Dosage de thyroglobuline ERIA Diagnostics Pasteur: interférence des autoanticorps

Immunoanal Bio Spec (1993) 8, 57-60

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© Elsevier, Paris

Techniques au quotidien

Dosage de thyroglobuline ERIA Diagnostics Pasteur: interference des autoanticorps R Sapin, F Gasser Institut de physique biologique (Pr J Chambron), facult6 de medecine, 67085 Strasbourg Cedex, France

(Regu le 12 mars 1992; accepte le 4 avril 1992)

Resume - - Un nouveau dosage immunoradiometrique de thyroglobuline utilisant des anticorps monoclonaux selectionnes d'apres leur absence de reactivite croisee avec les autoanticorps antithyroglobuline a et6 recemment commercialise. Pour tester la possibilite et la frequence d'une interference des autoanticorps clans ce dosage, un test de recuperation a ete realise sur 13 serums selectionnes d'apres leur taux eleve en anticorps antithyrogtobuline et sur 1 000 serums de patients ayant une pathologie thyro'~'dienne & I'exception de cancers, adresses au laboratoire pour dosage de thyroglobuline. Sur les 13 serums, six ont un pourcentage de recuperation abaisse (inferieur a 70%). Sur les 1 000 serums, seulement 11 ont un pourcentage de r~cuperation abaisse, en association neuf fois avec une concentration de thyroglobuline tres basse et une presence d'anticorps antithyroglobuline. Bien que rare, une interference des autoanticorps n'est donc pas totalement exclue avec ce kit (le pourcentage de recuperation le plus bas est de 22%). thyroglobuline / interference / autoanticorps / depistage Summary - - ERIA Diagnostics Pasteur thyroglobulin assay : interference of autoantibodies. A new immunoradiometric assay for thyroglobulin using monoclonal antibodies selected for their lack of cross reactivity with anti-thyroglobulin autoantibodies has been recently commercialized. To assess the possibility and frequency of interferences from autoantibodies in this assay, a recovery rate determination was performed in 13 sera selected according to their high titer of anti-thyroglobulin antibodies and in 1 000 sera received for thyroglobulin measurement. These sera came from patients suffering from various thyroid disorders except cancers. Of the 13 sera 6 had a low recovery rate (under 70%). Of the 1 000 sera 11 had a low recovery rate, associated 9 times with a low thyroglobulin level and a high titer of anti-thyroglobulin antibodies. Although rare with this kit, interference of autoantibodies can not be excluded in any case (the lower recovery rate was 22%). thyroglobulin / interference / autoantibody / screening

Introduction

Le dosage de la thyroglobuline (Tg) dans le serum est utilise pour le suivi des patients atteints d'affections thyroidiennes telles que le cancer differenci~ e t a ete pr~conise dans le cas des maLadies de Basedow et de Hashimoto [13, 2]. II contribue au diagnostic de I'hyperthyroi'die factice [5] et & la d~tection de tissu fonctionnel en cas d'hypothyrofdie congenitale [6]. L'inter&t des premiers dosages radio-immunologiques competitifs (RIA) utilisant des anticorps polyclonaux a 6te limit~ en raison de la grande frequence des interferences dues aux autoanticorps antithyroglobuline (aAc) [11] qui

sont presents dans le serum d'un grand nombre de patients atteints de maladies thyrofdiennes (auto-immunes ou cancereuses). Plus recemment, des dosages immunoradiometriques (Irma) mettant en oeuvre des anticorps monoclonaux ont ete developpes et comrrlercialises [3, 7, 9]. Avec ces dosages les interferences des aAc sont moins frequentes qu'avec les dosages RIA. Une interference, quand elle se produit dans une methode IRMA entraTne une sous-estimation de la concentration en Tg du serum et peut 6tre mise en evidence par la baisse du pourcentage de recuperation d'une quantite connue de Tg ajoutee au serum [4]. Ce pourcentage est idealement egal & 100%, admis entre 80 et 120% et tolere entre 70 et 130%.

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Tableau I. Pourcentage de recuperation de 50~g/I de thyroglobuline ajoutes au serum et concentration en thyroglobuline de 13 serums s61ectionnes d'apr~s leur fort taux en anticorps antithyroglobuNne.

Patient

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13

Anticorps anti-Tg (kU//) 6 000 4 970 15 900 6 270 19 600 6 770 14 700 20 000 9 570 5 830 167 000 3 000 000 12 700

Pourcentage Tg de recuperation (pg/I)

250 200 o c

o-

92 86 82 78 73 72 70 69 64 63 60 42 29

1,7 227 10 0,4 < 0,2 0,2 0,4 < 0,2 8,8 1,5 < 0,2 < 0,2 < 0,2

,~

150 100

I,,-

LL

50 m 20

40

80

1O0

120

140

160

180

Fig 1. Histogramme des frequences des pourcentages de r6cup~ration mesures sur 1 000 serums re(;us pour dosage de thyroglobuline.

Berlin, Allemagne). 100 kU/I. La commerciaNsation d'un nouveau dosage IRMA de Tg base sur I'emploi d'anticorps monoclonaux selectionnes pour leur absence de reactivite croisee avec les aAc, nous a incites & verifier I'absence d'interferences des aAc dans ce dosage annonce comme devant permettre un dosage fiable de la Tg m6me en presence d'aAc dans le s~rum [7]. Dans cette etude, nous rapportons les resultats d'un test de recuperation pratique sur 13 s~rums selectionnes pour leur taux eleve en anticorps anti-Tg et sur 1 000 serums adresses au laboratoire pour dosage de Tg entre decembre 1990 et fevrier 1992.

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Pourcentage de r6cup6ration

Le seuil de positivite est de

Echantillons Treize serums d'une serotheque precedemment constituee ont ete selectionnes d'apres leur taux 61ev~ en anticorps anti-Tg (superieur & 3 000 kU/I). Par ailleurs, la concentration de Tg et le pourcentage de recuperation d'une quantite connue de Tg ajout6e au serum ont ete determines sur 1 000 serums adress6s au laboratoire pour dosage de Tg. Ces echantillons proviennent principalement de patients hospitalises ou consultants dans des unites de medecine interne ou d'endocrinologie et atteints de diverses affections thyrofdiennes & I'exception de cancers.

Resultats Materiels et methodes

Dosages La thyroglobuline a ete dos6e & I'aide de la trousse IRMA ERIA Diagnostics Pasteur (Marnes-laCoquette, France) selon un protocole en deux etapes. La prise d'essai est de 100 ~1. Pour les tests de surcharge, ont ete doses 100 #1 d'un melange contenant 75 ~1 de serum (concentration en Tg: CB) et 25~LI de standard 200#g/I. Si CS est le resultat du dosage du melange, le pourcentage de r6cuperation peut 6tre calcul6 par la relation suivante : % = 2 [ C S - (0,75 × CB)] Nous avons consid6re comme anormal un pourcentage de recuperation inferieur & 70% et recherche les anticorps anti-Tg sur les echantillons dont le pourcentage de recuperation etait abaiss& La recherche des anticorps antithyroglobuline a et6 r#alisee & I'aide de la trousse Thyrak (Henning,

Parmi les 13 serums selectionnes par un fort taux en aAc anti-Tg, tous ont un pourcentage de recuperation inferieur & 100%, six en dessous de 70% et deux en dessous de 50% (tableau I). La distribution des pourcentages de recup6ration determines sur les 1 000 serums s'etend de 22 & 176% (fig 1) avec une mediane & 98%. Le pourcentage de recuperation est inferieur & 70% dans 11 serums provenant de dix patients et superieur & 130% dans 38 serums. Parmi les dix patients pour lesquels le rendement est inferieur & 70%, huit sont porteurs d'anticorps anti-Tg avec des taux compris entre 510 et 1 6 0 0 0 0 k U / I (tableau ll), Pour ces huit patients, le resultat de Tg est inferieur & l#g/I. Les diagnostics cliniques concernant ces patients se repartissent en quatre Base-

Thyroglobuline Pasteur

Tableau II. Concentration en thyroglobuline et anticorps

antithyroglobuline des 11 serums pour lesquels le pourcentage de r6cup6ration est inferieur & 70%.

Patient

Pourcen- Ac anti-Tg Tg Diagnostic tage de (kU/I) (p.g/I) recuperation

OF VN HJ VN BN SD GE SC TM SM BE

22 30 36 42 56 58 58 62 64 67 69

510 6 060 59 300 * 5 670 160 000 14 700 < 100 1 170 < 100 6 790

0 < 0,2 0 < 0,2 0 0,2 0,4 37 0,2 26 0,7

Lupus Hashimoto Hashimoto Hashimoto Basedow Basedow Hashimoto Euthyrofdie Basedow Euthyrofdie Basedow

* Donnee manquante. Cette patiente est la meme que la patiente VN pr~c6dente.

dow, trois Hashimoto et un lupus. Le serum des deux autres patients ne contient pas d'anticorps anti-Tg e t a une concentration en Tg plus elev6e (26 et 37#g/I); ces deux patients ne presentent pas de pathologie thyrofdienne. La majorite des serums pour lesquels le rendement est superieur & 130% ont une concentration en Tg 6levee (31/38 resultats superieurs & 200 #g/I).

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de noter que ces rendements eleves sont le plus souvent associes & une concentration elevee de Tg et ne devraient que peu nuire & I'interpr6tation clinique des resultats. La proportion de serums avec un pourcentage de r~cup6ration abaisse (1,1%) est plus faible que celle obtenue darts une ~tude comparable & la n6tre realisee avec une trousse IRMA (4%) [12]. C'est beaucoup moins que les valeurs generalement rapportees. De plus, il faut noter que les anticorps anti-Tg sont trouves plus frequemment chez les patients porteurs de thyrofdites d'Hashimoto ou de maladies de Basedow [8] qui constituent la majorite de la population etudi~e ici, que chez les patients atteints de cancers thyrofdiens plus souvent etudies dans la litterature [1, 10]. A titre de comparaison plus directe, dans notre laboratoire, avec une autre trousse IRMA utilisant des anticorps monoclonaux (CIS bio international) nous avions observe une proportion de 6,3% des pourcentages de recuperation inferieurs & 70% dans un recrutement de 334 serums de m6me provenance que ceux de la presente etude. Si nous utilisons un seuil plus eleve (rendemerit inferieur & 80%) pour suspecter une interference des aAc anti-Tg, la proportion (2,7%) est aussi plus basse que celle rapportee par Schlumberger et al [10] qui ont etudie des serums de patients cancereux avec une trousse IRMA & anticorps monoclonaux (5,5%).

Discussion Conclusion

La grande frequence (6/13) de valeurs abaissees du pourcentage de recup6ration dans les serums selectionnes d'apres ieur taux d'Ac anti-Tg montre qu'une interference des Ac dans ce dosage est possible. Un ~talement de I'histogramme des pourcentages de recuperation etabli & partir des resultats des 1 000 serums a et6 mis en evidence, vers le bas (1,1% des cas inferieur & 70%) en accord avec une possible interference des aAc mais aussi vers le haut d'une fa•on plus prononcee (3,8% superieur & 130%). Un tel etalement vers les valeurs hautes a et6 rapporte par Bornet [1] qui propose comme explication une neutralisation incomplete d'anticorps anti-souris. Pour Kato et al [3], ce resultat pourrait etre la consequence de I'action de proteases qui, en modifiant la structure conformationnelle de la Tg pendant I'incubation du dosage, entrafnerait I'exposition d'un epitope cache au depart. En pratique, il convient

L'interference des anticorps anti-Tg apparaft possible avec cette trousse, comme le montrent ies resultats des 13 serums selectionnes d'apres leur taux eleve en Ac anti-Tg, mais elle est particulierement peu frequente: moins de 1% dans notre serie. En effet, neuf serums seulement sur 1 000 ont un rendement inferieur & 70% associe & la presence d'Ac anti'-'Tg et une concentration de Tg basse. Le pourcentage de recuperation le plus bas a ete observe chez une patiente atteinte d'un lupus mais la possibilite d'une interference n'est pas limitee & cette pathologie (par exemple, des rendements de 29 et 42% ont ete observes chez deux patients atteints d'une maladie d'Hashimoto pure). Au terme de cette etude, il apparaft interessant de confirmer les resultats obtenus dans un echantillon de serums de patients atteints de cancers thyrofdiens dans le suivi desquels

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le dosage de la Tg a une place importante et pour lesquels une sous-estimation du r6sultat peut #tre prejudiciable.

Remerciements Nous sommes reconnaissants aux Pr M Pinget et JL'Schlienger ainsi qu'aux Drs P Hassler et V Sarafian pour les informations cliniques concernant leurs patients.

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