ORIGINALES Importancia de la ciclooxigenasa-2 en la regulación de la hemodinámica renal durante la gestación en ratas conscientes* A. S. Loria**, F. J. Salazar y M. T. Llinás Departamento de Fisiología. Facultad de Medicina. Universidad de Murcia. España
Objetivo. Determinar la importancia de la ciclooxigenasa-2 (COX-2) en la regulación de la hemodinámica renal durante la gestación en ratas. Material y método. En primer lugar se determinó la expresión renal de la COX-2 a lo largo de la gestación mediante la técnica de western blot. La expresión de la COX-2 fue analizada en los siguientes grupos de ratas: ratas vírgenes (n = 6), ratas en los días 6 (n = 6), 13 (n = 6) y 20 de gestación (n = 6) y ratas en el día 4 después del parto (n = 6). El análisis densitométrico de los diferentes western blot demostró que los niveles de la proteína aumentaron (p < 0,05) un 41% en la segunda semana de gestación con respecto a los observados en ratas vírgenes. En segundo lugar se determinó el efecto de la inhibición específica de la COX-2 sobre los cambios en la hemodinámica renal observados durante la mitad de la gestación. Los experimentos se realizaron en ratas vírgenes (n = 10) y ratas gestantes (n = 10) tratadas con vehículo (salino isotónico) o con el inhibidor específico de la COX-2 (rofecoxib). El inhibidor de la COX-2 fue administrado por vía oral durante tres días (10 mg/kg/día). Las medidas de presión arterial media (PAM), flujo plasmático renal (FPR) y tasa de filtración glomerular (TFG) fueron realizadas en el día 14 de gestación. Resultados. De acuerdo con estudios previos, la resistencia vascular renal (RVR) fue menor (p < 0,05) en el grupo de ratas gestantes (35 ± 3 mmHg/ml · min–1 · g–1) que en el grupo de ratas vírgenes tratadas con vehículo (46 ± 5 mmHg/ml · min–1 · g–1). Del mismo modo, la TFG fue mayor (p < 0,05) en las ratas gestantes (1,43 ± 0,16 ml/min/g) que en las ratas vírgenes tratadas con vehículo (0,99 ± 0,06 ml/min/g). La administración oral de rofecoxib no alteró la TFG ni la PAM en ninguno de los dos grupos de animales. Por el contrario, el tratamiento con el inhibidor específico de la COX-2 provocó una disminución significativa (p < 0,05) en la RVR en el grupo de ratas preñadas (27 ± 2 mmHg/ml · min–1 · g –1), sin afectar la RVR en el grupo de ratas vírgenes (49 ± 4 mmHg/ ml · min–1 · g–1). Conclusión. Los resultados de este estudio sugieren que la COX-2 está implicada en la regulación de la hemodinámica renal durante la gestación en ratas conscientes.
Role of COX-2 in regulating renal hemodynamics during gestation in conscious rats Objective. The purpose of this study was to determine the role of cyclooxygenase-2 (COX-2) in regulating renal hemodynamics during mid-gestation in the rat. Material and methods. Renal COX expression was determined by western blot analysis in kidneys from virgin rats (n = 6), pregnant rats at days 6 (n = 6), 13 (n = 6) and 20 (n = 6) of pregnancy and rats at day 4 postpartum (n = 6). Protein levels at day 13 of gestation were 41 % higher than in virgin rats. To evaluate whether the increase in COX-2 expression was involved in regulating renal hemodynamics during midpregnancy in the rat, we also tested the effects of a specific inhibitor of COX-2 (rofecoxib) on renal vascular resistance (RVR) and glomerular filtration rate (GFR) in virgin and midpregnant rats. Studies were conducted in four experimental groups: virgin rats + vehicle (n = 10), virgin rats + rofecoxib (n = 10), pregnant rats + vehicle (n = 10) and pregnant rats + rofecoxib (n = 10). Rofecoxib was administered by gavage over 3 days, at a dose of 10 mg/kg/day. Mean arterial pressure (MAP), renal plasma flow (RPF) and GFR were determined at day 14 of gestation. Results. Consistent with earlier reports, midterm pregnant rats showed a significantly (p < 0.05) lower RVR (35 ± 3 mmHg/ml · min–1 · g–1) than virgin controls (46 ± 5 mmHg/ ml · min–1 · g–1). Baseline GFR for gravid rats was significantly (p < 0.05) higher (1.43 ± 0.16 ml/min/g) than in virgin rats (0.99 ± 0.06 ml · min–1 · g–1). COX-2 inhibition with rofecoxib reduced RVR in pregnant rats (27 ± 2 mmHg/ml · min–1 · g–1), whereas it had not effect on RVR in virgin controls (49 ± 4 mmHg/ml · min–1 · g –1). Conclusion. These data suggest that COX-2 is involved in regulating renal hemodynamics during gestation in conscious rats. Key words: gestation, renal hemodynamics, cyclooxygenase, kidney, hypertension.
Palabras clave: gestación, hemodinámica renal, ciclooxigenasa, riñón, hipertensión.
Correspondencia: M. T. Llinás. Departamento de Fisiología Humana. Facultad de Medicina. Campus de Espinardo. 30100 Murcia. España. Correo electrónico:
[email protected] Recibido: 24 de noviembre de 2005. Aceptado: 30 de enero de 2006.
Introducción Una de las primeras adaptaciones que se producen en el organismo materno durante la gesta*El trabajo fue realizado con una subvención del Ministerio de Ciencia y Tecnología (SAF2003-08429). **A. S. Loria realizó el trabajo con una beca de la Sociedad Española de Hipertensión (SEH-LELHA). Hipertensión. 2006;23(1):13-8
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ción tiene lugar en el sistema cardiovascular. El gasto cardíaco y el volumen sanguíneo aumentan entre un 40%-50%, mientras que la presión arterial disminuye en asociación con una reducción de las resistencias vasculares periféricas1. Los riñones desempeñan un papel esencial en esta vasodilatación generalizada, y se ha demostrado que el flujo sanguíneo renal (FSR) y la tasa de filtración glomerular (TFG) aumentan de forma significativa en mujeres embarazadas, alcanzando incrementos máximos (40 %-80 %) al final del primer trimestre de gestación1. Estas alteraciones de la hemodinámica renal son fundamentales para el buen desarrollo del embarazo y por ello han sido objeto de numerosos trabajos de investigación. La rata grávida (22 días de gestación) ha sido utilizada en varios de estos estudios, ya que los cambios en la hemodinámica renal y en la presión arterial que se producen en estos animales a lo largo de la gestación, siguen un patrón similar al observado en el embarazo humano2-4. El FSR y la TFG sufren incrementos de hasta un 40 % a mitad de la gestación, mientras que la presión va disminuyendo durante la semana anterior al parto2-4. La interrelación entre las prostaglandinas y las alteraciones gestacionales en la circulación renal ha sido discutida por varios autores3, 5-7. Aunque parece claro que los niveles de prostaciclina (PGI2) están elevados durante la gestación en humanos y en diferentes especies animales8, 9, los resultados obtenidos en los estudios de hemodinámica renal en ratas gestantes, a las cuales se les administraron inhibidores inespecíficos de la enzima ciclooxigenasa (COX) son contradictorios3, 6, 7. En el riñón existen dos isoformas del enzima COX, conocidas como COX-1 y COX-2. La COX-1 parece ser la isoforma más abundante en la vasculatura renal y en el glomérulo10-12, mientras que la expresión de COX-2 se ha detectado en mácula densa, asa ascendente de Henle y células intersticiales papilares10-12. Hasta el momento no se ha determinado si la expresión renal de las dos isoformas de la COX está alterada durante la gestación. Por otra parte, ninguno de los estudios citados anteriormente ha analizado el papel desempeñado por cada una de las isoformas en la regulación de la hemodinámica renal durante el embarazo. El análisis de ambas isoformas por separado es importante porque, aunque su actividad in vitro es similar, su capacidad para producir prostanoides in vivo puede estar influenciada por su diferente regulación y distribución tisular. En un estudio reciente de nuestro grupo13 se ha demostrado que la expresión renal de COX-1 aumenta significativamente en ratas durante la segunda semana de gestación, coincidiendo con el máximo incremento en la TFG y el flujo plasmático renal (FPR) observado en estos ani14
males. La administración de un inhibidor específico de la COX-1 en este mismo estudio redujo los incrementos gestacionales en ambos parámetros y provocó un aumento significativo de la presión arterial. Los resultados de este estudio sugieren que los metabolitos derivados de la COX-1 contribuyen al control de la hemodinámica renal y la presión arterial durante la gestación. A la vista de estos resultados y debido a que, como mencionamos anteriormente, la COX-2 también se expresa en estructuras renales relacionadas con la regulación de la circulación renal, la propuesta del presente trabajo de investigación fue determinar si la expresión renal de la COX-2 está alterada durante la gestación. Además en el presente estudio también se analizaron los efectos de la inhibición selectiva de la COX-2 sobre la hemodinámica renal y la presión arterial en ratas gestantes.
Material y métodos Los estudios se realizaron en ratas hembras (225-240 g) Sprague Dawley criadas en al animalario de la Universidad de Murcia. Los animales se mantuvieron bajo condiciones de luz (12:12 horas luz/oscuridad) y temperatura (23ºC) constantes. Las ratas hembras se aparearon con machos en edad fértil. El primer día de gestación se determinó mediante la detección de esperma en el exudado vaginal. Todos los protocolos experimentales se llevaron a cabo de acuerdo con los principios aprobados por la Sociedad Americana de Fisiología. Western blot La expresión renal de COX-2 se determinó mediante la técnica de western blot en los siguientes grupos de animales: ratas vírgenes (n=6), ratas en el día 6 (n=6), día 13 (n=6) y día 20 (n=6) de gestación y ratas en el día 4 después del parto (n = 6). Todos los animales fueron anestesiados con isofluorano. Posteriormente, los riñones fueron extraídos y divididos en corteza y la médula. La corteza renal fue homogeneizada en un buffer compuesto por HEPEs, pH: 7,7; NaCl: 0,3 M; MgCl2: 1,5 mM; EDTA: 0,2 mM; Triton X-100: 1%; DTT: 0,5 mM; β-glicerfosfato: 20 mM; NaVO4: 100 μM; leupeptina: 1 μg/ml, y PMSF: 100 μg/ml. Después de 10 minutos de centrifugación a 10.000 g, el sobrenadante fue centrifugado de nuevo a una velocidad de 110.000 g durante 60 minutos para la obtención de microsomas. Una vez aislados, los microsomas se resuspendieron con SDS y se calentaron a 100º C durante 5 minutos. Las proteínas se separaron en geles de acrilamida (12,5% Bio-Rad) de 18 pocillos y posteriormente fueron transferidas a una membrana de polivinilideno difloruro (PVDF).
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Las membranas fueron bloqueadas con una solución compuesta por leche desnatada deshidratada y Tris Buffer salino (TBS) (10 %) e incubadas durante 1 hora a temperatura ambiente con una dilución 1:1.000 de un anticuerpo monoclonal específico para la COX-2 (Cayman Chemical). El anticuerpo secundario (Horseradish peroxidase conjugated goat anti-mouse IgG, Amersham) fue detectado mediante quimioluminiscencia (ECL Plus kit, Amersham). Las diferentes bandas fueron cuantificadas mediante densitometría, utilizando la actina como proteína control. Medida de la hemodinámica renal y presión arterial en ratas conscientes La contribución de la COX-2 a la regulación de la hemodinámica renal y la presión arterial durante la gestación se determinó mediante la administración de un inhibidor de la COX-2, rofecoxib, a ratas vírgenes y a ratas preñadas. Rofecoxib fue administrado por vía oral a una dosis de 10 mg/kg/día durante tres días (día 12, 13 y 14 de gestación). Los estudios se realizaron en los siguientes grupos experimentales: ratas vírgenes (n = 10) y ratas preñadas (n = 10) tratadas con vehículo y ratas vírgenes (n=10) y ratas preñadas (n=10) tratadas con rofecoxib. Todos los animales fueron sometidos a los procedimientos quirúrgicos que se citan a continuación. En el día 8 de gestación se llevó a cabo la colocación de sendos catéteres en la vena femoral (PE50) y la vejiga urinaria (PE90), los cuales fueron utilizados posteriormente para la infusión de diferentes sustancias y recolección de muestras de orina, respectivamente. En el día 13 de gestación se colocó un tercer catéter en la arteria carótida, a través del cual se midió la presión arterial y se obtuvieron las muestras de sangre. Todos los catéteres fueron exteriorizados a través de la piel del cuello. Las medidas de hemodinámica renal y presión arterial se realizaron en los animales conscien-
tes, el día 14 de gestación. La elección de este día para la obtención de las medidas se basa en estudios previos en los cuales se ha demostrado que los valores de TFG y FPR son máximos durante la segunda semana de gestación2-4. El día del experimento los animales fueron colocados en jaulas especialmente diseñadas para evitar su libre movimiento. El catéter venoso fue conectado a una bomba de infusión a través de la cual se administró una solución compuesta por salino isotónico, inulina tritiada (3H, 1 μCi/ml, American Radiolabeled Chemicals) y ácido paraaminohipúrico (PAH, 24 mg/ml, Sigma Chemical) a una velocidad de 3 ml/hora. Las medidas de presión arterial se realizaron a través del catéter arterial utilizando un transductor de presión conectado a un sistema informático (Grass Instrument Co) que almacenaba los datos de forma continua. Las muestras de sangre y orina se obtuvieron a partir del catéter arterial y vesical, respectivamente. Después de un período de estabilización de 60 minutos se recogieron muestras de orina durante dos períodos experimentales de 20 minutos. Las muestras de sangre se tomaron al final de cada uno de los dos períodos experimentales citados. La TFG y el FPR se calcularon a partir de las medidas de radiactividad (3H) y concentración de PAH (método colorimétrico) en plasma y orina. Estos valores fueron corregidos por gramo de peso de riñón. Las resistencias vasculares renales (RVR) se calcularon a partir de los valores de PAM y FPR.
Resultados Expresión renal de COX-2 durante la gestación En la figura 1A se muestra un western blot representativo de la expresión de la COX-2 en la corteza renal durante la gestación. En esta figura se puede observar que la expresión de COX-2 aumenta significativamente (p<0,05) en el día 13
A
B
COX-2
Actina Virgen
Día 6
Día 13 Día 20
PP
Unidades densitométricas
8 *
7 6 5 4 3 2 1 0 Vírgenes Día 6
Día 13 Día 20
PP
Fig. 1. Expresión renal de la COX-2 en la corteza renal de ratas vírgenes y ratas en diferentes días de gestación. A: Western blot representativo. B: Análisis densitométrico. Hipertensión. 2006;23(1):13-8
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de gestación. El análisis densitométrico de los diferentes western blot (fig. 1B) indica que los niveles de la proteína aumentaron (p < 0,05) un 41 % en la segunda semana de gestación con respecto a los observados en ratas vírgenes. Este incremento en la expresión de COX-2 no se observa durante el día 20 de gestación (final del período de gestación).
bidor selectivo de la COX-2 provocó una reducción de la RVR en el grupo de ratas preñadas (27± 2 mmHg/ml · min–1 · g–1). Sin embargo este parámetro no sufrió variaciones estadísticamente significativas en el grupo de ratas vírgenes tratadas con el inhibidor (49±4 mmHg/ml·min–1 ·g-–1).
Efectos de la inhibición específica de la COX-2 sobre la presión arterial y hemodinámica renal durante la segunda semana de gestación
La circulación renal contribuye en gran medida a la vasodilatación generalizada que se produce durante la gestación. El FPR y la TFG aumentan significativamente durante las primeras semanas de embarazo y permanecen aumentados hasta el final. Ambos parámetros son máximos a mitad de la gestación, alcanzando valores de entre un 40%-80% por encima de los observados en mujeres no embarazadas1. A pesar de que estos cambios gestacionales en la circulación renal han sido analizados en numerosos estudios, el mecanismo o mecanismos que intervienen en la regulación de la hemodinámica renal durante la gestación permanecen sin aclarar. En un estudio previo de nuestro grupo se ha demostrado que la vasodilatación renal que ocurre en la rata durante la mitad de la gestación está asociada a un aumento significativo de la expresión renal de la COX-113. Por otra parte, la administración de un inhibidor específico de esta isoforma en la segunda semana de gestación reduce los aumentos en TFG y ERPF observados durante este período13. Estos efectos renales inducidos por la inhibición selectiva de la COX-1 están asociados a una disminución en la excreción de 6-keto-PGF1α, metabolito estable de la prostaciclina, sugiriendo que metabolitos vasodilatadores derivados de la acción de la COX-1 podrían estar implicados en la vasodilatación renal observada durante el embarazo. En el presente estudio se determinó la expresión de la COX-2 en la corteza renal de ratas a lo largo de la gestación. Los resultados obtenidos indican que la expresión de esta isoforma aumenta de forma significativa durante la segunda semana, coincidiendo con la máxima vasodilatación renal observada en las ratas gestantes. La administración del inhibidor específico de la COX-2, rofecoxib, a las ratas preñadas durante esta etapa no tuvo efecto sobre la TFG y la presión arterial. Sin embargo, y al contrario de lo que ocurría con la inhibición específica de la COX-1, el bloqueo selectivo de las acciones de la COX-2 con rofecoxib provocó una disminución significativa de las resistencias vasculares renales. Los datos obtenidos sugieren que a pesar de que la COX-2 no parece estar mediando la vasodilatación renal observada durante la gestación, dicha isoforma participa en el mantenimiento del tono vascular renal cuando esta vasodilatación es máxima. Una posible hipóte-
En la figura 2 se representan los valores de PAM en ratas vírgenes y ratas preñadas en el día 14 de gestación. La PAM disminuyó significativamente (p < 0,05) en el día 14 de gestación en el grupo de ratas control (122±2 mmHg) con respecto al grupo de ratas vírgenes (132 ± 2 mmHg). La administración del inhibidor selectivo de la COX-2, rofecoxib, durante tres días no provocó variaciones significativas de la PAM en ninguno de los dos grupos de animales. La TFG (fig. 3A) fue mayor (p<0,05) en el grupo de ratas preñadas (1,43 ± 0,16 ml/min/g) que en el grupo de ratas vírgenes (0,99±0,06 ml/min/g). La inhibición selectiva de la COX-2 no tuvo efecto sobre este parámetro en ninguno de los dos grupos de animales. En cuanto a las RVR (fig. 3B), se observó una disminución significativa (p < 0,05) en el grupo de ratas gestantes (35 ± 3 mmHg/ml · min–1 · g–1), con respecto al grupo de ratas vírgenes (46 ± 5 mmHg/ml·min–1 ·g–1). El tratamiento con el inhi-
PAM (mmHg) 140
130
*
*
Preñadas
Preñadas + rofecoxib
120 110
100 90 Vírgenes
Vírgenes + rofecoxib
*Frente a virgen sin tratamiento
Fig. 2. Efecto de la administración del inhibidor selectivo de COX-2 (rofecoxib) sobre los valores de presión arterial media (PAM) en ratas vírgenes y en ratas preñadas en el día 14 de gestación.
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Discusión
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A
TFG (ml · min–1 · g–1) 2 *
B
RVR (mmHg/ml · min–1 · g–1) 60 55
*
1,5
50 45
*
40
1
35
*
30
0,5
25 20
0 Vírgenes
Vírgenes + rofecoxib
Preñadas
Preñadas + rofecoxib
*Frente a virgen sin tratamiento
Vírgenes
Vírgenes + rofecoxib
Preñadas
Preñadas + rofecoxib
*Frente a virgen sin tratamiento (p < 0,05) Frente a preñada sin tratamiento (p < 0,05)
Fig. 3. A: Efecto de la administración del inhibidor selectivo de la COX-2 (rofecoxib) sobre la tasa de filtración glomerular (TFG) en ratas vírgenes y ratas en el día 14 de gestación. B: Efecto de la administración del inhibidor selectivo de la COX-2 sobre la resistencia vascular renal (RVR) en ratas vírgenes y ratas en el día 14 de gestación.
sis para explicar estos resultados sería que el papel de la COX-2 en el mantenimiento del tono vascular renal estaría mediado por el sistema renina-angiotensina. Numerosos trabajos de investigación han descrito que dentro de la corteza renal, la COX-2 se expresa principalmente en la mácula densa y en fragmentos del asa ascendente de Henle adyacentes a la mácula densa, regiones éstas relacionadas estrechamente con la síntesis de renina14,15. En este sentido se ha observado que estados con niveles altos de renina como la baja ingesta de sal, administración de inhibidores del enzima de conversión o antagonistas de los receptores de la angiotensina, administración de diuréticos o en la hipertensión renovascular experimental están asociados con aumentos en la expresión de COX-2 en la mácula densa y fragmentos tubulares adyacentes14, 16-20. Además también se ha demostrado que los altos niveles de renina asociados con dichas situaciones disminuyen cuando se administran inhibidores selectivos de la COX-220-22. El embarazo es también un estado asociado con altos niveles de renina. Se ha descrito que tanto la pro-renina como la actividad plasmática de renina y los niveles de ANG II aumentan desde las primeras semanas del embarazo humano y permanecen aumentadas hasta el final del tercer trimestre23. Se ha propuesto que la función de la Ang II es mantener el tono vascular y la presión arterial en una situación donde la síntesis y la acción de sustancias vasodilatadoras está muy aumentada23. Dado que en la rata también se ha observado que el sistema renina-angiotensina está activado durante la gestación24, nuestra hipótesis es que la inhibición selectiva de la COX-2 en la rata gestante provocaría disminuciones en
la síntesis de renina y de Ang II, cuya acción llevaría a una mayor vasodilatación renal. Sin embargo, serán necesarios estudios adicionales para comprobar dicha hipótesis. En resumen, la máxima vasodilatación renal que se observa en la rata durante la mitad de la gestación está asociada a significativos aumentos de los niveles de expresión de las dos isoformas de la COX, COX-1 y COX-2. La inhibición selectiva de la COX-1 reduce esta vasodilatación y provoca aumentos importantes en la presión arterial. Por el contrario, la administración de un inhibidor selectivo de la COX-2 produce una disminución de las resistencias vasculares renales, en ausencia de cambios en la TFG y en la presión arterial. Estos resultados sugieren que las dos isoformas de la COX parecen tener efectos antagónicos en la regulación de la hemodinámica renal durante la gestación. Estos diferentes efectos podrían explicar los resultados de estudios previos en los cuales la administración de inhibidores no selectivos de la COX durante la gestación no tuvo ningún efecto sobre la hemodinámica renal ni la presión arterial6, 7. La inhibición conjunta de ambas isoformas en estos estudios enmascararía los efectos de cada una de las isoformas por separado. Perspectivas El estudio de los mecanismos que participan en las adaptaciones de la circulación renal a la gestación es de crucial importancia, puesto que se ha demostrado que la hemodinámica renal está comprometida en determinados desórdenes que aparecen durante el embarazo. La preeclampsia es un desorden hipertensivo específico del em-
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barazo que se caracteriza por la aparición de hipertensión, proteinuria, vasoconstricción renal, aumento de resistencias vasculares periféricas, disfunción endotelial y otros muchos síntomas que son dependientes del grado en el que se manifieste la enfermedad. Los resultados obtenidos por nuestro grupo sugieren que alteraciones en la síntesis y/o actividad de las dos isoformas de la COX podrían estar contribuyendo a la vasoconstricción renal y a los aumentos de presión arterial característicos de la preeclampsia. Bibliografía 1. Conrad KP, Lindheimer MD. Renal and cardiovascular alterations. In: Chesley’s hypertensive disorders in pregnancy. En: Lindheimer MD, Roberts JM, Cunningham FG, editors. 2nd ed. Stamford, Connecticut, USA: Appleton & Lange; 1999. p. 263-326. 2. Conrad KP. Renal hemodynamics during pregnancy in chronically catheterized conscious rats. Kidney Int. 1984; 26:24-9. 3. Danielson LA, Conrad KP. Prostaglandins maintain renal vasodilation and hyperfiltration during chronic nitric oxide synthase blockade in conscious pregnant rats. Circulation Research. 1996;79:1161-6. 4. Alexander BT, Miller MT, Kassab S, Novak J, Reckelhoff JF, Kruckeberg WC, Granger JP. Differential expression of renal nitric oxide synthase isoforms during pregnancy in rats. Hypertension. 1999;33(2):435-9. 5. Venuto RC, Donker, AJM. Prostaglandin E2, plasma rennin activity, and renal function throughout rabbit pregnancy. J. Lab Clin Med. 1982;99:239-46. 6. Conrad KP, Colpoys MC. Evidence against the hypothesis that prostaglandins are the vasopressor agents of pregnancy. Serial studies in chronically instrumented, conscious rats. J Clin Invest. 1986;77:236-45. 7. Baylis C. Cyclooxygenase products do not contribute to the gestational renal vasodilation in the nitric oxide synthase inhibited pregnant rat. Hypertension in Pregnancy. 2002; 21(2):109-114. 8. Goodman RP, Killam AP, Brash AR, Branch RA. Prostacyclin during pregnancy: comparison of production during normal pregnancy and pregnancy complicated by hypertension. Am J Obstet Gynecol. 1982;142:817-22. 9. Rupnow HL, Phernetton TM, Modrick ML, Wiltbank MC, Bird IM, Magness R. Endothelial vasodilator production by uterine and systemic arteries. VIII. Estrogen and progesterone effects on cPLA2, COX-1, and PGIS protein expression. Biology of Reproduction. 2002;66:468-74.
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