Importance des anticorps anti-leucocytaires et anti-plaquettaires en pratique transfusionnelle

Transfusion. T. I. N ° 3 - - 1958.

ACTUALITE

Importance des anticorps an ti-1 e u c o cyt air es et anti-plaquettaires en pratique transfusionnelle par J. DAUSSET et J. C O L O M B A N P

'APPARITION tr~s fr6quente d'anticorps anti-leucocytaires et antithrombocytaires Chez les malades transfus6s est maintenant un fait bien 6tabli. Les anticorps sont toujours inactifs contre les leucocytes et les plaquettes des malades. Ce simple fait signifie qu'il existe des groupes leucocytaires et plaquettaires. Bien que l'existence des antig~nes A, B du syst~me ABO, ainsi que l'antig~ne D du systSme Rhesus aient 6t$ d6montr& ~ la surface des leucocytes et des plaquettes, il ne peut s'agir d'anficorps dirig& contre ces antig~nes puisque toutes les transfusions sont d&ormais isogroupes ou compatibles pour ces antig~nes. I1 pourrait done s'agir d'iso-anticorps dirig& contre d'autres antig~nes connus sur les 6rythroeytes (C, E, c, e, Fya, etc.). Mais l'exp6-

L

(*) Centre N a t i o n a l de T r a n s f u s i o n S a n g u i n e , 6, r u e A l e x a n d r e - C a b a n e l , P a r i s - 1 5 e. ( D i r e c t e u r : J. P. S o u l i e r ) .

2 5 0 - J. D A U S S E T et J. C O L O M B . 4 N I

rience montre que les anticorps anti-leucocytaires ou anti-plaquettaires d$cel~s chez ces malades sont inactifs sur les h6maties. I1 s'agit donc bien d'anticorps d6celant des antig~nes p r o p r e m e n t leucocytaires ou plaquettaires, irrddpendants de ceux des 4rythrocytes. D6jh deux groupes leucocytaires ont 6t$ d6crits. Le groupe I (ou MAC) dont l'antig~ne est repr6sent5 chez 55 h 60 % des individus pris au hasard de la population fran~aise (Dausset et Coll [8]). Le groupe II present chez 1 1 % des individus de la population hollandaise (Van Rood et Coll. [36]). I1 est encore trop tbt pour savoir si les antig~nes leucocytaires et plaquettaires sont superposables. I1 est probable que de n o m b r e u x antig~nes sont communs aux deux $16ments. Nous nous proposons ici de m o n t r e r l'importance pratique des isoanticorps ainsi d6cel~s. Elle est de 3 ordres : - - r61e jou6 dans le d6clenchement de certains chocs transfusionnels, - - r61e jou6 sur la survie des leucocytes et des plaquettes transfus6es, - - r61e jou6 clans l'iso-immunisation f~eto-maternelle.

I. - - MODES DE DETECTION De nombreuses techniques ont $t6 d6crites ~ ce jour. Nous conseillons les techniques suivantes :

A/ Anticorps agglutinants (dits complets). Ils sont d6cel6s par contacts directs entre le s6rum contenant ranticorps et des leucocytes ou des plaquettes possSdant l'antig~ne correspondant. 1) LEUCO-AGGLUTININEIMMUNE.

Les d6tails de la r~aetion ont 6t6 publi6s ailleurs [7]. 2) THROMBO-AGGLUTININEIMMUNE. Depuis la premiere publication de Dausset et Colin [10] u n certain n o m b r e de modifications ont 6t~ apport6es. Nous conseillons la technique suivante :

IMPORTANCE

DES ANTICORPS

- - 251

Prdparation d u s ~ r u m ~t dtudier : L e s ~ r u m doit ~tre utilis6 inactiv6 p a r c h a u f f a g e de 30' h 56 ° C. I1 dolt 6tre d 6 p r o t h r o m b i n 6 p a r passage sur SO4 Ba. P o u r ce faire 1 m l de s 6 r u m inactiv6 est m i s a n contact ( p e n d a n t 15 m i n u t e s avec agitation c o n s t a n t e h la t e m p 6 r a t u r e d u laboratoire) avec 100 m g de SO4 Ba. Prdparation de la s u s p e n s i o n plaquettaire : La s u s p e n s i o n de p l a q u e t t e s est pr6par6e h partir de 9 v o l u m e s de sang norm a l de g r o u p e O pr61ev6 s u r u n v o l u m e de E.D.T.A. (Sequestr~ne Na2 fi 5 %) en t u b e silicon6. Le s a n g est centrifug6 de fa~on fi o b t e n i r u n e s u s p e n s i o n de plaquettes d a n s l e u r p r o p r e p l a s m a (centrifugation de 3 m i n u t e s fi 1.000 tours) ; les plaq u e t t e s sont e n s u i t e lav6es 3 lois d a n s u n e c e n t r i f u g e u s e r e f r o i d i e h ~- 4 °, en t u b e silicon6, avec la s o l u t i o n s u i v a n t e : PO~ H N a ~ h 9,4 g p o u r 1.000 e u e a u p h y s i o l o g i q u e . . . . . . . . . . 2 volumes. - - E.D.T.A. (Sequestr~ne Na:) h 1 % en e a u p h y s i o l o g i q u e . . . . 1 volume. C h a q u e c e n t r i f u g a t i o n se fait h 3.000 t o u r s / m i n u t e p e n d a n t 15 m i n u t e s . A u d e r n i e r lavage les p l a q u e t t e s sont r e m i s e s en s u s p e n s i o n dans l ' e a u physiol o g i q u e t a m p o n n 6 e h p H 7,2 p a r le t a m p o n a u x p h o s p h a t e s n e c o n t e n a n t pas de E.D.T.A. et de fa¢on h o b t e n i r la c o n c e n t r a t i o n de 900.0000 p l a q u e t t e s / m m ~ environ. Cette s u s p e n s i o n est chauff6e au bain-marie, u n e h e u r e a v a n t l ' e m p l o i , en t u b e silicon6, p a r fraction de 0,5 m l p e n d a n t u n t e m p s pr6cis de 15, 16, 17 on 18 s e c o n d e s h 56 ° C. Des 6preuves pr61iminaires d 6 t e r m i n e r o n t le t e m p s utile de chaufrage q u i p e u t varier d ' u n e varidt6 de p l a q u e t t e s h l'autre. O n u t i l i s e r a le t e m p s q u i p e r m e t d ' o b t e n i r des r6sultals n e t t e m e n t n6gatifs avec les s 6 r u m s de contr61e et des r 6 s u h a t s f r a n c h e m e u t positifs avec les s 6 r u m s p o s s 6 d a n t des thrombo-agglutinines. -

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Rdaction p r o p r e m e n t dite. D a n s u n godet d ' u n e p l a q u e de K l i n e (*) n o n silicon6e on m e t 0,10 m l de s6r u m h 6 t u d i e r et 0,05 m l de s u s p e n s i o n p l a q u e t t a i r e . A p r ~ s 30' d ' a g i t a t i o n circulaire s u r u n a g i t a t e u r de K l i n e plac6 h l'6tuve h 37 ° C et p a r c o u r a n t 80 rotations p a r m i n u t e de 4 c m de diam~tre, la lecture se fera d i r e c t e m e n t s u r la p l a q u e avec u n g r o s s i s s e m e n t de 90 lois e n v i r o n .

B/ Anticorps n o n agglutinants (dits incomplets). Les leuco

et les thrombo-anticorps

incomplets

sont mis en ~vidence

grace ~ la t e c h n i q u e de consommation de l'antiglobuline selon une technique, modifi6e d'apr~s Moulinier [22] et Steffen [31]. En voici les d6tails : Toutes les manipulations sont r6alis6es en verrerie silicon6e h -{-4°. 1. - - PREPARATION DES REACTIFS.

La c o n s o m m a t i o n de l ' a n t i g l o b u l i n e cst 6tudi6e p a r a l l ~ l e m e n t avec les leucocytes et les p ] a q u e t t e s n o r m a u x d u m ~ m c d o n n e u r . (*) Agitateur de Kline et plaques h godets concaves de chez Cogit, Paris.

252-

J. DAUSSET et J. COLOMBztNI

1) Pr~l$vement du sang. 9 volumes de sang. 1 volume de sequestr~ne Na~ (E.D.T.A.) ~ 5 % en eau physiologique. Un flacon de 400 cm ~ de sang permet de r6aliser 7 ou 8 tests. 2) Prdparation des plaquettes. Le sang est centrifug6 ~ 1.500 tours/minute pendant 12', le plasma surnageant est s6par6 et centrifug6 une nouvelle lois, dans les m6mes conditions que pr6e6demment. Le plasma riche en plaquettes est centrifug6 ensuite h 3.000 tours/minute pendant 30' de fa~on h obtenir un culot plaquettaire. Les plaquettes ainsi obtenues sont lav6es 8 lois en liquide de lavage ~ pH 7,4 dont la formule suit : 1 volume de solution de sequestr~ne Na= ~ 1 % en eau physiologique. - - 2 volumes de solution de phosphate de sodium PO4HNa~ ~ 9,4 pour 1.000 en eau physiologique. Chaque centrifugation destin~e aux lavages est effectu6e ~ 3.000 tours/minute pendant 10 minutes. Les plaquettes ainsi obtenues sont pratiquement eompl~tement isol6es des h6maties et des leucocytes. Chaque test est r6alis6 ~ partir de 4 milliards de plaquettes. -

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3) Prdparation des leucocytes. Les cu!ots d'h6maties et de leucocytes sont additionn6s de 2 parties d'eau physiologique tamponn6e et d'une pattie d'une solution de dextran sp6cial (poids mo16culaire : 160.000) ~ 5 % en eau physiologique, et laiss6 s6dimenter en tubes inclin6s ~ 45 ° pendant 45 minutes ~ temp6rature de laboratoire. La suspension leucocytalre ainsi obtenue est centrifug6e ~ 1.500 tours/minute pendant 5 minutes. Le eulot leucocytaire est alors lav6 8 lois dans un liquide de lavage ~ pH 7,2 dont la formule suit : - - 1 volume de solution de phosphate acide de potassium PO~H~K ~ 9,066 pour 1.000 en eau physiologique. - - 4 volumes de solution de phosphate de sodium PO~HNa~ '~ 9,4 pour 1.000 en eau physiologique. - - 20 volumes d'eau physiologique. Les centrifugations apr~s ehaque lavage sont effectuSes ~ 1..500 tours-/minute pendant 4 minutes. Chacun des tests est ainsi r6alis6 avec un culot de 100 ~ 150 millions de leucocytes, et quelques h6maties, impossibles ~ 61iminer totalement. 4) Prdparation des sdrums. Les s6rums sont inactiv6s par ehauffage de 30' ~ 56 ° et pass6s sur sulfate de baryum pour le test plaquettaire. Ce passage est r6alis6 par agitation constante, pendant 20' ~ la temp6rature du laboratoire de 1 ml de s6rum inactiv6 avec 0,10 g de sulfate de baryum. 2. - - SENSIBIUSATION DES LEUCOCYTES ST DES PLAQUETTES. 1) La sensibilisation des leucocytes est r6alis6e par contact de 1 heure ~ 37 ° de : 100 ~ 150 millions de leucocytes en eulot ; 0,3 ml de s6rum ~ tester.

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IMPORTANCE

DES

ANT1CORPS

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253

Apr~s ce temps, les leucocytes sensibilis6s sont lav6s 6 lois en liquide de lavage tamponn6 h pI-I 7,2 (voir pr6c6demment). 2) La sensibilisation des plaquettes est r6alis6e par contact de 1 heure ~ 37 ° de : 4 milliards de plaquettes en culot ; 0,3 ml de s6rum a tester. Apr~s cette incubation, les plaquettes sensibilis6es sont lav6es 6 lois en liquide de lavage tamponn6 h pH 7,4 (voir pr6c6demment). -

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3.

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CONSOMMATION DE L~ANTIGLOBULINE.

Chacun des culots de leucocytes ou de plaquettes sensibilis6s et lav6s est mis au contact pendant 6' "~ temp6rature de laboratoire (18° h 20 °) avec 0,15 ml d'une antiglobuline choisie h 8 dilutions au-dessous de son titre.~ L'antiglobuline est ensuite s6par6e par eentrifugation rapide et titr6e. 4.

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TITRAGE

DE LSANTIGLOBULINE.

L'antiglobuline est titr6e sur h6maties O Rh + sensibilis6es par un anti-D incomplet. Cette sensibilisation est r6alis6e par contact de 1 heure h 37 ° d'une quantit6 6gale de l'anti-D incomplet titrant 1/64 en Coombs indirect et d'une suspension d'h6maties h 30 % en eau physiologique. Le titre de l'antiglobuline ne doit pas varier apr~s contact de celle-ci avec les leucocytes ou les plaquenes sensibilis6s par un s6rum normal. La consommation est appr6ci6e par le nombre de tubes de chute entre le titre de l'antiglobuline ayant 6t6 en contact avec le s6rnm ~ tester et un s6rum normal t6moin.

II. - - F I g ~ Q U E N C E

A/Fr6quence

a b s o l u e et r e l a t i v e .

A l ' a i d e des t e c h n i q u e s p r 6 c S d e n t e s o u de v a r i a n t e s i l est a p p a r u q u e les a n t i c o r p s 6 t a i e n t e n fair d ' u n e e x t r 6 m e f r 6 q u e n c e . Celle-ci est c e p e n d a n t d i v e r s e m e n t a p p r $ c i 6 e selon les a u t e u r s . A n d r 6 , D r e y f u s e t S a l m o n [3] o b s e r v e n t c h e z 522 m a l a d e s a y a n t re~u p l u s de 3 t r a n s f u s i o n s , 68 l e u c o - a g g l u t i n i n e s et 60 t h r o m b o - a g g l u t i nines, soit u n e f r 6 q u e n c e d e 13,0 % p o u r les l e u c o c y t e s e t de 11,4 % p o u r les t h r o m b o c y t e s . Rose P a y n e

[24]

c o m p t e 31 l e u c o - a ~ g l u t i n i n e s c h e z 264 m a l a d e s

a y a n t re~u u n e o u p l u s d ' u n e t r a n s f u s i o n , s o i t u n e f r 6 q u e n c e de 15,5 %. V a n L o g h e m et coll. [34] o b s e r v e n t c h e z 98 m a t a d e s p o l y t r a n s f u s 6 s ( n o m b r e m i n i m u m de t r a n s f u s i o n n o n pr6cis6) 10 a n t i c o r p s c o m p l e t s (soit 10,2 % ) et 32 a n t i c o r p s i n c o m p l e t s (soit 32,6 % ) .

2 5 4 - J. D A U S S E T et J. C O L O M B A N I Nous-m~mes comptons chez 216 malades ayant re~u au moins u n e transfusion 35 leuco-aglutinines, soit 16,2 % et 20 thrombo.agglutinines, soit 10,8 %. L'association des anticorps anti-leucocytaires et plaquettaires aux anticorps anti-6rythrocytaires est diversement appr6ci6e. Consid6r6e c o m m e rare p a r certains auteurs (R. P a y n e [25], Van L o g h e m et coll. [34]), elle serait au contraire fr6quente p o u r Andr6 et coll. [2]. L ' a p p a r i t i o n d'anticorps anti-leucocytaires ou plaquettaires eonstituerait un indice d'une a p t i t u d e ~ l'iso-immunisation, devant faire r e c h e r c h e r avee un soin particulier, les anticorps anti-6rythrocytaires. Ainsi il a p p a r a l t que les antig~nes des leucocytes et des plaquettes sont f o r t e m e n t antig6niques p o u r les receveurs ne poss6dant pas ces antig~nes. Ils sont bien plus antig6niques que les antig~nes 6rythrocytaires autres que A, B e t D.

B/ Nombre moyen de tran~usions n6cessaires & l'iso-immunisation. L~ encore le h o m b r e est tr~s v a r i a b l e m e n t appr6ci6 selon les auteurs. I1 est difficile ~ 6tablir puisque l ' i m m u n i s a t i o n p e u t appara~tre contre un antigone que ne poss~dent pas les leucocytes ou les plaquettes utilis6s le j o u r du test. C e p e n d a n t nous avons pratiqu6 une exp6rienee assez significative [18]. Nous avons inject6 ~ 6 malades le sang p r o v e n a n t p o u r chacun d'eux du m 6 m e d o n n e u r et avons recherch6 syst6matiquement l'apparition de l ' i m m u n i s a t i o n contre les leucocytes du donneur. L ' i m m u nisation existait d~s la 7 e transfusion clans t o u s l e s cas oh elle est apparue. Mais on ne p e u t transposer exactement cCtte notion ~ la p r a t i q u e transfusionnelle quotidienne puisque l ' i m m u n i s a t i o n est r a r e m e n t faite avec le sang d'un m ~ m e donneur. P a r ailleurs il est des malades qui se sensibilisent tr~s r a p i d e m e n t , d'autres au contraire qui sont r6fractaires. I1 n ' y a donc pas de r~gle g6n6rale. Les anticorps complets peuvent a p p a r a i t r e d~s les toutes p r e m i e r e s transfusions c o m m e ils peuvent ne se d6~elopper qu'apr~s u n e longue s6rie de transfusion. Nous n'avons pas d'informations suffisamment 6tudi6es en ce qui concerne les anticorps incomplets.

I M P O R T A N C E DES A N T I C O R P S - - 255

III. - - ROLE DES ANTICORPS ANTI-LEUCOCYTAIRES ET PLAQUETTAIRES D A N S LES C H O C S TRANSFUSIONNELS

Deux ordres de faits militent en faveur de ce rSle. 1. - - des donn6es statistiques. 2. - - des exp6riences de transfusion s$1ective. L e s d o n n ~ e s s t a t i s t i q u e s , sont nombreuses, m o n t r a n t u n rapport entre la fr6quence des leuco.agglutinines et celles des rSactions transfusionnelles elles 6tablissent une pr6somption de causalit6. R. Payne [25], chez 49 malades prSsentant des r6actions transfusionnelles d6tecte des leuco-agglutinines dans 32 cas, soit 65 %. Van Loghem et coll. [32] ~tudiant 85 polytransfusSs m o n t r e n t qu'il existe une diff6rence significative dans la fr6quence des r6actions transfusionnelles entre le groupe des patients avec anticorps antileucocytaires (24/34) et celui des malades sans anticorps antileucocytaires (14/51). En outre ils soulignent le rSle du titre de l'anticorps. Chez 33 malades pr~sentant des r~actions transfusionnelles le titre de la leuco-agglutinine ~tait 19 fois ~ 1/4 et 14 fois ~ 1/8, alors que chez 19 malades sans rSaction transfusionnelle, le titre Stait toujours ~ 1/4. Van Rood et coll. [36] ~tudient 21 femmes recevant leur premiere transfusion ~ l'occasion d'un accouchement. Les r6actions transfusionnelles sont plus fr6quentes (5/7) dans le groupe des femmes avec anticorps anti-leucocytaires que dans le groupe sans anticorps (lj14). Andr6 e t coll. [3] par contre ne pensent pas qu'il existe une corr61ation significative entre la presence de leuco-anticorps et la survenue des r6actions transfusionnelles. Mais ici se pose le probl~me de la d6finition de la rSaction transfusionnelle sur lequel nous reviendrons. L'6tnde statistique ne peut apporter qu'un argument de pr6somption. Plus significatives semblent les exp6riences de. transfusions fractionnSes. Ces exp6riences ont $t6 faites chez des malades prSsentant r6guli~rement ~ chaque transfusion une r6action fSbrile avec frisson. Les m$thodes de fractionnement des divers 616ments sanguins, culots Srythrocytaires, plama riche en leucocytes ou en plaquettes, plasma sans leucocytes ni plaquettes, varient selon les auteurs. Nous d$crirons en dStail r u n e d'elles plus loin. ll est inutile de d6crire ici ces nombreuses exp6riences qui toutes m o n t r e n t l'apparition de la r6action f6brile lors de la perfusion de la suspension leucocytaire, et l'absence de r6action lors de l'injection des autres fractions.

2 5 6 - J. DAUSSET et 2. C O L O M B A N I De telles exp6riences ont $t$. r6alis$es par Brittingham et Chaplin [5] R. Payne [25], Van Loghem et coll. [32], Van Rood et coll. [36], Killmann [16], Brittingham [4], Dausset et coll. [12], Ces derniers ont en outre observ6 chez une malade pr6sentant de tels chocs une baisse du compl6ment ~ la suite de transfusions de sang contenant des leucocytes incompatibles. Ce fait peut 6tre interpr6t6 comme la fixation i n v i v o du compl6ment sur le complexe antig~ne-anticorps form6, ou peut-~tre comme un signe de prot$olyse fruste. En outre il semble que la quantit6 de leucocytes inject6s joue un role,

Dans le cas de Brittingham [4] la r6action apparaissait lorsqu'on transfusait 4 )< 109 leucocytes incompatibles, elle n'apparaissait pas lorsqu'on en transfusait 4 X 108. De m~me Dausset et coll. [12] ont observ6 que 109 leucocytes ne provoquaient par la r~action alors que 3 X 10' la provoquaient. Les chiffres donn6s par Killmann [16] sont du m~me ordre (2,2)< 10~), ainsi que ceux de Brittingham et Chaplin [5] (4,15 X 10~) • II semble que ces exp6riences 6tablissent avec certitude le r61e jou6 par l'injection de leucocytes incompatibles dans la gen~se de certaines r6actions transfusionnelles. Celles-ci consistent en une 616vation thermique de plus de 1 ° presque toujours accompagn6e de frissons et souvent de signes fonctionnels divers : c6phal6es, nausSes, sensation de malaise. La fi~vre pourrait 6tre due ~ la libSration d'une substance pyrog~ne endog~ne, "hpartir des leucocytes lSs~s par l'anticorps (Wood [38] ). Une exp6rience analogue a 6t6 faite par Dausset et coil. [11] chez une malade fortement sensibilis6e contre les plaquettes. L'injection de plasma ne provoquait pas de choc. L'injection du m6me plasma, riche en plaquettes d6clenchait celui.ci (observation non publi6e). Ces exp6riences ont en outre ravantage d'61iminer la possibilit6 de r6actions dues ~ une sensibilisation au plasma (Dameshek et Neber [6] ) ou h une incompatibilit6 6rythrocytaire non d6montr$e. Leur cons6quence est la possibilit6 de r6aliser cbez ces malades polytransfusSs des transfusions sans r6actions en utilisant du sang appauvri en leucocytes. Ceci est particuli~rement n6cessaire chez des malades pancytop6niques, qui ne survivent qu'~ l'aide de transfusions r~p~t6es. En effet la solution th6oriquement plus s6duisante qui consisterait h transfuser du sang contenant des leucocytes compatibles est pratiquement irr6alisable, car les anticorps antileucocytaires que poss~dent ces malades sont actifs contre la majorit6 des leucocytes test6s. Aussi une m6thode sim-

IMPORTANCE

DES

ANTICORPS

--

257

ple et efficace de pr6paration du sang appauvri en leucocytes et en plaquettes est-elle n6cessaire. Nous d6crirons ici celle pr6conis6e par Van Loghem et coll. [32] qui dans la pratique s'est av6r6e prSf~rable h celle que nous avions prSalablement propos6es (Dausset et coll. [13]). TECHNIQUE DE PRI$.PARATION DU SANG APPAUVRI EN LEUCOCYTES ET EN P L A Q U E T T E S (selon V a n L o g h e m [ 3 2 ] ) . (fig. 1).

® ® ®

I 'er

flacon

I) solution d e dextran. 100 n~l 2) e a u p h y s i o l o g i q u e .. 200 m l 3) culot drythrocytaire . 200 m l

1ler f l a c o n aprds 3 0 de s d d i m e n l a t i o n

m.

t ) culot d r y t h r o c y t a i r e a p p a u v r i en l e u c o c y t e s et en plaquettes. 2) liqnide surnageant riche en leucocytes et en plaquettes.

FIG. 1 : S c h d m a d u d i s p o s i t i f permettant la prdparation du sang a p p a u v r i en leucocytes et en plaquettes (selon Van LOGr~EM et Coll. [323 ).

1) Pr6paration de la solution de Dextran sp6cial h 5 %. 50 g de Dextran de poids mol6culaire 160.000 (*) sont mis h dissoudre dans 900 ml d'eau physiologique h 8 g de Na C1 par litre. Le chauffage jusqu'~ 6bullition est n6cessaire pour obtenir une dissolution complete. Apr~s refroidissement le volume est compl6t6 ~ 1.000 ml avec de reau physiologique. La solution ainsi pr6par6e est alors filtrSe st6rilement sur filtre (*) Poviet P r o d u c t i o n N. V. M a u r i t s k a d e , 14 - V a n Nierop, 18, r u e Chatran, N e u i l l y - s u r - S e i n e .

A m s t e r d a m . E t a b l i s s e m e n t L. P h .

2 5 8 - J. DAUSSET et J. C O L O M B A N I Karlsson ou Seitz E.K.S. L'absence de propri6t6s pyrogrnes est v6rifi6e avant l'emploi. 2) 400 ml de sang sont pr61ev6s sur 100 ml d'ACD et laiss6s s6direenter 12 h. ~ + 4 °. L'utilisation de sang pr61ev6 plus de 12 h. auparavant est impossible. On drcante les 3/4 du plasma surnageant, on complete le volume ~ 400 ml avec de l'eau physiologique, puis on ajoute 100 ml de la solution de Dextran. Le contenu du flacon est bien mrlang6. On met en place une prise d'air ~ longue aiguille allant jusqu'au fond du flacon, et une t u b u l u r e munie d'une aiguille courte, qui communique p a r son extr6mit6 distale avec un deuxi~me flacon. Les tubulures sont pinc6es avec des pinces de Kocher. Le p r e m i e r flacon est alors suspendu goulot en has ~ temp6rature du laboratoire et laiss6 s6dimenter 30 minutes. Les pinces sont alors enlev6es et on laisse s'6couler lentement darts le deuxi~me flacon qui a 6t6 m u n i d'une prise d'air la totalit6 de la couche 6rythrocytaire. 3) Le deuxi~me flacon est alors trait6 comme le premier : adjonction d'eau physiologique et de dextran, raise en place des tubulures, s6dimentation goulot en bas. Aprrs 30 minutes la totalit6 du culot 6rythrocytaire est transvas6 de la m r m e mani~re dans un 3e flacon. 4) Le culot est alors lav6 une fois en eau physiologique afin d'61iminer le dextran. On ajoute 100 ml d'eau physiologique afin de fluidiffer la suspension et de faciliter la transfusion qui dolt ~tre faite le j o u r m~me. On v6rifiera au pr6alable que le produit ~ transfuser contient moins de 5 % du n o m b r e original de leucocytes et seulement quelques rares plaquettes. Au lieu de deux s6dimentations successives nous utilisons u n e technique plus simple, plus rapide et mieux adapt6e ~ la forme trapue des flacons de sang utilis6s en France : apr~s d6plasmatisation, le culot cellulaire d'environ 200 ml est divis6 en 2 parties 6gales, 100 ml 6tant transfus6s dans u n second flacon, 100 ml laiss6s dans le flacon d'origine. Dans chacun des flacons on injecte 300 ml d'eau physiologique et 100 ml de dextran. La s6dimentatiou est alors effectu6e, goulot en bas aprrs la mise en place des tubulures. Apr~s 30 minutes les deux couches 6rythrocytaires sont rassembl6es dans un troisi~me flacon p o u r le lavage final.

I M P O R T A N C E DES A N T I C O R P S - - 259

IV. - - ROLE DES ANTICORPS ANTI-LEUCOCYTAIRES ET ANTI-PLAQUETTAIRES DANS LA SURVIE IN VIVO DES LEUCOCYTES ET DES PLAQUETTES TRANSFUSES T h ~ o r i q u e m e n t les leucocytes ou plaquettes compatibles doivent avoir une survie i n v i v o Sgale h celle des leucocytes et des plaquettes du receveur e~ les leucocytes ou les plaquettes incompatibles doivent 6tre 61iminSs darts un temps a n o r m a l e m e n t court. E n fair cette notion ne s'applique int6gralement qu'en ce qui coneerne les plaquettes, qui c o m m e les Srythrocytes d e m e u r e n t c o n s t a m m e n t dans les vaisseaux. Quant aux leucocytes on sait qu'ils ne vivent q u ' u n e partie peut6tre courte de leur existence dans les vaisseaux (Lissac [17] ). Ils quittent la circulation p a r diaped~se p o u r aller dans les divers tissus. I1 est donc impossible ~ l ' h e u r e actuelle de mesurer leur survie r6elle. Quant leur survie a p p a r e n t e darts la circulation on sait qu'elle est pratiq u e m e n t inexistante : les leucocytes transfuses sont tout d ' a b o r d arr6t6s dans les p o u m o n s et disparaissent donc i m m 6 d i a t e m e n t . E n ce qui concerne les plaquettes une notion c o m m u n 6 m e n t adraise est celle de la diminution du temps de survie des plaquettes transfus6es ~ des malades pr6sentant dans leur s6rum des anticorps antiplaquettaires. Cette notion repose sur 3 ordres de fairs : 1 - - l'exp6rienee clinique : au cours de syndromes h6morragiques p a r t h r o m b o p~nie, reffet h6mostatique des transfusions de plaquettes s'attSnue lors de la r6p6tition des transfusions. 2 - - L'6tude de la survie des plaquettes transfus6es chez les malades t h r o m b o p 6 n i q u e s poss6dant ou non une thrombo-agglutinine. 3 - - La m~me ~tude chez des a n i m a u x immunis6s. L ' a p p r $ c i a t i o n de la durSe de vie n o r m a l e des plaquettes est variable selon les m6thodes employ6es. Les m6thodes de num6rations l'estiment ~ 5 ~ 7 jours, celles qui utilisent le m a r q u a g e par les radio616ments ~ 8 ou 11 jours. Nous ne retiendrons ici que les faits concern a n t les thrombop6nies au cours d'aplasies m6dullaires ; dans ces cas seulement la survie des plaquettes transfus6es p e u t ~tre ou non influencSe p a r l'existence d'iso-anticorps d'origine transfusionnelle. Dans les cas de p u r p u r a t h r o m b o p 6 n i q u e s idiopathiques avec auto-anticorps ou dus ~ une sensibilisation mSdicamenteuse, et dans les thrombop6nies avec spl6nom6galies, les autres facteurs de destruction plaquettaire sont pr6dominants et emp~chent l'6tude de l'action d'6ventuels iso-anticorps. Lors de la r6p6tition des transfusions de plaquettes la diminution de l'effet h6mostatique est c o u r a m m e n t observ~ (Minor et Burnett [20] ).

2 6 0 - J. D A U S S E T et J. C O L O M B A N I Lorsque des 6tudes de la survie sont faites, on note parall~lement u n raccourcissement progressif de celle-ci (Stefanini, Dameshek et Adelson [29], Stefanini et Dameshek [28], Sprague et coll. [27], Hirsch et Gardner [15] ). Les temps de survie passent de 5-6 ou 7 jours p o u r les premieres transfusions ~ 1 j o u r ou quelques heures p o u r les derni~res. Hirsch et Gardner [15] r a p p o r t e n t en outre deux cas oh la survie n'6tait que de quelques heures d~s la premiere transfusion de plaquettes et attribuent ce f a i t h u n e immunisation ant6rieure par d'autres transfusions. D'autres auteurs, Stefanini, Dameshek, Adelson [29], 6tablissent une relation entre le raccourcissement de la survie et la pr6sence d'anticorps constat6s. Rappelons toutefois les r6serves qui s'imposent darts l'appr6ciation de ces iso-anticorps post-transfusionnels, peu de techniques 6tait ~ l'abri de route critique. Les exp6riences chez l'animal montrent enfin que les plaquettes 6trang~res subissent un sort diff6rent selon que le receveur est immunis6 (s6questration dans le poumon) ou non (s6questration pr6domi~ nante dans le foie) (Maupin ([19]). Ces faits p e r m e t t e n t de penser que l'iso-imunisation anti-plaquettaire fr6quemment observ6e chez les polytransfus6s doit jouer u n r61e important dans la survie des plaquettes transfus6es et Iimiter l'effet h6mostatique des transfusions. V. - - ROLE DES ANTICORPS ANTI-LEUCOCYTAIRES ET ANTI-PLAQUETTAIRES DANS L'IMMUNISATION FCETO-MATERNELLE P a r analogie avec ce qui est observ6 dans la s6rie 6rythrocytaire il est logique de penser qu'un conflit antig~ne-anticorps pourrait 6tre obscrv6 entre m~re et enfant. Ce conflit pr6sente th6oriquement deux aspects : 1 - - immunisation de la m~re, 2 - - effet nocif sur le f~etus ou le nouveau-n6. L'immunisation maternelle a 6t6 d6montr6e r6cemment (Van Rood et coll. [35, 36]), dans la s6rie leucocytaire. Cet auteur 6tudiant le s6rum de 122 multipares n o n transfus6es d6tecte 7 leuco-anticorps. L'effet nocif sur le foetus p o u r r a i t ~tre observ6 apr~s immunisation par les grossesses ou par des transfusions ant6rieures. I1 n'existe pas notre connaissance de leucop6nie du nouveau-n6 dont la preuve immunologique ait 6t6 faite, mais il reste possible que des maladies du foetus, et peut-~tre des avortements soient dus ~ l'action des anticorps

IMPORTANCE

DES

YlNTICORPS

--

261

maternels sur les tissus de l'enfant (Van Rood [36] ) ; on salt en effet qu'il existe des communaut6s antig6niques entre les leucocytes et divers tissus, n o t a m m e n t d'origine ectodermique. Dans la s6rie plaquettaire les deux aspects flu conflit devraient 6tre retrouv6s. Les observations de thrombopSnie du nouveau-n6 sont nombreuses, mais ne peuvent ~tre rapport~es h une incompatibilit6 f~etomaternelle possible que dans un h o m b r e limit6 de cas. Comme le soulighent Alagille et Menach6 [1] dans un travail r6cent, les autres causes de p u r p u r a d u nouveau-n$ doivent d'abord ~tre 61imin6es. P a r m i celles-ci l'existence d'un p u r p u r a thrombop6nique chez la m~re, m~me ancien, apparemment gu6ri apr~s spl6nectomie, dolt ~tre recherch6e avec soin. On peut donc, th$oriquement, d6finir ce que devra 6tre ce purpura : survenant d~s la naissance, il devra s'accompagner d'une m6gacaryoeytose m6dullaire normale ou augment6e. On ne devra trouver chez l'enfant aucune anomalie cong~nitale, aucune maladie h6matologique des autres lign~es, aucune, maladie infectieuse, virale ou parasitaire ; chez la m~re aucun ant6c6dent de purpura. Du point de vue s6rologique, on devra d6tecter dans le s6rum de la m~re, un iso-anticorps aetif contre les plaquettes de r e n f a n t , du p~re, et d'un n o m b r e limit6 de plaquettes normales choisies au hasard. Cet anticorps ne dolt pas ~tre actif sur les propres plaquettes de la m~re. Rappelons en outre qu'existent, pour la s6rie plaquettaire, des difficult~s s6rologiques propres, obligeant ~ une grande prudence clans l'interpr6tation des r6sultats. P a r m i les rares observations connues aucune ne r6pond compl~tement ~ ces crit~res (Harrington et coll. [14], Moulinier [23], Verstraete et Vandenbroucke [37], Stefanini et coll. [30], Sauer et Van Loghem [26] ). Enfin il faut citer les p u r p u r a du nouveau-n6 accompagnant une mal~die h6molytique du nouveau-n6 due ~ un anti-D (Moulinier [21]). Les conclusions pratiques sont encore impr6cises, mais seraient peut-~tre importantes, surtout en ce qui concerne le p u r p u r a du nouveau-n6, o/1 r i n d i c a t i o n d'une exsanguino-transfusion pourrait 6tre envisag6e. On volt que le domaine commence seulement ~ ~tre explor6. Les difficult6s s6rologiques inhSrentes aux s6ries leucocytaires et plaquettaire Sont relativement compens6es par les connaissances th6oriques que r o n a de ces probl~mes, par analogie avec ce qui est observ6 dans la s6rie ~rythrocytaire.

262-

1. D A U S S E T

et ]. C O L O M B A N 1

Conclusions et r6sum6 L'apparition d'anticorps anti-leucocytaires et anti-thrombocytaires est frSquente chez les malades polytransfus6s. Les leuco-agglutinines sont les plus fr$quentes (144 chez 1.100 polytransfus6s soit 13,1%), les thrombo-agglutinines le sont un peu moins (80 chez 738 polytransfusSs, soit 10,4 %). Les anticorps anti-leucocytaires le plus souvent et parfois les anticorps anti-thrombocytaires, sont ~ l'origine de r6actions transfusionnelles f6briles. Celles-ci peuvent Stre 61iminSes par la transfusion de sang appauvri en leucocytes et en plaquettes selon la technique pr6conis6e par Van Loghem de s6dimentation en presence de dextran. L'existence d'iso-anticorps anti-plaquettaires permet d'expliquer la diminution, lors des transfusions it6ratives de plaquettes, du temps de survie des plaquettes transfus6es, et de l'efficacit$ h6mostatique des transfusions. L'immunisation anti-leucocytaire et plaquettaire semble possible lors de grossesses multiples lorsqu'elle existe elle pourrait avoir une action nocive sur le foetus ou le nouveau-n6 bien que celle-ci n'ai pu encore ~tre d6montr~e. BIBLIOGRAPHIE l. - - ALAGILLE D., MENACHE D. : Les t h r o m b o p 6 n i e s n6o-natales. Sere. H6p. Paris, 42, 2.167-2.172, 1958. 2.-

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