G024 Implication des canaux KATP dans le syndrome de repolarisation précoce

S70 G022 LOSS-OF-FUNCTION MUTATION OF THE CARDIAC CAV1.2 CHANNEL IN THE SHORT QT SYNDROME M. AMAROUCH 1, J. BARC 1,2, D. BÉZIAU 1,2, F. KYNDT 1,2,3, H. LE MAREC 1,2,3, D. BABUTY 4, V. PROBST 1,2,3, J.-J. SCHOTT 1,2,3, I. BARO 1,2 1 Inserm UMR915 — l’institut du thorax, Nantes, France 2 CNRS, ERL3147, Nantes, France 3 CHU, Nantes, France 4 CHU Trousseau, Tours, France Short QT syndrome (SQTS) emerged as a new inherited channelopathy characterized by constantly short QT interval (QTc < 360 ms) associated with atrial brillation, syncopal episodes, and/or sudden cardiac death in patients with no underlying structural heart disease. It has been associated with a gain of function in 3 distinct potassium channels (KCNH2, KCNQ1, and KCNJ2) or a loss-of-function of a calcium channel Cav1.2. We identied a 6-year-old male proband who experienced a syncope episode and presented a QTc of 346 ms. In addition, a triangular T wave was observed in V2, V3 leads. His 34-year-old mother was also symptomatic (QTc: 359 ms), with Ventricular brillation. The grandmother was asymptomatic (QT: 405 ms). After a screen for ion channel mutations, we found a variant of CACNA1C, gene encoding the α1c of the cardiac L-type calcium channel, leading to c.667G>C transition caused a p.A223P substitution of a mammalian highly conserved residue. This variant was absent in 312 healthy controls. Cardiac Ca2+ channels are complexes including α1,β, and α2δ subunits allowing the Ca2+ inux (ICaL) essential for excitationcontraction coupling. To evaluate the incidence of this substitution on Cav1.2 function,α1c,β2a, and α2δ1b rat subunits were transfected in HEK-tsA201 cells. The human A223P mutation corresponds to A253P in the rat sequence. Whole-cell patch-clamp experiments were performed to study the mutation effects on ICaL biophysical parameters. A253P Cav1.2 generated a reduced ICaL (-5.48 ± 0.85 Pa/ pF, n = 54) in comparison with WT Cav1.2 (-12.24 ± 1.54 Pa/pF, n = 51). The voltage dependence of the Ca2+ current activation did not show any change (V1/2act: —11.54±1.15 mV, n=9, versus —12.94±1.03 mV, n=19 ; slope: 6.37±0.28 mV versus 6.46±0.27 mV, for mutant and WT channels, respectively). Second, we studied WT and mutant Cav1.2 expression levels. We quantied channels expression by Western blot. The mutated protein was expressed at the same level as WT-Cav1.2. We are currently investigating Cav1.2 addressing to the membrane. In conclusion, we have shown that A253P mutation reduces the ICaL amplitude but the mechanism behind this loss of function remains to be determined.

G023 SCN5A MUTATIONS AND THE ROLE OF GENETIC BACKGROUND IN THE PATHOPHYSIOLOGY OF BRUGADA SYNDROME J. BARC 1, V. PROBST 1,2, A.A.M. WILDE 4, F. SACHER 5, D. BABUTY 6, P. MABO 7, J. MANSOURATI 8, S. LE SCOUARNEC 1, F. KYNDT 1,3, P. GUICHENEY 9, J. ALBUISSON 3, P.-G. MEREGALLI 4, H. LE MAREC 1,2, H.-L. TAN 4, J.-J. SCHOTT 1,2 1 Inserm UMR915, CNRS ERL3147, Université de Nantes l’institut du thorax, Nantes, France 2 CHU de Nantes, l’institut du thorax, Service de cardiologie, Nantes, France 3 Service de génétique médicale, institut de Biologie CHU de Nantes, Nantes, France

Abstracts 4 Department of Cardiology, Academic Medical Center, Amsterdam, The Netherlands 5 Service de rythmologie, Hôpital cardiologique du Haut Leveque, Bordeaux, France 6 Service de cardiologie B, Hôpital Trousseau, Tours, France 7 Département de cardiologie, Hôpital Ponchaillou, Rennes, France 8 Service de cardiologie, centre hospitalo-universitaire de Brest, Brest, France 9 Inserm U582, institut de myologie, Groupe hospitalier Pitié-Salpêtrière, Paris, France

Background — Brugada syndrome (BrS) is an inherited arrhythmia syndrome with an increased risk of sudden death resulting from polymorphic ventricular tachycardia (VT) and/or ventricular brillation (VF) in the absence of gross structural abnormalities. Mutations in SCN5A, encoding the pore-forming subunit α of the cardiac voltage-gated sodium channel, are identied in about 20-30 % of probands affected by Brugada syndrome (BrS). SCN5A mutations may also lead to progressive cardiac conduction defects (PCCD). The causality of SCN5A mutations in PCCD was proven by linkage analysis. In contrast, SCN5A mutations in BrS were discovered by a candidate gene approach19 and linkage data are still lacking. The aim of this study was to investigate the association of SCN5A mutations and BrS in a group of large genotyped families. Methods and Results — Families were included if at least 4 family members were carriers of the SCN5A mutation identied in the proband. Thirteen large families composed by 115 mutation-carriers were studied. The signature type I ECG was present in 54 mutation-carriers (BrS-ECG+) (47 %). In 5 families, we found 7 individuals affected by BrS, but with a negative genotype (mutation-negative BrS-ECG+). Among these 7 mutation-negative BrS+ individuals, 3, belonging to 3 different families, had a spontaneous type I ECG, while 4 had a type I ECG after administration of Na+ channel blockers. EPS was performed in 5 BrS-ECG non-mutation patients. Ventricular tachyarrhythmias were inducible in 3. An ICD was implanted in these 3 patients. Mutation carriers (n=115) had, on average, longer PR and QRS intervals than non-carriers (n=148) demonstrating that these mutations exerted functional effects. Conclusions — Our results suggest that SCN5A mutations might not be sufcient to cause BrS and that genetic background may play a powerful role in the pathophysiology of BrS. However, this study conrms the role of SCN5A mutations in PCCD. These ndings add further complexity to concepts regarding the causes of BrS, and are consistent with the emerging notion that the pathophysiology of BrS includes various elements beyond mutant sodium channels.

G024 IMPLICATION DES CANAUX KATP DANS LE SYNDROME DE REPOLARISATION PRÉCOCE S. CHATEL 1, M. HAISSAGUERRE 2, F. SACHER 2, R. WEERASOORIYA 2, V. PROBST 3, G. LOUSSOUARN 1, M. HORLITZ 4, R. LIERSCH 4, E. SCHULZE-BAHR 5, A. WILDE 6, S. KÄÄB 7, H. LE MAREC 3, J.-J. SCHOTT 3 1 Inserm, U915, l’institut du thorax, CNRS ERL3147, Université de Nantes, Nantes, France 2 Université de Bordeaux, Bordeaux-Pessac, France 3 Inserm, U915, l’institut du thorax, CNRS ERL3147, Université de Nantes, Service de cardiologie, CHU Nantes, Nantes, France

Abstracts 4

Klinikum Wuppertal, Wuppertal, Germany Department of cardiology and angiology, Hospital of the university of Münster, Münster, Germany 6 Academic Medical Centre, Amsterdam, The Netherlands 7 Medizinische Klinik und Poliklinik I, Munich, Germany 5

Larepolarisationprécoceestunecaractéristiqueélectrocardiographique commune (1-5 % de la population générale). Une étude récente a montré que l’incidence de la repolarisation précoce (RP) est plus élevée chez les sujets ayant présenté une brillation ventriculaire (31 % des patients vs 5 % des contrôles). A ce jour, il est encore impossible de différencier les patients présentant un aspect de RP à risque parmi la population générale. L’existence de forme familiale de RP associée à des morts subites suggère un caractère héréditaire à cette pathologie. Une étude génétique a été réalisée sur une cohorte de 96 patients. Les gènes majeurs des troubles du rythme cardiaque et les gènes codant les canaux ioniques impliqués dans la phase de repolarisation du potentiel d’action ventriculaire ont été exclus par séquençage chez ces patients. Les canaux potassiques ATP dépendant (KATP) sont fortement exprimés dans les cardiomyocytes. L’une des hypothèses émises est qu’une augmentation de 1-2 % de l’ouverture de ces canaux générerait un courant sufsant qui pourrait affecter la phase de repolarisation ventriculaire. Les canaux KATP sont composés de sous-unités canalaires Kir6.0 (KCNJ8 codant Kir6.1 ou KCNJ11 codant Kir6.2) et de récepteurs aux sulphonylurées SUR (ABCC8 codant SUR1 ou ABCC9 codant SUR2). L’approche gène-candidat a permis de mettre en évidence le variant rare p.S422L dans le gène KCNJ8 chez une jeune patiente présentant de nombreux épisodes de brillation ventriculaire (plus de 100) et une RP dans les dérivations inféro-latérales. Suite à ces premiers résultats, nous avons séquencés les autres sous-unités des canaux KATP. Ainsi, 5 variants ont été identiés dans le gène ABCC9 : 4 variants faux-sens et une substitution d’un nucléotide dans un site d’epissage. L’enquête familiale et l’analyse fonctionnelle sont en cours pour ces patients. Plusieurs hypothèses physiopathologiques (augmentation du trac membranaire, diminution de la sensibilité à l’ATP…) vont être testées an de comprendre l’implication de ces variants sur le potentiel d’action ventriculaire. L’identication de 6 patients sur 96 (6.25 %) porteurs de variant dans les gènes codant les canaux KATP conforte l’hypothèse du rôle de ce courant dans le syndrome de repolarisation précoce.

Jeudi 2 avril 2009, de 15 h 30 à 17 h 00 H — INSUFFISANCE CARDIAQUE, CARDIOMYOPATHIES, BIOMARQUEURS H001 LE BLOCAGE DES RÉCEPTEURS AT1 ATTENUE L’ACTIVATION DE LA CALCINEURINE ET L’HYPERTROPHIE VENTRICULAIRE GAUCHE EN RÉPONSE À UN RÉGIME HYPERSODÉ CHEZ LA SOURIS HÉTÉROZYGOTE DÉFICIENTE EN CMYBP-C P. LE CORVOISIER 1, N. VIGNIER 2, L. SAMBIN 1, C. BLARD 2, C. DELCAYRE 3, L. CARRIER 2,4, L. HITTINGER 1, J.-B. SU 1 1 Inserm U955 ; Université Paris 12 Val-de-Marne, Faculté de Médecine, Créteil, France 2 Inserm U582 ; Institut de Myologie ; Université Paris 6, Paris, France

S71 3

Inserm U942 ; Université Paris-Diderot, Paris, France Institute of Experimental and Clinical Pharmacology and Toxicology, University Medical Center Hamburg-Eppendorf, Hamburg, Germany 4

La calcineurine est une phosphatase composée d’une sous-unité catalytique (CnA) et d’une sous-unité régulatrice (CnB). La calcipressin 1 codée par le gène RCAN1 joue un rôle inhibiteur ou facilitateur de la calcineurine. La calcineurine est activée dans le cœur en réponse à un régime hypersodé (RHS) et est impliquée dans l’hypertrophie ventriculaire gauche (HVG) induite par l’angiotensine II. Cette étude a examiné le rôle de la calcineurine dans l’effet antihypertrophique du blocage des récepteurs AT1 de l’angiotensine II chez la souris hétérozygote (HET) déciente en protéine-C cardiaque (cMyBP-C) soumise à un RHS (4 % NaCl). Les souris HET et sauvages, âgées de 5 mois ont suivi un régime standard (RS, 0,6 % NaCl) ou un RHS ou un RHS plus irbesartan (50 mg/kg/jour) pendant 8 semaines. Le niveau d’expression du gène PPP3CB codant la CnAβ (une isoforme de la CnA qui augmente en réponse à différents stimuli) et du gène RCAN1 dans le ventricule gauche a été déterminé par RT-qPCR. Après 8 semaines de traitement, la pression artérielle est comparable entre les groupes. Sous le RS, les souris HET ont un poids VG plus important que les souris sauvages. Le RHS augmente le poids VG des souris sauvages et HET (p < 0,01). Le poids VG des souris soumises au RHS plus irbesartan est similaire à celui des souris soumises au RS. L’expression de PPP3CB est comparable chez les souris HET et sauvages soumises au RS et n’est pas affecté par le RHS. Le traitement par irbesartan ne modie pas son expression chez la souris sauvages mais augmente son expression chez les souris HET. L’expression du gène RCAN1 est similaire chez les souris HET et sauvages soumises au RS et augmente signicativement sous le RHS. Le traitement par irbesartan maintient le niveau d’expression de RCAN1 similaire à celui des souris sauvages et HET soumises au RS. En conclusion, chez les souris HET et sauvages, le RHS induit une HVG et une augmentation de l’expression du gêne RCAN1, qui sont bloquées par l’irbesartan, suggérant un rôle du RCAN1 dans l’HVG induite par le RHS.

H002 FHL1 AND NPPB ARE INVOLVED IN THE LEFT VENTRICULAR HYPERTROPHY RESPONSE DUE TO GENETIC PREDISPOSITION, INDEPENDENTLY OF THE ACTIVATION OF HYPERTROPHIC SIGNALLING PATHWAYS INDUCED BY A HIGHT SALT DIET P. LE CORVOISIER 1, J.-B. SU 1, C. BLARD 2, L. SAMBIN 1, C. DELCAYRE 3, L. CARRIER 1,4, L. HITTINGER 1, N. VIGNIER 2 1 Inserm U955 ; Université Paris XII, Faculté de médecine, Créteil, France 2 Inserm U582 ; Institut de Myologie, Université Paris VI, Paris, France 3 Inserm U942, Université Paris VII, Paris, FRANCE 4 Institute of Experimental and Clinical Pharmacology and Toxicology, University Medical Center Hamburg-Eppendorf, Hamburg, Germany Cardiac myosin-binding protein C (cMyBP-C) gene mutations are associated with familial hypertrophic cardiomyopathy. Heterozygous cMyBP-C null mice (Het) develop left ventricular hypertrophy (LVH) at 10-11 months old. Previous studies showed that a high salt diet induces LVH in normal mice. Therefore, this study examined whether