L003 Contrôle de l’angiogenèse embryonnaire et pathologique par arn interférence : invalidation de dicer dans les cellules musculaires lisses

S118

Abstracts

L002 ÉTUDE DES MODIFICATIONS POSTTRADUCTIONNELLES DES PROTÉINES CONTRACTILES LORS DU REMODELAGE VENTRICULAIRE GAUCHE POST-INFARCTUS

L003 CONTRÔLE DE L’ANGIOGENÈSE EMBRYONNAIRE ET PATHOLOGIQUE PAR ARN INTERFÉRENCE : INVALIDATION DE DICER DANS LES CELLULES MUSCULAIRES LISSES

E. DUBOIS 1, C. CIENIEWSKI-BERNARD 1, P. MULDER 2, H. DROBECQ 3, C. FLAHAUT 4, C. THUILLEZ 2, P. AMOUYEL 1, V. RICHARD 2, F. PINET 1 1 Inserm U744, Institut Pasteur de Lille, Université Lille 2, IFR 141, Lille, France 2 Inserm U644, Institut de Recherche Biomédicale, IFRMP 23, Université de Rouen, Rouen, France 3 CNRS, UMR8161, Lille, France 4 E.A. 2465, IMPRT-IFR114, Université Artois, Lens, France

N. SABAA-METTOUDI 1, S. GAUVRIT 1, J. PHILIPPE 1, M. LESAGE 1, A. PATEL 2, S. GERMAIN 1 1 Inserm U833, Collège de France, Paris, France 2 CNRS UMR 6097, IPMC, Nice, France

Le remodelage ventriculaire est un processus complexe qui intervient après un infarctus du myocarde chez 30 % des patients en dépit des meilleurs traitements connus actuellement. An d’en identier les déterminants moléculaires et d’en comprendre les mécanismes, nous avons étudié les modications post-traductionnelles des protéines du ventricule gauche et en particulier, la phosphorylation et la O-N-acétylglucosaminylation (O-GlcNAc).

L’objectif de ce travail est d’étudier le rôle de l’ARN interférence dans la régulation de l’angiogenèse développementale et pathologique par invalidation de DICER in vivo spéciquement dans les cellules musculaires lisses (CML). Nous disposons de souris dont le gène dicer est oxé (allèle dicer conditionnel) ¹, permettant d’invalider spéciquement Dicer dans les cellules exprimant une recombinase Cre sous le contrôle de promoteurs spéciques des cellules musculaires lisses (α-SMA ; SM-MHC ; sm22), Ces souris ont aussi été croisées avec des souris R26R permettant d’analyser les cellules recombinées ².

Nous avons d’abord réalisé une étude globale du phosphoprotéome du ventricule gauche en phase tardive du remodelage (2 mois postligature coronaire gauche chez le rat). Nous avons ainsi identié 7 protéines uniquement phosphorylées dans le ventricule gauche des animaux insufsants cardiaques, 10 protéines présentant une augmentation de phosphorylation, 9 protéines présentant une diminution de phosphorylation et 3 protéines uniquement phosphorylées dans le ventricule gauche des animaux témoins. Nous avons ensuite étudié la phosphorylation de trois protéines contractiles en relation avec le remodelage ventriculaire : l’alpha-tropomyosine et les chaînes légères de myosine 2 et 3. De manière intéressante, nous avons observé que le ventricule gauche des animaux insufsants cardiaques présentait une diminution signicative de la phosphorylation uniquement sur les résidus sérine pour l’alpha-tropomyosine et la chaîne légère de myosine 2 ainsi qu’une augmentation signicative de la phosphorylation uniquement sur les résidus tyrosine pour la chaîne légère de myosine 3, montrant ainsi pour la première fois une phosphorylation sur les tyrosines de celle-ci. An de compléter l’analyse des modications posttraductionnelles, nous avons étudié les modications de O-GlcNAc pour ces trois protéines. Nous avons observé une diminution signicative de l’alpha-tropomyosine O-GlcNAc dans le ventricule gauche des animaux insufsants cardiaques montrant ainsi pour la première fois que l’apha-tropomyosine est une protéine O-GlcNAc. Nous avons également observé une augmentation signicative des chaînes légères de myosine 2 et 3 O-GlcNAc, mettant ainsi en évidence une balance entre la forme phosphorylée et O-GlcNAc de la chaîne légère de myosine 2, qui pourrait jouer un rôle important dans les altérations contractiles de cardiomyocytes associées au remodelage. Ces résultats nous permettent de mieux appréhender les mécanismes physiopathologiques impliqués dans le remodelage ventriculaire et en particulier le défaut de contraction cardiaque induit par celui-ci.

De nombreux facteurs épigénétiques, dont l’ARN interférence module l’expression génique au cours des pathologies cardiovasculaires. Bien que les micro-ARNs (miARN) soient exprimés dans le système cardiovasculaire, leur rôle est jusqu’alors peu connu.

Nos premiers résultats montrent que les embryons dont le gène dicer sous le contrôle du promoteur sm22 présentent des anomalies de développement embryonnaire à E16,5 (gure 1). Les embryons mutants souffrent d’hémorragies importantes entraînant la mort. La mort embryonnaire ne correspond à priori pas à des défauts de vasculogenèse importants, mais est plutôt caractéristique de défauts de remodelage angiogénique tels qu’une perméabilité endothéliale exacerbée ou une mauvaise différenciation des péricytes, induisant des vaisseaux immatures et perméables. Nous analysons donc les défauts vasculaires responsables de la mort embryonnaire en étudiant la morphologie des vaisseaux sanguins des souris mutantes, au cours du développement, par marquage spécique des veines, des artères, des CML ou des péricytes et des vaisseaux lymphatiques par marquages immunohistochimiques CD31, α-SMA, NG2, et VEGF-R3.

Figure 1 : Embryons Wt (gauche) et DICER KO dans les cellules musculaires lisses (droite) à E 16,5.

1. Harfe BD, McManus MT, Manseld JH, Hornstein E, Tabin CJ: The RNaseIII enzyme Dicer is required for morphogenesis but not patterning of the vertebrate limb, Proc Natl Acad Sci U S A 2005, 102:10898-10903 2. Soriano P: Generalized lacZ expression with the ROSA26 Cre reporter strain, Nat Genet 1999, 21:70-71