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Lupus systémique : comme les cellules dendritiques, les cellules NK s’activent via Toll-like recepteur 9
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68e Congrès de la Société franc¸aise de médecine interne, Saint-Malo, 12–14 décembre 2013 / La Revue de médecine interne 34S (2013) A22–A79
des marqueurs fibrotiques et des paramètres de remodelage de la matrice extracellulaire. De manière très intéressante, une réduction de la fibrose cutanée et pulmonaire est obtenue lors d’une injection de cellules souches mésenchymateuses à j21, lorsque la fibrose tissulaire est déjà bien installée. Ceci témoigne donc d’un effet curatif des cellules souches mésenchymateuses dans la sclérodermie systémique. Conclusion.– Cette étude préclinique montre un effet bénéfique des cellules souches mésenchymateuses sur la fibrose cutanée et pulmonaire dans la sclérodermie systémique murine. Cet effet est noté lors d’une injection de 2,5 × 105 cellules à j21, temps où la fibrose est déjà bien installée. Ce résultat, obtenu dans une approche curative, est très encourageant dans la perspective d’une application clinique chez l’Homme. http://dx.doi.org/10.1016/j.revmed.2013.10.072 CO058
Évaluation des altérations endothéliales et cardiaques dans un modèle murin de purpura thrombotique thrombocytopénique M. Le Besnerais a , J. Favre b,c , C. Denis d , P. Mulder b , L. Nicol b , B. Lenormand e , H. Levesque a , P. Coppo f , A. Veyradier g , A. Schiviz h , V. Richard b , Y. Benhamou a a Département de médecine interne, CHU de Rouen, Rouen, France b Inserm U1096, Rouen, France c Institut de recherche et d’innovation en biomédecine, CHU de Rouen, Rouen, France d Inserm U770, hôpital Bicêtre, Le-Kremlin-Bicêtre, France e Hématologie biologique et hémostase, CHU de Rouen, Rouen, France f Centre de référence des micro-angiopathies thrombotiques, hôpital Saint-Antoine, Paris, France g Service d’hématologie biologique, hôpital Antoine-Beclère, Clamart, France h Gmbh, Baxter Innovation, Vienne, Autriche Introduction.– Le purpura thrombotique thrombocytopénique (PTT) est une microangiopathie thrombotique résultant du défaut de clivage des multimères de facteur Von Willebrand (FVW) par la métalloprotéase ADAMTS13. Différents arguments sont en faveur d’un rôle clé de l’endothélium dans la formation d’agrégats plaquettaires entrainant des défaillances d’organes de sévérité variable. Cependant la nature de l’atteinte endothéliale reste à définir et semble limitée à certains territoires vasculaires. Parmi eux, l’atteinte cardiaque serait responsable d’une incidence élevée de la morbi-mortalité et n’a été que rarement étudiée. Matériels et méthodes.– Des souris B6.129 témoins (WT) et déficientes en ADAMTS 13 (KO) ont été injectées avec du FVW recombinant (2000 ui/kg). Toutes les expérimentations ont été faites sur n = 6 souris. L’étude de la fonction endothéliale ex-vivo a été réalisée sur des segments d’artères coronaires, mésentériques et rénales à l’aide d’un myographe de Mulvany en mesurant les relaxations endothélium et monoxyde d’azote (NO) dépendantes à l’acétylcholine ainsi que les relaxations endothélium indépendantes au nitroprussiate de sodium (NPS). Les artères ont également été incubées avec de la L Nitro-arginine (LNNA), un inhibiteur de la synthèse du NO afin d’évaluer l’implication d’autres facteurs que le NO. Des évaluations biologiques (plaquettes, hémoglobine, schizocytes), fonctionnelles (échographie cardiaque) et morphologiques (immuno-histochimie myocardique) ont été effectuées. Résultats.– À j1 de l’injection, les souris KO + FVW développent rapidement une thrombopénie (41,8 G/L ± 6,9 G/L) comparativement aux KO (1038 G/L ± 25 G/L) aux WT + FVW (480,7 G/L ± 86,5 G/L) et aux WT (1118,6 G/L ± 160,8 G/L) ; p < 0,001 et une anémie
hémolytique mécanique (40,9 % ± 0,8 % vs KO : 50,5 % ± 2,3 % ; WT + VWF : 51,3 % ± 3,8 % et WT : 56,1 % ± 3 % ; p < 0,05) permettant de confirmer le modèle de microangiopathie thrombotique. Également à j1 de l’injection du FVW, les souris KO + FVW présentent une dysfonction systolique objectivée par une baisse de la fraction d’éjection du ventricule gauche (73,8 % ± 2,7 % vs KO : 84,4 % ± 0,7 %, WT + VWF : 86,6 % ± 1,3 % et WT : 86,8 % ± 1,3 % ; p < 0,01), et de l’index cardiaque (1,21 mL/min/g ± 0,09 vs KO : 1,62 mL/min/g ± 0,11, WT + VWF : 1,70 mL/min/g ± 0,14 et WT : 1,66 mL/min/g ± 0,1 ; p < 0,05). À j2, l’analyse histologique cardiaque révèle la présence de nécrose myocardique associée à un infiltrat lymphocytaire et à de l’œdème interstitiel uniquement dans le groupe KO + FVW. Par ailleurs, la relaxation en réponse à l’acétylcholine est diminuée au niveau mésentérique (51,1 % ± 14,8 % vs KO : 92,4 % ± 2,4 %, WT + VWF : 94,4 % ± 1,6 % ; p < 0,05 et WT : 96,5 % ± 2,3 % ; p < 0,001) et coronaire (61,7 % ± 12,4 % vs WT + VWF : 89,9 % ± 6,3 % et WT : 96,8 % ± 0,9 % ; p < 0,05), sans atteinte rénale. De plus, les relaxations coronaires sous-LNNA sont particulièrement altérées (19,3 % ± 3,7 % vs WT + VWF : 70,2 % ± 4,7 % ; p < 0,001) et les réponses relaxantes au NPS sont légèrement atténuées (47,8 % ± 13,8 % vs WT + VWF : 79,1 % ± 13,3 % et WT : 80,2 % ± 7,2 % ; p < 0,05), suggérant l’existence d’une dysfonction vasculaire majeure au niveau coronaire. Conclusion.– Ce travail démontre dans un modèle de PTT induit l’implication du cœur comme cible privilégiée. Nous avons pour la première fois objectivée une dysfonction endothéliale marquée au niveau des territoires mésentérique et coronaire renforc¸ant le besoin d’explorer les mécanismes impliqués dans cette atteinte vasculaire précoce pouvant être à l’origine de la défaillance d’organe au cours de cette pathologie. http://dx.doi.org/10.1016/j.revmed.2013.10.073 CO059
Lupus systémique : comme les cellules dendritiques, les cellules NK s’activent via Toll-like recepteur 9
B. Hervier a , M. Pha b , M. Miyara c , F. Cohen-Aubart d , M. Hie d , P. Debre e , Z. Amoura f , V. Vieillard g a Service de médecine interne, CHU Pitié-Sapétrière, Paris, France b Service de médecine interne, CHU de Reims, Reims, France c Laboratoire immunochimie, Pitié-Salpêtrière, AP–HP, Paris, France d Service de médecine interne 2, centre de référence du lupus, Pitié-Salpêtrière, AP–HP, Paris, France e Umrs 945, Inserm & Upmc, Paris, France f Service de médecine interne 2, centre de référence lupus et Sapl, groupe hospitalier Pitié-Salpétrière, Paris, France g Umrs 945, Inserm &Amp, Upmc, Paris, France Introduction.– La physiopathologie du Lupus systémique (LS) est complexe. L’implication des acteurs de l’immunité innée, comme les cellules Natural Killer (NK), a pu être démontrée. Mais les mécanismes d’activation des NK au cours du LS restent mal compris. Au cours du LS, la voie Toll-like recepteur 9 (TLR9), dont les ligands correspondent à des petits fragments d’ADN hypométhylés, a été impliquée dans l’activation des cellules dendritiques plasmacytoïdes. Or TLR9 est également exprimé par les cellules NK, permettant par analogie d’envisager le rôle potentiel de cette voie (NK/TLR9) dans l’activation des NK au cours du LS. Patients et méthodes.– De janvier à août 2013, 36 patients ont été étudiés (F/H ratio = 35 ; âge médian 34 ans, 18-74) et comparés à 12 sujets témoins. Des analyses phénotypiques (marquages CD3, CD56, CD69, TLR9, NKG2A, CD16, CD226 en cytométrie en flux) et fonctionnelles (cytotoxicité directe en présence de cellules K562 : CD107a, productions d’IFNg et TNFa) des cellules NK ont été réalisées en l’absence ou en présence d’un ligand de TLR9 d’origine bactérienne (CpG ODN A). Les résultats ont été évalués à la
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lumière des caractéristiques cliniques des patients (détermination de l’activité du LS par SLEDAI > 4 ; recensement des traitements en cours). Les analyses statistiques ont été réalisées par des tests adaptés (GrAp-Hpad software 6.0c). Résultats.– Le niveau d’expression intracellulaire de TLR9 par les NK est significativement augmenté chez les patients actifs (n = 10) comparativement aux inactifs (n = 26) ou aux contrôles (intensité de fluorescence moyenne = 54,2 ± 26,8 vs 30,2 ± 15,6 et 32,4 ± 15, p < 0,003 et p < 0,03, respectivement). Par ailleurs, cette expression est significativement diminuée chez les patients (n = 20) en cas de traitement par Hydroxychloroquine (connue pour inhiber la voie des TLRs) : 30,3 ± 17,4 vs 41,6 ± 17, p < 0,04. In vitro, la culture des cellules mononuclées sanguines de patients atteints de LS (non-traités par Hydroxychloroquine) en présence de CpG ODN A, aboutit à une activation des cellules NK. Ainsi, l’expression de CD69 (marqueur d’activation ubiquitaire) à la surface des NK est significativement augmentée (n = 11) en présence de CpG ODN A, passant de 27,1 ± 24,7 % à 50,9 ± 21,3 %, p < 0,03. La dégranulation des NK est également majorée (n = 8) : passant de 27,7 ± 17,3 % à 42 ± 23,3 %, p < 0,03. De même, il existe une augmentation modérée de la production d’IFNg par les NK (n = 8) : passant de 2,1 ± 2,5 % à 5,7 ± 4,2 %, p = 0,06. L’effet du CpG ODN A sur des NK triés semble identique (n = 2), suggérant un mécanisme d’action direct via TLR9 exprimé par les NK. Conclusion.– La voie NK/TLR9 est fonctionnelle et semble impliquée dans l’activation des cellules NK au cours du LS. Des travaux complémentaires devront établir si cette activation correspond à une situation physiologique : si les auto-antigènes du Lupus (fragments d’ADN, nucléosomes, corps apoptotiques. . .) connus pour lier TLR9, peuvent stimuler directement les NK au cours du LS. Travail soutenu par la SNFMI (Bourse Marcel Simon 2010) et le Groupe Pasteur Mutualité (Bourse 2011). http://dx.doi.org/10.1016/j.revmed.2013.10.074 CO060
CD4+CXCR3+ T cells and plasmacytoid dendritic cells (pDCs) in atherosclerosis-associated with systemic lupus erythematosus (SLE) K. Sacre a , B. Escoubet b , N. Charles c , M.P. Chauveheid d , T. Papo d a Inserm U699, médecine interne, CHU Bichat Claude-Bernard, Paris, France b Cardiologie, CHU Bichat Claude-Bernard, Paris, France c Inserm U699, CHU Bichat Claude-Bernard, Paris, France d Médecine interne, CHU Bichat Claude-Bernard, Paris, France Introduction.– Accelerated atherosclerosis is not fully explained by traditional risk factors in patients with systemic lupus erythematosus (SLE). We hypothesized that T cell expressing chemokine receptors involved in transendothelial migration such as CXCR3 and plasmacytoid dendritic cells (pDCs) may contribute to SLE-associated atherosclerosis. Patients and methods.– We measured the expression of CXCR3 on peripheral blood mononuclear cells and its association with carotid artery intima-media thickness (IMT) in 49 SLE subjects and 18 controls. We analyzed the phenotype and function of CXCR3+CD4+ T cells, the plasma levels of CXCR3 ligands (CXCL9, CXCL10 and CXCL11) in SLE patients and controls, and the in vitro inducible production of CXCL9/10/11 by arterial endothelial cells. Results.– SLE patients displayed a high frequency of circulating CD4+ T cells expressing the chemokine receptor CXCR3, as compared to controls. Infra-clinic atherosclerosis in SLE subjects, as assessed by measurements of carotid IMT, was significantly associated with increased frequency of CD4+CXCR3+ T cell. Such CD4+CX3CR1+ T cells were antigen-primed, expressed IFN-␣ receptor and produced high levels of TNF-␣. IFN-␣ was able to induce
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in vitro the expansion of CD4+ CXCR3+ T cells. On the other hand, plasma levels of CXCL9, CXCL10 and CXCL11 were high in SLE patients with an active disease. Eventually, TLR9-stimulated pDCs were found to produce IFN-␣ and induce the production of CXCL9, CXCL10 and CXCL11 by human arterial endothelial cells. Conclusion.– In SLE-associated atherosclerosis, IFN-␣ produced by stimulated pDCs may promote the expansion of CD4+CXCR3+ T cells and induce endothelial cells to secrete CXCL9/10/11, which may drive parietal migration of CD4+CXCR3+ T cells. http://dx.doi.org/10.1016/j.revmed.2013.10.075 CO061
Implication de la cytotoxicité dépendante des anticorps (ADCC) des cellules natural killer dans la physiopathologie des vascularites systémiques P.A. Jarrot a , C. Dumoulin b , A. Wideman a , F. Dignat-George a , P. Paul a , G. Kaplanski a a Unité Inserm 1076, faculté de pharmacie, campus Timone, Aix-Marseille université, Marseille, France b Laboratoire d’hématologie spécialisée, hôpital de la Conception, Marseille, France Introduction.– Les vascularites primitives ont été récemment reclassées dans la nouvelle classification de Chapel-Hill suite à l’introduction de marqueurs immunologiques [1]. La découverte des anticorps dirigés contre le cytoplasme des polynucléaires neutrophiles (ANCA) a permis d’ajouter à la classification anatomique une dimension physiopathologique où on distingue actuellement 3 mécanismes : les vascularites à mécanisme immunitaire cellulaire (maladie de Horton), les vascularites par dépôts de complexes immuns (cryoglobulinémie mixte), et les vascularites associées aux ANCA (granulomatose avec polyangéite. . .). En dehors de ces mécanismes, nous avons voulu savoir si d’autres cellules et mécanismes de l’immunité innée comme les cellules natural killer (NK) et l’antibody cell dependent cytotoxicity (ADCC) pouvaient être impliqués dans la physiopathologie de ces maladies. Patients et méthodes.– Il s’agit d’une étude pilote prospective réalisée sur l’année 2012–2013 au sein d’une unité Inserm en partenariat avec un laboratoire d’hématologie hospitalier où nous avons inclus des patients atteints de cryoglobulinémie mixte, et de vascularite associée aux ANCA. L’ADCC est dépendante de la présence d’anticorps, et active la cellule NK via l’engagement du CD16, un récepteur de faible affinité des IgG [2]. Récemment, une technique innovante, développée au sein de notre unité Inserm a permis d’étudier l’ADCC dans le rejet de greffe via les variations de fluorescence du CD16, d’une part, l’expression de Lamp-1 (lysosomal associated membrane protein1) un marqueur de dégranulation des NK et la sécrétion d’interféron gamma (IFN␥), d’autre part. Nous avons adapté cette technique à 2 modèles : le premier étant basé sur la détection éventuelle d’anticorps anti-cellules endothéliales (AECA) préalablement rapportés dans les vascularites, le deuxième spécifique des vascularites associées aux ANCA, dirigés contre les polynucléaires neutrophiles (PNN) [3]. Nous avons ensuite regardé la capacité des NK à induire une activation et une apoptose endothéliale au cours d’une réaction d’ADCC. Résultats.– Au total, 6 cryoglobulinémies mixtes, 8 vascularites associées aux ANCA, et 3 témoins sains ont été inclus. Concernant le premier modèle, nous n’avons pas retrouvé de modification de fluorescence du CD16, ni de l’expression de Lamp-1 quelque soit le sérum vis-à-vis d’une cible endothéliale. Cependant, il existe un léger engagement du CD16, sans modification de l’expression de Lamp-1, mais avec une sécrétion d’IFN␥ dans le modèle spécifique aux vascularites associées aux ANCA. De plus, nous avons observé une augmentation de l’expression d’intercercellular adhe-
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des marqueurs fibrotiques et des paramètres de remodelage de la matrice extracellulaire. De manière très intéressante, une réduction de la fibrose cutanée et pulmonaire est obtenue lors d’une injection de cellules souches mésenchymateuses à j21, lorsque la fibrose tissulaire est déjà bien installée. Ceci témoigne donc d’un effet curatif des cellules souches mésenchymateuses dans la sclérodermie systémique. Conclusion.– Cette étude préclinique montre un effet bénéfique des cellules souches mésenchymateuses sur la fibrose cutanée et pulmonaire dans la sclérodermie systémique murine. Cet effet est noté lors d’une injection de 2,5 × 105 cellules à j21, temps où la fibrose est déjà bien installée. Ce résultat, obtenu dans une approche curative, est très encourageant dans la perspective d’une application clinique chez l’Homme. http://dx.doi.org/10.1016/j.revmed.2013.10.072 CO058
Évaluation des altérations endothéliales et cardiaques dans un modèle murin de purpura thrombotique thrombocytopénique M. Le Besnerais a , J. Favre b,c , C. Denis d , P. Mulder b , L. Nicol b , B. Lenormand e , H. Levesque a , P. Coppo f , A. Veyradier g , A. Schiviz h , V. Richard b , Y. Benhamou a a Département de médecine interne, CHU de Rouen, Rouen, France b Inserm U1096, Rouen, France c Institut de recherche et d’innovation en biomédecine, CHU de Rouen, Rouen, France d Inserm U770, hôpital Bicêtre, Le-Kremlin-Bicêtre, France e Hématologie biologique et hémostase, CHU de Rouen, Rouen, France f Centre de référence des micro-angiopathies thrombotiques, hôpital Saint-Antoine, Paris, France g Service d’hématologie biologique, hôpital Antoine-Beclère, Clamart, France h Gmbh, Baxter Innovation, Vienne, Autriche Introduction.– Le purpura thrombotique thrombocytopénique (PTT) est une microangiopathie thrombotique résultant du défaut de clivage des multimères de facteur Von Willebrand (FVW) par la métalloprotéase ADAMTS13. Différents arguments sont en faveur d’un rôle clé de l’endothélium dans la formation d’agrégats plaquettaires entrainant des défaillances d’organes de sévérité variable. Cependant la nature de l’atteinte endothéliale reste à définir et semble limitée à certains territoires vasculaires. Parmi eux, l’atteinte cardiaque serait responsable d’une incidence élevée de la morbi-mortalité et n’a été que rarement étudiée. Matériels et méthodes.– Des souris B6.129 témoins (WT) et déficientes en ADAMTS 13 (KO) ont été injectées avec du FVW recombinant (2000 ui/kg). Toutes les expérimentations ont été faites sur n = 6 souris. L’étude de la fonction endothéliale ex-vivo a été réalisée sur des segments d’artères coronaires, mésentériques et rénales à l’aide d’un myographe de Mulvany en mesurant les relaxations endothélium et monoxyde d’azote (NO) dépendantes à l’acétylcholine ainsi que les relaxations endothélium indépendantes au nitroprussiate de sodium (NPS). Les artères ont également été incubées avec de la L Nitro-arginine (LNNA), un inhibiteur de la synthèse du NO afin d’évaluer l’implication d’autres facteurs que le NO. Des évaluations biologiques (plaquettes, hémoglobine, schizocytes), fonctionnelles (échographie cardiaque) et morphologiques (immuno-histochimie myocardique) ont été effectuées. Résultats.– À j1 de l’injection, les souris KO + FVW développent rapidement une thrombopénie (41,8 G/L ± 6,9 G/L) comparativement aux KO (1038 G/L ± 25 G/L) aux WT + FVW (480,7 G/L ± 86,5 G/L) et aux WT (1118,6 G/L ± 160,8 G/L) ; p < 0,001 et une anémie
hémolytique mécanique (40,9 % ± 0,8 % vs KO : 50,5 % ± 2,3 % ; WT + VWF : 51,3 % ± 3,8 % et WT : 56,1 % ± 3 % ; p < 0,05) permettant de confirmer le modèle de microangiopathie thrombotique. Également à j1 de l’injection du FVW, les souris KO + FVW présentent une dysfonction systolique objectivée par une baisse de la fraction d’éjection du ventricule gauche (73,8 % ± 2,7 % vs KO : 84,4 % ± 0,7 %, WT + VWF : 86,6 % ± 1,3 % et WT : 86,8 % ± 1,3 % ; p < 0,01), et de l’index cardiaque (1,21 mL/min/g ± 0,09 vs KO : 1,62 mL/min/g ± 0,11, WT + VWF : 1,70 mL/min/g ± 0,14 et WT : 1,66 mL/min/g ± 0,1 ; p < 0,05). À j2, l’analyse histologique cardiaque révèle la présence de nécrose myocardique associée à un infiltrat lymphocytaire et à de l’œdème interstitiel uniquement dans le groupe KO + FVW. Par ailleurs, la relaxation en réponse à l’acétylcholine est diminuée au niveau mésentérique (51,1 % ± 14,8 % vs KO : 92,4 % ± 2,4 %, WT + VWF : 94,4 % ± 1,6 % ; p < 0,05 et WT : 96,5 % ± 2,3 % ; p < 0,001) et coronaire (61,7 % ± 12,4 % vs WT + VWF : 89,9 % ± 6,3 % et WT : 96,8 % ± 0,9 % ; p < 0,05), sans atteinte rénale. De plus, les relaxations coronaires sous-LNNA sont particulièrement altérées (19,3 % ± 3,7 % vs WT + VWF : 70,2 % ± 4,7 % ; p < 0,001) et les réponses relaxantes au NPS sont légèrement atténuées (47,8 % ± 13,8 % vs WT + VWF : 79,1 % ± 13,3 % et WT : 80,2 % ± 7,2 % ; p < 0,05), suggérant l’existence d’une dysfonction vasculaire majeure au niveau coronaire. Conclusion.– Ce travail démontre dans un modèle de PTT induit l’implication du cœur comme cible privilégiée. Nous avons pour la première fois objectivée une dysfonction endothéliale marquée au niveau des territoires mésentérique et coronaire renforc¸ant le besoin d’explorer les mécanismes impliqués dans cette atteinte vasculaire précoce pouvant être à l’origine de la défaillance d’organe au cours de cette pathologie. http://dx.doi.org/10.1016/j.revmed.2013.10.073 CO059
Lupus systémique : comme les cellules dendritiques, les cellules NK s’activent via Toll-like recepteur 9
B. Hervier a , M. Pha b , M. Miyara c , F. Cohen-Aubart d , M. Hie d , P. Debre e , Z. Amoura f , V. Vieillard g a Service de médecine interne, CHU Pitié-Sapétrière, Paris, France b Service de médecine interne, CHU de Reims, Reims, France c Laboratoire immunochimie, Pitié-Salpêtrière, AP–HP, Paris, France d Service de médecine interne 2, centre de référence du lupus, Pitié-Salpêtrière, AP–HP, Paris, France e Umrs 945, Inserm & Upmc, Paris, France f Service de médecine interne 2, centre de référence lupus et Sapl, groupe hospitalier Pitié-Salpétrière, Paris, France g Umrs 945, Inserm &Amp, Upmc, Paris, France Introduction.– La physiopathologie du Lupus systémique (LS) est complexe. L’implication des acteurs de l’immunité innée, comme les cellules Natural Killer (NK), a pu être démontrée. Mais les mécanismes d’activation des NK au cours du LS restent mal compris. Au cours du LS, la voie Toll-like recepteur 9 (TLR9), dont les ligands correspondent à des petits fragments d’ADN hypométhylés, a été impliquée dans l’activation des cellules dendritiques plasmacytoïdes. Or TLR9 est également exprimé par les cellules NK, permettant par analogie d’envisager le rôle potentiel de cette voie (NK/TLR9) dans l’activation des NK au cours du LS. Patients et méthodes.– De janvier à août 2013, 36 patients ont été étudiés (F/H ratio = 35 ; âge médian 34 ans, 18-74) et comparés à 12 sujets témoins. Des analyses phénotypiques (marquages CD3, CD56, CD69, TLR9, NKG2A, CD16, CD226 en cytométrie en flux) et fonctionnelles (cytotoxicité directe en présence de cellules K562 : CD107a, productions d’IFNg et TNFa) des cellules NK ont été réalisées en l’absence ou en présence d’un ligand de TLR9 d’origine bactérienne (CpG ODN A). Les résultats ont été évalués à la
68e Congrès de la Société franc¸aise de médecine interne, Saint-Malo, 12–14 décembre 2013 / La Revue de médecine interne 34S (2013) A22–A79
lumière des caractéristiques cliniques des patients (détermination de l’activité du LS par SLEDAI > 4 ; recensement des traitements en cours). Les analyses statistiques ont été réalisées par des tests adaptés (GrAp-Hpad software 6.0c). Résultats.– Le niveau d’expression intracellulaire de TLR9 par les NK est significativement augmenté chez les patients actifs (n = 10) comparativement aux inactifs (n = 26) ou aux contrôles (intensité de fluorescence moyenne = 54,2 ± 26,8 vs 30,2 ± 15,6 et 32,4 ± 15, p < 0,003 et p < 0,03, respectivement). Par ailleurs, cette expression est significativement diminuée chez les patients (n = 20) en cas de traitement par Hydroxychloroquine (connue pour inhiber la voie des TLRs) : 30,3 ± 17,4 vs 41,6 ± 17, p < 0,04. In vitro, la culture des cellules mononuclées sanguines de patients atteints de LS (non-traités par Hydroxychloroquine) en présence de CpG ODN A, aboutit à une activation des cellules NK. Ainsi, l’expression de CD69 (marqueur d’activation ubiquitaire) à la surface des NK est significativement augmentée (n = 11) en présence de CpG ODN A, passant de 27,1 ± 24,7 % à 50,9 ± 21,3 %, p < 0,03. La dégranulation des NK est également majorée (n = 8) : passant de 27,7 ± 17,3 % à 42 ± 23,3 %, p < 0,03. De même, il existe une augmentation modérée de la production d’IFNg par les NK (n = 8) : passant de 2,1 ± 2,5 % à 5,7 ± 4,2 %, p = 0,06. L’effet du CpG ODN A sur des NK triés semble identique (n = 2), suggérant un mécanisme d’action direct via TLR9 exprimé par les NK. Conclusion.– La voie NK/TLR9 est fonctionnelle et semble impliquée dans l’activation des cellules NK au cours du LS. Des travaux complémentaires devront établir si cette activation correspond à une situation physiologique : si les auto-antigènes du Lupus (fragments d’ADN, nucléosomes, corps apoptotiques. . .) connus pour lier TLR9, peuvent stimuler directement les NK au cours du LS. Travail soutenu par la SNFMI (Bourse Marcel Simon 2010) et le Groupe Pasteur Mutualité (Bourse 2011). http://dx.doi.org/10.1016/j.revmed.2013.10.074 CO060
CD4+CXCR3+ T cells and plasmacytoid dendritic cells (pDCs) in atherosclerosis-associated with systemic lupus erythematosus (SLE) K. Sacre a , B. Escoubet b , N. Charles c , M.P. Chauveheid d , T. Papo d a Inserm U699, médecine interne, CHU Bichat Claude-Bernard, Paris, France b Cardiologie, CHU Bichat Claude-Bernard, Paris, France c Inserm U699, CHU Bichat Claude-Bernard, Paris, France d Médecine interne, CHU Bichat Claude-Bernard, Paris, France Introduction.– Accelerated atherosclerosis is not fully explained by traditional risk factors in patients with systemic lupus erythematosus (SLE). We hypothesized that T cell expressing chemokine receptors involved in transendothelial migration such as CXCR3 and plasmacytoid dendritic cells (pDCs) may contribute to SLE-associated atherosclerosis. Patients and methods.– We measured the expression of CXCR3 on peripheral blood mononuclear cells and its association with carotid artery intima-media thickness (IMT) in 49 SLE subjects and 18 controls. We analyzed the phenotype and function of CXCR3+CD4+ T cells, the plasma levels of CXCR3 ligands (CXCL9, CXCL10 and CXCL11) in SLE patients and controls, and the in vitro inducible production of CXCL9/10/11 by arterial endothelial cells. Results.– SLE patients displayed a high frequency of circulating CD4+ T cells expressing the chemokine receptor CXCR3, as compared to controls. Infra-clinic atherosclerosis in SLE subjects, as assessed by measurements of carotid IMT, was significantly associated with increased frequency of CD4+CXCR3+ T cell. Such CD4+CX3CR1+ T cells were antigen-primed, expressed IFN-␣ receptor and produced high levels of TNF-␣. IFN-␣ was able to induce
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in vitro the expansion of CD4+ CXCR3+ T cells. On the other hand, plasma levels of CXCL9, CXCL10 and CXCL11 were high in SLE patients with an active disease. Eventually, TLR9-stimulated pDCs were found to produce IFN-␣ and induce the production of CXCL9, CXCL10 and CXCL11 by human arterial endothelial cells. Conclusion.– In SLE-associated atherosclerosis, IFN-␣ produced by stimulated pDCs may promote the expansion of CD4+CXCR3+ T cells and induce endothelial cells to secrete CXCL9/10/11, which may drive parietal migration of CD4+CXCR3+ T cells. http://dx.doi.org/10.1016/j.revmed.2013.10.075 CO061
Implication de la cytotoxicité dépendante des anticorps (ADCC) des cellules natural killer dans la physiopathologie des vascularites systémiques P.A. Jarrot a , C. Dumoulin b , A. Wideman a , F. Dignat-George a , P. Paul a , G. Kaplanski a a Unité Inserm 1076, faculté de pharmacie, campus Timone, Aix-Marseille université, Marseille, France b Laboratoire d’hématologie spécialisée, hôpital de la Conception, Marseille, France Introduction.– Les vascularites primitives ont été récemment reclassées dans la nouvelle classification de Chapel-Hill suite à l’introduction de marqueurs immunologiques [1]. La découverte des anticorps dirigés contre le cytoplasme des polynucléaires neutrophiles (ANCA) a permis d’ajouter à la classification anatomique une dimension physiopathologique où on distingue actuellement 3 mécanismes : les vascularites à mécanisme immunitaire cellulaire (maladie de Horton), les vascularites par dépôts de complexes immuns (cryoglobulinémie mixte), et les vascularites associées aux ANCA (granulomatose avec polyangéite. . .). En dehors de ces mécanismes, nous avons voulu savoir si d’autres cellules et mécanismes de l’immunité innée comme les cellules natural killer (NK) et l’antibody cell dependent cytotoxicity (ADCC) pouvaient être impliqués dans la physiopathologie de ces maladies. Patients et méthodes.– Il s’agit d’une étude pilote prospective réalisée sur l’année 2012–2013 au sein d’une unité Inserm en partenariat avec un laboratoire d’hématologie hospitalier où nous avons inclus des patients atteints de cryoglobulinémie mixte, et de vascularite associée aux ANCA. L’ADCC est dépendante de la présence d’anticorps, et active la cellule NK via l’engagement du CD16, un récepteur de faible affinité des IgG [2]. Récemment, une technique innovante, développée au sein de notre unité Inserm a permis d’étudier l’ADCC dans le rejet de greffe via les variations de fluorescence du CD16, d’une part, l’expression de Lamp-1 (lysosomal associated membrane protein1) un marqueur de dégranulation des NK et la sécrétion d’interféron gamma (IFN␥), d’autre part. Nous avons adapté cette technique à 2 modèles : le premier étant basé sur la détection éventuelle d’anticorps anti-cellules endothéliales (AECA) préalablement rapportés dans les vascularites, le deuxième spécifique des vascularites associées aux ANCA, dirigés contre les polynucléaires neutrophiles (PNN) [3]. Nous avons ensuite regardé la capacité des NK à induire une activation et une apoptose endothéliale au cours d’une réaction d’ADCC. Résultats.– Au total, 6 cryoglobulinémies mixtes, 8 vascularites associées aux ANCA, et 3 témoins sains ont été inclus. Concernant le premier modèle, nous n’avons pas retrouvé de modification de fluorescence du CD16, ni de l’expression de Lamp-1 quelque soit le sérum vis-à-vis d’une cible endothéliale. Cependant, il existe un léger engagement du CD16, sans modification de l’expression de Lamp-1, mais avec une sécrétion d’IFN␥ dans le modèle spécifique aux vascularites associées aux ANCA. De plus, nous avons observé une augmentation de l’expression d’intercercellular adhe-