Intérêt de la détermination des antigènes Gma, Gmb, Gmx pour identifier les taches de sang

Intérêt de la détermination des antigènes Gma, Gmb, Gmx pour identifier les taches de sang

Transfusion. T. VI. N ° 1. - - 1963 63 Intgr~t de la d~termination des antig~nes Gma, Gmb, Gmx pour identifier les taches de sang par J. DUCOS**, J...

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Transfusion. T. VI. N ° 1. - - 1963

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Intgr~t de la d~termination des antig~nes Gma, Gmb, Gmx pour identifier les taches de sang par

J. DUCOS**, J. R U F F I E * , M. VARSI**

Des exp6rimentations a~t6rieures nous ont permis de m o n t r e r que les antig~nes Gma, Grab, Gmx, peuvent ~tre ais6ment d6cel6s dans les taches de sang see. I1 est int6ressant de comparer les avantages apport6s par la eonnaissance de ces antig6nes h ceux que l'on peut retirer de la d6termination des autres antig6nes de groupes sanguines (A, B, MN, P, CDEc, Kell, Le a, et enfin Fy~). Cette comparaison peut s'effectuer sous trois angle : - - la faeilit6 technique de mise en 6vidence, la quantit6 de sang n6cessaire, i la valeur d'identification. -

-

Facilit6 t e c h n i q u e de mlse en ~vidence. Nous utilisons deux techniques qui sent fonctions de la nature des r6aetifs ufilis~s : 1. - - TECHNIQUE D'ABSORPTION AVEC DES S]~RUMS A N T I - G m SNAGG.

Un pr61~vement de la tache est m61ang6 ~t u n s6rum anti-Gm Snagg titrant 1/16. Au bout de 5 ~ 15 heures on titre l'anticorps anti-Gin clans le liquide surnageant et on compare ee titre a u taux initial. Ce(*) Centre de Transfusion Sanguine. H6pital Purpan, Toulouse. (**) Stagiaire de Becherche ~ l'Institut National d'Hygi~ne.

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lui-ci demeure inchang6 si la taehe ne renferrne pas l'antig~ne Gm correspondant. I1 est fortement abaiss6 (4 h 5 tubes de dilution) dans le cas contraire. 2. - - TECHNIQUE D'INHIBITION AVEC DES SI~RUMS ANTI-GIn RAGG.

Dans un permier temps on prepare tree maceration de la tache en s6rum physiologique. Dans un deuxi6me temps on recherche les antig6nes Gm dans eette macSration par les techniques habituellement employ6es pour la d6termination des groupes Gm dans le s6rum. I1 n'y a done pas de diffieult6s techniques sp6ciales surtout lorsqu'on utilise les s~rums anti-Gin Snagg pour grouper des taches r~centes. Le tableau I rGsume l'ensemble de nos rGsultats. Lorsque les taches sont plus anciennes on est conduit h utiliser des quantitGs de taches plus importantes et on peut avoir h c e moment1~ une absorption non spGcifique (mais elle est toujours discrete). Nous avons pu sans difficult6 grouper du point de r u e Gm des taches SgSes de 1 ~ 10 ans. D'apr~s notre expGrience, il est donc plus facile de rechereher dans les taches les antig~nes Gm que les antig~nes des sy~ t~mes MN, P, RhGsus, KeU, Duffy. Quant h la recherche des antig~nes ABO, elle n'est pas plus difficile que celle des antig~nes Gm sur les taches rGcentes, mais le devient sur les taches SgGes. 3. - - QUANTITI~DE SANGNECESSAIRE. I1 faut de 2 ~ 15 mg de tache pour ]a dGtermination de chacune des antigbnes du syst~meABO. I1 faut de 5 ~ 20 mg pour ]a dGtermination des antig~nes MN et de 5 ~ 35 mg pour la raise en 6vidence de chaeun des antig~nes Rh, Ken ou Duffy. Par eontre, il suffit de 1 ~ 5 mg pour la recherche des antig~nes Gm ~ l'aide d'anti-Gm Snagg et de 2 h 7 mg si l'on utilise des anti-Gin Ragg. Seule la recherche de l'origine humaine d'une tache de sang par la technique d'inhibition de rantiglobuline nGcessite moins de quantit~ de taches. Les chiffres que nous citons proviennent de rensemble de notre expSrimentation sur les taches se sang 6talGe sur plus de 10 ans et comportent l'examen de plusieurs milliers de taches. 4. - - LA VALEURD'IDENTIFICATION. Celle-ci est due, comme pour t o u s l e s syst~mes de groupes ~ la fr~quence des antig~nes correspondants dans la population eonsidGrGe et au hombre d'antig~nes dGterminG. Cependant il est des cas oit la

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d6tection des a n t i g 6 n ~ Gm dans une tache devient plus int6ressante que celle des groupes A B e ou RhSsus Standard, par exemple lorsque deux suspects appartiennent au m6me groupe A B e et R h (ce qui est assez fr6quent) ou lorsque agresseur et victime sent de m~me groupe 6rythrocytaire mais de groupe s6rique diff6rent. E n outre, lorsque les taches sent anciennes, il est p r u d e n t de ne tenir eompte p o u r la dStermination des antig~nes des divers syst6mes, que des absorptions observ6es. L'absenee d'absorption pouvant tr~s bien ~tre due non seulement ?~ rabsence d'antig6nes mais aussi h la d6naturation de ceux-ei pendant le vieillissement eomme nous l'avons d6montr6 au cours d'exp6rimentations antSrieures. Cet inconv6nient semble ne pas exister lorsqu'on 6tudie les antig~nes Gm, tout au moins en ce qui concerne les taches faites depuis moins de 10 ans et conserv6es h r a b r i des intemp~ries.

anti-Gma

anti-Gma Ragg

Snagg

tHOrpe.

anti-Grab Ragg

anti-Gmx Snagg

NOMBRE TYPE DE LA I)E T A C H E S TACHE

0 Gma ~-.. Gma ~ . . Grab ÷ . .

Grab ~ . . Gmx + . .

176 1fi4 118 48 52 137

{] 99

a.p. 0 0

a.t.

0

114 '} 0 101;

a.p.

a.t.

14 0

97 0

O

a.p. I a.t. I

a.p.a.t.

I 0 ]I 18 48 t 0

100 0

0

137

0 0

! 52 0

I

Conclusion La dStermination des antig~nes Gm dans les taches de sang see peut done se faire tr~s facilement grace ~ des techniques simples ~ condition d'utiliser des s~rums anti-Gin s$1ectionn6s au m o y e n d'une technique parfaitement codifi6e. La quantit6 de sang n$cessaire p o u r eette dStermination est tr~s nettement inf6rieure fi eelle qui serait indispensable p o u r la recherche des autres antig~nes de groupes sanguins. La fid61it6 des r~sultats observSs et la facilit6 de leur interprStation font que la recherche des antig~nes Gma, Grab, Gmx, a une grande valeur d'identifieation des taches de sang see et tout sp6eialement lorsque

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ces t a c h e s s o n t p e u i m p o r t a n t e s et a n c i e n n e s . N o u s p e n s o n s d o n c q u e l e g r o u p e G m des t a c h e s d e s a n g see d o i t t o u j o u r s ~ t r e effectu6 l o t s des e x p e r t i s e s m 6 d i c o - l @ a l e s e n p a r a U ~ l e avec l e g r o u p a g e A B O , M N o u R h 6 s u s ; d a n s d e n o m b r e u x cas o 5 l ' o n n e p o u r r a e f f e c t u e r s i m u l t a n 6 m e n t l a r e c h e r c h e d e ces d i v e r s a n t i g ~ n e s o n a u r a t o u t i n t 6 r ~ t d 6 t e r m i n e r d e p r 6 f 6 r e n c e c e u x d u systbane Gin. Des d6tails compl6mentaires seront publi6s dans u n travail h paraltre dans Vox SanguiniS et intitul6

<>(J. Dvcos, J. RUFFt~, M. VARSL)

M. MOULLEC.- Je v o u d r a i s clore ce colloque en vous p r o p o s a n t quelques c o n c l u s i o n s . Elles se r a p p o r t e n t h des p r o b l ~ m e s p r a t i q u e s . I1 est tr~s s o u h a i t a b l e , p a r e x e m p l e , de n o r m a l i s e r les techniques. Je p e n s e que nous s o m m e s tous d ' a c c o r d s u r les p o i n t s suivants. En p r e m i e r lieu, en vue de la d 6 t e r m i n a t i o n des g r o u p e s Gm et Inv, e m p l o y e r un c o m p l e x e d o n t la s61ectivit6 est b i e n ~tablie vis-a-vis du f a c t e u r 6tudi6. Ensuite, d ' ~ p r o u v e r le p o u v o i r i n h i b i t e u r des s6rums exam i n 6 s s u r p l u s i e u r s dilutions. Ce n ' e s t gu~re qu'au c o u r s de r e c h e r c h e s a n t h r o p o l o g i q u e s , et h c o n d i t i o n de se s e r v i r de Snagg c o m m e anti-Gm, que l ' o n peut h la r i g u e u r ne p a s a p p l i q u e r cette r~gle. Avec les Ragg, s6rums de PCE, l'~tude du p o u v o i r i n h i b i t e u r de p l u s i e u r s d i l u t i o n s est indispensable. Un a u t r e p o i n t de t e c h n i q u e p o u r r a i t a v o i r une tr~s g r a n d e i m p o r tance. L o r s q u e les ~ c h a n t i l l o n s ont 6t6 conserv6s darts de m a u v a i s e s c o n d i t i o n s , en p a r t i c u l i e r l o r s q u ' i l s sont rest6s p l u s i e u r s jours h la temp 6 r a t u r e o r d i n a i r e , ils se t r o u v e n t dans les c o n d i t i o n s 6tudi6es exp6r i m e n t a l e m e n t p a r M a d a m e P o d l i a c h 0 u k . On p o u r r a i t c r a i n d r e alors que, p a r e x e m p l e , c e r t a i n s s6rums Gm ( a + ) ne d e v i e n n e n t tr~s faiblem e n t i n h i b i t e u r s et ne s o i e n t c o n f o n d u s avec des Gm ( a - - ) . P u i s q u e M a d a m e P o d l i a c h o u k a 6tudi6 tout p a r t i c u l i ~ r e m e n t cette question, estime-t-elle q u ' i l soit utile de contr61er les r6sultats obtenus s u r des 6 c h a n t i l l o n s c o n s e r v e s dans de m a u v a i s e s c o n d i t i o n s en les c h a u f f a n t h 63 ° p e n d a n t 10 m i n u t e s ? Mme PODLIACHOUK. - prendre.

C'est en effet une p r 6 c a u t i o n i m p o r t a n t e

M. MOULLEC. P a r ailleurs, nous avons discut6 le p r o b l ~ m e des s6rums Gm ( a - - b - - ) . I1 est i n d i s p e n s a b l e de s ' a s s u r e r de la r~alit6 du p h 6 n o t y p e Gm ( a - - b - - ) , q u a n d on c r o i t en a v o i r r e n c o n t r 6 un, en le -

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contrSlant avec p l u s i e u r s anti-s~rums. D ' u n e fa~on gdn~rale, tout ph~notype rare, d~couvert dans u n laboratoire, devrait ~tre confirm~ d a n s u n , et si possible deux autres laboratoires, u t i l i s a n t des r~actifs anti-Gm et des complexes agglutinabtes diff~rents. La famille de ces sujets devrait, bien e n t e n d u , ~tre ~tudi~e avec la m~me attention. M. Ropartz n o u s a montr~ tout h l ' h e u r e que les s~rums anti-Gm ou a n t i - I n v a p p a r e m m e n t de m~me sp~cificit~ p e u v e n t ne pas d o n n e r exactement le m~me pourcentage de r~actions positives. I1 est d o n c n~cessaire, q u ' u n anti-s~rum et son complexe agglutinable soient confrontds, avant d'etre utilis~s, avec u n e s~rie de plus d ' u n e c e n t a i n e de s~rums n o r m a u x de r~f~rence. M. ROPARTZ. - - Tout h l'heure, je vous ai m o n t r 6 c o m m e n t n o u s sommes arriv6s h d 6 t e r m i n e r le facteur Gm (e) chez les blancs, oh les discordances e n t r e les deux p h 6 n o t y p e s Gm (b) et Gm (e) ont u n e fr6quence a p p r o x i m a t i v e de 4,6 %. P o u r a r r i v e r h d6tecter deux facteurs dont la diff6rence de fr6quence est de l ' o r d r e de 1 h 2 % , il faut u n p a n e l ~ d ' e n v i r o n 250 s6rums : s i n o n r o n risque h peu pros certainement de passer h c5t6 de cette diff6rence. M. MOULLEC. - - Autre question : les 6tudes de filiation. I1 est encore pr6matur6 de se s e r v i r des groupes de globulines 7 a u t r e m e n t q u ' e n p r e n a n t les facteurs isol6ment, et en s ' i n s p i r a n t de la r~gle simple : u n facteur Gm ou I n v ne peut 6tre pr6sent chez u n e n f a n t que s'il existe chez l ' u n au m o i n s de ses parents. De plus, les groupes de t o u s l e s int~ress6s d o i v e n t 6tre d 6 t e r m i n 6 s en u t i l i s a n t les m6mes r6actifs anti-Gm ou I n v et les m6mes complexes agglutinables. Les r~gles r6sultant de l'all61isme ne p e u v e n t encore 6tre appliqu~es car on c o n n a i t real la fr6quence et le c o m p o r t e m e n t des allbles autres que les t r o i s c o m m u n 6 ment rencontr6s. E n ce qui c o n c e r n e les Snagg n o n i n h i b a b l e s , dont nous avons parl6 tout h l'heure, ils p a r a i s s e n t r 6 p o n d r e h la d6finition donn6e p a r Milgrom q u a n d il a d6crit les p r e m i e r s s~rums n o r m a u x a g g l u t i n a n t des globules sensibilisds p a r u n anti-Rh incomplet. Milgrom avait propos6 de m61anger ces s6rums h des anti-D i n c o m p l e t s p o u r r e n d r e ceux-ci agglutinants en eau physiologique. Comme ce type de Snagg est assez peu fr6quent, il semble n6cessaire de mettre en garde les s6rologistes : il serait i m p r u d e n t d ' u t i l i s e r h cet effet des Snagg dont on aurait insnffis a m m e n t 6tudi6 les propri6t6s. Enfin, il n ' e s t pas i n u t i l e de pr6ciser n o t r e position c o m m u n e h propos de la n o m e n c l a t u r e . C o n f o r m 6 m e n t au v,ceu 6mis en 1961 p a r la ma]orit6 des c h e r c h e u r s t r a v a i l l a n t alors sur les groupes de globulines 7, la n o m e n c l a t u r e en G m e t I n v e s t conserv6e.