas avoir d’intérêt direct ou indirect (financier ou en nature) avec un organisme privé, industriel ou commercial en relation avec le sujet présenté.
Déclaration d’intérêt Les auteurs déclarent ne pas avoir d’intérêt direct ou indirect (financier ou en nature) avec un organisme privé, industriel ou commercial en relation avec le sujet présenté.
P195
P197
Le microbiote tissulaire est sous la dépendance du microbiote intestinal : implication dans le diabète de type 2
Impact de nutriments prébiotiques de type inuline sur la glycémie : mise en évidence de nouvelles cibles thérapeutiques
B. Coupé*,1, A.-C. Brunet1, B. Lelouvier1, F. Servant1, C. Chabo, C. SchusterKlein2, B. Guardiola2, J. Amar1, M. Courtney1, R. Burcelin1
A. Neyrinck*,1, P. Theulier1, A. Jouret1, B. Taminiau2, G. Daube2, R. Frederick1, P. Cani1, N. Delzenne1
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taines sont traitées par un mélange symbiotique (HFD4S). Le gène bactérien 16SADN est séquencé et quantifié dans le tissu adipeux, le foie et la muqueuse intestinale. Le transcriptome correspondant à ces tissus est analysé par microarrays. Résultats La composition du microbiote tissulaire est une signature spécifique de chaque tissu. Le régime diabétogène modifie de façon précoce (HFD1) et à long terme (HFD4) la composition du microbiote tissulaire. Nous montrons que les symbiotiques modifient considérablement la composition du microbiote tissulaire qui est donc sous la dépendance du microbiote intestinal. Le transcriptome de chaque tissu est également dépendant des changements du microbiote tissulaire. Des interactomes moléculaire microbiote-transcriptome sont identifiés. Conclusion Le microbiote tissulaire est sous la dépendance du microbiote intestinal définissant un axe intestin-tissu qui ouvre ainsi la voie à des traitements des maladies métaboliques (diabète de type 2 et obésité). L’identification moléculaire des interactomes définira les cibles précises à contrôler.
VAIOMER, INSERM, Labège, France, Servier, Suresnes, France.
*Auteur correspondant : [email protected]
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Université catholique de Louvain, Bruxelles, Belgique, Université de Liège, Liège, Belgique.
*Auteur correspondant : [email protected]
*Auteur correspondant : [email protected]
Introduction L’obésité et le diabète de type 2 sont caractérisés par une inflammation chronique à bas bruit notamment dans le tissu adipeux et le foie. La présence de composé bactérien sanguin (LPS, peptidoglycane) dont des bactéries vivantes ont été identifiées et caractérisent un « microbiote tissulaire » qui pourrait être à l’origine de l’inflammation et des dysfonctionnements organiques correspondants. Les objectifs de notre étude sont (i) de déterminer la distribution et la composition du microbiote tissulaire au cours de l’installation d’un diabète de type 2, (ii) d’identifier si ce microbiote tissulaire est dépendant du microbiote intestinal et (iii) de déterminer les interactions moléculaires avec le transcriptome. Matériels et méthodes Des souris mâles C57BL6/J âgées de 8 semaines sont nourries d’un régime standard (NC) ou gras pendant 1 (HFD1) ou 4 semaines (HFD4). Cer-
Introduction L’administration de nutriments prébiotiques (fructanes) diminue la glycémie dans différents modèles murins d’obésité et chez l’homme, un effet ayant abouti à une allégation de santé par l’EFSA (Autorité européenne de sécurité des aliments). Le mécanisme moléculaire impliqué dans cet effet demeure inconnu. Nous avons testé l’hypothèse d’un effet potentiel de l’inuline sur la digestion des glucides alimentaires et avons mis en relation cet effet avec la modulation du microbiote intestinal. Matériels et méthodes Des souris à jeun ont été gavées soit avec une solution de saccharose contenant de l’inuline (Fibruline® 5 %), soit avec du saccharose seul. Un test de tolérance orale au saccharose (TTOS) a été appliqué également chez des souris nourries durant 20 jours avec l’inuline (5 % dans un régime stan-
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