P1-13 GSK3β, PP2A, Protéines Tau et Neuroprotection

R e v u e Neurol o g i q ue 165 (2009) 53 - 64

peroxydases sur les lipides). Plus de 3000 plaques provenant de 3 cas (Braak VI) ont été comparées à 3 000 échantillons de neuropile sans plaque, provenant des mêmes prélèvements de la circonvolution temporale supérieure, microdisséqués dans les mêmes conditions. Un standard interne d’un isotope lourd de cholestérol a été ajouté à l’échantillon pour permettre la quantification. Résultats : La concentration de cholestérol libre était de 4.25 +/- 0.18 attomoles/μm3 dans les plaques séniles et de 2.2 +/0.86 attomoles/μm3 (p<0,0009) dans le neuropile avoisinant. Le nombre de molécules de cholestérol par plaque sénile n’était pas statistiquement différent du nombre de molécules de peptide Abêta. Conclusions : Le rapport molaire 1/1 entre le cholestérol libre et le peptide Abêta au sein des plaques séniles suggère une interaction directe. Du point de vue quantitatif, il est surprenant de constater que le cholestérol libre est aussi abondant dans la plaque sénile que le peptide Abêta lui-même.

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de la GSK3β par hairpin siRNA dans le neuroblastome SH SY5Y. Parallèlement, nous avons développé un modèle de “ pathologie de tau in vitro ” associée à une dégénérescence neuronale. Ce modèle est basé sur l’inhibition de la PP2A par l’OKA qui induit une hyperphosphorylation de tau associée à une apoptose neuronale. A l’heure actuelle, nous criblons de nouveaux inhibiteurs de GSK3β et autres kinases de tau (fournis par le Dr L. Meijer, France). Ces données révèlent que GSK3β agit à la fois sur le niveau de phosphorylation de tau mais également sur le niveau d’expression de la protéine tau, que PP2A régule les effets de la GSK3β sur tau. De plus, notre modèle in vitro nous permet de cribler et de sélectionner des inhibiteurs bloquant à la fois l’apoptose neuronale et l’hyperphosphorylation de tau. Pour étudier le rôle de tau dans ce modèle d’apoptose, nous utiliserons des cultures primaires de neurones corticaux issus d’embryons de souris KO pour tau.

P1-14 Atrophie cérébrale et altérations cognitives chez le microcèbe, un modèle primate du vieillissement cérébral

L. Martin et F. Terro J.-L. Picqa, F. Aujardb, A. Volkc et M. Dhenaind Faculté de Médecine, 2 rue du Dr Raymond Marcland, 87025 Limoges, France Dans les tauopathies telles que la maladie d’Alzheimer, les mécanismes moléculaires de l’agrégation de la protéine tau et leurs contributions au processus de neurodégénérescence restent inconnus. De récentes études ont montré que la protéine tau indépendamment de son état de phosphorylation et de son aggrégation joue a elle seule un rôle dans la dégénérescence neuronale. Ainsi, la réduction du niveau de tau pourrait représenter un mécanisme neuroprotecteur. Les mécanismes moléculaires qui régulent le niveau de tau sont mal connus. Nous avons étudié le rôle de deux enzymes clés de la régulation de la phosphorylation de tau, la Glycogène Synthétase Kinase 3β (GSK3β) et la Protéine Phosphatase-2A (PP2A), dans la modulation du niveau de la protéine tau et la mort neuronale. Pour cela, des cultures de neurones corticaux d’embryons de rat ont été exposées au lithium (2,5-7,5mM, 8h) et au 6-bromoindirubin-3’-oxime (6BIO, 2,5-10,0μM, 8h), deux inhibiteurs de la GSK3β ou à l’acide okadaïque (OKA, 1,5-25,0nM, 8h), un inhibiteur de la PP2A. L’invalidation par shRNA et la sur-expression de la GSK3β ont été réalisées dans le neuroblastome humain SH SY5Y. Le niveau de tau et la mort cellulaire ont été analysés par western-blots et imunofluorescences. Nous avons démontré que l’exposition de cultures corticales de neurones au lithium et le 6-BIO, 2 inhibiteurs de la GSK3β, diminuaient spécifiquement le niveau de la protéine tau. Ces résultats ont été confirmés en invalidant l’expression

Laboratoire de Psychopathologie et de Neuropsychologie Université Paris 8, 2 rue de la liberté, 93000 St Denis, France ; bCNRS UMR 7179, MNHN, 4 avenue du Petit Château, 91800 Brunoy, France ; cInstitut Curie, U759 INSERM, Centre Universitaire d’Orsay, Labo 112, 91405 Orsay cedex, France ; dCEA, DSV, I2BM, MIRCen, URA CEA CNRS 2210, 18 rue du panorama, 92265 Fontenay-aux -Roses cedex, France a

Introduction : Atrophies cérébrales et déficits cognitifs sont des manifestations fréquentes du vieillissement humain. La présente étude a utilisé l’imagerie par résonance magnétique nucléaire (IRM) in vivo pour décrire l’atrophie cérébrale régionale associée au vieillissement chez un petit primate, le microcèbe (Microcebus murinus). Une partie des animaux analysés en IRM a également été soumise à divers tests comportementaux afin de rechercher les éventuelles corrélations entre atrophie cérébrale et altérations cognitives. Matériel et méthodes : Un groupe de 34 microcèbes, 23 formant le groupe âgé et 11 le groupe jeune, a été soumis à un examen IRM. Une analyse morphométrique des cerveaux a été menée sur les images ainsi obtenues afin d’évaluer le volume intracrânien global et celui des quatre structures suivantes : hippocampe, noyau caudé, région septale et splénium du corps calleux. L’épaisseur de 12 aires corticales a également été mesurée. Des tests destinés à évaluer les fonctions exécutives (renversement et changement de critère de discrimination) et la mémoire spatiale (test de Barnes) ont permis d’évaluer les performances cognitives de 16 microcèbes (11 appartenant au groupe âgé et 5 au groupe jeune).