Isolement et structure d'une glycoprotéine superficielle de la paroi de Torulopsis candida

BIOCH1MIE, 1977, n ° 59, 687-692.

Isolement et structure d'une glycoprotdine superficielle de la paroi de Torulopsis candida. J. B. LEI,EU *, B. FOUI~NET**, J. P. MORILHAT *, R. BONALY *~ et J. MONTREUII, * ". • Laboraloire de Biochimie microbienne, Universit~ N a n c y I, 5 rue Albert Lebrun, B.P. 403, 540,01 N a n c y Cedex. • * Laboratoire de Chimie biologique, Universitd des Sciences et Techniques de Lille I, Laboratoire associd au C.N.R.S. n ° ~17, B.P. 36, 59650 Villeneuve d'Ascq. (13-6-1977). Summary. - - The treatment with ethylenediamine af Torulopsis candida yeast cell walls has permitted to isolate a mannoprotein. It has been possible to collect this glycoprotein in a pure state after separation of the different hydrosoluble products by gel filtrations and paper electrophoresis. This compound contains 62 per cent of mannose, 3 per cent of N-acetylglucosamine and 31 per cent of amino acids. The mannose units are attached by 1 --~ 2 linkages, short oligosaccharides are bound to scrine of the peptide chain hy O-glycosidic lin~kages while polysaecharides are attached to asparagine of this peptide chain by a N glycosidic linkages probably through the intermediate of chitobiose.

INTRODUCTION. La structure et la c o m p o s i t i o n de la p a r o i des cellules de levures se r6vblent tr~s variables n o n seulement en f o n c t i o n des genres et espbces de levures [1~ mats aussi en f o n c t i o n des caract6ristiques du milieu ext6rieur [2, 3~. Des 6tudes r6alis6es sur Candida aIbicans et Saccharomyces cereoisiae [4, 5] m e t t e n t en cause la paroi des cellules p o u r l ' e x p l i c a t i o n des p h 6 n o m 6 n e s de floeulence et de r6aetions antig~nes anticorps. Nous avons isol6 et abord6 l'dtude structurale d ' u n e m a n n o p r o t 6 i n e superfieiellc de la paroi de Torutopsis candida suppos6e i n t e r v e n i r dans de tels ph6nom6nes. Les r~sultats que nous d6erivons dans ce m 6 m o i r e se r a t t a c h e n t 5 ceux de Ballou et coll, relatifs aux m a n n a n n e s de Saccharomyces cerevisiae [6] et r e n f o r c e n t l'hypoth6se selon laquelle les liaisons de type N glyeosidique entre g l y c a n n e s et prot6ines font i n t e r v e n i r une mol6cule de chitobiose chez les levures. MATERIEL ET METHODES. A) Matdriel. Notre ~tude a 6t~ effectu6e sur les p a r o i s de eellules issues d ' u n e souche de Torulopsis candida cultiv6e sur substrat m6thanol. O Toute eorrespondance dolt ~tre adressde h R. Bonaly, Lahoratoire de Biochimie mierobienne. Universitd N,ancy I, 5 rue A~l,bertLebrun. B.P. 403- 54001 Nancy Cedex.

B) Isolement des parois. L ' e x t r a c t i o n de la glycoprot6ine a 6t6 effectu6e sur les p a t o i s cellulaires isol~es apr~s broyage m 6 c a n i q u e des cellules, scion le protocole suirant : Les cellules de levures sont mises en s u s p e n s i o n d a n s l'eau distill6e p e n d a n t 24 beures h une conc e n t r a t i o n de 9 h 3 g de levure lyophilis6e p o u r 10 ml d'eau puts sont broy6es avec u n b r o y e u r MSK (Braun Melsungen R.F.A.) h l'aide de billes de verre (0,45 h 0,50 m m de diam6tre). Les cellules subissent trois broyages de trois m i n u t e s h u n e temp6rature a v o i s i n a n t 0°C. Les broyats sont repris p a r l'ac6tone puts par u n m61ange 6ther de p6trole-6ther s u l f u r i q u e afin d'61iminer les lipides. La biomasse r6cup6r6e p a r c e n t r i f u g a t i o n "~ 20.000 g est alors mise en s u s p e n s i o n dans u n e solution de p h o s p h a t e disodique h 12 g/1 et soumise h u n e agitation constante p e n d a n t 5 6 heures. Apr~s lavage h l'eau distill6e, les p a t o i s sont incub6es p e n d a n t 3 heures h 38°C dans u n e solution de p h o s p h a t e disodique h 12 g/1 conten a n t 0,2 p. cent de trypsinc, puts lav6es plusieurs fois h l'eau distill6e. Ce d e r n i e r t r a i t e m e n t permet d'61iminer les d6bris cytoplasmiques prot6iques qui a d h 6 r e n t aux parois cellulaires. C) F r a c t i o n n e m e n t des patois par l'6thylbnediamine. Le f r a c t i o n n e m e n t des p a t o i s de levures par l ' 6 t h y l 6 n e d i a m i n e , agent c h i m i q u e pr~conis6 p a r

J. B. L e l e u et coll.

688

Korn et N o r t h c o t e [7], a 6t6 r6alis6 selon lo protocole de Bonaly et coll. [2]. me t r a i t e m e n t c o n d u i t ~ l ' o b t e n t i o n de trois f r a c t i o n s A, B e t C c o r r e s p o n d a n t aux critbres p h y s i q u e s suivants : la f r a c t i o n A est soluble dans est soluble dans l ' 6 t h y l b n e d i a m i n e , la f r a c t i o n B est soluble dans l ' 6 t h y l b n e d i a m i n e , la f r a c t i o n C est insoluble dans ces deux solvants. D) Mdthodes analytiques. 1-

D ~ t e r m i n a t i o n de la g l y c o p r o t 6 i n e a.

composition

de la

--Composition c e n % s i m a l e : les hexoses totaux ont 616 doses p a r la m 6 t h o d e h l ' o r c i n o l a e i d e s u l f u r i q u e [8], la g l u c o s a m i n e p a r la m 6 t h o d e d'Elson-Morgan [9] modifi~e [10] apr~s une h y d r o l y s e c h l o r h y d r i q u e (HC1 4 N redistill6, pendant 4 h e u r e s h 105°C).

--Composition

m o l a i r e : la c o m p o s i t i o n molaire en m o n o s a c c h a r i d e s a 6t6 d6termin6e apr~s m6thanolyse, p a r c h r o m a t o g r a p h i e en p h a s e gazeuse des m ~ t h y l g l y e o s i d e s triflnoroac6tyl6s, selon la m~thode de Zanetta el al. I l l ] . La c o m p o s i t i o n en a m i n o a c i d e s a 6t6 pr~cis~e l ' a i d e d ' u n a u t o a n a l y s e u r T e c h n i c o n apr~s h y d r o l y s e c h l o r h y d r i q u e (HC1 5,6 N redistill6, sous v i d e h 105°C et p e n d a n t 24 heures). 2 - - D 6 t e r m i n a t i o n de la masse mol~culaire. La masse m o l 6 c u l a i r e de la g l y c o p r o t ~ i n e ~ a 6t~ estim6e p a r l ' a p p l i c a t i o n de l'61ectrophor~se sur gel de p o l y a c r y l a m i d e en pr6sence de dod~cylsulfate de s o d i u m (SDS) selon la m 6 t h o d e de Neville [12]. E) Ddtermination des modalit~s des liaisons protdine-glycanne. 1 - - R e c h e r c h e des liaisons O-glycosidiques. La g l y c o p r o t ~ i n e a a ~t~ trait6e h une c o n c e n t r a t i o n de 1 m g / m l p a r la soude 0,5 N en pr6sence de NaBH 4 0,3 M dans les c o n d i t i o n s d~crites p a r T a n a k a et coll. [193. La c o m p o s i t i o n en glucides et la s t r u c t u r e des o l i g o s a c c h a r i d e s lib~r6s a 6t6 ensuite pr~cis~e ainsi que la c o m p o s i t i o n de ]a prot~ine restante. 2 - - R e c h e r c h e des liaisons N-glycosidiques. Le t r a i t e m e n t de la g l y c o p r o t 6 i n e a p a r la pronase (Calbiochem) a p e r m i s d ' i s o l e r nn g l y c a n n e avec son p o i n t d ' a t t a c h e [131. L ' a n a l y s e de cet a m i n o - g l y c a n n e a 6t6 pr6cis6e au cours de l'6tude.

BIOCHIM1E, 1977, 59, n ° 8-9.

F) D~termination de la structure des oligosaccharides fiber,s par action de la soude. Les o l i g o s a c c h a r i d e s lib~r~s p a r la soude en m i l i e u r ~ d u c t e u r ont ~t6 m6thyl~s p a r la m O h o d e de H a k o m o r i [14]. Les d~riv6s m O h y l ~ s des hexoses d ' u n e p a r t et de l ' h e x o s a m i n i t o l d ' a u t r e p a r t ont ~t6 lib6r6s p a r m 6 t h a n o l y s e et les ethers m O h y l i q u e s ont ensuite 6t6 identifi~s et dos6s p a r c h r o m a t o g r a p h i e en phase gazeuse s u i v a n t le protocole de F o u r n e t et coll. [15]. La n a t u r e de l ' O h e r m O h y l i q u e de l ' h e x o s a m i n i t o l a 616 pr6cis6e apr~s p e r a c 6 t y l a t i o n p a r s p e c t r o m ~ t r i e de masse ( a p p a r e i l L.K.B. 2091, 6nergie ~ l e c t r o n i q u e : 70 ev ; c o u r a n t d ' i o n i s a t i o n : 80 I~A, t e m p 6 r a t u r e de la c h a m b r e d ' i o n i s a t i o n : 170°C.

R E S U L T A T S E T DISCUSSION. I. COMPOSITION CHIMIQUE DE LA PAROI. L'6tude c h i m i q u e d6taill6e de la p a r o i de cette l e v n r e [16] r6vble qu'elle est c o n s t i t u t e de 52 h 60 p. cent d'hexoses, 12 p. cent de N-ac6tylgluc o s a m i n e et 13 p. cent d ' a c i d e s amin6s. Les hexoses sont constitu6s de glucose et m a n n o s e dans un r a p p o r t g l u c o s e / m a n n o s e 6gal h 0,9 ainsi que des traces de galactose. Les acides amin6s sont e s s e n t i e l l e m e n t co nstitu6s d ' a c i d e a s p a r l i q u e , thr6onine, s6rine, a c i d e glutamique, g l y c i n e et alanine. Le f r a c t i o n n e m e n t p a r l ' O h y l b n e d i a m i n e conduit aux f r a c t i o n s A, B e t C r e p r 6 s e n t a n t p o n d 6 r a l e m e n t r e s p e c t i v e m e n t 38,2 p. cent, 4,2 p. cent et 40,5 p. cent de la p a r o i s~chc. La nature et comp o s i t i o n c h i m i q u e sont trbs diff6rentes selon les f r a c t i o n s [16]. I I . ISOLEMENT DE LA GLYCOPROTEINE ,(~.

La g l y c o p r o t 6 i n e a a ~16 isol6e h p a r t i r de la f r a c t i o n A h y d r o s o l u b l e . La filtration m o l 6 c u l a i r e de la f r a c t i o n A sur gel <> A C A 54 conduit h une sous-fraction A ' I 61u6e au n i v e a u du v o l u m e d ' e x c l u s i o n et d ' u n e sous-fraction A2 + A'2 incluse darts ce gel. La sous-fraction A ' I est de nature g l y c o p r o t6ique, de masse m o l 6 c u l a i r e 61ev6e tandis que la sous-fraction A2 + A'2 est de nature p e p t i d i q u e de faible masse mol6culaire. Nous avons pu pr6p a r e r ainsi 700 mg de sous-fraction A'I h p a r t i r de 13 g de p a r o i de levure. Les ~lectrophor~ses de cette sons-fraction sur ac6tate de cellulose effectu6es avec le t a m p o n de Michl pH 3,5, ainsi q u ' a v e c les t a m p o n s au tStraborate de s o d i u m pH 9,2 et au v~ronal sod~ p H 8,6 sous une tension

I s o l e m e n t et s t r u c t u r e d ' u n e g l y c o p r o t ~ i n e . de 30 V / c m ont p e r m i s de mettre en 6vidence deux c o n s t i t u a n t s a et 6. Le c o n s t i t u a n t a, qui d o n n e seul u n e r6action positive avec le r6actif de Schiff et h l'amido-sch'warz, est de n a t u r e glycoprotdique. Le c o n s t i t u a n t ~ est de n a t u r e prot6ique.

DO,

~IAz+A[

1,5

689

P a r ailleurs, l'analyse p a r c h r o m a t o g r a p h i e en phase gazeuse des d6riv6s trifluoroac6tyl6s des oses libdr6s apr6s m 6 t h a n o l y s e de G c t r6v61e la pr6sence exclusive de m a n n o s e et de N-ac6tylg l u c o s a m i n e dans les r a p p o r t s 52:1. La c o m p o s i t i o n en acides amin6s r6sum6e dans le tableau I fair a p p a r a i t r e u n e p r o p o r t i o n 61ev6e en glycine, a l a n i n e , et acide glutamique. Cepend a n t il faut aussi n o t e r la p r 6 d o m i n a n c e p a r t i c u li6re de la t h r 6 o n i n e , de la s6rine et de l'acide aspartique. La c o m p o s i t i o n en acides amin6s de G a refl6te celle des acides amin6s de la p a r o i [16]. TABLEAU I. Composition en aminoacides de la glycoprot~ine a.

0,5

] 0

100 t V°

t

J 200

'~, 300

' 400

-m I

FIG. 1.

La p r 6 p a r a t i o n de la glycoprot6ine ct (G tt) a 6t6 r6alisde en r6it6rant des 61ectrophorbses sur p a p i e r W h a t m a n n 3 M M (39 × 45 cm) dans u n t a m p o n v6ronal sod6 pH 8,6. A chaque op6ration, 15 nag de fraction A'I sont ddposds en trait cont i n u au milieu du s u p p o r t ~ 6gale distance des 61ectrodes. Une t e n s i o n de 15 V / c m est appliqu6e d u r a n t une heure. Aprbs sdchage des dlectrophordgrammes les c o n s t i t u a n t s tt et 6 sont rep6r6s grace h leur fluorescence en U.V., puis dluds p a r de l'eau distil16e. Apr~s c o n c e n t r a t i o n sous vide, les rdsidus sont a d d i t i o n n 6 s de 50 volumes de m d t h a n o l distill6 et les c o n s t i t u a n t s ct et 6 qui p r d c i p i t e n t sont recueillis p a r c e n t r i f u g a t i o n (23 000 g) puis lyophilis6s. Le t r a i t e m e n t de 700 mg de sous-fraction A'I nous a p e r m i s de p r 6 p a r e r 280 mg de glycoprot6ine ~t et 20 mg de prot6ine i%

Acide aspartique Thrdonine Sdrlne Aeide glutamique Proline Glycine Alanine Valine Cystdine

PROTEINE a .

L'61ectrophorbse de cette glycoprotdine sur gel de p o l y a c r y l a m i d e selon la m6thode de Neville a p e r m i s d'en tester la puretd et d ' e n estimer la masse /t 45 000 daltons. L'analyse c h i m i q u e effectu6e p a r des m6thodes colorim6triques m o n t r e qu'elle est constitude de 62 p. cent d'hexoses, 3 p. cent de N-ac6tylglucosamine et 31 p. cent d'acides aminds. BIOCHIMIE, 1977, 59, n ° 8-9.

0,02 0,14 0,14 0,08 0,07 0,09 0,04 0,03

Les rdsultats sont exprimds en ttmole/mg de G ¢t.

IV. ETUDE STRUCTURALE DE LA GLYCOPROTEINE (L 1 - - Mise en ~videnee des liaisons O-glycosodiques. La mise en dvidence des liaisons O-glycosodiques a 6t6 effectude p a r i n c u b a t i o n de 1 mg de G a dans 3 ml de NaOH 0,1 N. La cindtique de rdaction a 6td suivie p a r lecture au spectrophotom b t r e / i ~ = 240 nm. L ' a u g m e n t a t i o n d ' a b s o r b a u c e DO, 0,7

___._~

¢f0,6

0.5 III. COMPOSITION CHIMIQUE DE LA GLYCO-

Mdthlonine Isoleucine Leucine Tyrosine Phdnylalanine Lysine Hlstldlne Argintne

0,23 0,17 0,16 0,22 0,12 0,18 0,17 0,12 traces

"

l

/' P 0,4./*

?

P o ~ - - - ~

20

ao

Heures

FIG. 2.

du milieu r 6 a c t i o n n e l h cette l o n g u e u r d ' o n d e est due "h la f o r m a t i o n des d d s h y d r o a m i n o a c i d e s forrods au t o u r s de la [3 61imination.

690

J. B. ]_,el e u et coil.

La figure 2 nous m o n t r e que la r6action de 61imination est achev6e apr6s 30 h e u r e s d ' i n c u bation p o u r G a. Au stade p r 6 p a r a t i f nous avons trait6 100 mg de G a p a r 100 ml de NaOH 0,1 N en pr6sence de NaBH 4 0,3 M d u r a n t 30 heures. La r6action est arr6t6e p a r a d d i t i o n de r6sine 6changeuse de cations (Do'wex 50 × 8, ¢ m e s h >> 25-50 f o r m e H+). Aprbs filtration et 6 v a p o r a t i o n sous vide, l ' a c i d e b o r i q u e est 61imin6 p a r distillation sous v i d e en pr6sence de m6thanol. 2 - - A n a l y s e des c o m p o s d s p a r ~ ~limination.

La f r a c t i o n F1, exclue du <> P=,, est de n a t u r e g l y c o p r o t 6 i q u e . La c o m p o s i t i o n de sa p a r tie p r o t 6 i q u e est analogue h celle de la g l y c o p r o t6ine a native, except6 p o u r la s6rine et l ' a l a n i n e . On observe une baisse de 50 /~ 55 p. cent de la t e n e u r en s6rine et une a u g m e n t a t i o n sensiblemerit parallble de celle en alanine.

lib~rds 21

Les d i v e r s compos6s obtenus aprbs la r6action de .~ 61imination sont s6par6s p a r filtration mol6c u l a i r e sur geI <> P.2 et caract6ris6s dans les 61uats p a r le r6actif au ph6nol s u l f u r i q u e [ t 7 ] . Nous a v o n s pu ainsi s 6 p a r e r trois f r a c t i o n s : F~ exclue, F_o et F 3 incluses dans ce gel (figure 3). DO

F,

0.2

Fz

FIG. 4.

l

/1

0,1

\-.-/

I

ot ~oo

tv°

200

300

400

~

m~

Fill. 3,

La f r a c t i o n F 2 est de nature o l i g o s a c c h a r i d i q u e et est constitu6e de m a n n i t o l et m a n n o s e dans le r a p p o r t 1 flA. La p e r m 6 t h y l a t i o n des oligosacchar i d e s de cette f r a c t i o n et l ' a n a l y s e des ethers m6t h y l i q u e s a mis en 6vidence les d6riv6s : 1,3,4,5, 6 p e n t a - O - m 6 t h y l - m a n n i t o l , 3,4,6 tri-O-m6thylm a n n o s e et 2,3,4,6 t6tra-O-m6thyl-mannose. Ces r6sultats nous p e r m e t t e n t de c o n c l u r e que la f r a c t i o n F 2 est constitu6e de deux oligosaccharides r 6 p o n d a n t aux structures suivantes : (Man (1 ~ 2) Mannitol) et (Man (1---> 2) Man (1---> 2) Mannitol) dans un r a p p o r t 5:1. L ' a n a l y s e de la f r a c t i o n F 3 m o n t r e la pr6sence e x c l u s i v e de m a n n i t o l et nous p e r m e t de c o n c l u r e q u ' u n e seule unit6 m a n n o s e est aussi engag6e dans une liaison O-glycosidique. BIOCHIMIE, 1977, 59, n ° 8-9.

Or G c t c o m p o r t e 0,16 i~mole/mg de s6rine soit 7 h 8 mol6cules de cet a m i n o a c i d e p a r m o l 6 c u l e de G a, il en r6sulte que seules 4 h 5 mol6cules de s6rine sont engag6es dans des liaisons O-glycosidiques avec des unit6s mannoses. Le taux de, t h r 6 o n i n e 6tant rest6 constant il est exclu que cet a m i n o a c i d e soit engag6 dans de telles liaisons. La c h r o m a t o g r a p h i c en phase gazeuse de la p a r t i e g l u c i d i q u e F 1 ne p e r m e t de d6celer que la p r 6 s e n c e de N - a c 6 t y l g l u c o s a m i n e et de m a n n o s e dans un r a p p o r t m o l a i r e 1/23. 3 - - R e c h e r c h e des liaisons N - g l y c o s i d i q u e s . La f r a c t i o n F 1 de nature g l y c o p r o t 6 i q u e a 6t6 soumise h un t r a i t e m e n t p a r la p r o n a s e selon le m o d e o p 6 r a t o i r e d6crit p a r Monsigny et coll. [13], afin d'61iminer la p a r t i e p r o t 6 i q u e de F~. Ira fraction g l y c o p e p t i d i q u e F' 1 issue de ce t r a i t e m e n t c o m p o r t e p o u r 2 moles de N-ac6tylglucosamine, 1 mole d ' a c i d e a s p a r t i q u e et 46 moles de mannose. Nous avons vu p r 6 c 6 d e m m e n t que G a c o m p o r t e 0,2,3 r~mole/mg d ' a c i d e a s p a r t i q u e p o u r 0,14 ~ m o l e / mg de N - a c 6 t y l g l u c o s a m i n e soit un r a p p o r t too-

i s o t e r a e n t et s t r u c t u r e d u e g l y c o p r o t e m e . laire 10:6. Or nous savons que la f r a c t i o n F'~ c o m p o r t e 3 r6sidus acide a s p a r t i q u e p o u r 6 r6sidus N-ac6tylglucosamine. Ces r6sultats p e r m e t tent de c o n c l u r e h la pr6sence de 3 liaisons N-gly-

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L'6tude de la p a r o i de l e v u r e constitue en g6n6ral une 6tape i n d i s p e n s a b l e h la c o m p r 6 h e n s i o n des ph6nom~nes relatifs au c o m p o r t e m e n t de la cellule vis-h-vis du m i l i e u ext6rieur.

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I

@ FIG. 5.

c o s i d i q u e s p a r mol6cule de G a qui e n g a g e r a i e n t e h a c u n e 2 unit6s N - a c 6 t y l g l u c o s a m i n e p o u r une units a c i d e aspartique. Ceci tend h r e n f o r c e r l ' h y p o t h 6 s e de Ballou et coll. [6] qui p r o p o s e p o u r les m a n n a n n e s de S a c c h a r o m g c e s cereoisiae des liaisons N g l y c o s i d i q u e s engageant une mol6cule de chitobiose. La c a r a c t 6 r i s a t i o n pr6cise de la s t r u c t u r e de ce p o i n t d ' a t t a c h e est en cours d'6tude, L ' e n s e m b l e des r6sultats d6crits nous p e r m e t de p r o p o s e r le schOna m o l 6 c u l a i r e s u i v a n t c o n c e r nant la g l y c o p r o t 6 i n e a (figure 5). CONCLUSION. L'6tude de telles mo16cules pr6sente, en d e h o r s de 1'aspect f o n d a m e n t a l , un int6r6t c e r t a i n dans des d o m a i n e s tr~s vari6s. On sait p a r e x e m p l e que les I n a n n o p r o t 6 i n e s superficielles des p a r o i s sont en p a r t i e r e s p o n s a b l e s des ph6nom~nes de floculence des levures, p h g n o m ~ n e s qui rev6tent u n e grande i m p o r t a n c e dans les i n d u s t r i e s de f e r m e n tation. P a r ailleurs on a d6montr6 que des manuannes engagbs dans des liaisons N - g l y c o s i d i q u e s sont r e s p o n s a b l e s des r6actions antig6niques chez les levures. De telles r6actions sont d6jh utilis6es en t a x o n o m i c [1;8] mais p o u r r a i e n t 6tre adopt6es pour r6soudre les p r o b l b m e s i n d u s t r i e l s c o n c e r nant la r e c o n n a i s s a n c e p r e c i s e des l e v u r e s i n c o r por6es duns des m61anges alirnentaires complexes. BIOCHIMIE, 1977, 59, n ° 8-9.

Remerciements. Nous remercions madame A. F. Bouquelet et monsieur Y. Leroy pour leur assistance technique. R~suM~. Une mannoprot~ine a ~t6 isol6e des parois de la levure Torulopsis candida apr~s traitement de ees ~l~ments cellulaires par l'~thylbnediamine, La sdparation des diff6rents produits hydrosolubles par filtrations sur gel et 61ectrophorbse sur papier a permis de recueillir eette glyeoprot~ine h l'~tat pur. Elle est constitu6e de 62 p. cent de mannose, 3 p. cent de N-ac6tylglucosamine et 31 p. cent d'aeides amines. L'~tude structurale r~v~le que les unit~s mannose sont li~es en 1 --> 2 et que de petits oligosaecharides sont fixds h la s6rine de la chaine peptidique par des liaisons O-glyeosidiques tandis que des polysaccharides sont fix4s & l'asparagine de cette chaine peptidique par une liaison N glycosidique faisant intervenir semble-t-il une moldcnle de ehitobiose. BIBLIOGRAPHIE. 1. Bartnieki-Gareia, S. (1968) Ann. Reo. Mierobiol., 22, 87-107. 2. Bonaly, R., Mou~ki, H., Touimi Benjelloun, A. a Pierfitte M. (1971) Biochim. Biophys. Acta, 244, 484-494. 3. Power, D. M. a Challinor, S. W. (1969) 2. Gem Microbiol., 55, 169-176. 4. Mc William, I. C. (1970) J. Inst. Br~w., 524-533. 5. Rasehke, W. C. ~ Ballou, C. E. (1972) Biochem., 11, (2), 3807-2816. 6. Nakajima, T. ~ Ballou, C. E. (1974) J. Biol. Chem., 249, (21), 7685-7694. 7. Korn, E. D. ~ Northcote, D. H. (1960) Biochem. J., 75, 1~-17.

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