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La réaction d'hémagglutination passive pour le sérodiagnostic de la syphilis (T.P.H.A.). Microméthode sur plaque
M6decine et Maladies Infectieuses.
1974
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t59-t62
La r action d'h mogglutination passive pour le s( rodiagnostic de la syphilis (T. P. H.A.). licrom thode sur plaque Technique ulihs e a l'instilut Alfred Fournier* par A. VAISMAN**, A. PARIS-HAMELIN ** et S. FUSTEC-IBARBOURE**
En 1970 (1), uous avons d~.jh d~crit cette nou,velle r~action pour le s~rodiagnostic de la s y p h i l i s et rapportd les p r e m i e r s rdsultats obtenus s'ur des s~rums h u m a l n s et e x p ~ r i m e n t a u x . il s'agit d'une r~action d'h~maggIutination passive ou conditionn~e (T.P.H.A.) oh l'antig~ne est constitu~ par un IgophiIisat de T r e p o n e m a p a l l i d u m (souche pathog~ne N i c h o l s ) [ix~ s a t des h~maties de m o u t o n [ormoldes et tann~es.
Lorsque cet antig6ne est mis en pr6sence d ' u n s6rum c o n t e n a n t l ' a n t i c o r p s t r 6 p o n 6 m i q u e homologue, il y a f o r m a t i o n d ' u n i m m u n complexe qui e n t r a i n e l ' a g g l u t i n a t i o n des h6maties. Si le s6rum ne c o n t i e n t pas l ' a n t i c o r p s homologue, il n ' y a pas d ' i m m u n complexe form6 et les h6maties s6dimentent n o r m a l e m e n t en a n n e a u x . Notre p r e m i e r travail avait 6t6 fait avec des r6actifs j a p 0 n a i s fabriqu6s p a r la Fuji Zoki P h a r m a c e u tical C o m p a n y et en u t i l i s a n t trbs e x a c t e m e n t la m6thode p r 6 c o n i s 6 e p a r cette firme. II s'agissait d ' u n e m a c r o - h 6 m a g g l u t i n a t i o n sur plaque O.M.S. avec t r a i t e m c n t et d i l u t i o n pr6alables des s6rums en tube p a r u n a b s o r b a n t c o n t e n a n t des h6maties de m o u t o n formol6es et tann6es, u n extrait de tr6pon6me Reiter, du s6rum de l a p i n n o r m a l et de la p o u d r e de testicules de l a p i n normal. Apr6s 30 minutes de contact, le tube 6tait centrifug6 et le s6rum de m a l a d e se trouvait, de ce fait, dilu6 au 1/20 ~ d6barrass6 d e ses agglutinines n a t u r e l l e s antim o u t o n et de ses 6ventuels a n t i c o r p s t r 6 p o n 6 m i q u e s de groupe (neutralis6s p a r l'extrait de tr6pon6me Reiter). Apr6s u n e 'nouvel[e d i l u t i o n en tube et au 1/4 de ce s6rum absorb6 (ce qui d o u n e u n e d i l u t i o n tinale au 1/80), on distribue, sur n n e plaque O.M.S., 0,5 ml de s6rum dilu6 dans deux alv6oles et on ajoute 0,05 ml d ' a n t i g 6 n e (r6action : h6maties sensibilis6es) dans u n e alv6ole et 0,05 ml de s u s p e n s i o n
* Manuscrit requ le 5 janvier 1974. ** lnstitut Alfred-Fournier, 25, bd St-Jacques, 75014 Paris. Centre International de R6f6rence de I'O.M.S. pour les Tr6pon6matoses end6miqnes.
d'h6maties n o n sensibilis6es dans l'autre (t6moin s6rum). La lecture se fait apr6s 6 heures de s6dim e n t a t i o n ~ t e m p 6 r a t u r e o r d i n a i r e , le t6moin-s6rum devant toujours pr6senter u n e image de s6dimentation parfaite et la r6aetion p o u v a n t 6tre semblable au t6moin (image n6gative) ou p o u v a n t pr6senter u n aspect h6magglntin6 (image positive avec des aspects i n t e r m 6 d i a i r e s , not6s 1 + , 2 + , 3 + ou 4 + selon la largeur de l ' a n n e a u de s6dimentation). La t e c h n i q u e 6tait donc assez longue et d e m a n dait p l u s i e u r s m a n i p u l a t i o n s en r a i s o n de l'absorption pr6alable des s6rums. C'est p o u r q u o i la firme j a p o n a i s e proposa, p o u r cette r6action, il y a deux ans, u n nouvel a b s o r b a n t ne c o n t e n a n t plus d'h6ma-. ties enti6res formol6es, mais seulement u n ultrasonat d'h6maties de m o u t o n et de bceuf, les autres c o n s t i t u a n t s r e s t a n t identiques. L ' e m p l o i de ce nouvel a b s o r b a n t p e r m e t de diluer les s6rums d i r e c t e m e n t et d'ex6cuter la r6action sans c e n t r i f u g a t i o n pr6alable, d'ofl u n e m a n i p u l a tion de m o i n s et u n gain d e temps appr6ciable. A la m i c r o - m 6 t h o d e d6crite p a r les auteurs japonais, nous avons pr6f6r6 une v a r i a n t e m i e u x adapt6e aux examens en s6rie qui seuls p e u v e n t p e r m e t t r e une utilisation r a t i o n n e l l e de cette r6action, sans qu'elle soit exag6r6ment on6reuse. Cette technique, que nous u t i l i s o n s dans nos laboratoires, nous d o n n e de bons r6sultats, r e p r o d u c t i b l e s , de sensibilit6 et spdcificit6 aussi b o n n e s que les m6thodes originales. L ' e n s e m b l e de nos r6sultats, qui p o r t e n t sur plus de 6.000 s6rums, fera l'objet d ' u n r a p p o r t ult6rieur, le but de cette note 6tant s e u l e m e n t de d6crire la technique que nous u t i l i s o n s actuellement. 159
A
(chlorhydrate de cyproheptadine, MSD)
Le premier mddicament quiaprouv6 qu'en stimulant l'appdtit, il entra nait une augmentation de poids.
P
riactine existe en c o m p r i m d s et en sirop. * marque deposee
C l a s s e Pharmacologique : Siimulant de I'appetit anti-allergique. Indications :
Chez les sujets en insuffisance ponderale pour lesqueis stimulation de I'app6tit et prise de poids sent seuhaitables. Anorexie accompagnee de retard ponderal et d'hypotrophie, pouvant avoir perticulierement pour origine une carence alimentaire, des troubles caracteriels et des allergies. Maigreur due ~. I'anorexie. iAffectiens allergiques et prurigineuses. Posologie :Elle est fonction des indications cliniques at de la r6ponse du malade. Aucun schema posolagique n'a 616 ' 61abli et ne peut donu etre conseillee chez I'enfant de moins de 2 ans. C o n t r e Indications : Glaucome et predisposition b~la retention d'urine. Ne pas associer avec les I.M.A.O. Sensibilisation au chlorhydrate de cyproheptadine. Viei/lards d~bilites; ulcere peptique st6nosant et obstruction pyloro-duod~nale. Phases eigu6s de la maladie asthmatique. P r d c a u t i o n s d'emploi e t T o l 6 r a n c e : A maintenir hors de la perteq des enfants du fait du danger que ferait coufir un surdosage. L'administration du produit ~ des femmes enceintes ou susceptibles de la devenir et ~ des meres qui allaitent, suppose que I'on ait au prealabTe; mis en balance les resultats therapeutiques escomptes et les risques eventuels pour
MSD
la mere et I'enfant. Du fait des risques d'affaiblissement de la vigilance, il faudra recommander la prudence aux conducteurs d'automobiles, aux utilisateurs de machines e't en cas d'exercice d'autres act[vites qu'une baisse de la vigilance rendrait dangereuses. Mettre en garde les patients contre I'ingestion d'alcool ou d'autres depresseurs du syst~me nerveux central. Devant une perte d'appetit severe il faudra avant tout eliminer touts affection serieuse sous-jacente. Possibilite de somnolence frequente en debut de traitement mais pouvant disparaftre a u bout de 3 ou 4 jours. Rarement secheresse de la bouche et des muqueuses, etourdissements, cephalees, naus6es, manifestations allergiques cutanees, stimulation du systeme nerveux central. Formule chimique : chlorhydrate de (dibenzo [a.d] cycloheptatdenylidene-5) 4 methyl-/-pip6ridine. Pr6sentation : Comprimes : bofte de 30 comprim~s s6cables doses & 4 mg de chlorhydrate de cyproheptadine, MSD. Prix : 11,50 F. Remboursement S.S. Admis aux collectivit~s et h6pitaux psychiatriques. Visa : NL 5195. Sirop : flacon de 125 mk Une cuillere-mesure : 2 mg de chlorhydrate de cyproheptadine, MSD. Prix : 6,75 F. - Remboursement S.S. Admis aux collectivites. Visa NL 1307. Informations d/~taill6es sur d e m a n d e .
Laboratoires Merck Sharp & Dohme. 146 Bd de Grenelle. 75015 Paris. t61. 566.75.57 MERCK Nouvelle adresse ~. partir du 1er mai 1974 9 3 av. Hoche. 75008 Paris. SHARP~ DOHME
~" L5 co co r.-o_
PREPARATION DU MATERIEL ET DES REACTIFS
r a p i d e m e n t avec u n e b o n n e pipette MLA de 10 microlitres, avec des embouts p l a s t i q u e s ~ usage unique. Dans ce p r e m i e r temps, on ne fait pas de t~moin p o u r chaque s~rum.
Le coffret de r~actifs j a p o n a i s * c o n t i e n t : le d i l u a n t a b s o r b a n t liquide, 2 flacons de 28 ml,
l'~mtig~ne h6maties de m o u t o n formol6es et tann6es, sensibilisSes par u n u l t r a s o u a t de Treponema palIidum, sous forme lyophilis~e. R e p r e n d r e le flacon p a r 2,5 ml d'eau distill6e, st6rile. Cet antigone reconstitu6 sera redilu~ avec de l ' a b s o r b a n t h raison de 1 ml d ' a n t i g~ne et de 7,5 ml de diluant. La quantit6 d ' a n t i g ~ n e utiliser p o u r chaque s~rum sera alors de 0,070 ml. h6maties n o n sensibilis6es (t6moin) r e p r e n d r e le flacon lyophilis6 p a r 1,5 m l d'eau distill~e, sterile. La s u s p e n s i o n de travail sera pr~par~e en r e d i l u a n t ~ r a i s o n de 1 ml de s u s p e n s i o n - m ~ r e et 7,5 ml d ' a b s o r b a n t . La quantit6 de suspensiont~moiu ~ u t i l i s e r p o u r chaque s~rum sera de m~me de 0,070 ml. u n s~rum p o s i t i f t ~ m o i n lyophilis~ ~ r e p r e n d r e p a r sterile.
1 ml d ' e a u distill~e,
P o u r n o t r e t e c h n i q u e modifi6e, il faut, en plus, du tampon P.B.S. de pH 7,2. Le m a t e r i e l n~cessaire h l'ex~cution de la r~action consiste en : un d i l u t e u r a u t o m a t i q u e capable de r~aliser u n e d i l u t i o n au 1/10 ~ du s~rum h e x a m i n e r en t a m p o n P.B.S.
des p i p e t t e s p e r m e t t a n t de d i s t r i b u e r 0,010 m l de s~rum dilu~ (pipette MLA de 10 m i c r o l i t r e s avec embout plastique h usage u n i q u e ) et u n d i s t r i b u t e u r de 0,070 ml. des m i c r o - p l a q u e s en U, en plastique, h usage unique, type M24A.
Cooke
TECHNIQUE - - Les s~rums h e x a m i n e r sont dilu~s au 1/10 e en t a m p o n P.B.S. ; il n'est pas n~cessaire de les i n a c river et la r~action peut m~me dtre faite sur plasma. Ces d i l u t i o n s se font en tube plastique, avec u n diluteur automatique. Sur u n e m i c r o - p l a q u e en U, d~poser 0,010 ml de chaque s~rum darts u n e alv~ole. Ceci est fait tr~s
* Ces r~acfifs sont disponibles chez Micro-Bio Laboratories Ltd, 46 Pembridge road, London W l l 3 HN, Grande-Bretagne.
-- Ajouter ensuite, avec u n e pipette de distribution automatique, 0,070 ml de s u s p e n s i o n d ' a n t i g ~ n e reconstitu~, comme nous l ' a v o n s i n diqu~ dans la p r e p a r a t i o n des r~actifs. Le s~rum se trouve d o n c dilu~ au 1/80 ~ p a r r a p p o r t au s~rum p u r et dans l'antig~ne lui-m~me, qui c o n t i e n t l ' a b s o r b a n t . - - Agiter la plaque p e n d a n t c i n q m i n u t e s sur u n v i b r a t e u r type Cooke, puts laisser s ~ d i m e n t e r h temp e r a t u r e o r d i n a i r e p e n d a n t 3 heures e n v i r o n . La lecture est faite tr~s f a c i l e m e n t h l'ceil nu. T o u s l e s s~rums positifs on d o n t e u x sont repris une seconde fois et refaits, h titre de contr61e, avec la m~me d i l u t i o n au 1/10 ~ mats dans deux alv~oles, p o u r avoir en m~me temps le t~moin s~rum obtenu en ajoutant 0,070 ml d ' h ~ m a t i e s n o n sensibilis~es. La r~action peut se faire ~galement quantitativemerit, en faisant des dilutions successives d u s~rum en t a m p o n P.B.S. ~ p a r t i r d u 1/10 ~, en progression g~om~trique de r a i s o n deux. Ces d i l u t i o n s p e u v e n t ~tre faites m a n u e l l e m e n t ou a u t o m a t i q u e m e n t si l'on dispose d ' u n d i l u t e u r a u t o m a t i q u e et la r~action se fait d a n s les m~mes c o n d i t i o n s sur chaque d i l u t i o n du s~rum. Un t~moin-s~rum est fait sur la p r e m i b r e dilution. Le titre d u s~rum est d onn~. en p r e n a n t l ' i n v e r s e de la plus g r a n d e d i l u t i o n p r ~ s e n t a n t une agglutination encore tr~s nette.
INTERPRETATION I1 s'agit d ' u n e r~action r e n t r a n t d a n s le c a d r e de la s~rologie dite << sp~cifique >>, p u i s q u e l'antig~ne est u n extrait de Treponema pallidum. Sa sensibilitd est tr~s g r a n d e , de p a r le p r i n c i p e m~me de la r~action. Sa sp~cificit~ est ~galement tr~s satisfaisante. Compar5 aux autres tests sp6cifiques tels que F.T.A. et T.P.I., on sait, et de tr6s n o m b r e u x t r a v a u x Font m o n t r 6 (2) (3) (4) (5), que I t T.P.H.A. est peu pros aussi pr6coce, darts les s y p h i l i s p r i m a i r e s , que le F.T.A. I1 ne semble pas influenc6 p a r les r6agines (anticorps a n t i l i p i d i q u e s n o n sp6cifiques) ni p a r les a n t i c o r p s t r 6 p o n 6 m i q u e s de groupe p u i s q u e ceux-ci sont neutralis6s p a r l ' a b s o r b a n t . II reste positif tr6s longtemps, mats suit davantage la courbe d'6volution des a n t i c o r p s du F.T.A. que celle du T.P.I. 161
RESUME
R 6 a c t i o n r a p i d e , r e l a t i v e m e n t s i m p l e m a i s m i n u t i e u s e , se c l a s s a n t d a n s le g r o u p e d e s t e s t s s p 6 c i f i q u e s , le T.P.H.A. est a p p e l 6 /t p r e n d r e u n e p l a c e i m p o r t a n t e d a n s le s 6 r o d i a g n o s t i c d c la s y p h i l i s , s ' a j o u t a n t a u x T.P.I. et F.T.A. C e p e n d a n t c e t t e r 6 a c t i o n n e p c u t r e m p l a c e r le t e s t d ' i m m o b i l i s a t i o n d e s t r 6 p o n b m e s d e N e l s o n et M a y e r , q u i r e s t e le t e s t d e r 6 f 6 r e n c e p o u r t o u s c e u x q u i l ' u t i l i s e n t d e p u i s p l u s d e 20 a n s . Mots-clef
:
S ~ r o l o g i e d e la s y p h i l i s - R 6 a c t i o n d ' h ~ m a g g l u t i n a t i o n f l u o r e s c e n c e (F.T.A.) - T e s t d e N e l s o n (T.P.I.).
SUMMARY
(T.P.H.A.) - I m m u n o -
T h e T r e p o n e m a P a s s i v e H a e m a g g l a t i n a t i o n T e s t ( T . P . H . A . ) is a r a p i d , r e l a t i v e l y s i m p l e b u t d e l i c a t e , s p e c i f i c t e s t f o r t h e d i a g n o s i s o f s y p h i l i s , it c a n be u s e d a l o n g s i d e t h e T P I a n d F T A tests. T h e T . P . H . A . d o e s n o t h o w e v e r r e p l a c e N e l s o n ' s T P I test, w h i c h r e m a i n s t h e r e f e r e n c e m e t h o d f o r s e r o d i a g n o s i s . Key-words : Syphilis serology- Treponema Passive Haemagglurtinalion Test (T.P.H.A.) Treponema Immobilisation Test (TPI).
BIBLIOGRAPHIE 1. PARIS-HAMELIN A., CATALAN FI et VAISMAN A. S~rodiagnostic de la syphilis u t i l i s a n t une rdaction d ' h d m a g g l u t i n a t i o n passive avec un antig&ne trSpondmique. Bull. Soc. Ft. Derm. Sgph., 1970, 77, 4, 474482. 2. J O H N S T O N N.A. - - L'fipreuve d ' h d m a g g l u t i n a t i o n p o u r le sSrodiagnostic de la syphilis : E v a l u a t i o n d'une mieromSthode modifi4e, W H O / V D T / R E S / 7 3 . 3 9 2 ' (documeut O.M.S. en cours de p u b l i c a t i o n ) . 3. LESINSKI J. ct KRACH-KACZMARCZYK J. - - Evalua= tion of Treponema p a l l i d u m h a e m a g g l u t i n a t i o n test
-
(TPHA) for s y p h i l i s ; a comparison w i t h TPI a n d FTA - ABS tests in syphi]itics a n d p r o b l e m sera, W H O / V D T / R E S / 7 3 . 2 9 8 (docmnent O.M.S. en eours de publication). 4. O'NEILL P., WARNER R.W. et NICOL C.S. - - Trep o n e m a p a l l i d u m h a e m a g g l u t i n a t i o n assay in the routine serodiagnosis of t r e p o n e m a l disease. Bril. J. Ven. Dis., 1973, $9, 5, 427-431. 5. GARNER M.F., BACKHOUSE J.L., DASKALOPOULOS G. et ~VALSH J.L. - - The Treponema p a l l i d u m haem a g g l u t i n a t i o n test for syphilis ; a c o m p a r i s o n w i f h the TPI a n d FTA-ABS tests, WHO/VDT/RESo 72.269 ( d o c u m e n t O.M.S. en coars de publication).
REPERTOIRE DES ANNONCEURS
BEECHAM-SEVIGNE
Pgopen
..........
CHOAY
Hdpatique
P.C.B.
126 .
132
C L I N COMAR B Y L A
Diarsed-N~omgcine
104
DELAGRANGE
P~nicIine
110
GLAX0
C e p o r e x i n e La F a m i l l e 4~ C C~porine Infantile Encart Libre H g d r o x o 5000 . . . 105 Protelipan ....... 106 Erythroton ...... 145 Tetra,wig ........ 108
HEPATROL
INAvA
162
........
LE BRUN LEO
Vesadol ......... Pondocilline ..... KaIeorid .........
122 153/154 3~ C
Pdriactine ....... Vlbraveineuse ... Erceftwgl ........ Bactrim ......... Recto plexil ...... F . E . V . 300 . . . . . . . Gentalline ....... Negram .........
160 119/120 140 2" C 142 136 148/149 129
MERCK SHARP et
DOHME
PFIZER CLIN R O B E R T et C A R R I E R E ROCHE SPECIA STAGO UNILABO WINTHROP
1974
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La r action d'h mogglutination passive pour le s( rodiagnostic de la syphilis (T. P. H.A.). licrom thode sur plaque Technique ulihs e a l'instilut Alfred Fournier* par A. VAISMAN**, A. PARIS-HAMELIN ** et S. FUSTEC-IBARBOURE**
En 1970 (1), uous avons d~.jh d~crit cette nou,velle r~action pour le s~rodiagnostic de la s y p h i l i s et rapportd les p r e m i e r s rdsultats obtenus s'ur des s~rums h u m a l n s et e x p ~ r i m e n t a u x . il s'agit d'une r~action d'h~maggIutination passive ou conditionn~e (T.P.H.A.) oh l'antig~ne est constitu~ par un IgophiIisat de T r e p o n e m a p a l l i d u m (souche pathog~ne N i c h o l s ) [ix~ s a t des h~maties de m o u t o n [ormoldes et tann~es.
Lorsque cet antig6ne est mis en pr6sence d ' u n s6rum c o n t e n a n t l ' a n t i c o r p s t r 6 p o n 6 m i q u e homologue, il y a f o r m a t i o n d ' u n i m m u n complexe qui e n t r a i n e l ' a g g l u t i n a t i o n des h6maties. Si le s6rum ne c o n t i e n t pas l ' a n t i c o r p s homologue, il n ' y a pas d ' i m m u n complexe form6 et les h6maties s6dimentent n o r m a l e m e n t en a n n e a u x . Notre p r e m i e r travail avait 6t6 fait avec des r6actifs j a p 0 n a i s fabriqu6s p a r la Fuji Zoki P h a r m a c e u tical C o m p a n y et en u t i l i s a n t trbs e x a c t e m e n t la m6thode p r 6 c o n i s 6 e p a r cette firme. II s'agissait d ' u n e m a c r o - h 6 m a g g l u t i n a t i o n sur plaque O.M.S. avec t r a i t e m c n t et d i l u t i o n pr6alables des s6rums en tube p a r u n a b s o r b a n t c o n t e n a n t des h6maties de m o u t o n formol6es et tann6es, u n extrait de tr6pon6me Reiter, du s6rum de l a p i n n o r m a l et de la p o u d r e de testicules de l a p i n normal. Apr6s 30 minutes de contact, le tube 6tait centrifug6 et le s6rum de m a l a d e se trouvait, de ce fait, dilu6 au 1/20 ~ d6barrass6 d e ses agglutinines n a t u r e l l e s antim o u t o n et de ses 6ventuels a n t i c o r p s t r 6 p o n 6 m i q u e s de groupe (neutralis6s p a r l'extrait de tr6pon6me Reiter). Apr6s u n e 'nouvel[e d i l u t i o n en tube et au 1/4 de ce s6rum absorb6 (ce qui d o u n e u n e d i l u t i o n tinale au 1/80), on distribue, sur n n e plaque O.M.S., 0,5 ml de s6rum dilu6 dans deux alv6oles et on ajoute 0,05 ml d ' a n t i g 6 n e (r6action : h6maties sensibilis6es) dans u n e alv6ole et 0,05 ml de s u s p e n s i o n
* Manuscrit requ le 5 janvier 1974. ** lnstitut Alfred-Fournier, 25, bd St-Jacques, 75014 Paris. Centre International de R6f6rence de I'O.M.S. pour les Tr6pon6matoses end6miqnes.
d'h6maties n o n sensibilis6es dans l'autre (t6moin s6rum). La lecture se fait apr6s 6 heures de s6dim e n t a t i o n ~ t e m p 6 r a t u r e o r d i n a i r e , le t6moin-s6rum devant toujours pr6senter u n e image de s6dimentation parfaite et la r6aetion p o u v a n t 6tre semblable au t6moin (image n6gative) ou p o u v a n t pr6senter u n aspect h6magglntin6 (image positive avec des aspects i n t e r m 6 d i a i r e s , not6s 1 + , 2 + , 3 + ou 4 + selon la largeur de l ' a n n e a u de s6dimentation). La t e c h n i q u e 6tait donc assez longue et d e m a n dait p l u s i e u r s m a n i p u l a t i o n s en r a i s o n de l'absorption pr6alable des s6rums. C'est p o u r q u o i la firme j a p o n a i s e proposa, p o u r cette r6action, il y a deux ans, u n nouvel a b s o r b a n t ne c o n t e n a n t plus d'h6ma-. ties enti6res formol6es, mais seulement u n ultrasonat d'h6maties de m o u t o n et de bceuf, les autres c o n s t i t u a n t s r e s t a n t identiques. L ' e m p l o i de ce nouvel a b s o r b a n t p e r m e t de diluer les s6rums d i r e c t e m e n t et d'ex6cuter la r6action sans c e n t r i f u g a t i o n pr6alable, d'ofl u n e m a n i p u l a tion de m o i n s et u n gain d e temps appr6ciable. A la m i c r o - m 6 t h o d e d6crite p a r les auteurs japonais, nous avons pr6f6r6 une v a r i a n t e m i e u x adapt6e aux examens en s6rie qui seuls p e u v e n t p e r m e t t r e une utilisation r a t i o n n e l l e de cette r6action, sans qu'elle soit exag6r6ment on6reuse. Cette technique, que nous u t i l i s o n s dans nos laboratoires, nous d o n n e de bons r6sultats, r e p r o d u c t i b l e s , de sensibilit6 et spdcificit6 aussi b o n n e s que les m6thodes originales. L ' e n s e m b l e de nos r6sultats, qui p o r t e n t sur plus de 6.000 s6rums, fera l'objet d ' u n r a p p o r t ult6rieur, le but de cette note 6tant s e u l e m e n t de d6crire la technique que nous u t i l i s o n s actuellement. 159
A
(chlorhydrate de cyproheptadine, MSD)
Le premier mddicament quiaprouv6 qu'en stimulant l'appdtit, il entra nait une augmentation de poids.
P
riactine existe en c o m p r i m d s et en sirop. * marque deposee
C l a s s e Pharmacologique : Siimulant de I'appetit anti-allergique. Indications :
Chez les sujets en insuffisance ponderale pour lesqueis stimulation de I'app6tit et prise de poids sent seuhaitables. Anorexie accompagnee de retard ponderal et d'hypotrophie, pouvant avoir perticulierement pour origine une carence alimentaire, des troubles caracteriels et des allergies. Maigreur due ~. I'anorexie. iAffectiens allergiques et prurigineuses. Posologie :Elle est fonction des indications cliniques at de la r6ponse du malade. Aucun schema posolagique n'a 616 ' 61abli et ne peut donu etre conseillee chez I'enfant de moins de 2 ans. C o n t r e Indications : Glaucome et predisposition b~la retention d'urine. Ne pas associer avec les I.M.A.O. Sensibilisation au chlorhydrate de cyproheptadine. Viei/lards d~bilites; ulcere peptique st6nosant et obstruction pyloro-duod~nale. Phases eigu6s de la maladie asthmatique. P r d c a u t i o n s d'emploi e t T o l 6 r a n c e : A maintenir hors de la perteq des enfants du fait du danger que ferait coufir un surdosage. L'administration du produit ~ des femmes enceintes ou susceptibles de la devenir et ~ des meres qui allaitent, suppose que I'on ait au prealabTe; mis en balance les resultats therapeutiques escomptes et les risques eventuels pour
MSD
la mere et I'enfant. Du fait des risques d'affaiblissement de la vigilance, il faudra recommander la prudence aux conducteurs d'automobiles, aux utilisateurs de machines e't en cas d'exercice d'autres act[vites qu'une baisse de la vigilance rendrait dangereuses. Mettre en garde les patients contre I'ingestion d'alcool ou d'autres depresseurs du syst~me nerveux central. Devant une perte d'appetit severe il faudra avant tout eliminer touts affection serieuse sous-jacente. Possibilite de somnolence frequente en debut de traitement mais pouvant disparaftre a u bout de 3 ou 4 jours. Rarement secheresse de la bouche et des muqueuses, etourdissements, cephalees, naus6es, manifestations allergiques cutanees, stimulation du systeme nerveux central. Formule chimique : chlorhydrate de (dibenzo [a.d] cycloheptatdenylidene-5) 4 methyl-/-pip6ridine. Pr6sentation : Comprimes : bofte de 30 comprim~s s6cables doses & 4 mg de chlorhydrate de cyproheptadine, MSD. Prix : 11,50 F. Remboursement S.S. Admis aux collectivit~s et h6pitaux psychiatriques. Visa : NL 5195. Sirop : flacon de 125 mk Une cuillere-mesure : 2 mg de chlorhydrate de cyproheptadine, MSD. Prix : 6,75 F. - Remboursement S.S. Admis aux collectivites. Visa NL 1307. Informations d/~taill6es sur d e m a n d e .
Laboratoires Merck Sharp & Dohme. 146 Bd de Grenelle. 75015 Paris. t61. 566.75.57 MERCK Nouvelle adresse ~. partir du 1er mai 1974 9 3 av. Hoche. 75008 Paris. SHARP~ DOHME
~" L5 co co r.-o_
PREPARATION DU MATERIEL ET DES REACTIFS
r a p i d e m e n t avec u n e b o n n e pipette MLA de 10 microlitres, avec des embouts p l a s t i q u e s ~ usage unique. Dans ce p r e m i e r temps, on ne fait pas de t~moin p o u r chaque s~rum.
Le coffret de r~actifs j a p o n a i s * c o n t i e n t : le d i l u a n t a b s o r b a n t liquide, 2 flacons de 28 ml,
l'~mtig~ne h6maties de m o u t o n formol6es et tann6es, sensibilisSes par u n u l t r a s o u a t de Treponema palIidum, sous forme lyophilis~e. R e p r e n d r e le flacon p a r 2,5 ml d'eau distill6e, st6rile. Cet antigone reconstitu6 sera redilu~ avec de l ' a b s o r b a n t h raison de 1 ml d ' a n t i g~ne et de 7,5 ml de diluant. La quantit6 d ' a n t i g ~ n e utiliser p o u r chaque s~rum sera alors de 0,070 ml. h6maties n o n sensibilis6es (t6moin) r e p r e n d r e le flacon lyophilis6 p a r 1,5 m l d'eau distill~e, sterile. La s u s p e n s i o n de travail sera pr~par~e en r e d i l u a n t ~ r a i s o n de 1 ml de s u s p e n s i o n - m ~ r e et 7,5 ml d ' a b s o r b a n t . La quantit6 de suspensiont~moiu ~ u t i l i s e r p o u r chaque s~rum sera de m~me de 0,070 ml. u n s~rum p o s i t i f t ~ m o i n lyophilis~ ~ r e p r e n d r e p a r sterile.
1 ml d ' e a u distill~e,
P o u r n o t r e t e c h n i q u e modifi6e, il faut, en plus, du tampon P.B.S. de pH 7,2. Le m a t e r i e l n~cessaire h l'ex~cution de la r~action consiste en : un d i l u t e u r a u t o m a t i q u e capable de r~aliser u n e d i l u t i o n au 1/10 ~ du s~rum h e x a m i n e r en t a m p o n P.B.S.
des p i p e t t e s p e r m e t t a n t de d i s t r i b u e r 0,010 m l de s~rum dilu~ (pipette MLA de 10 m i c r o l i t r e s avec embout plastique h usage u n i q u e ) et u n d i s t r i b u t e u r de 0,070 ml. des m i c r o - p l a q u e s en U, en plastique, h usage unique, type M24A.
Cooke
TECHNIQUE - - Les s~rums h e x a m i n e r sont dilu~s au 1/10 e en t a m p o n P.B.S. ; il n'est pas n~cessaire de les i n a c river et la r~action peut m~me dtre faite sur plasma. Ces d i l u t i o n s se font en tube plastique, avec u n diluteur automatique. Sur u n e m i c r o - p l a q u e en U, d~poser 0,010 ml de chaque s~rum darts u n e alv~ole. Ceci est fait tr~s
* Ces r~acfifs sont disponibles chez Micro-Bio Laboratories Ltd, 46 Pembridge road, London W l l 3 HN, Grande-Bretagne.
-- Ajouter ensuite, avec u n e pipette de distribution automatique, 0,070 ml de s u s p e n s i o n d ' a n t i g ~ n e reconstitu~, comme nous l ' a v o n s i n diqu~ dans la p r e p a r a t i o n des r~actifs. Le s~rum se trouve d o n c dilu~ au 1/80 ~ p a r r a p p o r t au s~rum p u r et dans l'antig~ne lui-m~me, qui c o n t i e n t l ' a b s o r b a n t . - - Agiter la plaque p e n d a n t c i n q m i n u t e s sur u n v i b r a t e u r type Cooke, puts laisser s ~ d i m e n t e r h temp e r a t u r e o r d i n a i r e p e n d a n t 3 heures e n v i r o n . La lecture est faite tr~s f a c i l e m e n t h l'ceil nu. T o u s l e s s~rums positifs on d o n t e u x sont repris une seconde fois et refaits, h titre de contr61e, avec la m~me d i l u t i o n au 1/10 ~ mats dans deux alv~oles, p o u r avoir en m~me temps le t~moin s~rum obtenu en ajoutant 0,070 ml d ' h ~ m a t i e s n o n sensibilis~es. La r~action peut se faire ~galement quantitativemerit, en faisant des dilutions successives d u s~rum en t a m p o n P.B.S. ~ p a r t i r d u 1/10 ~, en progression g~om~trique de r a i s o n deux. Ces d i l u t i o n s p e u v e n t ~tre faites m a n u e l l e m e n t ou a u t o m a t i q u e m e n t si l'on dispose d ' u n d i l u t e u r a u t o m a t i q u e et la r~action se fait d a n s les m~mes c o n d i t i o n s sur chaque d i l u t i o n du s~rum. Un t~moin-s~rum est fait sur la p r e m i b r e dilution. Le titre d u s~rum est d onn~. en p r e n a n t l ' i n v e r s e de la plus g r a n d e d i l u t i o n p r ~ s e n t a n t une agglutination encore tr~s nette.
INTERPRETATION I1 s'agit d ' u n e r~action r e n t r a n t d a n s le c a d r e de la s~rologie dite << sp~cifique >>, p u i s q u e l'antig~ne est u n extrait de Treponema pallidum. Sa sensibilitd est tr~s g r a n d e , de p a r le p r i n c i p e m~me de la r~action. Sa sp~cificit~ est ~galement tr~s satisfaisante. Compar5 aux autres tests sp6cifiques tels que F.T.A. et T.P.I., on sait, et de tr6s n o m b r e u x t r a v a u x Font m o n t r 6 (2) (3) (4) (5), que I t T.P.H.A. est peu pros aussi pr6coce, darts les s y p h i l i s p r i m a i r e s , que le F.T.A. I1 ne semble pas influenc6 p a r les r6agines (anticorps a n t i l i p i d i q u e s n o n sp6cifiques) ni p a r les a n t i c o r p s t r 6 p o n 6 m i q u e s de groupe p u i s q u e ceux-ci sont neutralis6s p a r l ' a b s o r b a n t . II reste positif tr6s longtemps, mats suit davantage la courbe d'6volution des a n t i c o r p s du F.T.A. que celle du T.P.I. 161
RESUME
R 6 a c t i o n r a p i d e , r e l a t i v e m e n t s i m p l e m a i s m i n u t i e u s e , se c l a s s a n t d a n s le g r o u p e d e s t e s t s s p 6 c i f i q u e s , le T.P.H.A. est a p p e l 6 /t p r e n d r e u n e p l a c e i m p o r t a n t e d a n s le s 6 r o d i a g n o s t i c d c la s y p h i l i s , s ' a j o u t a n t a u x T.P.I. et F.T.A. C e p e n d a n t c e t t e r 6 a c t i o n n e p c u t r e m p l a c e r le t e s t d ' i m m o b i l i s a t i o n d e s t r 6 p o n b m e s d e N e l s o n et M a y e r , q u i r e s t e le t e s t d e r 6 f 6 r e n c e p o u r t o u s c e u x q u i l ' u t i l i s e n t d e p u i s p l u s d e 20 a n s . Mots-clef
:
S ~ r o l o g i e d e la s y p h i l i s - R 6 a c t i o n d ' h ~ m a g g l u t i n a t i o n f l u o r e s c e n c e (F.T.A.) - T e s t d e N e l s o n (T.P.I.).
SUMMARY
(T.P.H.A.) - I m m u n o -
T h e T r e p o n e m a P a s s i v e H a e m a g g l a t i n a t i o n T e s t ( T . P . H . A . ) is a r a p i d , r e l a t i v e l y s i m p l e b u t d e l i c a t e , s p e c i f i c t e s t f o r t h e d i a g n o s i s o f s y p h i l i s , it c a n be u s e d a l o n g s i d e t h e T P I a n d F T A tests. T h e T . P . H . A . d o e s n o t h o w e v e r r e p l a c e N e l s o n ' s T P I test, w h i c h r e m a i n s t h e r e f e r e n c e m e t h o d f o r s e r o d i a g n o s i s . Key-words : Syphilis serology- Treponema Passive Haemagglurtinalion Test (T.P.H.A.) Treponema Immobilisation Test (TPI).
BIBLIOGRAPHIE 1. PARIS-HAMELIN A., CATALAN FI et VAISMAN A. S~rodiagnostic de la syphilis u t i l i s a n t une rdaction d ' h d m a g g l u t i n a t i o n passive avec un antig&ne trSpondmique. Bull. Soc. Ft. Derm. Sgph., 1970, 77, 4, 474482. 2. J O H N S T O N N.A. - - L'fipreuve d ' h d m a g g l u t i n a t i o n p o u r le sSrodiagnostic de la syphilis : E v a l u a t i o n d'une mieromSthode modifi4e, W H O / V D T / R E S / 7 3 . 3 9 2 ' (documeut O.M.S. en cours de p u b l i c a t i o n ) . 3. LESINSKI J. ct KRACH-KACZMARCZYK J. - - Evalua= tion of Treponema p a l l i d u m h a e m a g g l u t i n a t i o n test
-
(TPHA) for s y p h i l i s ; a comparison w i t h TPI a n d FTA - ABS tests in syphi]itics a n d p r o b l e m sera, W H O / V D T / R E S / 7 3 . 2 9 8 (docmnent O.M.S. en eours de publication). 4. O'NEILL P., WARNER R.W. et NICOL C.S. - - Trep o n e m a p a l l i d u m h a e m a g g l u t i n a t i o n assay in the routine serodiagnosis of t r e p o n e m a l disease. Bril. J. Ven. Dis., 1973, $9, 5, 427-431. 5. GARNER M.F., BACKHOUSE J.L., DASKALOPOULOS G. et ~VALSH J.L. - - The Treponema p a l l i d u m haem a g g l u t i n a t i o n test for syphilis ; a c o m p a r i s o n w i f h the TPI a n d FTA-ABS tests, WHO/VDT/RESo 72.269 ( d o c u m e n t O.M.S. en coars de publication).
REPERTOIRE DES ANNONCEURS
BEECHAM-SEVIGNE
Pgopen
..........
CHOAY
Hdpatique
P.C.B.
126 .
132
C L I N COMAR B Y L A
Diarsed-N~omgcine
104
DELAGRANGE
P~nicIine
110
GLAX0
C e p o r e x i n e La F a m i l l e 4~ C C~porine Infantile Encart Libre H g d r o x o 5000 . . . 105 Protelipan ....... 106 Erythroton ...... 145 Tetra,wig ........ 108
HEPATROL
INAvA
162
........
LE BRUN LEO
Vesadol ......... Pondocilline ..... KaIeorid .........
122 153/154 3~ C
Pdriactine ....... Vlbraveineuse ... Erceftwgl ........ Bactrim ......... Recto plexil ...... F . E . V . 300 . . . . . . . Gentalline ....... Negram .........
160 119/120 140 2" C 142 136 148/149 129
MERCK SHARP et
DOHME
PFIZER CLIN R O B E R T et C A R R I E R E ROCHE SPECIA STAGO UNILABO WINTHROP