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Session 23 Biologie moléculaire des virus et surveillance transfusionnelle
Communications
SESSION 23
Biologie moleculaire des virus et surveillance transfusionnelle Sympos (S) Moderateurs : J.J. Lefrere, B. Mercier
S23-1 Haute prevalence du virus 11 cbez les donneun de sanl: importance du systeme d'amplification. P. Biagini), P. Gallian', H. Anouil , M. Touinssi l , J.F. Cantaloube', JP. l 2 lapitelli l , X. de Lamballerie1 • P. de Micco . . (I) Laboratotr« de Virologl'Moltcl/lalr" EFS "Alpes-Medlterranee", /019, Bd Bailie, JJOOS Marseille; /2J Unlit des Vlf'IIs Emergents. FOCI/IIi de Mideclne, 27, Bd J. Moulin, JJOOS MarseIlle. Le virus TT (1TV) est un virus nouvellement decrit. non enveloppC et compose d'un genome' ADN cireulaire simplebrin, qui pounait etre ctasse dans Ia fanulle des Circoviridae. Les premieres etudes epidcmiologiqllC$ reaJis6es par PCR ont pu montrer que Ie TTY el3Jt present sur plusleurs continents, a la (ois chez des populations • nsque mais egalement chez des Individus ne prescntant aucune pathologic apparcnte. Cependant, l'anaIyse del la litterature reveled'impoItaDtes disparites dans les prevalences observCes, probablement dues' des protocoles d'amplitication non optimis6s. En e1Tet. les eludes mol6culaires ont pu mettre en evidence un grand nombre dt genotypes du virus bases sur l'anaIyse de la variabihte gcnomique du 11V dans ses 2 ORFs pnnclpalea. ainS! que la presence de populations virales diverses dans un memel!chantillon sanguin. Dans un premier temps, une population de donneurs de sang (n-289) a etc testee• I'aidede 3 systemes d'amorces s6lectionncs dans diverses zonesdu genome viral CI associes • une methode d'bybridation en microplaques. La prevalence finalea alteint 800/. mais avec seulement 27.So/. de cas confirmes simultanement par les 3 systemes (1). Ccci nousa conduit dans un secondtemps, grice 'I'etude de genomes complelS du TTY bautement divergents, a detinir 2 systemes d'amorcelplus performanll silues dans des regions (ortement conservees du genome viral. Celieapprocbe I etc reaJi~ en s'appuyant sur les di1J'erentes s6quences dispombles dans lesbanques de donnees maisegalcment grAce aux genomelcomplets oblenus dans notrelaboraloire, avecnotamment la miseau pointd'une technique simplede sequen~ge des zonesrichesen G+C (1) Bineini et coll..Transfusion 2000$OilS press'
Transfus Clin Bioi 2000 ; 3
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S23·2 Incidence de "hipatite C apres autognffe de moeDe cbez des enfaots indus entre 1985 et 1987dans une etude raodomisee comparant traosfusion de plaquettes en preventilvenus curatif. N. Oubouzar,O. Hartmann. E. Dussaix·, E . Benhamou, D. TramalIoni, D. Valteau~uanet, V. Lapierre InstiM Gustave Roussy, ·HopltaJ POIII B1'OII5#, nlleJl/lf D'octobre 1985 • navembre 1987 nous avons mcne une etude randomis6e camparanl Ia transfusion de p1aquettes en prCventlf versus CIU'lII1f aprl!s autogreffe de moelle osseuse chez l' enfant. La periode de eeue etude CtanI • haut risque d'bCpatite C post-transfusionnelle, nous avons controJe en 1999 les serwns post-greffe de 66 wants stin de dttennincr 51 une des deux stratCgies transfusionne1les etait associ6e • un risqueinfectieux plus eleW. Les s6rwns ont etC testes systema!iquemcnt en ELISA 3- generatioD (Elysia. Ortho diagnostic) et en PCRARN (Test Cobas Amplioor HCV V2.0, Roche Diagnostic). La mCdiane du deIai entre Ia demie.e transfusion et Ie serum etait de 3 mois (extrtmes: 1-181- La PCRARN s'est revelee positive pour28 wants (420/.), 12/30 dans Ie bras prl!ventifversus 16136 dans Ie bras curatif (P-NS). La moyenne du nombre de concelllrCs de pIalp:Ues II
S23·3 Interet. de "analyse phylogenetique du gene El du virus de I'hipatite C dans les enquetts post transfusionntlles. J-F. CanraJoube. H. Venault, J·P. lapiteUi. P. 0aD.ian, X. de Lamballerie, P. deMicco.
E.F.S. Alpes·MUlImanee, J49 bd Bailie JJ(}()S Mar#lIk Le virus de I'bCpatite C a etC souvent implique dans des contanunations llanSfusionnelles. Jusqu'en 1990, aueun test de dCpistage De penneDait d'elimmer ce virus de la qualification du don. On est.une• environ 200000 Ie nombred'hl!patitO$ C post-trans1'ustonneUes. eo France. Le Iaboratoire de Biologie .Moll!culaire de rEFS A1pes-MCditerTaMCe genOlypc CI sequence systemauquement tous les produits de PCR positifs obtenus • parur d'l!chantillons de donneurs et de recevcurs. Des l!chantillons ont ~\I! obtenus• partir de 20 paires de donncurs de sang et de leurs receveurs respcctifs. Los IOIJCbes virales ont ete genotyp6es par s6qucn~ge dans la region S' non
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Communications
S23·4
Un cas de seroconverslon tardive reveh! par biologie moleculaire sur un don desang. F. D~,B.DAJaC,R.TARDrvEL,A.BEAUPLET
E.F.S. Bretagne Rue Pierre Jean Gtnest« 35000 RENNES Lors dudepistage duvirus del'hepatite C (VHC) partechnique de biologie moleculaire sur le plasma destine au fractionnement par Ie Laboratoire Francais du Fractioenement et des Biotechnologies, iI est mis en evidence lapresence d'ARN duVHC surunprelevement de 1997. Cette decouverte conduit Arealiser une enquete d'hemovigilance sur les dons effectues precedemment (1997-1988). Des contrOles re~iers chez Ie donneur et unsuivi onteteeffectul!s durant ces 3 annees. L ensemble des trousses ELISA depistant I'anticorps antiVHC revl!le une seronegativitl! pendant 28 mois. Le cas est declare « Immunosilencieux '. L'enquete d'hl!moviltilance (1988·1997), revele une periode de contamination entre 1~95 et 1997, et une periode dllliciJe d'interpretation entre 1988 et 1995. II est a noter que 4 des 5 receveurs de 1988 sont actuellement seronegatifs. Le bilan complementaire revc!le une reaction immunitaire humorale normale vis-a-vis de nombreux ~ermes ubiquitaires (Varicelle, Zona, Herpes I et 2, Toxoplasmose Gondii), et unbilan hepatique et immunitaire normal. L'etar de tolerance immunitaire constate vis-a-vis du VHC n'est pas lie a une contamination matemo-foetale (Ia serologie et la viremie matemelles sont negatives pour Ie VHC). L'hypothese retenue est un trou dans Ierepertoire immunitaire. En janvier 2000, unnouveau controle esteffectue mettant enevidence: un ELISA positif vis-a-vis du VHC (Ortho ratio: 4,2 et B10RAD, ratio: 3,6) avec une bande C22 + ++, surIe Riba Ortho 3.0. Les transaminases sont augmenlees de 18 i 36. Une hospitalisation, afin de pratiquer une paH, est prevue et une analyse comparative des sequences d'ARN du VHe sur differents prelevements entre 1998 et 2000, sont en cours de realisation.
SESSION 24
Diagnostic prenatal et prophsjlaxie MHNN Sympos (S)
Moderateurs : C. Kaplan, L. Mannessier Posters (P)
S24·1 lenal dus Ie plasma des lemmes enceintes Rh nqatil (Etude pr6-dla&Dostique de 181 cas)
G~notypage RllD
C. Rouillacl , P. PuiDandre I, Colin y 2, LeVan Kim~, CartronJr, Y. Brouard l , F Pamd-Mathiel
'Centn HemohlologN PIrInaJak, Paris,t llNSERM U76-JNTS. Pam. Le plasma des femmes enceintes contient de I'ADN f~ en concentralion croissante avec: Ie lermegestalionnel Le gen0typ4ge btaJ RHD dans Ie I&IIg des meres Rh-negatif devienl ainsi possible el iI est per~ comme une avance. imporlante pour Ie IUivi des patientes inumlniseea, pour Ie ciblage de l'immunopropbyIax Rh lIIlenatale el pour I'epargne de RAJ prenatales. Sa validaliOll doit M exigeante ear I'ADN btaJ est en faible concentralion el Ie gene RHCEDe peu1 M exploi\l! commelemoin de .. pRsence. A ee jour, Ie plasma de 182 femmes Rh-negatif • ele leste [137 CIt r6trospectifs avec plasma heparinO el 4S CIt prospeclifa avec plasma EDTA). L'ADN p1lS11lalique est purdie eI coocentJ'e lUI' microcolonnes QIamp puia amplifie dansdeuxregions distinc:tes dugene RHD(exoDl7 elIO). Lea r6sultats obtenus • differenlS termes (SA- IIemaine d'arnenonnee) confrOnlts au pbenolype 6rythrocytaire eI au aCnolype des amniocytea IOnl les suivanta'
Terme EIIkie Re~ctM EJuJe Prospecnv« SA Pos Nell Discordances Total Pos Nell Discordances Total 8 ·14 6 6 0 t4-17 4 12 8 18·24 27 IS 3 faux· 4S 4 1 faux + 6 11 24·29 0 7 6 I faux + >30 6S 27 1 faux +. 9 92 8 t Au lotal 96% des CIt IOnt concordanta. On reloeve 3 faux + [I conlanunaUon el 2 genes RHD aileocieux (t maJerneI, 1 blal)] el 3 faux - [probablemenl par actioa inhibitrice deI'heparine] Parmi lea rtsuJwa politifs,8 (donl S < 18 SA) etaienl poaitifa IIIIiquemenl avec: Ia PCJl exon 7 L'oojectif 100 % de lensibilile' partir de t2 SA pvallacceuible pour Ie a6notypage RHD politi£.
Transfus Clin Bioi 2000 ; 3
SESSION 23
Biologie moleculaire des virus et surveillance transfusionnelle Sympos (S) Moderateurs : J.J. Lefrere, B. Mercier
S23-1 Haute prevalence du virus 11 cbez les donneun de sanl: importance du systeme d'amplification. P. Biagini), P. Gallian', H. Anouil , M. Touinssi l , J.F. Cantaloube', JP. l 2 lapitelli l , X. de Lamballerie1 • P. de Micco . . (I) Laboratotr« de Virologl'Moltcl/lalr" EFS "Alpes-Medlterranee", /019, Bd Bailie, JJOOS Marseille; /2J Unlit des Vlf'IIs Emergents. FOCI/IIi de Mideclne, 27, Bd J. Moulin, JJOOS MarseIlle. Le virus TT (1TV) est un virus nouvellement decrit. non enveloppC et compose d'un genome' ADN cireulaire simplebrin, qui pounait etre ctasse dans Ia fanulle des Circoviridae. Les premieres etudes epidcmiologiqllC$ reaJis6es par PCR ont pu montrer que Ie TTY el3Jt present sur plusleurs continents, a la (ois chez des populations • nsque mais egalement chez des Individus ne prescntant aucune pathologic apparcnte. Cependant, l'anaIyse del la litterature reveled'impoItaDtes disparites dans les prevalences observCes, probablement dues' des protocoles d'amplitication non optimis6s. En e1Tet. les eludes mol6culaires ont pu mettre en evidence un grand nombre dt genotypes du virus bases sur l'anaIyse de la variabihte gcnomique du 11V dans ses 2 ORFs pnnclpalea. ainS! que la presence de populations virales diverses dans un memel!chantillon sanguin. Dans un premier temps, une population de donneurs de sang (n-289) a etc testee• I'aidede 3 systemes d'amorces s6lectionncs dans diverses zonesdu genome viral CI associes • une methode d'bybridation en microplaques. La prevalence finalea alteint 800/. mais avec seulement 27.So/. de cas confirmes simultanement par les 3 systemes (1). Ccci nousa conduit dans un secondtemps, grice 'I'etude de genomes complelS du TTY bautement divergents, a detinir 2 systemes d'amorcelplus performanll silues dans des regions (ortement conservees du genome viral. Celieapprocbe I etc reaJi~ en s'appuyant sur les di1J'erentes s6quences dispombles dans lesbanques de donnees maisegalcment grAce aux genomelcomplets oblenus dans notrelaboraloire, avecnotamment la miseau pointd'une technique simplede sequen~ge des zonesrichesen G+C (1) Bineini et coll..Transfusion 2000$OilS press'
Transfus Clin Bioi 2000 ; 3
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S23·2 Incidence de "hipatite C apres autognffe de moeDe cbez des enfaots indus entre 1985 et 1987dans une etude raodomisee comparant traosfusion de plaquettes en preventilvenus curatif. N. Oubouzar,O. Hartmann. E. Dussaix·, E . Benhamou, D. TramalIoni, D. Valteau~uanet, V. Lapierre InstiM Gustave Roussy, ·HopltaJ POIII B1'OII5#, nlleJl/lf D'octobre 1985 • navembre 1987 nous avons mcne une etude randomis6e camparanl Ia transfusion de p1aquettes en prCventlf versus CIU'lII1f aprl!s autogreffe de moelle osseuse chez l' enfant. La periode de eeue etude CtanI • haut risque d'bCpatite C post-transfusionnelle, nous avons controJe en 1999 les serwns post-greffe de 66 wants stin de dttennincr 51 une des deux stratCgies transfusionne1les etait associ6e • un risqueinfectieux plus eleW. Les s6rwns ont etC testes systema!iquemcnt en ELISA 3- generatioD (Elysia. Ortho diagnostic) et en PCRARN (Test Cobas Amplioor HCV V2.0, Roche Diagnostic). La mCdiane du deIai entre Ia demie.e transfusion et Ie serum etait de 3 mois (extrtmes: 1-181- La PCRARN s'est revelee positive pour28 wants (420/.), 12/30 dans Ie bras prl!ventifversus 16136 dans Ie bras curatif (P-NS). La moyenne du nombre de concelllrCs de pIalp:Ues II
S23·3 Interet. de "analyse phylogenetique du gene El du virus de I'hipatite C dans les enquetts post transfusionntlles. J-F. CanraJoube. H. Venault, J·P. lapiteUi. P. 0aD.ian, X. de Lamballerie, P. deMicco.
E.F.S. Alpes·MUlImanee, J49 bd Bailie JJ(}()S Mar#lIk Le virus de I'bCpatite C a etC souvent implique dans des contanunations llanSfusionnelles. Jusqu'en 1990, aueun test de dCpistage De penneDait d'elimmer ce virus de la qualification du don. On est.une• environ 200000 Ie nombred'hl!patitO$ C post-trans1'ustonneUes. eo France. Le Iaboratoire de Biologie .Moll!culaire de rEFS A1pes-MCditerTaMCe genOlypc CI sequence systemauquement tous les produits de PCR positifs obtenus • parur d'l!chantillons de donneurs et de recevcurs. Des l!chantillons ont ~\I! obtenus• partir de 20 paires de donncurs de sang et de leurs receveurs respcctifs. Los IOIJCbes virales ont ete genotyp6es par s6qucn~ge dans la region S' non
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S23·4
Un cas de seroconverslon tardive reveh! par biologie moleculaire sur un don desang. F. D~,B.DAJaC,R.TARDrvEL,A.BEAUPLET
E.F.S. Bretagne Rue Pierre Jean Gtnest« 35000 RENNES Lors dudepistage duvirus del'hepatite C (VHC) partechnique de biologie moleculaire sur le plasma destine au fractionnement par Ie Laboratoire Francais du Fractioenement et des Biotechnologies, iI est mis en evidence lapresence d'ARN duVHC surunprelevement de 1997. Cette decouverte conduit Arealiser une enquete d'hemovigilance sur les dons effectues precedemment (1997-1988). Des contrOles re~iers chez Ie donneur et unsuivi onteteeffectul!s durant ces 3 annees. L ensemble des trousses ELISA depistant I'anticorps antiVHC revl!le une seronegativitl! pendant 28 mois. Le cas est declare « Immunosilencieux '. L'enquete d'hl!moviltilance (1988·1997), revele une periode de contamination entre 1~95 et 1997, et une periode dllliciJe d'interpretation entre 1988 et 1995. II est a noter que 4 des 5 receveurs de 1988 sont actuellement seronegatifs. Le bilan complementaire revc!le une reaction immunitaire humorale normale vis-a-vis de nombreux ~ermes ubiquitaires (Varicelle, Zona, Herpes I et 2, Toxoplasmose Gondii), et unbilan hepatique et immunitaire normal. L'etar de tolerance immunitaire constate vis-a-vis du VHC n'est pas lie a une contamination matemo-foetale (Ia serologie et la viremie matemelles sont negatives pour Ie VHC). L'hypothese retenue est un trou dans Ierepertoire immunitaire. En janvier 2000, unnouveau controle esteffectue mettant enevidence: un ELISA positif vis-a-vis du VHC (Ortho ratio: 4,2 et B10RAD, ratio: 3,6) avec une bande C22 + ++, surIe Riba Ortho 3.0. Les transaminases sont augmenlees de 18 i 36. Une hospitalisation, afin de pratiquer une paH, est prevue et une analyse comparative des sequences d'ARN du VHe sur differents prelevements entre 1998 et 2000, sont en cours de realisation.
SESSION 24
Diagnostic prenatal et prophsjlaxie MHNN Sympos (S)
Moderateurs : C. Kaplan, L. Mannessier Posters (P)
S24·1 lenal dus Ie plasma des lemmes enceintes Rh nqatil (Etude pr6-dla&Dostique de 181 cas)
G~notypage RllD
C. Rouillacl , P. PuiDandre I, Colin y 2, LeVan Kim~, CartronJr, Y. Brouard l , F Pamd-Mathiel
'Centn HemohlologN PIrInaJak, Paris,t llNSERM U76-JNTS. Pam. Le plasma des femmes enceintes contient de I'ADN f~ en concentralion croissante avec: Ie lermegestalionnel Le gen0typ4ge btaJ RHD dans Ie I&IIg des meres Rh-negatif devienl ainsi possible el iI est per~ comme une avance. imporlante pour Ie IUivi des patientes inumlniseea, pour Ie ciblage de l'immunopropbyIax Rh lIIlenatale el pour I'epargne de RAJ prenatales. Sa validaliOll doit M exigeante ear I'ADN btaJ est en faible concentralion el Ie gene RHCEDe peu1 M exploi\l! commelemoin de .. pRsence. A ee jour, Ie plasma de 182 femmes Rh-negatif • ele leste [137 CIt r6trospectifs avec plasma heparinO el 4S CIt prospeclifa avec plasma EDTA). L'ADN p1lS11lalique est purdie eI coocentJ'e lUI' microcolonnes QIamp puia amplifie dansdeuxregions distinc:tes dugene RHD(exoDl7 elIO). Lea r6sultats obtenus • differenlS termes (SA- IIemaine d'arnenonnee) confrOnlts au pbenolype 6rythrocytaire eI au aCnolype des amniocytea IOnl les suivanta'
Terme EIIkie Re~ctM EJuJe Prospecnv« SA Pos Nell Discordances Total Pos Nell Discordances Total 8 ·14 6 6 0 t4-17 4 12 8 18·24 27 IS 3 faux· 4S 4 1 faux + 6 11 24·29 0 7 6 I faux + >30 6S 27 1 faux +. 9 92 8 t Au lotal 96% des CIt IOnt concordanta. On reloeve 3 faux + [I conlanunaUon el 2 genes RHD aileocieux (t maJerneI, 1 blal)] el 3 faux - [probablemenl par actioa inhibitrice deI'heparine] Parmi lea rtsuJwa politifs,8 (donl S < 18 SA) etaienl poaitifa IIIIiquemenl avec: Ia PCJl exon 7 L'oojectif 100 % de lensibilile' partir de t2 SA pvallacceuible pour Ie a6notypage RHD politi£.
Transfus Clin Bioi 2000 ; 3