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2 dépendante contrôle la synthèse des chylomicrons
S86
Nutrition clinique et métabolisme 27 (2013) S57–S175 / Cahiers de nutrition et de diététique 48 (2013) S57–S175
autres AA 1. Des études menées in vitro ou dans des modèles animaux suggèrent que l’exposition à des niveaux élevés de BCAA pourrait avoir un effet délétère sur la signalisation de l’insuline c par un mécanisme mTOR dépendant 2-4. Une limitation de l’apport alimentaire en leucine permettrait une amélioration de la sensibilité à l’insuline et dans le foie, par l’activation de l’AMPK et GCN2 et par la diminution des voies de signalisation de mTOR 5. Cependant, ces effets restent controversés. Matériel et méthodes. – Des hépatocytes, incubés en présence de fortes concentration en AA (HAA) (équivalente à celles mesurées dans la veine porte deux heures après l’ingestion d’un régime riche en protéines), à faibles concentrations en AA (LAA) (équivalentes à celles mesurées à jeun dans la veine porte), ou en LAA additionné de leucine à des concentrations équivalentes aux HAA (L), en absence ou en présence d’insuline. Les hépatocytes ont été incubés pendant 0, 1 à 5 min pour étudier l’effet de la leucine sur les voies de transduction de l’insuline. La signalisation de l’insuline a été mesurée par l’activation de P-IRS1/IRS-1 et P-Akt2/Akt2 au moyen de kits ELISA PathScan Sandwich (Cell Signaling Technology). Les hépatocytes ont été incubés pendant 6 heures, pour étudier en transcriptomique, le profil de modification de l’expression des gènes et les voies métabolique qui sont affectées. Les ARN obtenus, ont été purifiés et hybridisés sur des microarrays (Affymetrix Rat Gene 1,0 ST array). Pour la détection des voies métaboliques gene set enrichment analysis étaient utilisé. Résultats. – Les résultats que nous avons obtenus concernant le rôle signal des de la leucine mettent en évidence : a- La leucine ne modifie pas la transduction du signal insuline au niveau de la PIRS1 et P-Akt. b- Les fortes concentrations en acides aminés stimulent toutes les étapes de la synthèse des protéines (transcription, traduction et modification post-traductionnelles). Conclusion. – Les AA, à des concentrations physiologiques similaires à celles observées dans la veine porte 2 heures après l’ingestion d’un repas riche en protéines, modifient toutes les étapes de la synthèse des protéines. Une grande partie des effets des AAsur les voies métabolique dans le foie peut être expliquée par la leucine ce qui confirme le rôle signal de la leucine. La leucine, à court terme, ne modifie pas la transduction du signal insuline. Référencesþ: 1. Lavigne et al. American journal of physiology 278, E491-500. (2000). 2. Patti, et al. J Clin Invest 101, 1519-1529. (1998). 3. Tremblay andMarette, The Journal of biological chemistry 276, 3805238060 (2001). 4. Nair and Klionsky, The Journal of biological chemistry 280, 41785-41788 (2005). 5. Xiao, F. et al. Diabetes 60, 746-756 (2011). 6. Zhang, et al. Diabetes 56, 1647-1654 (2007).
P059 Le lipido-récepteur intestinal CD36 et sa cascade de signalisation ERK1/2 dépendante contrôle la synthèse des chylomicrons V. Traynard1,*, T. Thi Thu Tran1, P. Besnard1, N. Khan1, H. Poirier1, I. Niot1 1Équipe Physiologie de la Nutrition et Toxicologie (NUTox), UMR U866, INSERM / Université de Bourgogne / AgroSup Dijon, Dijon, France Introduction et but de l’étude. – L’intestin est capable d’adapter sa capacité d’absorption à la teneur en lipide du régime. Cette
adaptation implique un système de détection des lipides au niveau entérocytaire. Le CD36, qui est une glycoprotéine transmembranaire liant avec une forte affinité les acides gras à longue chaîne (AGLC), pourrait jouer ce rôle. En effet, ex vivo, la présence d’AGLC est associée à une activation de la voie ERK1/2 et conduit à l’induction de protéines clés du métabolisme intestinal des lipides : l’ApoB48 et la MTP. Cette régulation est CD36 dépendante (Tran et al. 2011). De plus, la déficience de CD36 est associée chez l’Homme et l’animal à une altération de la sécrétion des chylomicrons (Masuda et al, 2008 ; Drover et al, 2005). L’objectif de ce travail est de démontrer que 1) CD36 intestinal est un récepteur qui déclenche l’activation de la voie ERK1/2 par liaison avec ses ligands, 2) l’activation des ERK1/2 est à l’origine de l’induction des protéines clés de la synthèse des chylomicrons. Matériel et méthodes. – Pour étudier le rôle du CD36 au niveau intestinal, une méthode ex vivo de culture de segments jéjunaux a été développée chez des souris sauvages et CD36 (-/-). L’expression des protéines intestinales impliquées dans l’absorption des lipides ainsi que des ERK kinases ont été étudiée par Western Blotting et celle des gènes par qPCR. Les segments intestinaux ont été traités soit avec de l’acide linoléique (750 μM), soit avec un ligand de CD36, le Sulfo-N-succinimidyl-Oleate (SSO, 100 μM) pendant 5, 20 et 45 minutes. Afin d’évaluer la contribution des ERK1/2, les segments ont été traités avec un inhibiteur spécifique de ces kinases, le U0126 (10 μM). Pour compléter l’approche ex vivo, des souris CD36 (-/-) ou ERK1(-/-) ont été gavées avec 0,5 ml d’huile Isio4 en présence ou absence de tyloxapol (500 mg/kg). L’expression des protéines impliquées dans la synthèse des chylomicrons (MTP, Apobec1, L-FABP) a été mesurée au niveau jéjunal après 6 h de gavage ainsi que la triglyceridémie. Résultats. – Le SSO déclenche l’activation des ERK1/2 et l’induction de l’ApoB48 au niveau des segments de souris sauvages. L’absence d’effet du SSO sur les segments des souris CD36 (-/-) démontre que le SSO est spécifique du CD36 et de sa signalisation. Le traitement des segments intestinaux avec un inhibiteur des ERK conjointement avec l’acide gras, abolit l’induction de la protéine ApoB48 et des ARNm Apobec-1 et L-FABP. Enfin, la charge en lipide conduit à une perte d’induction de la MTP chez les souris CD36 (-/-) et de la L-FABP chez les souris CD36 (-/-) et ERK1 (-/-). Les deux types de souris transgéniques gavées avec l’huile en présence de tyloxapol présentent une altération des quantités d’ApoB48 et de triglycérides plasmatiques. Conclusion. – CD36 est un lipido-récepteur à l’origine d’une signalisation ERK1/2 dépendante, permettant à l’entérocyte d’adapter ses capacités d’absorption à la teneur en lipides du régime. En situation d’alimentation riche en lipides, ce système de sensing intestinal des lipides alimentaires pourrait contribuer à la mise en place de l’obésité.
P060 Étude comparative par immunolocalisation des lipido-récepteurs CD36 et GPR120 dans la papille caliciforme de souris D. Ancel1,*, P. Passilly-Degrace1, C. Schneider2, A. Bernard 1, C. Martin1, P. Besnard1 1 Laboratoire NUTox, UMR U866 INSERM/Université de Bourgogne/AgroSup Dijon, 2 UMR INRA 1347 agroécologie, INRA, Dijon, France
Nutrition clinique et métabolisme 27 (2013) S57–S175 / Cahiers de nutrition et de diététique 48 (2013) S57–S175
autres AA 1. Des études menées in vitro ou dans des modèles animaux suggèrent que l’exposition à des niveaux élevés de BCAA pourrait avoir un effet délétère sur la signalisation de l’insuline c par un mécanisme mTOR dépendant 2-4. Une limitation de l’apport alimentaire en leucine permettrait une amélioration de la sensibilité à l’insuline et dans le foie, par l’activation de l’AMPK et GCN2 et par la diminution des voies de signalisation de mTOR 5. Cependant, ces effets restent controversés. Matériel et méthodes. – Des hépatocytes, incubés en présence de fortes concentration en AA (HAA) (équivalente à celles mesurées dans la veine porte deux heures après l’ingestion d’un régime riche en protéines), à faibles concentrations en AA (LAA) (équivalentes à celles mesurées à jeun dans la veine porte), ou en LAA additionné de leucine à des concentrations équivalentes aux HAA (L), en absence ou en présence d’insuline. Les hépatocytes ont été incubés pendant 0, 1 à 5 min pour étudier l’effet de la leucine sur les voies de transduction de l’insuline. La signalisation de l’insuline a été mesurée par l’activation de P-IRS1/IRS-1 et P-Akt2/Akt2 au moyen de kits ELISA PathScan Sandwich (Cell Signaling Technology). Les hépatocytes ont été incubés pendant 6 heures, pour étudier en transcriptomique, le profil de modification de l’expression des gènes et les voies métabolique qui sont affectées. Les ARN obtenus, ont été purifiés et hybridisés sur des microarrays (Affymetrix Rat Gene 1,0 ST array). Pour la détection des voies métaboliques gene set enrichment analysis étaient utilisé. Résultats. – Les résultats que nous avons obtenus concernant le rôle signal des de la leucine mettent en évidence : a- La leucine ne modifie pas la transduction du signal insuline au niveau de la PIRS1 et P-Akt. b- Les fortes concentrations en acides aminés stimulent toutes les étapes de la synthèse des protéines (transcription, traduction et modification post-traductionnelles). Conclusion. – Les AA, à des concentrations physiologiques similaires à celles observées dans la veine porte 2 heures après l’ingestion d’un repas riche en protéines, modifient toutes les étapes de la synthèse des protéines. Une grande partie des effets des AAsur les voies métabolique dans le foie peut être expliquée par la leucine ce qui confirme le rôle signal de la leucine. La leucine, à court terme, ne modifie pas la transduction du signal insuline. Référencesþ: 1. Lavigne et al. American journal of physiology 278, E491-500. (2000). 2. Patti, et al. J Clin Invest 101, 1519-1529. (1998). 3. Tremblay andMarette, The Journal of biological chemistry 276, 3805238060 (2001). 4. Nair and Klionsky, The Journal of biological chemistry 280, 41785-41788 (2005). 5. Xiao, F. et al. Diabetes 60, 746-756 (2011). 6. Zhang, et al. Diabetes 56, 1647-1654 (2007).
P059 Le lipido-récepteur intestinal CD36 et sa cascade de signalisation ERK1/2 dépendante contrôle la synthèse des chylomicrons V. Traynard1,*, T. Thi Thu Tran1, P. Besnard1, N. Khan1, H. Poirier1, I. Niot1 1Équipe Physiologie de la Nutrition et Toxicologie (NUTox), UMR U866, INSERM / Université de Bourgogne / AgroSup Dijon, Dijon, France Introduction et but de l’étude. – L’intestin est capable d’adapter sa capacité d’absorption à la teneur en lipide du régime. Cette
adaptation implique un système de détection des lipides au niveau entérocytaire. Le CD36, qui est une glycoprotéine transmembranaire liant avec une forte affinité les acides gras à longue chaîne (AGLC), pourrait jouer ce rôle. En effet, ex vivo, la présence d’AGLC est associée à une activation de la voie ERK1/2 et conduit à l’induction de protéines clés du métabolisme intestinal des lipides : l’ApoB48 et la MTP. Cette régulation est CD36 dépendante (Tran et al. 2011). De plus, la déficience de CD36 est associée chez l’Homme et l’animal à une altération de la sécrétion des chylomicrons (Masuda et al, 2008 ; Drover et al, 2005). L’objectif de ce travail est de démontrer que 1) CD36 intestinal est un récepteur qui déclenche l’activation de la voie ERK1/2 par liaison avec ses ligands, 2) l’activation des ERK1/2 est à l’origine de l’induction des protéines clés de la synthèse des chylomicrons. Matériel et méthodes. – Pour étudier le rôle du CD36 au niveau intestinal, une méthode ex vivo de culture de segments jéjunaux a été développée chez des souris sauvages et CD36 (-/-). L’expression des protéines intestinales impliquées dans l’absorption des lipides ainsi que des ERK kinases ont été étudiée par Western Blotting et celle des gènes par qPCR. Les segments intestinaux ont été traités soit avec de l’acide linoléique (750 μM), soit avec un ligand de CD36, le Sulfo-N-succinimidyl-Oleate (SSO, 100 μM) pendant 5, 20 et 45 minutes. Afin d’évaluer la contribution des ERK1/2, les segments ont été traités avec un inhibiteur spécifique de ces kinases, le U0126 (10 μM). Pour compléter l’approche ex vivo, des souris CD36 (-/-) ou ERK1(-/-) ont été gavées avec 0,5 ml d’huile Isio4 en présence ou absence de tyloxapol (500 mg/kg). L’expression des protéines impliquées dans la synthèse des chylomicrons (MTP, Apobec1, L-FABP) a été mesurée au niveau jéjunal après 6 h de gavage ainsi que la triglyceridémie. Résultats. – Le SSO déclenche l’activation des ERK1/2 et l’induction de l’ApoB48 au niveau des segments de souris sauvages. L’absence d’effet du SSO sur les segments des souris CD36 (-/-) démontre que le SSO est spécifique du CD36 et de sa signalisation. Le traitement des segments intestinaux avec un inhibiteur des ERK conjointement avec l’acide gras, abolit l’induction de la protéine ApoB48 et des ARNm Apobec-1 et L-FABP. Enfin, la charge en lipide conduit à une perte d’induction de la MTP chez les souris CD36 (-/-) et de la L-FABP chez les souris CD36 (-/-) et ERK1 (-/-). Les deux types de souris transgéniques gavées avec l’huile en présence de tyloxapol présentent une altération des quantités d’ApoB48 et de triglycérides plasmatiques. Conclusion. – CD36 est un lipido-récepteur à l’origine d’une signalisation ERK1/2 dépendante, permettant à l’entérocyte d’adapter ses capacités d’absorption à la teneur en lipides du régime. En situation d’alimentation riche en lipides, ce système de sensing intestinal des lipides alimentaires pourrait contribuer à la mise en place de l’obésité.
P060 Étude comparative par immunolocalisation des lipido-récepteurs CD36 et GPR120 dans la papille caliciforme de souris D. Ancel1,*, P. Passilly-Degrace1, C. Schneider2, A. Bernard 1, C. Martin1, P. Besnard1 1 Laboratoire NUTox, UMR U866 INSERM/Université de Bourgogne/AgroSup Dijon, 2 UMR INRA 1347 agroécologie, INRA, Dijon, France