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Étude de l’efficacité de l’hypochlorite de sodium à 2,5 %, de la chlorhexidine à 0,5 %, et de l’hydroxyde de calcium sur Candida albicans
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MYCMED-621; No. of Pages 6 Journal de Mycologie Médicale (2016) xxx, xxx—xxx
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ARTICLE ORIGINAL/ORIGINAL ARTICLE
Étude de l’efficacité de l’hypochlorite de sodium à 2,5 %, de la chlorhexidine à 0,5 %, et de l’hydroxyde de calcium sur Candida albicans Efficacy of sodium hydroxide at 2.5 %, chlorhexidine gluconate at 0.5 % and calcium hydroxide against Candida albicans D. Ndiaye a,*, K. Diongue b, K. Bane a, A. Seck a, S.O. Niang a, F. Lèye Benoist a, D. Ndiaye b, B. Touré a a b
´ partement d’odontologie, universite ´ Cheikh Anta Diop-Dakar BP 5005 Dakar, Se ´ ne ´ gal De ´ ne ´ gal Laboratoire de parasitologie et de mycologie, CHU Le Dantec, BP 16477, Dakar, Se
´e le 16 mars 2016; accepte´ le 6 avril 2016 Rec¸u le 18 janvier 2016 ; rec¸u sous la forme re´vise
MOTS CLÉS Candida albicans ; Hypochlorite de sodium ; Gluconate de chlorhexidine ; Désinfection ; Concentration minimale inhibitrice
Résumé Introduction. — La flore endodontique est dominée dans la partie apicale des canaux par des bactéries anaérobies strictes et quelques anaérobies facultatives mais aussi par les levures du genre Candida et particulièrement l’espèce Candida albicans qui sont impliquées dans l’entretien et la persistance des infections endodontiques. Leur élimination du système canalaire en pratique par des procédés chémo-mécaniques de désinfection n’est pas toujours garantie. C’est ainsi que cette étude in vitro a été réalisée pour déterminer la sensibilité de C. albicans à l’hypochlorite de sodium (NaOCl) dosée à 2,5 %, au digluconate de chlorhexidine à 0,5 % et à l’hydroxyde de calcium utilisée en médication interséance. Me ´thodologie. — La méthode de diffusion a été utilisée dans un premier temps pour tester la sensibilité des souches de C. albicans aux produits précités. Puis une technique de dilution nous a permis de déterminer la concentration minimale inhibitrice des produits actifs sur C. albicans. Re ´sultat. — Des souches de C. albicans provenant des dents à pulpe infectée de patients ont montré une sensibilité à l’hypochlorite de sodium pour une concentration minimale inhibitrice inférieure à 70 mg/mL et de 60 mg/mL pour la chlorhexidine.
* Auteur correspondant. Adresse e-mail : [email protected] (D. Ndiaye). http://dx.doi.org/10.1016/j.mycmed.2016.04.006 1156-5233/# 2016 Publié par Elsevier Masson SAS.
Pour citer cet article : Ndiaye D, et al. Étude de l’efficacité de l’hypochlorite de sodium à 2,5 %, de la chlorhexidine à 0,5 %, et de l’hydroxyde de calcium sur Candida albicans. Journal De Mycologie Médicale (2016), http://dx.doi.org/10.1016/j.mycmed.2016.04.006
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D. Ndiaye et al. Conclusion. — Cette étude a démontré une sensibilité de C. albicans à l’hypochlorite de sodium et à la chlorhexidine. # 2016 Publié par Elsevier Masson SAS.
KEYWORDS Candida albicans; Sodium hypochlorite; Chlorhexidine gluconate; Disinfection; Minimum inhibitory concentration
Summary Introduction. — Endodontic flora is dominated in the apical part of the channels by strict anaerobic and some facultative anaerobic bacteria but also by Candida yeasts, especially Candida albicans species that are involved in the maintenance and persistence of endodontic infections. Their elimination of the canal system in practice by chemo-mechanical methods of disinfection is not always guaranteed. Thus, this in vitro study was performed to determine the sensitivity of C. albicans with sodium hypochlorite (NaOCl) dosed at 2.5 %, the chlorhexidine digluconate 0.5 % and calcium hydroxide used in inter-session medication. Methods. — The diffusion method was used initially to test the sensitivity of C. albicans strains with the above products. Then a dilution technique has allowed us to determine the minimum inhibitory concentration of these active products on C. albicans. Results. — Strains from infected pulp teeth of patients showed a sensitivity of C. albicans to sodium hypochlorite to a minimum inhibitory concentration less than 70 mg/mL and 30 mg/mL for chlorhexidine. Conclusion. — This study demonstrated a sensitivity of C. albicans to sodium hypochlorite and chlorhexidine. # 2016 Published by Elsevier Masson SAS.
Introduction La présence des levures dans les canaux pulpaires infectés a été démontrée par de nombreuses études [12,13,18]. Leur prévalence varie de 1 à 61,5 % dans les primo infections [13,15]. Dans les infections persistantes, leur prévalence est de 2,9 à 22 %. L’espèce la plus fréquemment identifiée est Candida albicans [17]. Ces levures sont des aérobies qui peuvent se reproduire dans des conditions anaérobies. De par leur présence, il serait possible que les levures interviennent directement ou indirectement dans l’étiologie et l’entretien des parodontites apicales d’origine endodontique. Ces levures possèdent une virulence qui dépend de leur adaptation aux conditions environnementales, de leur adhésion aux surfaces dentinaires [3], mais aussi de l’activité collagénique de C. albicans d’utiliser la dentine radiculaire comme source de nutriment [6]. Sur le plan structural elle possède des canalicules dentinaires susceptibles d’héberger des micro-organismes. Ces conditions propices peuvent être offertes par l’anatomie du réseau canalaire. En outre les procédures mécaniques de préparation canalaire entraînent toujours la formation d’une couche hybride de débris de surface appelée boue dentinaire ou smear layer. Cette couche organo-minérale, qui a une épaisseur très faible, peut pénétrer dans les canalicules dentinaires et servir de substrats pour la prolifération de certains micro-organismes. La recherche de la sensibilité des levures aux agents de désinfection et aux médications intracanalaires serait bénéfique pour déterminer un moyen efficace de les éliminer au niveau des tissus dentaires infectés [1,8,14]. Hormis les études sur la croissance des levures dans le système canalaire, il y a eu très peu d’études portant sur l’effet de ces produits de désinfection sur ces dernières. Les travaux existant sont difficiles à comparer en raison des variations dans la méthodologie et des solutions testées [4,5,21].
Cette présente étude a été menée dans le but de déterminer la sensibilité in vitro des souches de C. albicans aux solutions de désinfection et à l’hydroxyde de calcium par la méthode de diffusion. Puis la méthode de dilution a permis de déterminer la concentration minimale inhibitrice (CMI) des produits actifs sur C. albicans.
Matériels et méthodes L’étude expérimentale in vitro était réalisée au service de parasitologie et mycologie de l’hôpital Aristide Le Dantec de Dakar.
Souches Elles étaient constituées de trois souches de C. albicans isolées de patients présentant des dents à pulpe infectée avec une nécrose pulpaire ouverte. Une souche de référence de C. albicans 24433 ATCC (Rockville, MD) a été utilisée comme souche contrôle (Tableau 1). Après identification, les isolats ont été conservés à 20 8C dans du bouillon cœur cervelle (BBC) ajouté à d glycérol à 15 % au laboratoire de parasitologie et de mycologie de l’hôpital Aristide Le Dantec.
Préparation des souches de levures Après décongélation, les différentes souches ont été mises en suspension dans de l’eau physiologique, puis ensemencées à l’aide d’une anse de platine, autour d’un bec Bensun, dans des boîtes de pétri contenant de la gélose de Sabouraudchloramphénicol (SC). Ensuite, les boîtes étaient incubées dans une étuve à 37 8C pendant 24 h.
Pour citer cet article : Ndiaye D, et al. Étude de l’efficacité de l’hypochlorite de sodium à 2,5 %, de la chlorhexidine à 0,5 %, et de l’hydroxyde de calcium sur Candida albicans. Journal De Mycologie Médicale (2016), http://dx.doi.org/10.1016/j.mycmed.2016.04.006
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Hypochlorite de sodium, de la chlorhexidine et de l’hydroxyde de calcium Tableau 1 Répartition des différentes souches. Strains distribution. Souches
Provenance
Souche de référence
ATCC 24433
Rockville, MD
Dent 11 Dent 21 Dent 22
C. albicans C. albicans C. albicans
Patient 1 Patient 2 Patient 3
Préparation des inocula L’inoculum est préparé à partir d’une culture pure de 24 h obtenue sur gélose SC. Quelques colonies bien isolées et parfaitement identiques sont raclées à l’aide d’une anse de platine et déchargée dans 5 mL d’eau physiologique stérile à 0,9 %. La suspension de levures est bien homogénéisée et ajustée jusqu’à atteindre une opacité équivalente à 0,5 Mc Farland.
Méthode de diffusion L’ensemencement des inocula sur gélose SC est fait avec un écouvillon stérile. Les disques ont été confectionnés à l’aide d’un papier Whatmann (Whatmann1, États-Unis), découpés en disque de 6 mm de diamètre et stérilisés au four pendant 15 min à 120 8C. Après séchage à l’étuve à 37 8C des géloses ensemencées, les disques imbibés des solutions sont essorés avant d’être déposés au centre des différentes boîtes SC à l’aide d’une pince stérilisée à la flamme. L’hypochlorite de sodium (NaOCl) Une solution d’hypochlorite de sodium du commerce dosée à 2,5 % a été utilisée (Lacroix1, Palmolive, Sénégal). Un disque imprégné de cette solution était placé au centre de la boîte de pétri contenant de la gélose SC auparavant ensemencée de l’inoculum de C. albicans, puis la boîte était placée dans une étuve pendant 24 h à 37 8C. Le gluconate de chlorhexidine Il était utilisé à une concentration de 0,5 % (Pierre Fabre1, France). Le même procédé a été utilisé que pour le NaOCl à 2,5 % pour déterminer l’activité du produit sur C. albicans. La pâte d’hydroxyde de calcium (Pulpdent Corporation MA, États-Unis) Elle a été utilisée et préparée selon la technique décrite par Morgan et al. [11] ; 10 mg de la poudre d’hydroxyde de calcium est dissoute dans 5 mL d’eau distillée (soit une concentration massique de 2 mg/mL). La solution était vigoureusement agitée pour homogénéiser le mélange, qui était disposée en contact de l’inoculum de C. albicans au centre d’une boîte de pétri contenant la gélose SC et incubée pendant 24 h à 48 h à 37 8C. Contrôles La povidone iodée était utilisée comme contrôle positif pour s’assurer de la sensibilité des souches de C. albicans à un antifongique et le sérum physiologique pour attester de la viabilité des souches comme contrôle négatif.
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Méthode de dilution Un inoculum standardisé (0,5 Mc Farland) des différentes souches de C. albicans a été sensibilisé aux solutions de désinfection. Les solutions de désinfection ont été successivement diluées à la demie à partir de la concentration initiale (Tableau 2). La technique de dilution a été réalisée avec le bouillon Sabouraud-chloramphénicol (BSC) (Biokar Diagnostics, France) dans des tubes en verre stérile de dimension 10 75 mL. NaOCl à 2,5 % Des tubes stériles contenant 2 mL de BSC ont été additionnés aux différentes concentrations de NaOCl (Tableau 2). La gamme de concentration allait de 2500 mg/mL à 10 mg/mL. Un volume égal d’inoculum de 100 mL a été ajouté dans les tubes pour chaque dilution. Les tubes ont été incubés dans une étuve à 37 8C pendant 48 h. La sensibilité des souches aux produits était attestée par la turbidité ou la limpidité des tubes. Le digluconate de chlorhexidine Les procédures de dilution étaient faites comme décrite pour la solution d’hypochlorite de sodium. La gamme de concentration allait de 500 mg/mL à 10 mg/mL. Pour confirmer l’absence de croissance dans les tubes, le liquide était ensemencé dans de la gélose SC à 37 8C pendant 24 h.
Analyse statistique L’analyse des données a été effectuée avec le logiciel Graph Path Prism version 1.6. Le test non paramétrique two way Anova a permis de comparer les différentes moyennes des solutions utilisées sur les différentes souches (de référence, cliniques). Le seuil de significativité était fixé à p < 0,05.
Résultats Tous les témoins négatifs avaient montré une croissance de C. albicans. La culture du surnageant dans des boîtes de pétri contenant de la gélose SC avait observé des colonies de C. albicans après 24 h à 48 h à 37 8C. La povidone iodée, utilisée comme contrôle positif, a montré une activité de celle-ci sur les souches de C. albicans.
Tableau 2 Répartition des différentes concentrations des solutions utilisées. Concentrations solutions distribution. Solutions
Concentrations (%)
2,5 1,25 0,62 0,31 0,15 0,07 0,03 0,01 NaOCl — Gluconate de 0,5 0,25 0,12 0,06 0,03 0,01 — chlorhexidine
Pour citer cet article : Ndiaye D, et al. Étude de l’efficacité de l’hypochlorite de sodium à 2,5 %, de la chlorhexidine à 0,5 %, et de l’hydroxyde de calcium sur Candida albicans. Journal De Mycologie Médicale (2016), http://dx.doi.org/10.1016/j.mycmed.2016.04.006
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Méthode de diffusion Hypochlorite de sodium (NaOCl) à 2,5 % Il était actif sur C. albicans avec un diamètre d’inhibition de 33 mm (Fig. 1).
Pâte d’hydroxyde de calcium Une absence d’activité a été notée avec la présence de colonies squatters de C. albicans tout autour de la pâte d’hydroxyde de calcium (Fig. 3).
Méthode de dilution Gluconate de chlorhexidine à 0,5 % C. albicans était sensible à la chlorhexidine avec un diamètre d’inhibition de 11 mm (Fig. 2).
Hypochlorite de sodium à 2,5 % La croissance de C. albicans a été inhibée pour des concentrations variant entre 2500 mg/mL et 10 mg/mL. Le test Anova n’a pas détecté de différence significative entre les différentes concentrations de NaOCl utilisées ( p < 0,05). La concentration minimale inhibitrice (CMI) de NaOCl pour inhiber la croissance de C. albicans était inférieure à 70 mg/mL pour les souches provenant des dents à pulpe infectée de patients et de 30 mg/mL pour la souche de référence (Tableau 3). Digluconate de chlorhexidine La croissance de C. albicans a été inhibée à des concentrations de digluconate de chlorhexidine variant entre 500 mg/mL à 10 mg/mL. La croissance des levures était inhibée à une CMI inférieure à 60 mg/mL pour les souches provenant des dents à pulpe infectée de patients et de 30 mg/mL pour la souche de référence. Les résultats sont exprimés en souche « sensible (S) » ou « résistante (R) » (Tableau 3). Le test Anova n’a pas permis de noter une différence significative entre les différentes concentrations de solutions utilisées avec une P-value < 0,05.
Figure 1 Activité du NaOCl à 2,5 % sur C. albicans. NaOCl at 2.5 % activity against C. albicans.
Pâte d’hydroxyde de calcium À cause de l’absence de sensibilité par la méthode de diffusion, la dilution n’a pas été faite.
Figure 2 Sensibilité de C. albicans au gluconate de chlorhexidine. C. albicans susceptibility to chlorhexidine gluconate.
Figure 3 Activité de la pâte d’hydroxyde de calcium sur C. albicans. Calcium hydroxide paste activity against C. albicans.
Pour citer cet article : Ndiaye D, et al. Étude de l’efficacité de l’hypochlorite de sodium à 2,5 %, de la chlorhexidine à 0,5 %, et de l’hydroxyde de calcium sur Candida albicans. Journal De Mycologie Médicale (2016), http://dx.doi.org/10.1016/j.mycmed.2016.04.006
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Hypochlorite de sodium, de la chlorhexidine et de l’hydroxyde de calcium
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Tableau 3 Répartition de la sensibilité des souches de C. albicans en fonction de la concentration des solutions. Strains susceptibility distribution according to the solutions’ concentrations. Produits
Gamme de concentrations
C. albicans (11)
C. albicans (21)
C. albicans (22)
ATCC 24433
NaOCl
2,5 1,25 0,62 0,31 0,15 0,07 0,03 0,01 0,5 0,25
S S S S S S R R S S
S S S S S S R R S S
S S S S S S R R S S
S S S S S S S R S S
0,12 0,06 0,03 0,01
S S R R
S S R R
S S R R
S S S R
Gluconate de chlorhexidine
Le test Anova n’a pas montré une différence significative ( p < 0,05) entre le groupe témoin négatif et la pâte d’hydroxyde de calcium.
Discussion Cette étude in vitro a permis de tester les produits intracanalaires utilisés pour la désinfection endocanalaire et de déterminer leur CMI nécessaire pour inhiber les micro-organismes endocanalaires responsables des infections endodontiques notamment les levures du genre Candida. Malgré les travaux qui montrent la présence et la croissance des champignons dans le système canalaire, il y a eu très peu d’études portant sur l’effet de ces agents antimicrobiens sur les levures. Des études antérieures [7,16,20] ont rapporté que C. albicans étaient sensibles au NaOCl pour des concentrations variant entre 1 et 5,25 %. Les résultats de cette présente étude ont rapporté une CMI inférieure à 70 mg/ mL pour le NaOCl à laquelle une inhibition de C. albicans provenant des canaux à pulpe infectée était obtenue. Par contre pour la souche de référence, la CMI pour le NaOCl était inférieure à 30 mg/mL. Ces résultats se rapprochent de ceux Fergusson et al. [5] sur la CMI de la souche de référence. Le gluconate de chlorhexidine a montré une activité sur C. albicans avec une CMI inférieure à 30 mg/mL. Ces résultats sont similaires à ceux d’Ercan et al. [4] sur la sensibilité de C. albicans à la chlorhexidine. Dans cette présente étude une concentration d’hypochlorite de sodium à 2,5 % a été utilisée. Des travaux ont montré qu’à la concentration de 2,5 %, le NaOCl semble être le meilleur compromis entre efficacité et absence de toxicité [9]. Cependant son efficacité dépend également du volume de la solution et de son renouvellement dans la mesure où le chlore disponible doit rester en excès par rapport à la quantité de matière à dissoudre [19]. Dans certaines situations, telles que l’existence de douleurs préopératoires associées à une parodontite apicale d’origine endodontique, la persistance d’un suintement canalaire ou encore la présence de résorptions radiculaires,
la triade endodontique ne peut être bien conduite. D’où l’intérêt de mettre en place des médicaments intracanalaires à des fins antiseptiques tels que l’hydroxyde de calcium. Des études ont démontré son activité antimicrobienne contre les agents pathogènes responsables des infections endodontiques mais il est moins efficace contre C. albicans et Enterococcus faecalis [2,10]. Ceci a été confirmé par les résultats de cette présente étude où une absence d’activité de la pâte d’hydroxyde de calcium a été notée. Des études comme ceux de Waltimo et al. [21] ont également démontré une absence de sensibilité de C. albicans à la pâte d’hydroxyde de calcium.
Conclusion Les résultats de cette étude ont permis de démontrer la sensibilité de C. albicans aux solutions de désinfection intracanalaires (hypochlorite de sodium à 2,5 %, gluconate de chlorhexidine). Leur utilisation régulière pourrait améliorer la prise en charge des canaux infectés par les levures et contribuer au succès des traitements endodontiques.
Déclaration de liens d’intérêts Les auteurs déclarent ne pas avoir de liens d’intérêts.
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Pour citer cet article : Ndiaye D, et al. Étude de l’efficacité de l’hypochlorite de sodium à 2,5 %, de la chlorhexidine à 0,5 %, et de l’hydroxyde de calcium sur Candida albicans. Journal De Mycologie Médicale (2016), http://dx.doi.org/10.1016/j.mycmed.2016.04.006
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MOTS CLÉS Candida albicans ; Hypochlorite de sodium ; Gluconate de chlorhexidine ; Désinfection ; Concentration minimale inhibitrice
Résumé Introduction. — La flore endodontique est dominée dans la partie apicale des canaux par des bactéries anaérobies strictes et quelques anaérobies facultatives mais aussi par les levures du genre Candida et particulièrement l’espèce Candida albicans qui sont impliquées dans l’entretien et la persistance des infections endodontiques. Leur élimination du système canalaire en pratique par des procédés chémo-mécaniques de désinfection n’est pas toujours garantie. C’est ainsi que cette étude in vitro a été réalisée pour déterminer la sensibilité de C. albicans à l’hypochlorite de sodium (NaOCl) dosée à 2,5 %, au digluconate de chlorhexidine à 0,5 % et à l’hydroxyde de calcium utilisée en médication interséance. Me ´thodologie. — La méthode de diffusion a été utilisée dans un premier temps pour tester la sensibilité des souches de C. albicans aux produits précités. Puis une technique de dilution nous a permis de déterminer la concentration minimale inhibitrice des produits actifs sur C. albicans. Re ´sultat. — Des souches de C. albicans provenant des dents à pulpe infectée de patients ont montré une sensibilité à l’hypochlorite de sodium pour une concentration minimale inhibitrice inférieure à 70 mg/mL et de 60 mg/mL pour la chlorhexidine.
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KEYWORDS Candida albicans; Sodium hypochlorite; Chlorhexidine gluconate; Disinfection; Minimum inhibitory concentration
Summary Introduction. — Endodontic flora is dominated in the apical part of the channels by strict anaerobic and some facultative anaerobic bacteria but also by Candida yeasts, especially Candida albicans species that are involved in the maintenance and persistence of endodontic infections. Their elimination of the canal system in practice by chemo-mechanical methods of disinfection is not always guaranteed. Thus, this in vitro study was performed to determine the sensitivity of C. albicans with sodium hypochlorite (NaOCl) dosed at 2.5 %, the chlorhexidine digluconate 0.5 % and calcium hydroxide used in inter-session medication. Methods. — The diffusion method was used initially to test the sensitivity of C. albicans strains with the above products. Then a dilution technique has allowed us to determine the minimum inhibitory concentration of these active products on C. albicans. Results. — Strains from infected pulp teeth of patients showed a sensitivity of C. albicans to sodium hypochlorite to a minimum inhibitory concentration less than 70 mg/mL and 30 mg/mL for chlorhexidine. Conclusion. — This study demonstrated a sensitivity of C. albicans to sodium hypochlorite and chlorhexidine. # 2016 Published by Elsevier Masson SAS.
Introduction La présence des levures dans les canaux pulpaires infectés a été démontrée par de nombreuses études [12,13,18]. Leur prévalence varie de 1 à 61,5 % dans les primo infections [13,15]. Dans les infections persistantes, leur prévalence est de 2,9 à 22 %. L’espèce la plus fréquemment identifiée est Candida albicans [17]. Ces levures sont des aérobies qui peuvent se reproduire dans des conditions anaérobies. De par leur présence, il serait possible que les levures interviennent directement ou indirectement dans l’étiologie et l’entretien des parodontites apicales d’origine endodontique. Ces levures possèdent une virulence qui dépend de leur adaptation aux conditions environnementales, de leur adhésion aux surfaces dentinaires [3], mais aussi de l’activité collagénique de C. albicans d’utiliser la dentine radiculaire comme source de nutriment [6]. Sur le plan structural elle possède des canalicules dentinaires susceptibles d’héberger des micro-organismes. Ces conditions propices peuvent être offertes par l’anatomie du réseau canalaire. En outre les procédures mécaniques de préparation canalaire entraînent toujours la formation d’une couche hybride de débris de surface appelée boue dentinaire ou smear layer. Cette couche organo-minérale, qui a une épaisseur très faible, peut pénétrer dans les canalicules dentinaires et servir de substrats pour la prolifération de certains micro-organismes. La recherche de la sensibilité des levures aux agents de désinfection et aux médications intracanalaires serait bénéfique pour déterminer un moyen efficace de les éliminer au niveau des tissus dentaires infectés [1,8,14]. Hormis les études sur la croissance des levures dans le système canalaire, il y a eu très peu d’études portant sur l’effet de ces produits de désinfection sur ces dernières. Les travaux existant sont difficiles à comparer en raison des variations dans la méthodologie et des solutions testées [4,5,21].
Cette présente étude a été menée dans le but de déterminer la sensibilité in vitro des souches de C. albicans aux solutions de désinfection et à l’hydroxyde de calcium par la méthode de diffusion. Puis la méthode de dilution a permis de déterminer la concentration minimale inhibitrice (CMI) des produits actifs sur C. albicans.
Matériels et méthodes L’étude expérimentale in vitro était réalisée au service de parasitologie et mycologie de l’hôpital Aristide Le Dantec de Dakar.
Souches Elles étaient constituées de trois souches de C. albicans isolées de patients présentant des dents à pulpe infectée avec une nécrose pulpaire ouverte. Une souche de référence de C. albicans 24433 ATCC (Rockville, MD) a été utilisée comme souche contrôle (Tableau 1). Après identification, les isolats ont été conservés à 20 8C dans du bouillon cœur cervelle (BBC) ajouté à d glycérol à 15 % au laboratoire de parasitologie et de mycologie de l’hôpital Aristide Le Dantec.
Préparation des souches de levures Après décongélation, les différentes souches ont été mises en suspension dans de l’eau physiologique, puis ensemencées à l’aide d’une anse de platine, autour d’un bec Bensun, dans des boîtes de pétri contenant de la gélose de Sabouraudchloramphénicol (SC). Ensuite, les boîtes étaient incubées dans une étuve à 37 8C pendant 24 h.
Pour citer cet article : Ndiaye D, et al. Étude de l’efficacité de l’hypochlorite de sodium à 2,5 %, de la chlorhexidine à 0,5 %, et de l’hydroxyde de calcium sur Candida albicans. Journal De Mycologie Médicale (2016), http://dx.doi.org/10.1016/j.mycmed.2016.04.006
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Hypochlorite de sodium, de la chlorhexidine et de l’hydroxyde de calcium Tableau 1 Répartition des différentes souches. Strains distribution. Souches
Provenance
Souche de référence
ATCC 24433
Rockville, MD
Dent 11 Dent 21 Dent 22
C. albicans C. albicans C. albicans
Patient 1 Patient 2 Patient 3
Préparation des inocula L’inoculum est préparé à partir d’une culture pure de 24 h obtenue sur gélose SC. Quelques colonies bien isolées et parfaitement identiques sont raclées à l’aide d’une anse de platine et déchargée dans 5 mL d’eau physiologique stérile à 0,9 %. La suspension de levures est bien homogénéisée et ajustée jusqu’à atteindre une opacité équivalente à 0,5 Mc Farland.
Méthode de diffusion L’ensemencement des inocula sur gélose SC est fait avec un écouvillon stérile. Les disques ont été confectionnés à l’aide d’un papier Whatmann (Whatmann1, États-Unis), découpés en disque de 6 mm de diamètre et stérilisés au four pendant 15 min à 120 8C. Après séchage à l’étuve à 37 8C des géloses ensemencées, les disques imbibés des solutions sont essorés avant d’être déposés au centre des différentes boîtes SC à l’aide d’une pince stérilisée à la flamme. L’hypochlorite de sodium (NaOCl) Une solution d’hypochlorite de sodium du commerce dosée à 2,5 % a été utilisée (Lacroix1, Palmolive, Sénégal). Un disque imprégné de cette solution était placé au centre de la boîte de pétri contenant de la gélose SC auparavant ensemencée de l’inoculum de C. albicans, puis la boîte était placée dans une étuve pendant 24 h à 37 8C. Le gluconate de chlorhexidine Il était utilisé à une concentration de 0,5 % (Pierre Fabre1, France). Le même procédé a été utilisé que pour le NaOCl à 2,5 % pour déterminer l’activité du produit sur C. albicans. La pâte d’hydroxyde de calcium (Pulpdent Corporation MA, États-Unis) Elle a été utilisée et préparée selon la technique décrite par Morgan et al. [11] ; 10 mg de la poudre d’hydroxyde de calcium est dissoute dans 5 mL d’eau distillée (soit une concentration massique de 2 mg/mL). La solution était vigoureusement agitée pour homogénéiser le mélange, qui était disposée en contact de l’inoculum de C. albicans au centre d’une boîte de pétri contenant la gélose SC et incubée pendant 24 h à 48 h à 37 8C. Contrôles La povidone iodée était utilisée comme contrôle positif pour s’assurer de la sensibilité des souches de C. albicans à un antifongique et le sérum physiologique pour attester de la viabilité des souches comme contrôle négatif.
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Méthode de dilution Un inoculum standardisé (0,5 Mc Farland) des différentes souches de C. albicans a été sensibilisé aux solutions de désinfection. Les solutions de désinfection ont été successivement diluées à la demie à partir de la concentration initiale (Tableau 2). La technique de dilution a été réalisée avec le bouillon Sabouraud-chloramphénicol (BSC) (Biokar Diagnostics, France) dans des tubes en verre stérile de dimension 10 75 mL. NaOCl à 2,5 % Des tubes stériles contenant 2 mL de BSC ont été additionnés aux différentes concentrations de NaOCl (Tableau 2). La gamme de concentration allait de 2500 mg/mL à 10 mg/mL. Un volume égal d’inoculum de 100 mL a été ajouté dans les tubes pour chaque dilution. Les tubes ont été incubés dans une étuve à 37 8C pendant 48 h. La sensibilité des souches aux produits était attestée par la turbidité ou la limpidité des tubes. Le digluconate de chlorhexidine Les procédures de dilution étaient faites comme décrite pour la solution d’hypochlorite de sodium. La gamme de concentration allait de 500 mg/mL à 10 mg/mL. Pour confirmer l’absence de croissance dans les tubes, le liquide était ensemencé dans de la gélose SC à 37 8C pendant 24 h.
Analyse statistique L’analyse des données a été effectuée avec le logiciel Graph Path Prism version 1.6. Le test non paramétrique two way Anova a permis de comparer les différentes moyennes des solutions utilisées sur les différentes souches (de référence, cliniques). Le seuil de significativité était fixé à p < 0,05.
Résultats Tous les témoins négatifs avaient montré une croissance de C. albicans. La culture du surnageant dans des boîtes de pétri contenant de la gélose SC avait observé des colonies de C. albicans après 24 h à 48 h à 37 8C. La povidone iodée, utilisée comme contrôle positif, a montré une activité de celle-ci sur les souches de C. albicans.
Tableau 2 Répartition des différentes concentrations des solutions utilisées. Concentrations solutions distribution. Solutions
Concentrations (%)
2,5 1,25 0,62 0,31 0,15 0,07 0,03 0,01 NaOCl — Gluconate de 0,5 0,25 0,12 0,06 0,03 0,01 — chlorhexidine
Pour citer cet article : Ndiaye D, et al. Étude de l’efficacité de l’hypochlorite de sodium à 2,5 %, de la chlorhexidine à 0,5 %, et de l’hydroxyde de calcium sur Candida albicans. Journal De Mycologie Médicale (2016), http://dx.doi.org/10.1016/j.mycmed.2016.04.006
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D. Ndiaye et al.
Méthode de diffusion Hypochlorite de sodium (NaOCl) à 2,5 % Il était actif sur C. albicans avec un diamètre d’inhibition de 33 mm (Fig. 1).
Pâte d’hydroxyde de calcium Une absence d’activité a été notée avec la présence de colonies squatters de C. albicans tout autour de la pâte d’hydroxyde de calcium (Fig. 3).
Méthode de dilution Gluconate de chlorhexidine à 0,5 % C. albicans était sensible à la chlorhexidine avec un diamètre d’inhibition de 11 mm (Fig. 2).
Hypochlorite de sodium à 2,5 % La croissance de C. albicans a été inhibée pour des concentrations variant entre 2500 mg/mL et 10 mg/mL. Le test Anova n’a pas détecté de différence significative entre les différentes concentrations de NaOCl utilisées ( p < 0,05). La concentration minimale inhibitrice (CMI) de NaOCl pour inhiber la croissance de C. albicans était inférieure à 70 mg/mL pour les souches provenant des dents à pulpe infectée de patients et de 30 mg/mL pour la souche de référence (Tableau 3). Digluconate de chlorhexidine La croissance de C. albicans a été inhibée à des concentrations de digluconate de chlorhexidine variant entre 500 mg/mL à 10 mg/mL. La croissance des levures était inhibée à une CMI inférieure à 60 mg/mL pour les souches provenant des dents à pulpe infectée de patients et de 30 mg/mL pour la souche de référence. Les résultats sont exprimés en souche « sensible (S) » ou « résistante (R) » (Tableau 3). Le test Anova n’a pas permis de noter une différence significative entre les différentes concentrations de solutions utilisées avec une P-value < 0,05.
Figure 1 Activité du NaOCl à 2,5 % sur C. albicans. NaOCl at 2.5 % activity against C. albicans.
Pâte d’hydroxyde de calcium À cause de l’absence de sensibilité par la méthode de diffusion, la dilution n’a pas été faite.
Figure 2 Sensibilité de C. albicans au gluconate de chlorhexidine. C. albicans susceptibility to chlorhexidine gluconate.
Figure 3 Activité de la pâte d’hydroxyde de calcium sur C. albicans. Calcium hydroxide paste activity against C. albicans.
Pour citer cet article : Ndiaye D, et al. Étude de l’efficacité de l’hypochlorite de sodium à 2,5 %, de la chlorhexidine à 0,5 %, et de l’hydroxyde de calcium sur Candida albicans. Journal De Mycologie Médicale (2016), http://dx.doi.org/10.1016/j.mycmed.2016.04.006
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Hypochlorite de sodium, de la chlorhexidine et de l’hydroxyde de calcium
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Tableau 3 Répartition de la sensibilité des souches de C. albicans en fonction de la concentration des solutions. Strains susceptibility distribution according to the solutions’ concentrations. Produits
Gamme de concentrations
C. albicans (11)
C. albicans (21)
C. albicans (22)
ATCC 24433
NaOCl
2,5 1,25 0,62 0,31 0,15 0,07 0,03 0,01 0,5 0,25
S S S S S S R R S S
S S S S S S R R S S
S S S S S S R R S S
S S S S S S S R S S
0,12 0,06 0,03 0,01
S S R R
S S R R
S S R R
S S S R
Gluconate de chlorhexidine
Le test Anova n’a pas montré une différence significative ( p < 0,05) entre le groupe témoin négatif et la pâte d’hydroxyde de calcium.
Discussion Cette étude in vitro a permis de tester les produits intracanalaires utilisés pour la désinfection endocanalaire et de déterminer leur CMI nécessaire pour inhiber les micro-organismes endocanalaires responsables des infections endodontiques notamment les levures du genre Candida. Malgré les travaux qui montrent la présence et la croissance des champignons dans le système canalaire, il y a eu très peu d’études portant sur l’effet de ces agents antimicrobiens sur les levures. Des études antérieures [7,16,20] ont rapporté que C. albicans étaient sensibles au NaOCl pour des concentrations variant entre 1 et 5,25 %. Les résultats de cette présente étude ont rapporté une CMI inférieure à 70 mg/ mL pour le NaOCl à laquelle une inhibition de C. albicans provenant des canaux à pulpe infectée était obtenue. Par contre pour la souche de référence, la CMI pour le NaOCl était inférieure à 30 mg/mL. Ces résultats se rapprochent de ceux Fergusson et al. [5] sur la CMI de la souche de référence. Le gluconate de chlorhexidine a montré une activité sur C. albicans avec une CMI inférieure à 30 mg/mL. Ces résultats sont similaires à ceux d’Ercan et al. [4] sur la sensibilité de C. albicans à la chlorhexidine. Dans cette présente étude une concentration d’hypochlorite de sodium à 2,5 % a été utilisée. Des travaux ont montré qu’à la concentration de 2,5 %, le NaOCl semble être le meilleur compromis entre efficacité et absence de toxicité [9]. Cependant son efficacité dépend également du volume de la solution et de son renouvellement dans la mesure où le chlore disponible doit rester en excès par rapport à la quantité de matière à dissoudre [19]. Dans certaines situations, telles que l’existence de douleurs préopératoires associées à une parodontite apicale d’origine endodontique, la persistance d’un suintement canalaire ou encore la présence de résorptions radiculaires,
la triade endodontique ne peut être bien conduite. D’où l’intérêt de mettre en place des médicaments intracanalaires à des fins antiseptiques tels que l’hydroxyde de calcium. Des études ont démontré son activité antimicrobienne contre les agents pathogènes responsables des infections endodontiques mais il est moins efficace contre C. albicans et Enterococcus faecalis [2,10]. Ceci a été confirmé par les résultats de cette présente étude où une absence d’activité de la pâte d’hydroxyde de calcium a été notée. Des études comme ceux de Waltimo et al. [21] ont également démontré une absence de sensibilité de C. albicans à la pâte d’hydroxyde de calcium.
Conclusion Les résultats de cette étude ont permis de démontrer la sensibilité de C. albicans aux solutions de désinfection intracanalaires (hypochlorite de sodium à 2,5 %, gluconate de chlorhexidine). Leur utilisation régulière pourrait améliorer la prise en charge des canaux infectés par les levures et contribuer au succès des traitements endodontiques.
Déclaration de liens d’intérêts Les auteurs déclarent ne pas avoir de liens d’intérêts.
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