Diagnostic moléculaire de la maladie de Gaucher en Tunisie

Pathologie Biologie 61 (2013) 59–63

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Article original

Diagnostic mole´culaire de la maladie de Gaucher en Tunisie Molecular diagnosis of Gaucher disease in Tunisia W. Cherif a,*,b, H. Ben Turkia b, F. Ben Rhouma a,c, I. Riahi b, J. Chemli d, O. Amaral e, M.C. Sa´ Miranda e, C. Caillaud f, N. Kaabachi g, N. Tebib b, S. Abdelhak a, M.F. Ben Dridi b a

Unite´ de recherche « exploration mole´culaire des maladies orphelines d’origine ge´ne´tique », institut Pasteur de Tunis, BP 74, 13, place Pasteur, Belve´de`re, 1002 Tunis, Tunisie Unite´ de recherche « de´pistage et prise en charge des maladies he´re´ditaires du me´tabolisme », service de pe´diatrie, hoˆpital La Rabta, 1007 Tunis, Tunisie Unite´ de recherche « maladies neurologiques de l’enfant », faculte´ de me´decine, 1007 Tunis, Tunisie d Service de pe´diatrie, hoˆpital Sahloul, 4011 Sousse, Tunisie e De´partement de neurobiologie ge´ne´tique, universite´ de Porto, institut de biologie mole´culaire et cellulaire, 4150-180 Porto, Portugal f Laboratoire de ge´ne´tique me´tabolique, faculte´ de me´decine de Cochin, 75014 Paris, France g Laboratoire de biochimie, hoˆpital La Rabta, 1007 Tunis, Tunisie b c

I N F O A R T I C L E

R E´ S U M E´

Historique de l’article : ˆ t 2010 Rec¸u le 20 aou Accepte´ le 20 mars 2012

La maladie de Gaucher est une maladie de surcharge lysosomale due a` un de´ficit de l’enzyme bglucosidase. Afin d’e´tudier le spectre mutationnel de cette affection en Tunisie, nous avons recherche´ les mutations re´currentes chez 30 patients. Le de´pistage des mutations re´currentes par PCR/RFLP et se´quenc¸age direct a re´ve´le´ que la mutation N370S est la plus fre´quente (44 %, 22/50 alle`les mute´s), suivie par la mutation L444P qui pre´sente une fre´quence de l’ordre de 16 % (8/50 alle`les mute´s). L’alle`le recombinant (RecNciI) a e´te´ retrouve´ chez 14 % des cas e´tudie´s. Les mutations non identifie´es dans cette e´tude repre´sentent 26 %. En outre, nos re´sultats ont montre´ que le ge´notype N370S/RecNciI est le plus fre´quent dans les formes a` re´ve´lation pe´diatrique et il est associe´ a` une atteinte visce´rale se´ve`re. La recherche de ces mutations en priorite´ fournit un outil de diagnostic mole´culaire pour la majorite´ des patients, elle permet ainsi un de´pistage des he´te´rozygotes indispensable pour le conseil ge´ne´tique. ß 2012 Elsevier Masson SAS. Tous droits re´serve´s.

Mots cle´s : Maladie de Gaucher Ge`ne GBA Diagnostic mole´culaire Population tunisienne Afrique du Nord

A B S T R A C T

Keywords: Gaucher disease GBA gene Molecular diagnosis Tunisian population North Africa

Gaucher disease is a lysosomal storage disorder caused by a deficiency of the enzyme acid b-glucosidase. In order to determine the mutation spectrum in Tunisia, we performed recurrent mutation screening in 30 Tunisian patients with Gaucher disease. Screening of recurrent mutation by PCR/RFLP and direct sequencing had shown that N370S was the most frequent mutation (22/50 mutant alleles, 44%), followed by L444P mutation, which is found in 16% (8/50 mutant alleles). The recombinant allele (RecNciI) represented 14%. Our findings revealed that the genotype N370S/RecNciI was mosst frequent in patients with childhood onset and it was associated with severe visceral involvement. The screening of these three mutations provided a simple tool for molecular diagnosis of Gaucher disease in Tunisian patients and allowed also genetic counselling for their family members. ß 2012 Elsevier Masson SAS. All rights reserved.

1. Introduction

sphingolipides, est la maladie de surcharge lysosomale la plus fre´quente avec une pre´valence estime´e a` 1/50 000 a` 1/100 000 mais dont la pre´valence atteint 1/1000 a` 1/1200 dans la population juive ashke´naze [2,3]. Elle est due a` un de´ficit en b-glucoce´re´brosidase (ou exceptionnellement de son activateur saposine C) qui catalyse la premie`re e´tape de la transformation du glucoce´re´broside en glucose et ce´ramide. Le de´ficit enzymatique entraıˆne l’accumulation du substrat dans les lysosomes des cellules du syste`me re´ticulo-endothe´lial [4]. Le diagnostic est oriente´ par la mise en e´vidence des cellules de Gaucher sur les pre´le`vements tissulaires (moelle osseuse, foie, rate). Les cellules de Gaucher prennent une

La maladie de Gaucher (OMIM 230800, 230900 et 231000) a e´te´ de´crite pour la premie`re fois en 1882 par Philippe Gaucher dans sa the`se de me´decine intitule´e « Epithe´lioma primitif de la rate, hypertrophie idiopathique de la rate sans leuce´mie » [1]. Cette maladie, conse´quence d’une erreur inne´e du me´tabolisme des

* Auteur correspondant. Adresse e-mail : [email protected] (W. Cherif). 0369-8114/$ – see front matter ß 2012 Elsevier Masson SAS. Tous droits re´serve´s. doi:10.1016/j.patbio.2012.03.006

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morphologie typique et s’accumulent dans le foie, la rate, la moelle osseuse et l’espace de Virchow Robin du cerveau, aboutissant aux principaux signes cliniques de la maladie : l’he´patome´galie, la sple´nome´galie et les complications osseuses [5]. La maladie de Gaucher pre´sente une importante variabilite´ clinique, trois phe´notypes majeurs sont classiquement distingue´s sur la base de la pre´sence ou non et la se´ve´rite´ de l’atteinte primitive du syste`me nerveux central. Le type 1 est la forme la plus fre´quente, son e´volution est chronique, sans atteinte neurologique. Le type 2 correspond a` la forme infantile, avec une atteinte neurologique d’e´volution aigue¨ et le type 3, ou la forme juve´nile, de´bute comme une maladie purement visce´rale superposable au type 1 et se comple`te dans l’enfance ou l’adolescence par une de´te´rioration neurologique d’e´volution subaigue¨ [6]. La maladie de Gaucher est transmise sur le mode autosomique re´cessif, son he´te´roge´ne´ite´ clinique est due en partie a` des mutations du ge`ne GBA qui code pour la b-glucoce´re´brosidase. Ce ge`ne est forme´ de 11 exons et s’e´tend sur une re´gion de 8,8 kb [7,8]. Depuis la de´couverte de ce ge`ne, 250 mutations ont e´te´ rapporte´es (www.hgmd.org), dont la plupart sont des mutations ponctuelles majoritairement regroupe´es entre l’exon 8 et 11. Les mutations re´currentes ponctuelles N370S, L444P et c.84insG et deux alle`les complexes RecNciI (L444P, A456P et V460 V) et RecTL (D409H, L444P, A456P et V460 V) sont les plus fre´quentes. Leur fre´quence et leur distribution sont variables selon les populations e´tudie´es. En aval du ge`ne GBA, se trouve son pseudoge`ne pGBA de taille 5kb. Il pre´sente 96 % d’homologie de se´quence avec le ge`ne

fonctionnel. Certaines mutations de´crites dans la maladie de Gaucher, notamment l’alle`le complexe RecNciI, re´sultent de re´arrangements chromosomiques complexes qui impliquent le ge`ne et son pseudoge`ne [8]. La corre´lation phe´notype-ge´notype, bien qu’imparfaite, a e´te´ retrouve´e avec certaines mutations : l’homozygotie pour la mutation L444P est corre´le´e aux formes neurologiques (type 2 et 3), alors que la mutation N370S est toujours associe´e a` la forme visce´rale (type 1) [9]. L’homoalle`lisme pour la mutation D409H a e´te´, quant a` lui, associe´ a` une atteinte cardiaque, caracte´rise´e par une calcification des valves cardiaques chez des jeunes patients [10]. L’objectif de la pre´sente e´tude est la caracte´risation mole´culaire de la maladie de Gaucher dans la population tunisienne. Dans un premier temps, nous avons cible´ des mutations re´currentes de´ja` identifie´es dans d’autres populations me´diterrane´ennes. 2. Patients, mate´riel et me´thodes Trente patients atteints de la maladie de Gaucher appartenant a` 25 familles non apparente´es et originaires de diffe´rentes re´gions de la Tunisie ont e´te´ explore´s (Tableau 1). Le diagnostic de maladie de Gaucher a e´te´ e´voque´ devant un tableau clinique caracte´rise´ essentiellement par une he´pato-sple´nome´galie, des anomalies he´matologiques et des le´sions osseuses. Le diagnostic clinique a e´te´ confirme´ chez tous les cas e´tudie´s par le dosage de l’activite´ de l’enzyme b-glucoce´re´brosidase sur leucocytes en utilisant un substrat synthe´tique fluviome´trique 4-me´thylumbelliferyl-b-d-glucopyranoside [11].

Tableau 1 Description clinique et profil mutationnel des patients. Famille

Consanguinite´

Code

Sexe

ˆ ge de A de´but

ˆ ge au A moment de l’e´tude

Organome´galie

Atteinte he´matologique

Le´sions osseuses

Atteinte Neurologique

Type

F1 F2 F3 F4

1er degre´ 3e degre´ 1er degre´ Non

F5 F6 F7 F8 F9 F10 F11

Non 1er degre´ 1er degre´ 1er degre´ Non Non 1er degre´

GBA1 GBA2 GBA3 GBA4 GBA5 GBA6 GBA7 GBA8 GBA9 GBA10 GBA11 GBA12 GBA13

F M M M F M F M F M M M M

9 mois 2 ans 14 mois 3 ans 8 ans 3 ans 2 ans 3 ans 10 mois 5 ans 5 ans 7 ans 6 ans

6 ans 10 ans 2 ans 19 ans 11 ans 15 ans 7 ans 8 ans 5 ans 11 ans 6 ans 13 ans 6 ans

Se´ve`re Non Se´ve`re Mode´re´ Mode´re´ Se´ve`re Se´ve`re Se´ve`re Se´ve`re Non Mode´re´ Non Non

Se´ve`re Non Non Non Non Mode´re´ Mode´re´ Mode´re´ Se´ve`re Se´ve`re Non Non Non

Non Non Non Non Non Non Non Non Non Non Non Non Non

Type Type Type Type Type Type Type Type Type Type Type Type Type

GBA14

M

2 ans

2 ans

Se´ve`re Mode´re´ Se´ve`re Se´ve`re Mode´re´ Se´ve`re Se´ve`re Se´ve`re Se´ve`re Mode´re´ Se´ve`re Mode´re´ He´patome´galie mode´re´e sans sple´nome´galie He´patome´galie mode´re´e sans sple´nome´galie Sple´nome´galie se´ve`re Se´ve`re + atteint neurologique Se´ve`re

Non

Non

Non

Type I

N370S/N370S

NP

NP

Non

Type I

?/?

NP

NP

Oui

Type II

RecNciI/ ?

Se´ve`re

Non

Type III A

L444P/L444P

Mode´re´ Mode´re´ Se´ve`re Se´ve`re Se´ve`re Se´ve`re Se´ve`re Se´ve`re Mode´re´ Se´ve`re Mode´re´ Se´ve`re

Se´ve`re Mode´re´ Se´ve`re Se´ve`re Se´ve`re Se´ve`re Se´ve`re Mode´re´ Mode´re´ Se´ve`re Mode´re´ Se´ve`re

Non Oui Non Non Non Oui Oui Oui Oui Non Non Non

Strabisme + cyphose Non Non Non Non Non Non Non Non Non Non Non Non

Type Type Type Type Type Type Type Type Type Type Type Type

?/? N370S/N370S N370S/RecNciI N370S/N370S N370S/L444P ?/? ?/? N370S/N370S N370S/L444P N370S/L444P N370S/N370S N370S/ ?

Mode´re´

Mode´re´

Oui

Non

Type I

F12

Non

GBA15

M

NP

16 ans

F13

NP

GBA16

F

NP

6 mois

F14

1er degre´

GBA17

M

1 an 4 mois

2 ans 3 mois

F15 F16 F17 F18 F19 F7 F20 F21 F22

Lointaine Non Non 1er degre´ Non 1er degre´ 1er degre´ 2e degre´ Non

F23 F24

1er degre´ Non

GBA18 GBA19 GBA20 GBA21 GBA22 GBA23 GBA24 GBA25 GBA26 GBA27 GBA28 GBA29

F F M M M F F F F M M M

F25

Non

GBA30

F

3 ans 28 ans 17 ans 10 ans 46 ans 4 ans 18 mois 40 ans 12 ans 56 ans 19 ans A` la naissance 12 ans

11 ans 29 ans 19 ans 24 ans 46 ans 19 ans 28 ans 43 ans 53 ans 57 ans 19 ans A` la naissance 28 ans

Ge´notype

I? I I? I I I I I I I I I I

I I I I I I I I I I I I

L444P/L444P N370S/RecNciI L444P/L444P N370S/RecNciI N370S/RecNciI N370S/RecNciI ?/? ?/? N370S/ ? N370S/RecNciI N370S/RecNciI N370S/N370S N370S/N370S

N370S/N370S

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Fig. 1. Localisation des amorces choisies pour l’amplification spe´cifique des exons 9 et 10. Les fle`ches indiquent les amorces et le triangle mentionne la re´gion de´le´te´e de 55 pb. Apre`s l’obtention du consentement e´claire´ des familles, 5 ml de sang ont e´te´ pre´leve´ sur anticoagulant (EDTA 15 %) pour chaque patient et ses parents. L’ADN ge´nomique a e´te´ extrait a` partir du sang total selon la proce´dure standard d’extraction au phe´nol/chloroforme [12]. Les exons 9 et 10 ont e´te´ amplifie´s par la re´action de polyme´risation en chaıˆne (PCR). Le choix des amorces a e´te´ fortement influence´ par la pre´sence du pseudoge`ne psGBA qui est localise´ a` proximite´ du ge`ne fonctionnel GBA (16 kb en aval du ge`ne) et de sa haute homologie avec ce dernier (96 % d’homologie exonique). En effet, la re´gion entre l’intron 8 et l’exon 10 repre´sente 98 % d’homologie entre GBA et psGBA. Graˆce aux outils de bioinformatique, nous avons pu ve´rifier l’amplification spe´cifique des re´gions vise´es. Pour l’exon 9, l’amorce sens (Ex9F) s’hybride sur le ge`ne et le pseudoge`ne, toutefois l’amplification est rendue spe´cifique par le choix de l’amorce anti-sens (Ex9R), celle-ci s’hybride uniquement sur le ge`ne GBA car elle est situe´e dans la portion de´le´te´e de 55 pb au niveau du pseudoge`ne. Il en est de meˆme pour l’exon 10, l’amorce sens (Ex10F) ne s’hybride que sur le ge`ne GBA puisqu’elle est une partie de la portion de´le´te´e du pseudoge`ne ; l’amorce anti-sens s’hybride quant a` elle sur une se´quence de l’exon 10 homologue dans GBA et psGBA (Fig. 1) [13,14]. Les fragments amplifie´s ont e´te´ purifie´s par le kit QIAquick (QIAGEN) selon les instructions du fournisseur, et se´quence´s avec le Kit Big Dye Terminator sur un se´quenceur ABI Prism 377 ou ABI 3130 (Applied Biosystems), en utilisant successivement les amorces sens et anti-sens. Pour de´pister la mutation N370S, une partie du site de reconnaissance de l’enzyme XhoI est introduite par PCR en utilisant une amorce modifie´e comme de´crite par Beutler et al. [15]. Le produit issu de l’amplification de l’exon 9 du ge`ne GBA, de taille 105 pb, est dige´re´ par l’enzyme de restriction XhoI, cette enzyme reconnaıˆt le motif CTCGAG/GAGCTC et va couper seulement la se´quence mute´e en donnant deux fragments 89 pb et 16 pb, un individu homozygote pour la mutation donnera deux bandes visibles sur un gel de polyacrylamide, un individu he´te´rozygote va se pre´senter avec trois bandes de taille 105 pb, 89 pb et 16 pb (Fig. 2). La pre´sence de la mutation L444P et/ou l’alle`le complexe RecNciI (L444P, A456P et V460 V) est de´piste´e par la digestion du produit de l’amplification de l’exon 10 par l’enzyme NciI [14] qui reconnaıˆt le motif CCSGG/GGSCC et elle coupe le fragment d’ADN en pre´sence de la mutation L444P (Fig. 3).

Fig. 2. Profil e´lectrophore´tique de la digestion enzymatique de l’exon 9 du ge`ne GBA par l’enzyme XhoI sur gel d’acrylamide a` 12 %. Re´sultats de la digestion enzymatique par XhoI des produits d’amplification de l’ADN ge´nomique des patients atteints de la maladie de Gaucher, en utilisant l’amorce modifie´e, et teste´ sur un gel de polyacrylamide a` 12 %. Les pistes 3, 4 et 5 pre´sentent deux bandes : 105 pb et 89 pb de´montrant l’he´te´rozygotie des patients pour la mutation N370S. La bande correspondant a` la taille 16 pb ne figure pas sur ce gel. Pour la se´quence normale, elle reste intacte (piste 1 : individu normal, piste 2 : patient non porteur de la mutation N370S, piste 6 : produit non dige´re´). M : marqueur FX174 dige´re´ par HaeIII.

La distinction entre les deux alle`les L444P et RecNciI, se fait par se´quenc¸age direct du produit de PCR. Une digestion a e´te´ alors re´alise´e pour les produits de PCR obtenus pour chaque exon. Les enzymes de restriction NciI et XhoI ont e´te´ utilise´es en vue de de´tecter les deux mutations L444P et N370S, respectivement. Selon la taille des fragments de digestion obtenus, on de´duit l’e´tat d’he´te´rozygotie, d’homozygotie ou normal des individus e´tudie´s pour les mutations correspondantes. Les re´sultats obtenus par PCR/RFLP sont confirme´s par se´quenc¸age direct des exons 9 et 10 du ge`ne GBA en utilisant les amorces Ex9R et Ex10R. Pour les patients qui ont pre´sente´ un profil normal avec l’une des deux PCR/RFLP re´alise´es, un se´quenc¸age du fragment de taille 637 pb en utilisant les amorces Ex10F et Ex10R a e´te´ effectue´. Le fragment se´quence´ est constitue´ d’une partie de l’exon 9, de l’intron 9 et de l’exon 10, le se´quenc¸age de la totalite´ de l’exon 9 est assure´ par l’utilisation de l’amorce Ex9R.

3. Re´sultats Notre e´tude du spectre mutationnel de la maladie de Gaucher en Tunisie a porte´, au total, sur 30 sujets atteints (18 enfants et 12 adultes) issus de 25 familles non apparente´es, la consanguinite´ a e´te´ retrouve´e chez 56 % des familles e´tudie´es (14/25), ou` elle e´tait ge´ne´ralement du premier degre´. A` l’exception de deux enfants en bas aˆge, aucun patient ne pre´sentait de signe neurologique au moment de l’e´tude. L’analyse ge´notypique a montre´ que parmi les 30 patients explore´s, huit patients sont homozygotes N370S (trois enfants de la meˆme famille et cinq adultes), trois enfants sont homozygotes

Fig. 3. Profil e´lectrophore´tique de la digestion enzymatique de l’exon 10 du ge`ne GBA par l’enzyme NciI sur gel d’agarose a` 2 %. Re´sultats de la digestion enzymatique par NciI des produits d’amplification de l’ADN ge´nomique des patients atteints de la maladie de Gaucher, teste´ sur un gel d’agarose a` 2 %. La piste 2 pre´sente deux bandes : 536 pb et 102 pb de´montrant l’homozygotie du patient pour la mutation L444P (confirme´ par se´quenc¸age). Les pistes 4, 5 et 6 pre´sentent trois bandes : 638 pb, 536 pb et 102 pb, de´montrant l’he´te´rozygotie des patients pour la mutation RecNciI (confirme´ par se´quenc¸age). Pour la se´quence normale, elle reste intacte (piste 1 : individu normal, piste 3 : patient non porteur de la mutation L444P ou RecNciI). M : marqueur FX174 dige´re´ par HaeIII.

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24%

24% 20% 12% 8%

8%

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ciI /? cN

P

S/ ?

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70 N3

44

S/ L4

N3

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44 L4

N3

70

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37

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4%

Fig. 4. Distribution des ge´notypes chez les familles e´tudie´es.

L444P (aˆge´s de moins de 6 ans), sept patients sont he´te´rozygotes composites N370S/RecNciI (six enfants et un adulte) et trois patients sont N370S/L444P (trois adultes). Les re´sultats obtenus pour deux autres patients ont montre´ que l’un est he´te´rozygote pour la mutation N370S et l’autre est he´te´rozygote pour l’alle`le complexe RecNciI ; le deuxie`me alle`le ne correspondait pas aux mutations re´currentes recherche´es. Aucune des mutations recherche´es par PCR/RFLP n’a e´te´ retrouve´e chez trois autres patients. De plus, le se´quenc¸age direct des exons 9 et 10 a re´ve´le´ une se´quence normale chez ces cinq patients ; il s’agit probablement de mutations sie´geant dans les autres exons. L’analyse de la fre´quence relative de´termine´e sur les patients non apparente´s a re´ve´le´ que trois mutations (N370S, L444P et RecNciI) repre´sentent 74 % des alle`les mute´s (37/50 alle`les mute´s). En effet, sur 50 alle`les mute´s e´tudie´s, la mutation N370S est pre´sente dans 44 % des cas (22/50 alle`les mute´s), suivie par la mutation L444P avec un taux de l’ordre de 16 % (8/50), l’alle`le complexe (RecNciI) est pre´sent dans 14 % des alle`les. Les mutations non identifie´es dans cette e´tude repre´sentent 26 %. Cette e´tude mole´culaire a de´montre´ que la recherche de ces trois mutations, en priorite´, chez les patients atteints de la maladie de Gaucher peut fournir un outil de diagnostic mole´culaire indispensable pour le conseil ge´ne´tique. Les ge´notypes N370S/N370S et N370S/RecNciI sont les plus fre´quents chez les patients tunisiens, retrouve´s chez 48 % des familles explore´es (Fig. 4).

4. Discussion La pre´valence exacte de la maladie de Gaucher est me´connue en Tunisie, bien que cette affection ne soit pas exceptionnelle. Une e´tude re´trospective re´alise´e sur une pe´riode de 18 ans (1983– 2001) et qui a collige´ 27 cas a montre´ que le type 1 est de loin la forme la plus fre´quente [16]. Re´cemment, une e´tude multicentrique nationale, conduite en 2009, a recense´ une se´rie de 86 cas sur une pe´riode de 35 ans ; la pre´valence de naissance a e´te´ estime´e a` 0,92 cas pour 100 000 naissances vivantes [17] soit une pre´valence plus e´leve´e que celle de la Turquie (0,23 cas/ 100 000 habitants) [18]. Les formes adultes asymptomatiques restaient sous-diagnostique´es selon cette e´tude, ce qui sousestimait la fre´quence de la maladie. Un registre national est en cours d’e´laboration, il permettrait d’e´valuer la pre´valence et l’incidence exactes de cette maladie. La mutation N370S semble eˆtre la mutation la plus fre´quente dans notre pays, elle est pre´sente avec un taux relatif de 44 %, cette valeur est proche de celle retrouve´e en Italie [19].

La mutation N370S, tre`s fre´quente dans la population caucasienne, est absente chez la population asiatique [20]. Chez les juifs ashke´nazes, la fre´quence de cette mutation est de 75 %, suivie de la mutation c.84insG avec une fre´quence de 13 % ; la mutation L444P est pre´sente chez 3 % des cas [21]. Dans la population japonaise, la mutation L444P est la mutation la plus fre´quente, elle constitue 43,6 % des alle`les e´tudie´s suivie par la mutation F213I (14,9 %), la mutation N370S n’a pas e´te´ de´tecte´e [22]. En Italie, les mutations N370S et L444P et RecNciI repre´sentent respectivement 36 %, 27,4 % et 2,1 % des alle`les e´tudie´s [19]. Ces proportions sont similaires a` celles rencontre´es en Roumanie : 50 %, 22,2 % et 5,6 % respectivement [23]. La mutation N370S pre´sente un inte´reˆt pronostique puisqu’elle est toujours associe´e aux formes non neurologiques de la maladie de Gaucher. L’homozygotie pour cette mutation est souvent corre´le´e a` une atteinte pauci- voire asymptomatique. Dans notre se´rie, l’homozygotie N370S e´tait le ge´notype le plus fre´quemment retrouve´ chez les cas adultes e´tudie´s (5/12) ; il e´tait associe´ a` une atteinte visce´rale se´ve`re chez un seul patient. Cela sugge`re l’intervention de ge`nes modificateurs en association avec des facteurs environnementaux dans l’expression du ge`ne GBA. Par ailleurs, l’homozygotie pour la mutation L444P retrouve´e chez trois patients (Tableau 1) s’est associe´e a` une atteinte visce´rale se´ve`re et pre´coce mais sans atteinte neurologique jusqu’au de´ce`s a` l’aˆge de 6 ans chez deux patients (GB1 et GB2). Chez le troisie`me patient, l’atteinte neurologique s’est limite´e a` un strabisme qui serait post-traumatique et une cyphose. Ce ge´notype est habituellement associe´ au type 3A norbottnien et dans d’autres populations a` un phe´notype se´ve`re et une paralysie oculomotrice de l’horizontalite´ (type 3B), cependant en l’absence d’une e´valuation neuro-ophtalmologique spe´cialise´e chez les deux premiers patients, on ne peut e´carter l’existence d’anomalies oculomotrices frustes ou l’e´volution vers une atteinte neurologique si la survie avait e´te´ plus prolonge´e. L’association de l’homoalle´lisme pour la mutation L444P aux formes neurologiques est un sujet de de´bat. Dans la population caucasienne, ce ge´notype semble eˆtre lie´ a` la forme neuropathique de type 3 alors qu’il paraıˆt eˆtre associe´ au type 1 non neuropathique chez les patients japonais. La diffe´rence d’expression de ce ge´notype chez les deux populations pourrait s’expliquer par leurs origines ge´ne´tiques. Koprivica et al. ont sugge´re´ que l’homozygotie pour la mutation L444P est peut-eˆtre associe´e a` un phe´notype se´ve`re de la maladie de Gaucher de type 1 [9]. Le ge´notype N370S/RecNciI est le plus fre´quent parmi les enfants atteints e´tudie´s (5/15 familles) ou` il s’est associe´ a` une forme visce´rale se´ve`re. Une grande partie des patients sont he´te´rozygotes composites (44 %). Le fait que deux des 11 patients he´te´rozygotes composites soient issus de mariages consanguins plaide en faveur de la fre´quence e´leve´e de ces mutations dans la population ge´ne´rale. Parmi les patients issus de mariages consanguins, trois ne portent pas de mutations connues, ce qui sugge`re l’apparition de nouvelles mutations prive´es favorise´es par la consanguinite´. Ce phe´nome`ne a de´ja` e´te´ observe´ dans d’autres maladies autosomiques re´cessives e´tudie´es dans notre population comme l’immunode´ficience conge´nitale [24], la maladie d’Imerslund [25] et la granulomatose septique chronique [26]. Re´fe´rences [1] Gaucher PCE (1882). On primary epithelioma of the spleen: idiopathic hypertrophy of the spleen without leukemia. The`se de Me´decine. Faculte´ de Me´decine de Paris. In: Hruska KS, LaMarca ME, Scott CR, Sidransky E. Gaucher disease: mutation and polymorphism spectrum in the glucocerebrosidase gene (GBA). Hum Mutat 2008;29:567–83. [2] Meikle PJ, Hopwood JJ, Clague AE, Carey WF. Prevalence of lysosomal storage disorders. JAMA 1999;281:249–54.

W. Cherif et al. / Pathologie Biologie 61 (2013) 59–63 [3] Zhao H, Keddache M, Bailey L, Arnold GL, Grabowski G. Gaucher’s disease: identification of novel mutant alleles and genotype-phenotype relationships. Clin Genet 2003;64:57–64. [4] Sidransky E. Gaucher disease: complexity in a ‘‘simpl’’ disorder. Mol Genet Metab 2004;83:6–15. [5] Beutler E, Grabowski GA. Gaucher disease. In: Scriver CR, Beaudet AL, Sly WS, Valle D, editors. The metabolic and molecular bases of inherited diseases. New York: McGraw-Hill; 2001. p. 3635–68. [6] Hsia D, Naylor J, Bigler JA. Gaucher’s disease: report of two cases in father and son and review of the literature. New Eng J Med 1959;261:164–9. [7] Zimran A, Sorge J, Gross E, Kubitz M, West C, Beutler E. A glucocerebrosidase fusion gene in Gaucher disease. Implications for the molecular anatomy, pathogenesis, and diagnosis of this disorder. J Clin Invest 1990;85:219–22. [8] Horowitz M, Wilder S, Horowitz Z, Reiner O, Gelbart T, Beutler E. The human glucocerebrosidase gene and pseudogene: structure and evolution. Genomics 1989;4:87–96. [9] Koprivica V, Deborah LS, Park JK, Callahan M, Frisch A, Cohen IJ, et al. Analysis and classification of 304 mutant alleles in patients with type 1 and type 3 Gaucher disease. Am J Hum Genet 2000;66:1777–86. [10] George R, McMahon J, Lytle B, Clark B, Lichtin A. Severe valvular and aortic arch calcification in a patient with Gaucher’s disease homozygous for the D409H mutation. Clin Genet 2001;59:360–3. [11] Peters SP, Coyle P, Glew RH. Differentiation of beta-glucocerebrosidase from beta-glucosidase in human tissues using sodium taurocholate. Arch Biochem Biophys 1976;175:569–82. [12] Sambrook J, Fritsh EF, Maniatis T. Molecular cloning: a laboratory manual.. Cold spring Harbor, NY: Cold Spring Laboratory Press; 1989. [13] Beutler E, Gelbart T, West C. The facile detection of the nt 1226 mutation of glucocerebrosidase by ‘‘mismatched’’ PCR. Clin Chim Acta 1990;194:161–6. [14] Judith AP, Rosenbaum H, Ruth GB. Mutations in the glucocerebrosidase gene and Parkinson’s disease in Ashkenazi Jews. N Engl J Med 2004;351:1972–7.

63

[15] Beutler E. Gaucher disease: new molecular approaches to diagnosis and treatment. Science 1992;256:794–8. [16] Chaabouni M, Aloulou H, Tebib N, Hachicha M, Ben Becher S, Monastiri K, et al. La maladie de Gaucher en Tunisie (e´tude multicentrique). Rev Med Interne 2004;25:104–10. [17] Riahi Imen. Histoire naturelle de la maladie de Gaucher en Tunisie. The`se de Me´decine, Faculte´ de me´decine de Tunis. 2009. [18] Ozkara HA, Topc¸u M. Sphingolipidoses in Turkey. Brain Dev 2004;26:363–6. [19] Filocamo M, Mazzotti R, Stroppiano M, Seri M, Giona F, Parenti G, et al. Analysis of the glucocerebrosidase gene and mutation profile in 144 Italian Gaucher patients. Hum Mutat 2002;20:234–5. [20] Grabowski GA, Horowitz M. Gaucher’s disease: molecular, genetic and enzymological aspects. Baillieres Clin Haematol 1997;10:635–56. [21] Beutler E, Gelbart T, Kuhl W, Zimran A, West C. Mutations in Jewish patients with Gaucher disease. Blood 1992;79:1662–6. [22] Ida H, Rennert OM, Kawame H, Maekawa K, Eto Y. Mutation prevalence among 47 unrelated Japanese patients with Gaucher disease: identification of four novel mutations. J Inherit Metab Dis 1997;20:67–73. [23] Drugan C, Procopciuc L, Jebeleanu G, Grigorescu-Sido P, Dussau J, Poenaru L, et al. Gaucher disease in Romanian patients: incidence of the most common mutations and phenotypic manifestations. Eur J Hum Genet 2002;10:511–5. [24] Elloumi-Zghal H, Barbouche MR, Chemli J, Bejaoui M, Harbi A, Snoussi N, et al. Clinical and genetic heterogeneity of inherited autosomal recessive susceptibility to disseminated Mycobacterium bovis bacilli Calmette-Guerin infection. J Infect Dis 2002;185:1468–75. [25] Bouchlaka C, Maktouf C, Mahjoub B, Ayadi A, Sfar MT, Sioud M, et al. Genetic heterogeneity of megaloblastic anaemia type 1 in Tunisian patients. J Hum Genet 2007;52:262–70. [26] El Kares R, Barbouche MR, Elloumi-Zghal H, Bejaoui M, Chemli J, Mellouli F, et al. Genetic and mutational heterogeneity of autosomal recessive chronic granulomatous disease in Tunisia. J Hum Genet 2006;51:887–95.