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Gaschromatographische untersuchungen der fettsäuren der neutralfette, phospholipide und cholesterinester reifer menschlicher placentazotten in vitro
CLINICA
CHIMICA ACTA
479
GASCHROMATOGRAPHISCHEUNTERSUCHUNGEN DER FETTSAUREN DER
NEUTRALFETTE,
REIFER
MENSCHLICHER
GLLRICH
I
/)hysiologisch-Chewlisches (Eingegangen
den
Institut
PHOSPHOLIPIDE PLACENTAZOTTEN
dev Universitd
Hamburg**
UND IN
CHOLESTERINESTER VITRO
(Deutschland)
I I. Mai, 1967)
SUMMARY
Gas-Chromatographic Studies on, the Fatty Acids of Neutral Lipids, Phos$holipids and C~o~este~~~ Esters from V&i oj ~~~at~~effld%tan ~~a~e~tas in z&5 In mature human placental villi, the fatty acids of six lipid fractions were investigated by gas chromatography. In vitro incubation (2 lo 180 min) shows a significantly changed composition of the following fatty acids (moles/xoo moles fatty acids) : I. In the fraction of free fatty acids C, : o and C,, : 1 diminish between the 2nd and 30th min of incubation time; C, : ,, increases between the 3oth and 120th min. Polyunsaturated fatty acids (C,, : 1, C,, : %,C,, : 3, C,, : 4) are found. 2. In the fraction of monoglyceridcs the fatty acids C,, : Ir C,, : D and C,, : 1 increase between the 15th and r8oth min of incubation. Polyunsaturated fatty acids are not detectable. 3. In the fractions of diglycerides and triglycerides saturated (C,, : 0, C,, : @I C,, : @)and unsaturated (C,, : 1, C,, : 2, C, : a) f a tt y acids increase during the whole incubation time. 4. In the fraction of phospholipids the saturated fatty acids decrease, but the polyunsaturated fatty acids (C,, : 1, C,, : ,,) increase. 5. In the fraction of cholesterol esters saturated fatty acids (C,, : J decrease while the unsaturated fatty acid (C,, : 1, C,, : I, C, : ,) increase. These alterations of the fatty acid composition of the six lipid fractions are discussed in view of the metabolism of these fatty acids, as during the in vitro incubation also the incorporation of [r-l%]acetate in these six lipid fractions changes significantly.
Im Rahmen unserer Untersuchungen iiber den Fettstoffwechsel reifer menschlither Placentazottenl-3 haben wir festgestellt, dass [I-**C]Acetat is vitro besonders hoch in die Triglyceridfraktion, weniger ausgeprggt in Phospholipide, freie Fett* Jctzige Adresse: Universit%ts-Frauenklinik, land. ** Direktor: Prof. Dr. J. Kiihnau.
z Hamburg-Eppendorf,
Martinistrasse
C&n. China. Acta,
52,
Deutsch-
‘7 (1967) 479-486
I
480
sauren, Cholesterinester und Diglyceride ringebaut sind. Die nlonogl~c”idfr~tktion zeigte den geringsten Einbau der untersuchten Fraktionen. Hier sol1 die l;ettsaurcZusammensetzung der einzelnen Lipidfraktionen wahrend unterschiedlich langer Inkubationszeiten untersucht werden, urn hiermit Einhlicke in den Stoffwechsel obiger Lipidfraktionen zu bekommen.
Darstellung
einigev
Lipidfraktionen
am rnenschlichen
Placentazottex
Die Praparation und Inkubation der Placentazotten erfolgt bei 37” in 1007; 0, in folgendem Medium : 154 milf NaCl, z mM KCl, 0.9 m,lP CaCl,, 0.4 rniZf M&l,, 60/, Dextran, 7.57 mA9 ~-Glucose und Phosphatpuffer (pH 7.4) wie an anderer Stellel ausftihrlich beschrieben. Nach der Inkubation werdcn die Placentazotten homogenisiert, mit Chloroform-Methanol (I: I, v/v) extrahiert und der Lipidextrakt nach Folch” gereinigt. Der Lipidextrakt wird auf Kieselgels%ultn in die Fraktionen: Cholesterinester, Neutralfette zusammen mit Cholesterin und Phospholipide aufgetrennt. Die Neutralfett-Cholesterinfraktion wird dtinnschichtchromatographisch auf Kieselgel [Petrolgther-Diisopropylather-Essigsaure (60 : 40: 1.5, v/v)] praparativ in Triglyceride, freie Fettsauren, Diglycerid-Cholesteringemisch und Monoglyceride getrennt. Da sich die mit dem Cholesterin laufende Diglyceridfraktion mit dem angegebenen dtinnschichtchromatographischen Verfahren nicht einwandfrei isolieren lasst, wird diese Doppelfraktion nach einer infolge einer persbnlichcn Mitteilung von Btihring etwas modifizierten Methode nach Dole und Meinertz” in Cholesterin und Fettsauren der Diglyceride aufgetrennt. Die Radioaktivitat der einzelnen Lipidfraktionen wird in einem Tri-Carb Fltissigkeitsscintillationsspektrometer gemessen und auf Ipm/ro mg DNS (siehe I) bezogen. llarstellmg
der Fettsizrren
der Lipidfraktiovte-iz
Die Mono-, Di- und Triglyceride, die Cholesterinester und die Phospholipide werden mit 0.5 N methanolischer KOH 30 min am Rtickfluss bei 90’ verseift und mit Bortrifluorid nach Metcalfe und Schmitz6 verestert. Die Fettsaureanalysen werden mit einem Barber-Colman Gaschromatographen Model1 IO, ausgertistet mit einem Disc-Integrator, durchgefiihrt. Als Detektor dient eine Radium-Argon-Ionisationskammer. Es werden U-fijrmig gebogene Glassaulen von 250 cm Lange und einem Durchmesser von 5 mm verwendet. Die station&e Phase besteht aus 2074, Diathylen-Glykol-Succinat auf Celite 545 U 70/80 mesh, prapariert nach Farquhar? und Btihrings (Saulentemperatur 185”, Kammer 225” und Probengeber 320’; Argonflussgeschwindigkeit go bis 95 ml/min). Ein aliquoter Teil der zu analysierenden I’ettsauregemische wird mit einer IO ~1 Mikrospritze ohne Unterbrcchung des Argongasstromes durch eine Siliconkautschukmembran direkt auf die S%ule gegebrn. Die Identifizierung der einzelnen Fettsaure-Peaks erfolgt durch Vergleich der Retentionszeiten eines bekannten, genau eingestellten, Testgemisches. Die Fettsauren werden in Mol yb angegeben. Die Test-Fettsauren wurden von den Firmen : Calbiochem, Los Angeles, Calif., U.S.A.; Sigma Chemical Comp. St. Louis 18, MO., U.S.A44.und Applied Science Laboratories Inc., State College, Penn., U.S.A., die stationare Phase und der Trager von Analabs Inc., Hamden, Conn., U.S.A. bezogen. Die in den Tabellen I-VI angegebcne Standardabweichung (& s) des MittelClin. Chim. Acta, 17
(1967) 479-486
FETTShUREN IN PLACE~TAZOTTE~
481
wertes (x) wird nach der Formel s = & berechnungen ERGERNISSE
erfolgen UND
/&a -
I
N$ -
berechnet.Die Signifikanz-
3-I
nach dem t-Test nach Student.
DISKUSSION
Wie aus Fig. I hervorgeht, ist der Einbau von jr-**C]Acetat in die Fraktian der freierz F~~t~~~~~~ nach der 15. min abgeschlossen: Die -gaschromatographisch~ Ipm
_/Triglyceride
l0mg DNS 25.103
: /
,_ +_+ .-.- __.---___“-_25 15
30
60 inkubati~nszeit
_. ~_.__. * -_ 120
180
(min)
Fig. I. Abhgngigkeit des Einbaues van fr-14C]hcetat Placentazotten van der Inkubationszeit.
in Lipidfraktionen
reifer menschlichcr
Analyse der freien Fettsauren (s. Tab. I) zeigt wahrend einer Inkuhationszeit von z bis 180 min in folgenden FettsHure-Fraktionen Seine signifikanten Unterschiede in der prozentualen Zusamme~lsetzung (Mel yO) : Hexadecans~ure (C,, : ,,), Hexadecensgure (C,, : J, Octadecansgure (C,, : J, OctadecadiensLure (C,, : .J, Octadecatriens&ure (C,, : J, Docosans&re (C,, : J und Eicosatetraens&re (C,, : J. Die prozentuale Zusammensetzung der Tetradecansaure (C,, : ,) nimmt zwischen der 2. und 30, Inkubationsminute signifikant ab urn dann wieder signifikant zuzunehmen, ebenso diejenige der Octadecensaure (C,, : I). Wie aus unseren friiheren Untersuchungenl-3 hervorgeht, findet sehr wahrscheinlich in den Zotten der reifen menschlichen Placenta eine de nova Synthese von Triglyceriden iiber den Mono-, Di- und Triglyceridweg statt. In diesem Zusammenhang ist die Zusammensetzung der Fettsguren der Mono-, Di- und TriglyceridfrakC&n. Chim.
Acfra, 17 (1967)
479-486
KLEINE
482 TABELLE
I (Mol
FETTSkUREZUSAMMENSETZUNG PLACENTOZOTTEN
DER
DER
FREIEN
FISTTS:iUREX
IIEIFER
hll:XSCHLICH&R
(min) L
8.0*
2
a
0.2**
9
I 8
IO.0 3.7 5.6
32.3 9.0 24.9 ~~ 3.8 6.0 rr.4
3.3 1)
0.4 ‘4 12
22.8
I.7 7.2 - I ;:5
5.0 23.3 25.3 5.5
* Mittelwert (x) Enthxlt Spurcn
(a)
P(2’
-f
4.j
** “on
47.7
_
-+
120’)
I.2
3.4 c
0.7
6. I
2.0
I.8
‘w.7 13.0 60.1
4.6 I.9 8.1
0.7 2.2
20.5 5r.r 18.7
4.4 8.9 4.8
55.2
7.8
20.2
3.6
des Mittelwcrtcs ( (C,, : 1); ,V = ,\nzahl (c)
2.0
9.4
47,O
-: 10.0
3.2 I.4
3.i 0.3
IO.1
)
8.0
4.4 2.4
Standardabweichung Dokosamonoens&nre
(1,) P(jo’
30’)
2.0
1.5 0.4 3.0 I.8
9.9
!
IO.0
t 0.3
12
m!
38.8
2.7
I.9
4.7
5.3
4.6 0.8
2j.o
2.3
0
***
FRAKTION
s
lnkubations zeit
‘1;)
i?L 7,itV0
P(5’
1.1
0.7 ~~-
I.3
2.8
0.6
I.7 3.7 2.I
2.2 0.5 2.5 2.2
1.4 1.8
3.7 20 2 .j
1.i 2.2
I .o
0.5
’ ..3
’
0.3
0.8
0
I .6
0.7
3 3
0.7
0.2
2.1
; s) ctcr I~lnzelwerte
--f 30’)
<0.02
tionen
im Vergleich zu derjenigen der freien Fettsauren von besonderem Interesse. In der Monoglyceridfraktion (s. Tab. II) andert sich der prozentuale Anteil der Fettsauren C,, : ,, und C,, : ,, von der 2. bis 180. min nicht signifikant, obwohl bei der C,, : ,-Fraktion innerhalb der ersten 30 min eine gewisse Zunahme der prozentualen Zusammensetzung zu verzeichnen ist und in der entsprechenden Fraktion der freien Fettsauren eine Abnahme. Bei den Fettsauren C,, : 1, C,, : Ound C,, : 2 ist dagegen wahrend der ganzen Inkubationszeit eine signifikante Zunahme zu verzeichnen, desgleichen eine signifikante Abnahme von C,, : 1der freien Fettsauren (s. Tab. I). II
TABELLIS
FETTS~UREZUSAMMENSETZUNG ZOTTEN
Inkubatioizszeit (miil) 2
:,a)
DER
MONOGLYCERIDFRAKTIO~
RHIFER
MENSCHLICHER
,V
2
5
9
I5
8
30
6
60
‘4
I20
12
I80
12
* Mittelwert (x) *** Enth< Spuren (a) ~(15’ --f 180’) co.025 Cl&.
(iLlOl
in Wit+‘0
China. Acta,
r5.9* 3.8** 1.17.8
38.2 6.3 --3&L
1. 4.2
-t
3.3
’ II.8
38.5 3.3 39.2 4.8
25.1 6.4 ‘4.5 ~,. 4.3
43.6 13.0 51.9 16.1
16.4 ;: 4.0
40.9 _t 13.8
21.h
3.7 20.8
4.4 1.0
3.8 !m0.6 6.3 a 2.9 8.8 2.6
13.3 1 4.6 10.0
19.7 1: 4.0
24.4 5.1 IS.5b 5.0 19.8
16.3 7.4 12.9 c 1.9 I I.0
3.6 22.5
3.1 18.6
~1 8.8 24.9
3.’
Ij.2 I- 3.8
7.4 20.9 tl
j- 0.9 6.1 :
;
-~
1.2 3.’ 2.8
16.2 L 3.5
5.3 5 ‘3 0.5 38.8 I I.2 20.0 I-j.7 i 2.5 .I 6.3 ___ ** Standardabweichung des Mittelwertcs ( s) van Dokosamonocns%ure (C,,:,) ; N = .4nzahl der Einzelwerte. (d)Z(Izo’ --f 180’) (c) P(I5’ + 120’) (b) @(Is’ + 120’) (0.02
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to.05
io.001
PLACENTA-
I’ETTS.qUREN
IN PLACENTAZOTTEN
483
In der Di- ftizl ~~~~~y~~~idjy~k~~~~ andert sich die prozentuale Zusammensetnicht zung der Fettsauren C,, : O,C,, : I und C,, : 3wahrend der ganzen Inkubationszeit signifikant, wohl dagegen diejenige der Fettsauren C,, : ,, (nur Diglyceride), C,, : I, C,, : ,, und C,, : 2 (nur Diglyceride). Wahrend sich die Fettsguren C,, : ,, und C, : 4 in der Monoglyceridfraktion im Gegensatz zur Fraktion der freien FettsHuren nicht oder nur in Spuren nachweisen lassen, vermehrt sich der prozentuale Anteil dieser Fettsguren in der Di- und Triglyceridfraktion wHhrend der ganzen Inkubationszeit signifikant (s. Tab. III und IV).
FtiTTSKUREZUS4~1MENSr~T%~~~ ZCVCTEN
ii?
““)
(.\fOl
DER
DIGLYCERIDFR.\:
RFIFER
16.5 5.9
16.5 3.8
8.2
IS.0
12.8
5.0
6.6 4.3
17.0
1.3-4
7.4
2
5
9
I.5
8
30
6
00
‘4
33.5 .-
9.4*
2 _.
g**
9.1
15.8
39.9
4.8
12.0
II.7
33.7
f 3.4
‘- 8.j 31.6a 7.2b 44.3 ‘3.4
I0.I
7.2 -10.4 2.8
120
I.?
180
_ 2.4
1.7
4.6
!
I_ L.0 _j 0.j
I.7
12.7 o.7d,c
4.0 r.5c 11.8 4.8
28.0
II.5 ,26.1
5O.Z
‘5.9
‘7.3
_ I.3
13.x
2r.h
r7.7
: 7.3
‘. 4.3
LI 5.3
i 5.3
34.0
6.5
k 1.2
13.2
12.1 ‘. 3.8 r4.0 ; 2.9 17.1
18.2
I2
--
5.7 _/
IO.2
* ***
<0.02 PW
4
to.05
it’)
$5(120
3
180’)
(g)
P(2’
+
io.001
--
PLACENTA-
3.0 0.9 _. 0.1
4.1 1~3.0
1.9
3.6
3.3
.’ 0.x
4.9
--
I.0
77 3.’ 11.4
9.9g
II.3
5.2
1.8
‘3.3
3.1
_: 3.6
0.5
~-
4.2
6.6 ,- 4.5 J. II.1 -1
3.r
‘4.3 1: 2.6h
7.6
x.5.4 /. 13.2 8.1 i- 5.2 11.7
2.1
--
+
2.4
I.0
--
Z.Of
3.3
Mittelwert (X) +* Standardabwcichung des Mittelwrtes Enthalt Spuren van Dokosamonocns%ure (C,, : 1); A’ (b) F(3o’ + ho’) (CL) P(JO’ --f 120’) (c) P(30’ --f 120’)
k)
RIENSCHLICHER
vetvo
_ 8.5
( : 6) =
Anzahl tier Einzclwerte ((1) $(30’ --f 180’)
30’)
(h) $(3o’ + 120’) io.05
Der Vergleich der Inkorporation von [I-%]Acetat in die Fraktionen der Mono-, Di- und Triglyceride zeigt (s. Fig. I), dass bei den Mono- und Triglyceriden nach der 60. min, bei der Diglyceridfraktion dagegen nach der 30. min keine weitere Radioaktivitat mehr eingebaut wird. Die spezifischen Aktivitaten (Ipm@5’,,mole/ro mg DNS) der Fettsauren der Mono-, Di- und Triglyceridfraktionen verhalten sich wie I : z:4 (Lit. 2). ‘4~s diesen Befunden ist zu ersehen, dass wahrend einer Inkubationszeit von 180 min in die Monoglyceridfraktion aus der Fraktion der freien Fettsauren in erster Linie C,, : 1, weniger C,, : o und C,, : 1 eingebaut werden, wohingegen in die Di- und Triglyceridfraktionen vor allem C,, : Ir C,, : O, C,, : i und hiiher ungesattigte Fetts2uren inkorporiert werden. Der doppelt so hoch wie erwartete Einbau i4Cmarkierter Fettsauren in die Triglyceridfraktion in den ersten 30 ~nkubationsminuten ist mijglicherweise mit der in dieser Zeit signifikanten Zunahme von C, : 4 in Zusammenhang zu bringen, da in der iibrigen Fettsaurezusammensetzung wahrend dieser Zeit keine signifikante Anderung festzustellen ist. Dieser Befund stiitzt unsere Annahme von der Existenz zweier Triglycerid-Synthesewege in den Zotten reifer menschlither Placenten: Erstens: Mono-, Di-, Triglycerid de nave Synthese und zweitens: Anhangen hoch l*C-markierter Fettsguren an ein nicht oder wenig l*C-markiertes lxin. Chin?. Actff,
‘7 (1967) 479-.$x
KLEINE
484 T.U3EI,LE
I\.
FETTS.iUREZUSAMMENSETZUNG
(MO1
q,)
DER
TRIGLYCERIDFRAKTION
REIFER
MENSCHLICHER
I’L:,CENT.\-
c,, :
I,
2
0 x 0
I2
29.5 2.5
2.5 I.”
13.4 IO.5
19.3 L 0.6
IO. I - 3.I
9.0 2.4 7.3 2.7
29.9 ~ 6.0 28.5 3.8 35.’ 12.9
4.2 I I.7 3.7 l.I 3.8a 0.9
16.4 7. I 14.9 5.2 II.8b
9.8 3.3 0.4 I.7 8.3
30.9 i.6 30.7
7.2 5.3 6. I
I.5 IO.4 3.1 15.9
19.6 ! 1.1 21.5 2.1 2I.5 ~ I.6 21.5 5.7 18.4
I I.3 4.8
9.5 34.7
I_ 2.” 5.7
5.8 17.3
5.” 17.6
4.2 IO.0
I.7
4.5
’ 7.”
‘_ 3.7
7.9 3.7 6.9
‘1 I2
7.6* 2-f**
‘- 3.8 7.3 4.6 8.1
‘~
4.3 * Mittclwert (x) *** Enth%lt Spurcn (a) p(30’ + 120’)
(c)
$(.j'
IO.1
I.2
IO.1
5.” 1.0
1.j 0.; 1.2 0.j 0.q
! 0.2 I.3 0.3 2.3 ~ 0.2 2.2 I ..3
10.0
1 ..3
6.7’1
2.7 .- 0.9 2.9 1.0
2.qc ‘).
4.5 I.7
1.3 7.6
2.8c
0.9
3.7 ro.6 2.0 12.5
3.9 I .o 4.0 I.2
I.1 0.5
I
2.6 I I.9
5.’
** Standardabweichung des Mittclwertes (: s) van Dokosamonoens%ure (C,, : J ; N = _tnzahl der Einzelwrertc (c) p(60’ -+ 180’) (b) p(30’ + 180’) (d) P(5’ * 30’) <0.“2
--Z 180’)
<“.005
Di- oder Triglycerid. Die endgiiltige Entscheidung muss aber weiteren Untersuchungen iiberlassen werden. Die Zusammensetzung der Fettsguren der Phospholifde (s. Tab. V) wghrend einer Inkubation von 180 min verh5lt sich im Vergleich zu derjenigen der Mono-, Diund Triglyceride grundlegend anders : Wghrend der ganzen Inkubationszeit zeigt sich
F~TTSfiUREZUShMMEFSETZUNG
(M”l
2,)
DER
FH”SPH”LIPIDFRhKTI”N
REIFER
MENSCHLICHER
PL.\(‘E.ST
(‘p,,:
5
9 8
I.5 30
2.7* 0.9** 2.6a
2
2
1.1
37.8 4.7 4I.4b 4.3
2.1
3 5
0.7 0
1.1 0.5
00
‘4
2.8 I
120
12
0.9
38.5 I”.9 3”. I 9.7
I.8 0.8
1x0
I2
‘5
7.” 37.3 I: 6.3 43.2 -8.1
2.5 I.”
‘7.2
-
4.2 23.8d
1.2C
5.4 22.3
I.”
2.T
4.3 21.6 1 3.1 20.0
I.3 2.”
/ 0.8 2.” -0.7
9.5 20.7
2.4 0.6 2.6 0.8
I_ 3.3 IS.3 0.8
(c) P(5’ + 3”‘) <“.““5
(b) P(5’ --f 18”‘) <“.“5 (0 P(5’ --f -0’) <"."j
3.6 ‘7.5
2.8
15.3
3.6
I5.0
L 5.5 14. I 3.”
0.9 1~0.1
II.5 I.4 13.9c 4.’ 9.8 3.3 8.1
2.0
0.8
: 0.1 :
(g) P(I5’
-> 18”‘)
<".""l
0.6 0.2
I
4.3f I.9
0.6 0.4
3.8 2.0
0.8 0. I
3 4 I.9 4.” 2.6
8.4 ‘- 3.6 ,~ 9.2 3.1 11.0
4.7
des Mittelwertes ( : s) (C,, : ,) ; N = Anzahl der Einzelwwtc ((I) P(5’ --f 18”‘) (c) P(5’ --f 18”‘) (0.02 tO.0.j
** Standardabweichung * Mittelwert (X) *** Enthslt Spuren van Dokosamonoensgure (a) P(5’ 4 3”‘) <“.““I
‘3.7 ‘~ 0.8 20.7 6.4 16.0
2.4
\-
**c *
485
FETTSiiUREKIS PLACENTAZOTTEN eine iiberwiegende
der prozentualen Zusammensetzung folgender Fettund C,, : o. Nur die ungesattigten Fettsauren sauren: C,, : o, G, : o, Cl8 : o, Cl8 : 1, Cl8 : 2 nehmen prozentual signifikant zu. Da der Einbau von [I-X]Acetat C,, : 1 und Go : 4 nach der 60. min. bereits abgeschlossen ist, wiirden diese Befunde einen Austausch gegen hijher ungeder gesattigten Fettsauren (C,, : 0, C,, : 0, C,, : ,) der Phospholipide geslttigten sattigte Fettsauren (C,, : I, C,, : 4) anzeigen. Der LJmbau von langkettigen Fettsauren in hoher ungesattigte Fettsauren ist von Bloomfield und Blochg, Mead und bzw. RattenMitarbeiterl”Tll sowie Stoffel und Mitarbeiter12y13 an Hefepraparationen leber gezeigt worden. Ob diese Synthese von ungesattigten Fettsauren such in menschlichen Placentazotten stattfindet, muss in weiteren Untersuchungen geprtift werden. In der Fraktion der Cholesterinester nimmt der prozentuale Anteil von C,, : ,, wahrend der in vitro Inkubation ab, wohingegen derjenige der Fettsauren C,, : 1, C,, : ,,, C,, : I und C,, : 4 signifikant zunimmt (s. Tab. VI). Da die Inkorporation von TABELLB
Abnahme
VI
FETTS~URXZUSAMMENSETZUS~ PLACENTAZOTTEN
Inkzdxztionsieit (nzin)
(MO1
,1’
2
2 9
5
cl,:,,
cl,:”
DER
CHOLESTERINESTERFRAKTIOS
8
‘5
22.6
9.0
26.5 8.6 25.6 6.0
3.7
rr.4a 2.1
6
30 00
14
I20
12
180
IL
-cl,;:,
8.2* :- 1.2** j.2
23.9 4.3
‘4.7b + 5.0 4.9 2.6 7.3 14.4 7.5 2.6
* ***
0;))
REIFER
26.
I
II.2
27.2 _t 13.6 28.1 :
12.0
cm:,,
5.9
rr.5
c,,:,
cl*:2
20.6
20.0
2.4
3.0
_--2.2
1 I.2
6.3c m_ 2.2
16.9d
7.8 _c 3. I 8.6 ‘- I.9
12.6
‘4.7 4.4 17.1 :. 4.6 16.8g & 1.8
ro.4 .: 2.6 16.7 6.7 17.0
14.4 7.2
19.5 !I 4.7 15.7
Il.2
_/: 8.0 ‘2.3 4.5
_ ~__~ _ Mittclwert (X) ** Standardabweichung EnthSlt Spuren van DokosamonoensSure
I.0
4.6 9.9e 2.9f
’ 3.0
22.5
‘_ 4.3 19.0 ‘- 5.6
15.7 3.7
‘9.3 2.8
2.4 21.8 -‘- 5.9 18.1 6.7 22.5
c,o:,***
0.9
-
* ;:
0.7 0.2 1.8
0.9
‘_ 0.1
+ 0.1
I.0 IO.,
I.3h .; I.0 2.6 0.8 z.6i
1..3
I.2
I.1
0.5 -
0.9 1.5 0.7
’
0.3
- -
9.6 3. r
des Mittelwertes ( dI s) (C,, ; 1); N = Anzahl der Einzclwertc
(b) P(3o’ + 60’) <0.05
(c) P5’ + 60’) <0.005
(d) P(5’ + 30’)
(f)
(g) P(3o’ * 60’) <0.005
(h) P(5’ + 30’)
(i)
-> 180’) <0.02
c*,:,
c,,:,
5.4
(a) P(r5’ --j 60’) <0.05 P(3o
MENSCHLICHER
it2 7&W
(e) P(3o’ + 60’)
fi(3o’ + 180’) <0.005
[I-14C]Acetat in die Cholesterinester nach der 30. Inkubationsminute bereits abgeschlossen ist, und obige Beobachtungen nach dieser Zeit stattfinden, wiirden diese Befunde daftir sprechen, dass in der Cholesterinesterfraktion in erster Linie ungesattigte Fettsauren an Stelle von gesattigten Fettsauren eingebaut bzw. ausgetauscht werden. Zusammenfassend kann festgestellt werden, dass wahrend einer Inkubation von 180 min die Fettsaurezusammensetzung der einzelnen Lipidfraktionen reifer menschlicher Placentazotten nicht konstant bleibt, sondern bemerkenswerten Schwankungen unterworfen ist. Ob sich in diesen Anderungen der Fettsaurezusammensetzung mdglicherweise der Urn-, Ab- oder Aufbau von bestimmten Fettsauren bzw. Lipidfraktionen fur den Feten wiederspiegeln, sol1 in einer anderen Arbeit untersucht werden. Clin. Chivp?.Acta,
17 (1967)
479-486
_
486
KLEINE
I)ANK
Der
Autor dankt
Frl. Irmgard
Hess fur wertvolle
technische
Mitarbeit.
ZUSAMMENFASSUNG
Reife menschliche Placentazotten zeigen, verschieden lang is vitro inkubiert, signifikante Anderungen per prozentualen Zuzammensetzung (Mol T/o)der Fettsauren der einzelnen Lipidfraktionen : Freie Fettsiuren: Abnahme von C,, : ,, und C,, : 1 zwischen der 2. und 30. Inkubationsminute und Zunahme zwischen der 30. und 120. min der ersteren. Hijher ungesattigte Fettsauren (C,, : 1, C,, : 2, C,, : 3, C,, : J sind nachweisbar. Monoglyceride: Zunahme von C,, : 1, C,, : ,, und C,, : 1 zwischen der Digly15. und 180. min. Die Fettsauren C,, : 3 und C,, : 4 sind nicht nachweisbar. cede: Zunahme von C,, : O, C,, : Ir C,, : ,,, C,, : 2 und C,, : 4 wahrend der ganzen Inkubationszeit. Triglyceride: Zunahme von C,, : 1, C,, : O, C,, : O und C,, : 4 wahrend der ganzen Inkubationszeit. Phospholipide: Abnahme von C,, : “, C,, : O, C,, : O, C,, : 1, C,,: 2 und C,, : o wahrend der ganzen Inkubationszeit. Zunahme von C,, : 1und C,, : 4.Choleste&ester: Abnahme von C,, : o. Zunahme von C,, : 1, C,, : O, C,, : 1 und C,, : 4 wahrend der ganzen Inkubationszeit. Die Veranderungen werden im Hinblick auf den Urn-, Ab- und Aufbau der Fettsauren an Hand des Einbaues von [I-W]Acetat in die obigen Lipidfraktionen diskutiert.
I I 3 4 5 6 7 8 9 10 II IZ 13
LT. KLEINE, 2. Physiol. Chem., 17 (1967) 95. U. KLEINE, Clin. Chim. Acta, 205 (1967) 256. 1:. KLEINE, Arch. Gyniikol.. im Druck (1967). J. FOLCH, M. LEES UND G. H. S. STANLEY, J. Biol. Chem., 226 (1957) ~97. V. D. DOLE UND H. MEINERTZ, J. Bid. Chest., 235 (1960) 2595. L. D. METCALFE UND A. A. SCHMITZ, Anal. Chem., 33 (1961) 363. J. W. FARQUHAR, W. INSULL Jr,, P. ROSEN, W. STOFFEL UND E. H. AHRENS Jr., ,\“ufv. Heu. (Sufi$Z.), 17, No. 8, part II (1959) I. H. BOHRING, J. Chromatog., II (1963) 452. D. K. BLOOMFIELD UND K. BLOCH, J. Biol. Chem., 235 (1960) 337. G. STEINBERG, W. H. SLATON, D. R. HOWTON UND J. F. MEAD, J. Biol. Chem., LLO (1956) 257. J. F. MEAD UND D. R. HOU’TON, J. Bid. Chem., 229 (1957) 575. \V. STOFFEL, Biochem. Bioph_ys. Res. Commun.. 6 (1961) 270. W. STOFFEL UND K. L. .4ca, Z. Ph?lsioZ. Chem., 337 (1964) 123.
Clin.
Chim.
Acta,
17 (1967)
479-486
CHIMICA ACTA
479
GASCHROMATOGRAPHISCHEUNTERSUCHUNGEN DER FETTSAUREN DER
NEUTRALFETTE,
REIFER
MENSCHLICHER
GLLRICH
I
/)hysiologisch-Chewlisches (Eingegangen
den
Institut
PHOSPHOLIPIDE PLACENTAZOTTEN
dev Universitd
Hamburg**
UND IN
CHOLESTERINESTER VITRO
(Deutschland)
I I. Mai, 1967)
SUMMARY
Gas-Chromatographic Studies on, the Fatty Acids of Neutral Lipids, Phos$holipids and C~o~este~~~ Esters from V&i oj ~~~at~~effld%tan ~~a~e~tas in z&5 In mature human placental villi, the fatty acids of six lipid fractions were investigated by gas chromatography. In vitro incubation (2 lo 180 min) shows a significantly changed composition of the following fatty acids (moles/xoo moles fatty acids) : I. In the fraction of free fatty acids C, : o and C,, : 1 diminish between the 2nd and 30th min of incubation time; C, : ,, increases between the 3oth and 120th min. Polyunsaturated fatty acids (C,, : 1, C,, : %,C,, : 3, C,, : 4) are found. 2. In the fraction of monoglyceridcs the fatty acids C,, : Ir C,, : D and C,, : 1 increase between the 15th and r8oth min of incubation. Polyunsaturated fatty acids are not detectable. 3. In the fractions of diglycerides and triglycerides saturated (C,, : 0, C,, : @I C,, : @)and unsaturated (C,, : 1, C,, : 2, C, : a) f a tt y acids increase during the whole incubation time. 4. In the fraction of phospholipids the saturated fatty acids decrease, but the polyunsaturated fatty acids (C,, : 1, C,, : ,,) increase. 5. In the fraction of cholesterol esters saturated fatty acids (C,, : J decrease while the unsaturated fatty acid (C,, : 1, C,, : I, C, : ,) increase. These alterations of the fatty acid composition of the six lipid fractions are discussed in view of the metabolism of these fatty acids, as during the in vitro incubation also the incorporation of [r-l%]acetate in these six lipid fractions changes significantly.
Im Rahmen unserer Untersuchungen iiber den Fettstoffwechsel reifer menschlither Placentazottenl-3 haben wir festgestellt, dass [I-**C]Acetat is vitro besonders hoch in die Triglyceridfraktion, weniger ausgeprggt in Phospholipide, freie Fett* Jctzige Adresse: Universit%ts-Frauenklinik, land. ** Direktor: Prof. Dr. J. Kiihnau.
z Hamburg-Eppendorf,
Martinistrasse
C&n. China. Acta,
52,
Deutsch-
‘7 (1967) 479-486
I
480
sauren, Cholesterinester und Diglyceride ringebaut sind. Die nlonogl~c”idfr~tktion zeigte den geringsten Einbau der untersuchten Fraktionen. Hier sol1 die l;ettsaurcZusammensetzung der einzelnen Lipidfraktionen wahrend unterschiedlich langer Inkubationszeiten untersucht werden, urn hiermit Einhlicke in den Stoffwechsel obiger Lipidfraktionen zu bekommen.
Darstellung
einigev
Lipidfraktionen
am rnenschlichen
Placentazottex
Die Praparation und Inkubation der Placentazotten erfolgt bei 37” in 1007; 0, in folgendem Medium : 154 milf NaCl, z mM KCl, 0.9 m,lP CaCl,, 0.4 rniZf M&l,, 60/, Dextran, 7.57 mA9 ~-Glucose und Phosphatpuffer (pH 7.4) wie an anderer Stellel ausftihrlich beschrieben. Nach der Inkubation werdcn die Placentazotten homogenisiert, mit Chloroform-Methanol (I: I, v/v) extrahiert und der Lipidextrakt nach Folch” gereinigt. Der Lipidextrakt wird auf Kieselgels%ultn in die Fraktionen: Cholesterinester, Neutralfette zusammen mit Cholesterin und Phospholipide aufgetrennt. Die Neutralfett-Cholesterinfraktion wird dtinnschichtchromatographisch auf Kieselgel [Petrolgther-Diisopropylather-Essigsaure (60 : 40: 1.5, v/v)] praparativ in Triglyceride, freie Fettsauren, Diglycerid-Cholesteringemisch und Monoglyceride getrennt. Da sich die mit dem Cholesterin laufende Diglyceridfraktion mit dem angegebenen dtinnschichtchromatographischen Verfahren nicht einwandfrei isolieren lasst, wird diese Doppelfraktion nach einer infolge einer persbnlichcn Mitteilung von Btihring etwas modifizierten Methode nach Dole und Meinertz” in Cholesterin und Fettsauren der Diglyceride aufgetrennt. Die Radioaktivitat der einzelnen Lipidfraktionen wird in einem Tri-Carb Fltissigkeitsscintillationsspektrometer gemessen und auf Ipm/ro mg DNS (siehe I) bezogen. llarstellmg
der Fettsizrren
der Lipidfraktiovte-iz
Die Mono-, Di- und Triglyceride, die Cholesterinester und die Phospholipide werden mit 0.5 N methanolischer KOH 30 min am Rtickfluss bei 90’ verseift und mit Bortrifluorid nach Metcalfe und Schmitz6 verestert. Die Fettsaureanalysen werden mit einem Barber-Colman Gaschromatographen Model1 IO, ausgertistet mit einem Disc-Integrator, durchgefiihrt. Als Detektor dient eine Radium-Argon-Ionisationskammer. Es werden U-fijrmig gebogene Glassaulen von 250 cm Lange und einem Durchmesser von 5 mm verwendet. Die station&e Phase besteht aus 2074, Diathylen-Glykol-Succinat auf Celite 545 U 70/80 mesh, prapariert nach Farquhar? und Btihrings (Saulentemperatur 185”, Kammer 225” und Probengeber 320’; Argonflussgeschwindigkeit go bis 95 ml/min). Ein aliquoter Teil der zu analysierenden I’ettsauregemische wird mit einer IO ~1 Mikrospritze ohne Unterbrcchung des Argongasstromes durch eine Siliconkautschukmembran direkt auf die S%ule gegebrn. Die Identifizierung der einzelnen Fettsaure-Peaks erfolgt durch Vergleich der Retentionszeiten eines bekannten, genau eingestellten, Testgemisches. Die Fettsauren werden in Mol yb angegeben. Die Test-Fettsauren wurden von den Firmen : Calbiochem, Los Angeles, Calif., U.S.A.; Sigma Chemical Comp. St. Louis 18, MO., U.S.A44.und Applied Science Laboratories Inc., State College, Penn., U.S.A., die stationare Phase und der Trager von Analabs Inc., Hamden, Conn., U.S.A. bezogen. Die in den Tabellen I-VI angegebcne Standardabweichung (& s) des MittelClin. Chim. Acta, 17
(1967) 479-486
FETTShUREN IN PLACE~TAZOTTE~
481
wertes (x) wird nach der Formel s = & berechnungen ERGERNISSE
erfolgen UND
/&a -
I
N$ -
berechnet.Die Signifikanz-
3-I
nach dem t-Test nach Student.
DISKUSSION
Wie aus Fig. I hervorgeht, ist der Einbau von jr-**C]Acetat in die Fraktian der freierz F~~t~~~~~~ nach der 15. min abgeschlossen: Die -gaschromatographisch~ Ipm
_/Triglyceride
l0mg DNS 25.103
: /
,_ +_+ .-.- __.---___“-_25 15
30
60 inkubati~nszeit
_. ~_.__. * -_ 120
180
(min)
Fig. I. Abhgngigkeit des Einbaues van fr-14C]hcetat Placentazotten van der Inkubationszeit.
in Lipidfraktionen
reifer menschlichcr
Analyse der freien Fettsauren (s. Tab. I) zeigt wahrend einer Inkuhationszeit von z bis 180 min in folgenden FettsHure-Fraktionen Seine signifikanten Unterschiede in der prozentualen Zusamme~lsetzung (Mel yO) : Hexadecans~ure (C,, : ,,), Hexadecensgure (C,, : J, Octadecansgure (C,, : J, OctadecadiensLure (C,, : .J, Octadecatriens&ure (C,, : J, Docosans&re (C,, : J und Eicosatetraens&re (C,, : J. Die prozentuale Zusammensetzung der Tetradecansaure (C,, : ,) nimmt zwischen der 2. und 30, Inkubationsminute signifikant ab urn dann wieder signifikant zuzunehmen, ebenso diejenige der Octadecensaure (C,, : I). Wie aus unseren friiheren Untersuchungenl-3 hervorgeht, findet sehr wahrscheinlich in den Zotten der reifen menschlichen Placenta eine de nova Synthese von Triglyceriden iiber den Mono-, Di- und Triglyceridweg statt. In diesem Zusammenhang ist die Zusammensetzung der Fettsguren der Mono-, Di- und TriglyceridfrakC&n. Chim.
Acfra, 17 (1967)
479-486
KLEINE
482 TABELLE
I (Mol
FETTSkUREZUSAMMENSETZUNG PLACENTOZOTTEN
DER
DER
FREIEN
FISTTS:iUREX
IIEIFER
hll:XSCHLICH&R
(min) L
8.0*
2
a
0.2**
9
I 8
IO.0 3.7 5.6
32.3 9.0 24.9 ~~ 3.8 6.0 rr.4
3.3 1)
0.4 ‘4 12
22.8
I.7 7.2 - I ;:5
5.0 23.3 25.3 5.5
* Mittelwert (x) Enthxlt Spurcn
(a)
P(2’
-f
4.j
** “on
47.7
_
-+
120’)
I.2
3.4 c
0.7
6. I
2.0
I.8
‘w.7 13.0 60.1
4.6 I.9 8.1
0.7 2.2
20.5 5r.r 18.7
4.4 8.9 4.8
55.2
7.8
20.2
3.6
des Mittelwcrtcs ( (C,, : 1); ,V = ,\nzahl (c)
2.0
9.4
47,O
-: 10.0
3.2 I.4
3.i 0.3
IO.1
)
8.0
4.4 2.4
Standardabweichung Dokosamonoens&nre
(1,) P(jo’
30’)
2.0
1.5 0.4 3.0 I.8
9.9
!
IO.0
t 0.3
12
m!
38.8
2.7
I.9
4.7
5.3
4.6 0.8
2j.o
2.3
0
***
FRAKTION
s
lnkubations zeit
‘1;)
i?L 7,itV0
P(5’
1.1
0.7 ~~-
I.3
2.8
0.6
I.7 3.7 2.I
2.2 0.5 2.5 2.2
1.4 1.8
3.7 20 2 .j
1.i 2.2
I .o
0.5
’ ..3
’
0.3
0.8
0
I .6
0.7
3 3
0.7
0.2
2.1
; s) ctcr I~lnzelwerte
--f 30’)
<0.02
tionen
im Vergleich zu derjenigen der freien Fettsauren von besonderem Interesse. In der Monoglyceridfraktion (s. Tab. II) andert sich der prozentuale Anteil der Fettsauren C,, : ,, und C,, : ,, von der 2. bis 180. min nicht signifikant, obwohl bei der C,, : ,-Fraktion innerhalb der ersten 30 min eine gewisse Zunahme der prozentualen Zusammensetzung zu verzeichnen ist und in der entsprechenden Fraktion der freien Fettsauren eine Abnahme. Bei den Fettsauren C,, : 1, C,, : Ound C,, : 2 ist dagegen wahrend der ganzen Inkubationszeit eine signifikante Zunahme zu verzeichnen, desgleichen eine signifikante Abnahme von C,, : 1der freien Fettsauren (s. Tab. I). II
TABELLIS
FETTS~UREZUSAMMENSETZUNG ZOTTEN
Inkubatioizszeit (miil) 2
:,a)
DER
MONOGLYCERIDFRAKTIO~
RHIFER
MENSCHLICHER
,V
2
5
9
I5
8
30
6
60
‘4
I20
12
I80
12
* Mittelwert (x) *** Enth< Spuren (a) ~(15’ --f 180’) co.025 Cl&.
(iLlOl
in Wit+‘0
China. Acta,
r5.9* 3.8** 1.17.8
38.2 6.3 --3&L
1. 4.2
-t
3.3
’ II.8
38.5 3.3 39.2 4.8
25.1 6.4 ‘4.5 ~,. 4.3
43.6 13.0 51.9 16.1
16.4 ;: 4.0
40.9 _t 13.8
21.h
3.7 20.8
4.4 1.0
3.8 !m0.6 6.3 a 2.9 8.8 2.6
13.3 1 4.6 10.0
19.7 1: 4.0
24.4 5.1 IS.5b 5.0 19.8
16.3 7.4 12.9 c 1.9 I I.0
3.6 22.5
3.1 18.6
~1 8.8 24.9
3.’
Ij.2 I- 3.8
7.4 20.9 tl
j- 0.9 6.1 :
;
-~
1.2 3.’ 2.8
16.2 L 3.5
5.3 5 ‘3 0.5 38.8 I I.2 20.0 I-j.7 i 2.5 .I 6.3 ___ ** Standardabweichung des Mittelwertcs ( s) van Dokosamonocns%ure (C,,:,) ; N = .4nzahl der Einzelwerte. (d)Z(Izo’ --f 180’) (c) P(I5’ + 120’) (b) @(Is’ + 120’) (0.02
I7 (1967) 479-486
to.05
io.001
PLACENTA-
I’ETTS.qUREN
IN PLACENTAZOTTEN
483
In der Di- ftizl ~~~~~y~~~idjy~k~~~~ andert sich die prozentuale Zusammensetnicht zung der Fettsauren C,, : O,C,, : I und C,, : 3wahrend der ganzen Inkubationszeit signifikant, wohl dagegen diejenige der Fettsauren C,, : ,, (nur Diglyceride), C,, : I, C,, : ,, und C,, : 2 (nur Diglyceride). Wahrend sich die Fettsguren C,, : ,, und C, : 4 in der Monoglyceridfraktion im Gegensatz zur Fraktion der freien FettsHuren nicht oder nur in Spuren nachweisen lassen, vermehrt sich der prozentuale Anteil dieser Fettsguren in der Di- und Triglyceridfraktion wHhrend der ganzen Inkubationszeit signifikant (s. Tab. III und IV).
FtiTTSKUREZUS4~1MENSr~T%~~~ ZCVCTEN
ii?
““)
(.\fOl
DER
DIGLYCERIDFR.\:
RFIFER
16.5 5.9
16.5 3.8
8.2
IS.0
12.8
5.0
6.6 4.3
17.0
1.3-4
7.4
2
5
9
I.5
8
30
6
00
‘4
33.5 .-
9.4*
2 _.
g**
9.1
15.8
39.9
4.8
12.0
II.7
33.7
f 3.4
‘- 8.j 31.6a 7.2b 44.3 ‘3.4
I0.I
7.2 -10.4 2.8
120
I.?
180
_ 2.4
1.7
4.6
!
I_ L.0 _j 0.j
I.7
12.7 o.7d,c
4.0 r.5c 11.8 4.8
28.0
II.5 ,26.1
5O.Z
‘5.9
‘7.3
_ I.3
13.x
2r.h
r7.7
: 7.3
‘. 4.3
LI 5.3
i 5.3
34.0
6.5
k 1.2
13.2
12.1 ‘. 3.8 r4.0 ; 2.9 17.1
18.2
I2
--
5.7 _/
IO.2
* ***
<0.02 PW
4
to.05
it’)
$5(120
3
180’)
(g)
P(2’
+
io.001
--
PLACENTA-
3.0 0.9 _. 0.1
4.1 1~3.0
1.9
3.6
3.3
.’ 0.x
4.9
--
I.0
77 3.’ 11.4
9.9g
II.3
5.2
1.8
‘3.3
3.1
_: 3.6
0.5
~-
4.2
6.6 ,- 4.5 J. II.1 -1
3.r
‘4.3 1: 2.6h
7.6
x.5.4 /. 13.2 8.1 i- 5.2 11.7
2.1
--
+
2.4
I.0
--
Z.Of
3.3
Mittelwert (X) +* Standardabwcichung des Mittelwrtes Enthalt Spuren van Dokosamonocns%ure (C,, : 1); A’ (b) F(3o’ + ho’) (CL) P(JO’ --f 120’) (c) P(30’ --f 120’)
k)
RIENSCHLICHER
vetvo
_ 8.5
( : 6) =
Anzahl tier Einzclwerte ((1) $(30’ --f 180’)
30’)
(h) $(3o’ + 120’) io.05
Der Vergleich der Inkorporation von [I-%]Acetat in die Fraktionen der Mono-, Di- und Triglyceride zeigt (s. Fig. I), dass bei den Mono- und Triglyceriden nach der 60. min, bei der Diglyceridfraktion dagegen nach der 30. min keine weitere Radioaktivitat mehr eingebaut wird. Die spezifischen Aktivitaten (Ipm@5’,,mole/ro mg DNS) der Fettsauren der Mono-, Di- und Triglyceridfraktionen verhalten sich wie I : z:4 (Lit. 2). ‘4~s diesen Befunden ist zu ersehen, dass wahrend einer Inkubationszeit von 180 min in die Monoglyceridfraktion aus der Fraktion der freien Fettsauren in erster Linie C,, : 1, weniger C,, : o und C,, : 1 eingebaut werden, wohingegen in die Di- und Triglyceridfraktionen vor allem C,, : Ir C,, : O, C,, : i und hiiher ungesattigte Fetts2uren inkorporiert werden. Der doppelt so hoch wie erwartete Einbau i4Cmarkierter Fettsauren in die Triglyceridfraktion in den ersten 30 ~nkubationsminuten ist mijglicherweise mit der in dieser Zeit signifikanten Zunahme von C, : 4 in Zusammenhang zu bringen, da in der iibrigen Fettsaurezusammensetzung wahrend dieser Zeit keine signifikante Anderung festzustellen ist. Dieser Befund stiitzt unsere Annahme von der Existenz zweier Triglycerid-Synthesewege in den Zotten reifer menschlither Placenten: Erstens: Mono-, Di-, Triglycerid de nave Synthese und zweitens: Anhangen hoch l*C-markierter Fettsguren an ein nicht oder wenig l*C-markiertes lxin. Chin?. Actff,
‘7 (1967) 479-.$x
KLEINE
484 T.U3EI,LE
I\.
FETTS.iUREZUSAMMENSETZUNG
(MO1
q,)
DER
TRIGLYCERIDFRAKTION
REIFER
MENSCHLICHER
I’L:,CENT.\-
c,, :
I,
2
0 x 0
I2
29.5 2.5
2.5 I.”
13.4 IO.5
19.3 L 0.6
IO. I - 3.I
9.0 2.4 7.3 2.7
29.9 ~ 6.0 28.5 3.8 35.’ 12.9
4.2 I I.7 3.7 l.I 3.8a 0.9
16.4 7. I 14.9 5.2 II.8b
9.8 3.3 0.4 I.7 8.3
30.9 i.6 30.7
7.2 5.3 6. I
I.5 IO.4 3.1 15.9
19.6 ! 1.1 21.5 2.1 2I.5 ~ I.6 21.5 5.7 18.4
I I.3 4.8
9.5 34.7
I_ 2.” 5.7
5.8 17.3
5.” 17.6
4.2 IO.0
I.7
4.5
’ 7.”
‘_ 3.7
7.9 3.7 6.9
‘1 I2
7.6* 2-f**
‘- 3.8 7.3 4.6 8.1
‘~
4.3 * Mittclwert (x) *** Enth%lt Spurcn (a) p(30’ + 120’)
(c)
$(.j'
IO.1
I.2
IO.1
5.” 1.0
1.j 0.; 1.2 0.j 0.q
! 0.2 I.3 0.3 2.3 ~ 0.2 2.2 I ..3
10.0
1 ..3
6.7’1
2.7 .- 0.9 2.9 1.0
2.qc ‘).
4.5 I.7
1.3 7.6
2.8c
0.9
3.7 ro.6 2.0 12.5
3.9 I .o 4.0 I.2
I.1 0.5
I
2.6 I I.9
5.’
** Standardabweichung des Mittclwertes (: s) van Dokosamonoens%ure (C,, : J ; N = _tnzahl der Einzelwrertc (c) p(60’ -+ 180’) (b) p(30’ + 180’) (d) P(5’ * 30’) <0.“2
--Z 180’)
<“.005
Di- oder Triglycerid. Die endgiiltige Entscheidung muss aber weiteren Untersuchungen iiberlassen werden. Die Zusammensetzung der Fettsguren der Phospholifde (s. Tab. V) wghrend einer Inkubation von 180 min verh5lt sich im Vergleich zu derjenigen der Mono-, Diund Triglyceride grundlegend anders : Wghrend der ganzen Inkubationszeit zeigt sich
F~TTSfiUREZUShMMEFSETZUNG
(M”l
2,)
DER
FH”SPH”LIPIDFRhKTI”N
REIFER
MENSCHLICHER
PL.\(‘E.ST
(‘p,,:
5
9 8
I.5 30
2.7* 0.9** 2.6a
2
2
1.1
37.8 4.7 4I.4b 4.3
2.1
3 5
0.7 0
1.1 0.5
00
‘4
2.8 I
120
12
0.9
38.5 I”.9 3”. I 9.7
I.8 0.8
1x0
I2
‘5
7.” 37.3 I: 6.3 43.2 -8.1
2.5 I.”
‘7.2
-
4.2 23.8d
1.2C
5.4 22.3
I.”
2.T
4.3 21.6 1 3.1 20.0
I.3 2.”
/ 0.8 2.” -0.7
9.5 20.7
2.4 0.6 2.6 0.8
I_ 3.3 IS.3 0.8
(c) P(5’ + 3”‘) <“.““5
(b) P(5’ --f 18”‘) <“.“5 (0 P(5’ --f -0’) <"."j
3.6 ‘7.5
2.8
15.3
3.6
I5.0
L 5.5 14. I 3.”
0.9 1~0.1
II.5 I.4 13.9c 4.’ 9.8 3.3 8.1
2.0
0.8
: 0.1 :
(g) P(I5’
-> 18”‘)
<".""l
0.6 0.2
I
4.3f I.9
0.6 0.4
3.8 2.0
0.8 0. I
3 4 I.9 4.” 2.6
8.4 ‘- 3.6 ,~ 9.2 3.1 11.0
4.7
des Mittelwertes ( : s) (C,, : ,) ; N = Anzahl der Einzelwwtc ((I) P(5’ --f 18”‘) (c) P(5’ --f 18”‘) (0.02 tO.0.j
** Standardabweichung * Mittelwert (X) *** Enthslt Spuren van Dokosamonoensgure (a) P(5’ 4 3”‘) <“.““I
‘3.7 ‘~ 0.8 20.7 6.4 16.0
2.4
\-
**c *
485
FETTSiiUREKIS PLACENTAZOTTEN eine iiberwiegende
der prozentualen Zusammensetzung folgender Fettund C,, : o. Nur die ungesattigten Fettsauren sauren: C,, : o, G, : o, Cl8 : o, Cl8 : 1, Cl8 : 2 nehmen prozentual signifikant zu. Da der Einbau von [I-X]Acetat C,, : 1 und Go : 4 nach der 60. min. bereits abgeschlossen ist, wiirden diese Befunde einen Austausch gegen hijher ungeder gesattigten Fettsauren (C,, : 0, C,, : 0, C,, : ,) der Phospholipide geslttigten sattigte Fettsauren (C,, : I, C,, : 4) anzeigen. Der LJmbau von langkettigen Fettsauren in hoher ungesattigte Fettsauren ist von Bloomfield und Blochg, Mead und bzw. RattenMitarbeiterl”Tll sowie Stoffel und Mitarbeiter12y13 an Hefepraparationen leber gezeigt worden. Ob diese Synthese von ungesattigten Fettsauren such in menschlichen Placentazotten stattfindet, muss in weiteren Untersuchungen geprtift werden. In der Fraktion der Cholesterinester nimmt der prozentuale Anteil von C,, : ,, wahrend der in vitro Inkubation ab, wohingegen derjenige der Fettsauren C,, : 1, C,, : ,,, C,, : I und C,, : 4 signifikant zunimmt (s. Tab. VI). Da die Inkorporation von TABELLB
Abnahme
VI
FETTS~URXZUSAMMENSETZUS~ PLACENTAZOTTEN
Inkzdxztionsieit (nzin)
(MO1
,1’
2
2 9
5
cl,:,,
cl,:”
DER
CHOLESTERINESTERFRAKTIOS
8
‘5
22.6
9.0
26.5 8.6 25.6 6.0
3.7
rr.4a 2.1
6
30 00
14
I20
12
180
IL
-cl,;:,
8.2* :- 1.2** j.2
23.9 4.3
‘4.7b + 5.0 4.9 2.6 7.3 14.4 7.5 2.6
* ***
0;))
REIFER
26.
I
II.2
27.2 _t 13.6 28.1 :
12.0
cm:,,
5.9
rr.5
c,,:,
cl*:2
20.6
20.0
2.4
3.0
_--2.2
1 I.2
6.3c m_ 2.2
16.9d
7.8 _c 3. I 8.6 ‘- I.9
12.6
‘4.7 4.4 17.1 :. 4.6 16.8g & 1.8
ro.4 .: 2.6 16.7 6.7 17.0
14.4 7.2
19.5 !I 4.7 15.7
Il.2
_/: 8.0 ‘2.3 4.5
_ ~__~ _ Mittclwert (X) ** Standardabweichung EnthSlt Spuren van DokosamonoensSure
I.0
4.6 9.9e 2.9f
’ 3.0
22.5
‘_ 4.3 19.0 ‘- 5.6
15.7 3.7
‘9.3 2.8
2.4 21.8 -‘- 5.9 18.1 6.7 22.5
c,o:,***
0.9
-
* ;:
0.7 0.2 1.8
0.9
‘_ 0.1
+ 0.1
I.0 IO.,
I.3h .; I.0 2.6 0.8 z.6i
1..3
I.2
I.1
0.5 -
0.9 1.5 0.7
’
0.3
- -
9.6 3. r
des Mittelwertes ( dI s) (C,, ; 1); N = Anzahl der Einzclwertc
(b) P(3o’ + 60’) <0.05
(c) P5’ + 60’) <0.005
(d) P(5’ + 30’)
(f)
(g) P(3o’ * 60’) <0.005
(h) P(5’ + 30’)
(i)
-> 180’) <0.02
c*,:,
c,,:,
5.4
(a) P(r5’ --j 60’) <0.05 P(3o
MENSCHLICHER
it2 7&W
(e) P(3o’ + 60’)
fi(3o’ + 180’) <0.005
[I-14C]Acetat in die Cholesterinester nach der 30. Inkubationsminute bereits abgeschlossen ist, und obige Beobachtungen nach dieser Zeit stattfinden, wiirden diese Befunde daftir sprechen, dass in der Cholesterinesterfraktion in erster Linie ungesattigte Fettsauren an Stelle von gesattigten Fettsauren eingebaut bzw. ausgetauscht werden. Zusammenfassend kann festgestellt werden, dass wahrend einer Inkubation von 180 min die Fettsaurezusammensetzung der einzelnen Lipidfraktionen reifer menschlicher Placentazotten nicht konstant bleibt, sondern bemerkenswerten Schwankungen unterworfen ist. Ob sich in diesen Anderungen der Fettsaurezusammensetzung mdglicherweise der Urn-, Ab- oder Aufbau von bestimmten Fettsauren bzw. Lipidfraktionen fur den Feten wiederspiegeln, sol1 in einer anderen Arbeit untersucht werden. Clin. Chivp?.Acta,
17 (1967)
479-486
_
486
KLEINE
I)ANK
Der
Autor dankt
Frl. Irmgard
Hess fur wertvolle
technische
Mitarbeit.
ZUSAMMENFASSUNG
Reife menschliche Placentazotten zeigen, verschieden lang is vitro inkubiert, signifikante Anderungen per prozentualen Zuzammensetzung (Mol T/o)der Fettsauren der einzelnen Lipidfraktionen : Freie Fettsiuren: Abnahme von C,, : ,, und C,, : 1 zwischen der 2. und 30. Inkubationsminute und Zunahme zwischen der 30. und 120. min der ersteren. Hijher ungesattigte Fettsauren (C,, : 1, C,, : 2, C,, : 3, C,, : J sind nachweisbar. Monoglyceride: Zunahme von C,, : 1, C,, : ,, und C,, : 1 zwischen der Digly15. und 180. min. Die Fettsauren C,, : 3 und C,, : 4 sind nicht nachweisbar. cede: Zunahme von C,, : O, C,, : Ir C,, : ,,, C,, : 2 und C,, : 4 wahrend der ganzen Inkubationszeit. Triglyceride: Zunahme von C,, : 1, C,, : O, C,, : O und C,, : 4 wahrend der ganzen Inkubationszeit. Phospholipide: Abnahme von C,, : “, C,, : O, C,, : O, C,, : 1, C,,: 2 und C,, : o wahrend der ganzen Inkubationszeit. Zunahme von C,, : 1und C,, : 4.Choleste&ester: Abnahme von C,, : o. Zunahme von C,, : 1, C,, : O, C,, : 1 und C,, : 4 wahrend der ganzen Inkubationszeit. Die Veranderungen werden im Hinblick auf den Urn-, Ab- und Aufbau der Fettsauren an Hand des Einbaues von [I-W]Acetat in die obigen Lipidfraktionen diskutiert.
I I 3 4 5 6 7 8 9 10 II IZ 13
LT. KLEINE, 2. Physiol. Chem., 17 (1967) 95. U. KLEINE, Clin. Chim. Acta, 205 (1967) 256. 1:. KLEINE, Arch. Gyniikol.. im Druck (1967). J. FOLCH, M. LEES UND G. H. S. STANLEY, J. Biol. Chem., 226 (1957) ~97. V. D. DOLE UND H. MEINERTZ, J. Bid. Chest., 235 (1960) 2595. L. D. METCALFE UND A. A. SCHMITZ, Anal. Chem., 33 (1961) 363. J. W. FARQUHAR, W. INSULL Jr,, P. ROSEN, W. STOFFEL UND E. H. AHRENS Jr., ,\“ufv. Heu. (Sufi$Z.), 17, No. 8, part II (1959) I. H. BOHRING, J. Chromatog., II (1963) 452. D. K. BLOOMFIELD UND K. BLOCH, J. Biol. Chem., 235 (1960) 337. G. STEINBERG, W. H. SLATON, D. R. HOWTON UND J. F. MEAD, J. Biol. Chem., LLO (1956) 257. J. F. MEAD UND D. R. HOU’TON, J. Bid. Chem., 229 (1957) 575. \V. STOFFEL, Biochem. Bioph_ys. Res. Commun.. 6 (1961) 270. W. STOFFEL UND K. L. .4ca, Z. Ph?lsioZ. Chem., 337 (1964) 123.
Clin.
Chim.
Acta,
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