- Email: [email protected]
Raport z badań ogólnopolskich w neutropenii wrodzonej: nowe defekty genetyczne w patogenezie choroby
acta haematologica polonica 46s (2015) 76–82
79
Cel: Celem projektu była próba zaprojektowania testu diagnostycznego w systemie real-time PCR, który umożliwia identyfikację 5 najczęściej występujących gatunków Candida spp. w oparciu o sondy Bi-probe z pominięciem długotrwałych hodowli. Materiał i metody: Do analizy użyto 15 próbek szczepów pobranych od pacjentów, u których podejrzewano zakażenia grzybicze. DNA izolowano wg standardowych protokołów. Do reakcji real-time PCR użyto starterów Cand-F-CCTGTTTGAGCGTCGTTT oraz ITS-R-ATATCAATAAGCGGAGGA oraz sondy 5'-Cy5-CATTGCTTGCGGCGGTA-biotyna-3'. Do reakcji użyto zestawu MasterMix SYBR Green I celem zapewnienia identyfikacji gatunków grzybów niehybrydyzujących z zaprojektowaną sondą. Wyniki: Użyta sonda pozwoliła na skuteczną identyfikację 13 z 15 badanych szczepów grzybiczych. W pozostałych dwóch przypadkach system wykazał zakażenie gatunkiem Candida dubliniensis, co potwierdziła analiza sekwencyjna. Wnioski: Nasze badania wykazały, że test identyfikujący pięć najczęściej występujących Candida spp. może znaleźć zastosowanie kliniczne jako prosty i szybki test przesiewowy. Poza identyfikacją znanych gatunków pozwala on na wskazanie zakażenia innymi grzybami patogennymi i może stać się w przyszłości ważnym narzędziem we wczesnej diagnostyce zakażeń grzybiczych w hematoonkologii. http://dx.doi.org/10.1016/j.achaem.2015.07.159
Raport z badań ogólnopolskich w neutropenii wrodzonej: nowe defekty genetyczne w patogenezie choroby A. Jasińska 1,*, M. Borowiec 2, K. Kałwak 3, M. Klaudel-Dreszler 4, L. Chełmecka-Hanusiewicz 5, K. WachowiakSzajdak 6, B. Kaczorowska-Hać 7, I. Karpińska-Derda 8, A. Lewandowicz-Uszyńska 9, K. Mycko 1, W. Młynarski 1 1 Klinika Pediatrii, Onkologii, Hematologii i Diabetologii, Uniwersytet Medyczny w Łodzi, Polska 2 Katedra Genetyki Klinicznej i Laboratoryjnej, Uniwersytet Medyczny w Łodzi, Polska 3 Klinika Transplantacji Szpiku, Onkologii i Hematologii Dziecięcej, Uniwersytet Medyczny we Wrocławiu, Polska 4 Klinika Gastroenterologii, Hepatologii i Immunologii IPCZD, Warszawa, Polska 5 Klinika Onkologii i Hematologii Dziecięcej, CM UJ, Kraków, Polska 6 Klinika Onkologii, Hematologii I Transplantologii Pediatrycznej, UMK w POznaniu, Polska 7 Klinika Pediatrii, Hematologii i Onkologii, Gdański Uniwersytet Medyczny, Polska 8 Chorzowskie Centrum Pediatrii i Onkologii, Polska 9 Oddział Immunologii Klinicznej i Pediatrii, Wrocław, Polska *Autor prezentujący i do korespondencji. Adres email: [email protected] Słowa kluczowe: wrodzona neutropenia, HSCT, badanie genetyczne Wprowadzenie: Ciężka wrodzona neutropenia (SCN) jest rzadką przyczyną pierwotnego niedoboru odporności. Zidentyfikowano dotąd liczne geny zaangażowane w patogenezę tej choroby. Cel pracy: Celem pracy była identyfikacja mutacji odpowiedzialnych za wystąpienie wrodzonej neutropenii u dzieci w populacji polskiej. Materiał i metody: Do badania zakwalifikowano 64 pacjentów z podejrzeniem wrodzonej neutropenii z różnych ośrodków hematologii dziecięcej w Polsce, w latach 2009–2014. W zależności od wskazań klinicznych, metodą bezpośredniego sekwencjonowania DNA analizowano mutacje genów ELANE, HAX1, GFI1, WAS, CD40L, CXCR4, G6PC3, GATA2 i JAGN1. Wyniki: U 17 pacjentów zidentyfikowano podłoże genetyczne neutropenii. U 1 pacjenta potwierdzono zespół hiper-IgM (mutacja Y172C genu CD40L). U 13 pacjentów zidentyfikowano mutację genu ELANE; u 3 rozpoznano cykliczną neutropenię, u 10 SCN typu 1 (SCN1). Czworo dzieci (z mutacjami G185R, C42W, G193fs_insGGAGG) ze względu na ciężki przebieg kliniczny lub oporność na G-CSF zostało poddanych allo-HSCT. U 1 pacjenta rozpoznano SCN4 (mutacja Gly113Glu genu G6PC3). U 1 pacjenta z opornością na G-CSF zidentyfikowano mutację genu JAGN1 (Glu21Asp, SCN6). U jednej pacjentki z obrazem mielokateksji neutropenia spowodowana była mutacją Q353X genu GATA2. Pacjenci, u których znaleziono genetyczną przyczynę neutropenii, nie różnili się od pozostałych pod względem wieku rozpoznania ani wyjściowej liczby neutrofili, charakteryzowali się natomiast niższym odsetkiem linii granulocytarnej w szpiku kostnym (27,3 20% vs 46 19,6%, p = 0,018). Istotnie częściej stwierdzano u nich charakterystyczne dla neutropenii infekcje (100% vs 79% pacjentów, p = 0,04). Ponadto większy odsetek w porównaniu z pacjentami bez mutacji przebył posocznicę (47% vs 6,4%, p = 0,007). Wnioski: Pacjenci z genetycznie uwarunkowaną neutropenią charakteryzują się niższym odsetkiem linii granulocytarnej w szpiku kostnym; częściej obserwuje się u nich typowe infekcje o ciężkim przebiegu. Najczęstszą przyczyną SCN u dzieci w populacji polskiej są mutacje genu ELANE. Niewrażliwość na G-CSF, która może być wskazaniem do HSCT, obserwuje się u pacjentów z mutacjami ELANE oraz JAGN1. http://dx.doi.org/10.1016/j.achaem.2015.07.160
79
Cel: Celem projektu była próba zaprojektowania testu diagnostycznego w systemie real-time PCR, który umożliwia identyfikację 5 najczęściej występujących gatunków Candida spp. w oparciu o sondy Bi-probe z pominięciem długotrwałych hodowli. Materiał i metody: Do analizy użyto 15 próbek szczepów pobranych od pacjentów, u których podejrzewano zakażenia grzybicze. DNA izolowano wg standardowych protokołów. Do reakcji real-time PCR użyto starterów Cand-F-CCTGTTTGAGCGTCGTTT oraz ITS-R-ATATCAATAAGCGGAGGA oraz sondy 5'-Cy5-CATTGCTTGCGGCGGTA-biotyna-3'. Do reakcji użyto zestawu MasterMix SYBR Green I celem zapewnienia identyfikacji gatunków grzybów niehybrydyzujących z zaprojektowaną sondą. Wyniki: Użyta sonda pozwoliła na skuteczną identyfikację 13 z 15 badanych szczepów grzybiczych. W pozostałych dwóch przypadkach system wykazał zakażenie gatunkiem Candida dubliniensis, co potwierdziła analiza sekwencyjna. Wnioski: Nasze badania wykazały, że test identyfikujący pięć najczęściej występujących Candida spp. może znaleźć zastosowanie kliniczne jako prosty i szybki test przesiewowy. Poza identyfikacją znanych gatunków pozwala on na wskazanie zakażenia innymi grzybami patogennymi i może stać się w przyszłości ważnym narzędziem we wczesnej diagnostyce zakażeń grzybiczych w hematoonkologii. http://dx.doi.org/10.1016/j.achaem.2015.07.159
Raport z badań ogólnopolskich w neutropenii wrodzonej: nowe defekty genetyczne w patogenezie choroby A. Jasińska 1,*, M. Borowiec 2, K. Kałwak 3, M. Klaudel-Dreszler 4, L. Chełmecka-Hanusiewicz 5, K. WachowiakSzajdak 6, B. Kaczorowska-Hać 7, I. Karpińska-Derda 8, A. Lewandowicz-Uszyńska 9, K. Mycko 1, W. Młynarski 1 1 Klinika Pediatrii, Onkologii, Hematologii i Diabetologii, Uniwersytet Medyczny w Łodzi, Polska 2 Katedra Genetyki Klinicznej i Laboratoryjnej, Uniwersytet Medyczny w Łodzi, Polska 3 Klinika Transplantacji Szpiku, Onkologii i Hematologii Dziecięcej, Uniwersytet Medyczny we Wrocławiu, Polska 4 Klinika Gastroenterologii, Hepatologii i Immunologii IPCZD, Warszawa, Polska 5 Klinika Onkologii i Hematologii Dziecięcej, CM UJ, Kraków, Polska 6 Klinika Onkologii, Hematologii I Transplantologii Pediatrycznej, UMK w POznaniu, Polska 7 Klinika Pediatrii, Hematologii i Onkologii, Gdański Uniwersytet Medyczny, Polska 8 Chorzowskie Centrum Pediatrii i Onkologii, Polska 9 Oddział Immunologii Klinicznej i Pediatrii, Wrocław, Polska *Autor prezentujący i do korespondencji. Adres email: [email protected] Słowa kluczowe: wrodzona neutropenia, HSCT, badanie genetyczne Wprowadzenie: Ciężka wrodzona neutropenia (SCN) jest rzadką przyczyną pierwotnego niedoboru odporności. Zidentyfikowano dotąd liczne geny zaangażowane w patogenezę tej choroby. Cel pracy: Celem pracy była identyfikacja mutacji odpowiedzialnych za wystąpienie wrodzonej neutropenii u dzieci w populacji polskiej. Materiał i metody: Do badania zakwalifikowano 64 pacjentów z podejrzeniem wrodzonej neutropenii z różnych ośrodków hematologii dziecięcej w Polsce, w latach 2009–2014. W zależności od wskazań klinicznych, metodą bezpośredniego sekwencjonowania DNA analizowano mutacje genów ELANE, HAX1, GFI1, WAS, CD40L, CXCR4, G6PC3, GATA2 i JAGN1. Wyniki: U 17 pacjentów zidentyfikowano podłoże genetyczne neutropenii. U 1 pacjenta potwierdzono zespół hiper-IgM (mutacja Y172C genu CD40L). U 13 pacjentów zidentyfikowano mutację genu ELANE; u 3 rozpoznano cykliczną neutropenię, u 10 SCN typu 1 (SCN1). Czworo dzieci (z mutacjami G185R, C42W, G193fs_insGGAGG) ze względu na ciężki przebieg kliniczny lub oporność na G-CSF zostało poddanych allo-HSCT. U 1 pacjenta rozpoznano SCN4 (mutacja Gly113Glu genu G6PC3). U 1 pacjenta z opornością na G-CSF zidentyfikowano mutację genu JAGN1 (Glu21Asp, SCN6). U jednej pacjentki z obrazem mielokateksji neutropenia spowodowana była mutacją Q353X genu GATA2. Pacjenci, u których znaleziono genetyczną przyczynę neutropenii, nie różnili się od pozostałych pod względem wieku rozpoznania ani wyjściowej liczby neutrofili, charakteryzowali się natomiast niższym odsetkiem linii granulocytarnej w szpiku kostnym (27,3 20% vs 46 19,6%, p = 0,018). Istotnie częściej stwierdzano u nich charakterystyczne dla neutropenii infekcje (100% vs 79% pacjentów, p = 0,04). Ponadto większy odsetek w porównaniu z pacjentami bez mutacji przebył posocznicę (47% vs 6,4%, p = 0,007). Wnioski: Pacjenci z genetycznie uwarunkowaną neutropenią charakteryzują się niższym odsetkiem linii granulocytarnej w szpiku kostnym; częściej obserwuje się u nich typowe infekcje o ciężkim przebiegu. Najczęstszą przyczyną SCN u dzieci w populacji polskiej są mutacje genu ELANE. Niewrażliwość na G-CSF, która może być wskazaniem do HSCT, obserwuje się u pacjentów z mutacjami ELANE oraz JAGN1. http://dx.doi.org/10.1016/j.achaem.2015.07.160