La transcription des gènes de Bax et du ligand de Fas contribue à la redistribution de la ribonucléoprotéine Ro60 dans les kératinocytes humains irradiés par UVA

Rev Rhum Fas ligand

in UV-A irradiated 0

2000

; 67 : 355-61

[Ed Fr] 2000

and Bax gene transcription Editions

human

keratinocytes

scientifiques

contributes

to Ro60 ribonucleoprotein

- Joint Bone Spine 2000

et mtdicales

redistribution

; 67 (in press)

Elsevier SAS. Tous droits

r&ervPs

ARTICLE ORIGINAL

La transcription des genes de Bax et du ligand de Fas contribue 81la redistribution de la ribonuck!oprot&ne Ro60 dans les keratinocytes humains irradibs par UVA Juan Jose Bollain-y-Goytia, Esperanza Avalos-Diaz*, Rafael Herrera-Esparza Departement

d’immunologie,

CBE, universitb autonome de Zacatecas, Guadalupe, Zacatecas, Mexique

R&sum4 - Ol~jecfifs. Les ribonucleoproteines Ro sont des marqueurs seriques de formes photosensibles de lupus comme le lupus erythemateux cutane subaigu, dans lequel les lesions a repetition de la peau sont declenchees par I’exposition au soleil. Nous avons etudie le role de I’apoptose dans I’expression de Ro60. M&hodes. Nous avons utilise les keratinocy-tes humains irradies par les UVA. R&~~/fats. Nous montrons que dans des cellules irradiees par les UVA, I’augmentation de I’expression de la ribonucleoproteine Ro a pour origine,une redistribution de I’antigene suite a I’activation des genes de Bax et du ligand de Fas. Rev Rhum [Ed Fr] 2000 ; 67 : 355-61. 0 2000 Editions scientifiques et medicales Elsevier SAS anticorps anti-Ro / antigene Ro60 / apoptose / Fas-L et Bax / kbratinocytes Summary - Fas ligand and Bax gene transcription contributes to Ro60 ribonucleoprotein redistribution in UV-A irradiated human keratinocytes. Ol#?ctives. Ro ribonucleoproteins are of particular interest because they are serologic markers of photosensitive variants of lupus such as the subacute cutaneous lupus erythematosus (SCLE), in which the polycyclic skin lesions are triggered by exposure to the sun. We study the role of apoptosis in the expression of Ro antigen. MefMIs. We used UV-A irradiated keratinocytes. Results We demonstrate in cultured human UVA-irradiated keratinocytes that the enhanced expression of Ro60 ribonucleoprotein is caused by antigenic redistribution consecutive to Fas-L and Bax gene activation. Joint Bone Spine 2000 ; 67 (in press). 0 2000 Editions scientifiques et medicales Elsevier SAS anti-R0 antibodies / apoptosis / Fas-L and Bax / keratinocytes / Ro60 antigen

La particule Ro est composte de trois ribonucleo-proteines de 60, 54 et 52 kDa [l-3]. La sous unite de 60 kDa est associee a l’une des cinq hYARN [4]. L’antigene Ro a ete decrit par Clark en 1969 a partir de serums auto-immuns [5]. Le complexe moltculaire Ro est reconnu par des autoanticorps de patients atteints de lupus trythemateux systemique (LES), de lupus trythemateux cutant subaigu (LECA), de syndrome de Gougerot-Sjogren (SGS) et de lupus neonatal [G].

‘Correspondance

et tir& a part

Les ribonucleoprottines sont des molecules aux fonctions relativement enigmatiques localisees dans le noyau et dans le cytoplasme. Leur expression et leurs profils de phosphorylation varient au tours du cycle cellulaire [T-12]. La fonction de Ro n’est pas encore bien tlucidee ; on sait cependant que la ribonucltoproteine Ro de 60 kDa forme des complexes avec des ARNr 5s dtfectifs qui n’arrivent pas a &tre transform& en ARNr 5s matures. L’ensemble

: Chepinque 306, Cal. Lomas de la Soledad, Zacatecas, 98040, Mexico.

356

J.J. Bollain-y-Goytia er al.

de ces don&es suggere que la proteine Ro de 60 kDa est impliquCe dans le contrble de la qualitt de la synthPse des ARNr 5s [ 131. D’un point de vue clinique, les anticorps anti-R0 sont associ& au LECA et les Itsions cutantes de ces patients sont dCclenchCes par les irradiations aux UV [14, 151. De pl us, des rtsultats expCrimentaux montrent que l’irradiation par les UV entraine une augmentation de 1’expression des autoantigenes dans les ktratinocytes et qu’il en r&ulte une redistribution de certaines ribonu&oprotCines comme Ro [ 16, 171. Dans cette ttude, nous avons utilist des kiratinocytes humains irradies par les UVA pour etudier le r81e de I’apoptose dans l’expression de Ro60.

MATERIEL ET MtTHODES

modtrte B s&&e [ 191. Les cellules ttmoins ont ct& c&i&es et utilisees sans irradiation durant 24 et 48 heures. Oligonuclkotides

Les sondes suivantes ont ctt! utilistes en PCR. Oligo sens pour le ligand de Fas (Fas-L) 5’-CAAGTCCAACTCAAGGTCCATGCC-3’ et antisens : 5’-CAGAGAGAGCTCAGATACGTTTGAC-3’, oligo sens pour Bax 5’-ATCCAGGATCGAGCAGGGCG-3’et antisens 5’-ACTCGCTCAGCTTCTTGGTG-3’, oligo sens pour Ro60 5’-AGATGGCAGAGGATGTGAAG-3 et antisens 5’-TCTCTACAGCCTCCAGATAC-3’ [20-221. Transcription

Culture cellulaire

Les ktratinocytes humains ont et& obtenus par digestion de prtpuces (collect& pendant des opCrations chirurgicales) par la trypsine. La culture des kkratinocytes a Ptt rtalisCe dans du milieu KGM (Gibco BRL) addition& d’EGF, d’insuline, d’hydrocortisone et d’antibiotiques. Les cellules ont et6 resuspendues et &al&es dans des flacons de polystyr&ne et des tubes Leighton (Costar) B une concentration de 5 x 106/mL et incubees dans une atmosphkre B 5 % de CO2 et 85 % d’humiditt relative. Les expdriences d’irradiation par les UVA ont Pte rtalistes sur cellules en phase logarithmique de croissance. La purett cellulaire, determinte par immunofluorescence indirecte avec des anticorps monoclonaux dirigts contre le rCcepteur du facteur de croissance tpidermique, Ctait de 97 %. Anticorps

Deux anticorps monoclonaux anti-Ro60, 1Dll et 2G-1 ont ttt utilish pour l’immunofluorescence indirecte et les Western Blot [ 181. Ces anticorps ttaient un don de R. Smeenk du CLB (Amsterdam). Des strums normaux, anti-Sm et anti-RNP, ont iti utilisCs comme ttmoins.

de Fas-L, Bax et Ro60

Afin d’tvaluer le biosynthese de novo de ces mol&ules, les ARN totaux des cellules irradites ou non par les UVA ont CtC isol& par du TRIzol (Gibco BRL), puis extraits par chloroforme/isopropanol. La RT-PCR ttait alors rtalisees sur 250 ng d’ARN total, 200 mM de dNTP, 0,75 pM d’oligonucltotides antisens et 5U/20 ~1 d’ADN polymtrase rTth (Gene AmpTM PCR System 9 600, Perkin Elmer). La transcription reverse (RT) a ttC rCalisCe par une incubation de 10 minutes B 70 “C et arr&tte sur la glace. Aprts la RT, l’amplification par PCR des ADNc de Fas-L, Bax et Ro60 a cte rtalisPe en ajoutant 0,15 FM d’oligonucltotide sens. De I’huile mintrale (50 ~1) Ptait dPposPe dans les tubes sur les 100 pl de mPlange rtactionnel. Les ADNc ont Ctt ampI&& par PCR dans un thermocycler (COY, TempCycler) par 30 cycles composts chacun de : 2 minutes B 94 “C, 2 minutes B 48 “C et 1,4 minute B 72 “C. A la fin de la rPaction PCR, une electrophortse sur gel d’agarose 0,8 % et 0,5 mg/mL de bromure d’Cthidium a ttt &al&e sur 5 ~1 de produit d’amplification. Les amplicons ont &te observts sous lumitre UV. Le gene ubiquitaire de l’actine 6 ttait amplifit par RT-PCR comme ttmoin [23]. Immunofluorescence

Irradiation

des cellules

Les cellules ont iti irradites et 48 heures avec une lampe Ray UVL-56). Les cellules (1 immediatement rtcup&tes 5-30 mJ/cm2 correspondait

B 360 nm pendant 24 B UVA (lampe Blackx 106) ont et& ensuite et la dose totale de B une brfilure solaire

indirecte (FI)

Des tests d’immunofluorescence indirecte ont cte realis& sur les monocouches (tubes Leighton) de cellules irradites ou non irradiees. Les cellules ttaient fixees dans de l’ac&one refroidie, puis la&es dans du PBS et mise en presence d’anticorps monoclonaux anti-Ro60. Plusieurs lavages ont Ctt ensuite

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Ro60 et apoptose

rtalises puis les cellules ont ete mises en presence d’une IgG anti-souris de chevre marquee par du FITC (Sigma). L’analyse a ete rtalisee avec un microscope Olympus B-Max a tpifluorescence [24]. Des cellules mise en presence de 1’IgG anti-souris de chevre marquee par du FITC uniquement ont ete utilistes comme ttmoin.

sur membrane de nitrocellulose selon le protocole decrit par Towbin et al. [27]. Les proteines presentes sur le gel ont ete alors hybridees avec l’anticorps monoclonal anti-R0 dime au l/100 dans du tampon PTX. Les anticorps lies furent detect& par un marquage avec de la proteine A de Staphylococcus aureus marquee a 1’1251, suivi d’une autoradiographie [28].

Hybridation

Analyse

in situ

Des sondes ADN pour Ro60, Fas-L et Bax ont ete synthetisees par PCR avec des oligonucltotides sptcifiques et une matrice obtenue a partir dune librairie hgtll de ktratinocyte humains (Clontech). Un marquage interne des produits PCR fut r&&C avec un bluoro-blue-UTP (Amersham) pendant la reaction PCR, comme dtcrit par ailleurs [25]. Les amplicons ttaient utilises pour l’hybridation in situ fluorescente dans les conditions suivantes : les monocouches de cellules exposees ou non aux W etaient prbhybridtes dans 0,02M HCI, puis permeabilistes avec 0,Ol % de Triton Xl00 dans du PBS. Les sondes fluorescentes etaient dilutes B une concentration de 50 ng/mL dans un melange Cquimolaire de tampon d’hybridation et de formamide, puis elles etaient incubees sur les monocouches de ktratinocytes irradies ou non pendant trois minutes a 90 “C et deux heures a 37 “C. Les lames ttaient la&es avec du PBS, puis avec du SSC. Aprts montage, l’analyse a ttC realiste par microscopic a tpifluorescence. Extraction

&a&g&e

Les cellules irradiees ou non ont Ctt dtcollees avec un grattoir et centrifugtes pendant dix minutes a 1 200 rpm. Les cellules ont ete alors mises en suspension dans un tampon assurant une denaturation par lyse (1 % SDS, 0,25M EDTA, 2mM 2-mercaptoethanol, 1 mM tris pH 7,5, 5mM de PMSF pour 1 mL d’Hz0). L’antigene a ete extrait par cinq sonications de 30 secondes (efftcacite 50 %). Les lysats ont ete alors centrifuges pendant dix minutes a 12 000 rpm et le surnageant immediatement utilise pour l’analyse. La concentration prottique etait mesure par coefficient d’extination a 280 nm. SDS-PAGE,

Western Blot et autoradiographie

Le SDS-PAGE a ete rtalise en conditions rtductrices sur des minigels contenant 11 % de polyacrylamide selon la technique de Laemmli et Favre [26]. Les gels non color-es de SDS PAGE furent tlectrotransferes

de I’image

Les images de cellules en microscopic et les gels ont ete analysts et quantifies par les logiciels &image Scion et le programme informatique Kodak Science 1D. Les analyses statistiques ont ete rtalistes a l’aide de systemes number cruncher statistical.

R&ULTATS L’irradiation de Ro60

par les WA

augmente l’expression

Les anticorps monoclonaux anti-R0 marquaient faiblement le compartiment nucleaire des keratinocytes non irradies. La ribonucleoproteine Ro60 apparaissait sous forme de petites taches dans le nucltoplasme, a proximitt de la membrane nucltaire. Ro n’etait detect6 ni dans le cytoplasme ni sur la membrane plasmique. Dans les keratinocytes irradies pendant 24 heures, la detection de Ro ttait accrue dans le noyau et le cytoplasme, et l’antigtne ttait distribue de faGon polaire le long du complexe de Golgi. Dans les cellules irradiees pendant 48 heures, apparaissaient des remaniements relevant de phenomenes d’apoptose, tels des corps apoptotiques ou des bulles (( blebs N,et l’antigene Ro6O etait disperse dans ces corps denses. La conclusion preliminaire de ces resultats etait que Ro60 s’exprimait mieux dans les keratinocytes irradies. Cependant, une augmentation de la fluorescence n’indiquait pas necessairement une augmentation du contenu cellulaire total de Ro. C’est pourquoi une analyse d’image digital&e a ttt me&e sur 100 cellules marquee par I’anticorps monoclonal anti-Ro60. Les resultats, exprimts en pixels, Ctaient les suivants : 215 f 175 pour les cellules non irradites, 295 f 275 pour les cellules irradiees 24 heures et 375 f 225 pour les cellules irradiees 48 heures @gure I). Ces resultats n’ttaient pas statistiquement differents. Les ribonucltoprot&nesSm et RNP ttaient ltgtrement redistrib&es aprts irradiation par les W, et le strum normal ttait negatif

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J.J. Bollain-y-Goytia et al.

Figure 1. Expression de Ro60 dans les keratinocytes irradies par les UVA par immunofluorescence avec des anticorps monoclonaux anti-Ro. A :

keratinocytes irradies. B : Ro60 est transloque vers le cytoplasme dans les cellules irradiees 24 heures. C : Ro60 est incorpore dans les corps apoptotique dans les cellules irradiees 48 heures. La fluorescence des cellules est montree sur la colonne de gauche. Les images digitalisees permettant de mesurer quantitativement I’expression de Ro (vet-t) sont montrees dans la colonne du milieu. Les histogrammes correspondant (colonne de droite) montrent qu’il n’y a pas de difference significative dans le contenu cellulaire total de Ro.

La transcription des g&es Fas-L et Bax augmente ap&s irradiation, mais pas le g&e Ro60 Pour Plucider le mtcanisme d’augmentation de l’expression de Ro60 induit par les W et de determiner s’il s’agissait dun phenomene de translocation ou de synthese de novo, une amplification par RT-PCR a CtC rCaliste avec des oligonucltotides specifiques. L’expression gtnique en l’absence d’W servait de reference. La comparaison semi-quantitative de l’intensitt en pixels des amplicons ne montrait pas de difference pour Ro60 dans les cellules irradites ou non irradites. En revanche, la transcription des genes d’apoptose augmentait de facon importante en reponse a l’irradiation par les WA. Dans le cas de Fas-L, la transcription etait augmentee d’un facteur 5, alors que Bax ttait augment6 dun facteur 2. Ces r&hats concordent avec ceux obtenus par hybridation in situ ou une t&s importante augmentation de l’expression des ARNm de Fas-L et de Bax etait induite par les WA (fi;gurer 2 et 3).

Tkmoin

Irradiation aux UVA

Figure 2. Transcription des genes Fas-L, Bax et Ro60 induite par UVA.

Les ARN totaux etaient extraits de cellules non irradiees ou irradiees 24 heures. Les ADNc etaient obtenus par RT et amplifies par PCR. Les produits d’amplification etaient soumis a electrophorese sur gel a 1 % d’agarose et apres coloration avec du bromure d’ethidium, le gel etait visualise sous UV. Le taux d’ARN de Fas-L etait augmente de cinq fois dans les cellules irradiees.

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Figure 3. Expression des ARNm de Fas-L detect& par hybridation in situ (image digitalisee). A : cellules temoins non irradiees. B : keratinocytes irradies 24 heures, montrant une agregation des ARNm de Fas-L sur la membrane nucleaire et dans le cytoplasme. C et D : cellules irradiees 48 heures montrant des ARNm de Fas-L localises dans les corps apoptotiques. E : q bulles * membranaires n b/e&u.

La ribonuclCoprot&ne Ro60 n’est pas clivde aprks les irradiations par les W Comme certains anti&es sent clivts au cows du processus d’apoptose, nous nous sommes demand& si tel ttait le cas pour Ro60. Aussi, les extraits cellulaires de ktratinocytes humains irradits ou non etait soumis a une electrophorese, transfer& et hybrid& avec les anticorps monoclonaux anti-Ro60. Les extraits cellulaires irradies ou non irradies Ctaient reconnus par les anticorps monoclonaux au niveau d’une bande de 60 kDa. Ces anticorps ne permettaient pas de detecter des produits de clivage de la ribonucleoprottine Ro60 $gure 4).

Ro

60 kD

1234 Figure 4. Western Blot sur les extraits de cellules irradiees ou non. Hybridation avec un anticorps monoclonal anti-R060 (lignes 1 et 2) ou avec un serum humain temoin normal (lignes 3 et 4).

DISCUSSION La presente etude cherchait a rtsoudre le probltme de savoir si l’expression de Ro60 induite aprtts irradiation par les W etait la consequence dun phtnomtne de transcription ou bien dune redistribution de l’antigene. Les principaux rtsultats sont les suivants : - l’antigtne Ro60 est detect6 de fason accrue dans les keratinocytes irradies par les W, - l’antigtne Ro60 est transloqut vers le cytoplasme suite B l’irradiation par les W, - des doses importantes de lumitre W induisent une apoptose et Ro60 est integrt aux corps apoptotiques, - l’irradiation par les WA augmente la transcription des genes de Fas-L et de Bax, mais pas celui de Ro60, - la ribonucleoproteine Ro60 n’est pas clivte pendant l’apoptose. Dans le LES, la composante W de la lumiere solaire est responsable des lesions cutanees. Une irradiation artificielle de patients atteints de lupus par une lampe W reproduit ce type de lesions [29]. L’irradiation de la peau provoque vraisemblablement le relargage d’antigene et une poussee de la maladie ; cependant, les mecanismes moleculaires ne sont pas totalement d&is. Les toutes premieres etudes de Le Feber et al. demontraient que l’irradiation par les UVB augmentait la liaison des autoanticorps anti-Ro, La, Sm et RNP aux ktratinocytes en culture [3O], ce qui demontre que l’induction des antigtnes par les W n’est pas sptcifique de l’autoantigtne Ro. En revanche, l’inter&t clinique concerne principalement Ro de par son association avec les poussees dans le LECA. Par ailleurs, les WA et des UVB induisent l’apoptose des ktratinocytes par deux voies : - l’activation de la voie Fas/FasL, - le recrutement direct de la prottine adaptatrice FADD (domaine de mort associt B Fas) sur CD95

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J.J. Bollain-y-Goytia

[3 l-331. Fas et Fas-L sont des prottines qui, aprb liaison, induisent une apoptose dans divers tissus et cellules [34]. Les UV regulent positivement les genes de Fas et de Fas-L dans les cellules tpidermiques et lympholdes 135, 361, ce qui cord&e un role immunortgulateur a la molecule Fas-L [37]. Fas-L est un homotrimere de la famille du TNF et chaque homotrimere Fas-L se lie B trois molecules Fas. Par I’intermediaire de FADD, le complexe Fas-L/Fas se lie au zymogene de la caspase 8 qui, apres oligomerisation, active les caspases effectrices en aval, telles que la caspase 9 ; ces evenements menent finalement a l’apoptose de la cellule [38]. Bax induit l’apoptose en se dtplacant du cytosol vers la membrane mitochondriale de facon indtpendante de Bcl-2 et de Bcl-x [39]. Les travaux de Cassiola-Rosen et al. ont dtmontre que I’expression de la ribonucleoprottine Ro6O sur la surface cellulaire de keratinocytes irradies est provoquee par l’apoptose de la cellule [4O]. La plupart des etudes confirme ce mtcanisme et font l’hypothese que la translocation nucleocytoplasmique de Ro60 est une consequence de I’activation des cascades Fas-L et Bax. La mort cellulaire programmee parait jouer un role important dans la diffusion d’epitopes des autoantigenes du lupus. Durant I’apoptose, les proteines deviennent antigeniques par phosphorylation ou prottolyse. Ainsi, la phosphorylation d’autoantigenes est correlee B l’activation de cascades mises en jeu dans la mort cellulaire programmte, et les prottines modifiees constituent les meilleurs cibles pour la production d’autoanticorps dans le LES. C’est par exemple le cas de complexes (form& par association de proteines serinelarginine a role dans I’epissage et de petites ribonucltoproteines [snRNP]-Ul) qui constituent des phosphoantigenes gCnCrts par apoptose [41, 421. Dans la prtsente etude, nous avons montrt que l’irradiation par les UV ne degrade pas la proteine Ro ; en effet, aucun produits de clivage n’a et& detect& par analyse en Western Blot. En accord avec ces resultats, Casiano et al. ont montrt I’absence de produits de clivage de Ro pendant I’apoptose [43]. Nous ne savons pas actuellement si Ro est phosphorylt durant l’apoptose. En conclusion, l’ensemble de ces informations permet d’elaborer la thtorie suivante : les phtnomtnes d’apoptose induits apres irradiation par les UV contribueraient B la generation primitive ou secondaire de molecules immunogtniques qui pourraient potentiellement controler ou induire les pousstes dans le lupus cutant. Les reponses prtliminaires obtenues sont, pour confirmer cette hypothttse, riches de promesse.

et al.

REMERCIEMENTS Ce projet a ete finance par une bourse 1878 PM de CONACYT pour E. Avalos-Diaz. Ce travail constitue une part de la these de medecine de J.J. Bollainy-Goytia financte par une bourse CONACYT, # 11426/l 14856. RtFtRENCES 1 Elkon K, Culhane L. Partial immunochemical characterization of Ro and La proteins using antibodies from patients with sicca syndrome and lupus erythematosus. J Immunol 1984 ;132 : 2350-6. 2 Ben-Chetrit E, Chan EKL, Sullivan KF, Tan EM. A 52 kD protein is a novel component of the SS-A/Ro ribonucleoprotein autoantigen. J Exp Med 1988 ;167 : 1560-71. 3 Rader MD, O’Brien C, Liu YS, Harley JB, Reichlin M. Heterogeneity of the Ro/SS-A antigen. Different molecular forms in lymphocytes and red blood cells. J Clin Invest 1989 ; 83 : 1293-8. 4 Wolin S, Steitz J. Genes for two small cytoplasmic RoRNAs are adjacent and appear to be a single-copy in the human genome. Cell 1983 ; 32 : 735-44. of a soluble 5 Clark G, Reichlin M, Tomasi TB. Characterization cytoplasmic antigen reactive with sera from patients with systemic lupus erythematosus. J Immunol 1969 ; 102 : 117-22. 6 Provost TT, Herrera-Esparza R, Diaz LA. Nucleoprotein autoantibodies in lupus erythematosus. J Invest Dermatol 1985 ; 85 : 133s-139s. E, Herrera-Esparza R, Avalos-Diaz E. Cellular 7 Lopez-Robles localization of the RolSS-A antigen. Clin Rheumatol 1986 ; 5 : 33-38. 8 Lopez-Luna A, Ramirez-Santoyo RM, Barbosa-Cisneros OY, Avalos-Diaz E, Herrera-Esparza R. Phosphorylation profiles of 60 kD Ro antigen in synchronized HEp-2 cells. Stand J Rheumatol 1994 ; 24 : 293-9. MP, Herrera-Esparza R. La tyrosine kinase 9 Ramos-DeLeon participe a la phosphorylation de ribonucleoprottine Ro60. Rev Rhum [Ed Fr] 1998 ; 65 : 101-5. 10 Peek R, Pruijn GJM, van der Kemp AJW, van Venrooij WJ. Subcellular distribution of Ro ribonucleoprotein complexes and their constituents. J Cell Sci 1993 ; 106 : 929-35. 11 Simons FH, Pruijn GJM, van Venrooij WJ. Analysis of the intracellular localization and assembly of Ro ribonucleoprotein particles by microinjection into Xenopus laevis oocytes. J Cell Biol 1994 ; 125 : 981-8. 12 Simons FHM, Rutjers SA, van Venrooij WJ, Pruijn GJM. The interactions with Ro60 and La differentially affect nuclear export of hYI RNA. RNA 1996 ; 2 : 264-73. 13 O’Brien CA, Wolin SL. A possible role for the 60 kD Ro autoantigen in a dischard patway for defective 5s rRNA precursors. Genes Dev 1994 ; 8 : 2891-2903. 14 Lee LA, Gaither KK, Coulter SN, Norris DA, Harley JB. Pattern of cutaneous immunoglobulin G deposition in subacute cutaneous lupus erythematosus is reproduced by infusing purified anti-R0 (SSA) autoantibodies into human skin-grafted mice. J Clin Invest 1989 ; 83 : 1556-62. of photosensitive lupus erythe15 Norris DA. Photomechanisms matosus. J Invest Dermatol 1993 ; 100 : 68S-68s.

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