P13-2 Caractérisation des extrémités des génomes viraux: application au virus GB

Session 13 - Biologie mol6culaire et s61ection microbiologique des dons P13-2

Caractdrisation des extr6mitds des gdnomes viraux : application au virus GB P Biagini ~, H Attoui 2, JF C a n t a l o u b e L X d e L a m b a l l e r i e 2, P De Micco ~ 1Laboratoire de biologie moldculaire, ETS Alpes-Provence, 149, bd Baille, 13005 Marseille ; 21aboratoirede virologie mol~culaire, tropicale et transfusionnelle, facultd de mfdecine, Marseille Les extr6mit6s 5'et 3 ' d ' u n g6nome viral contiennent g6n6-

ralement des 616ments essentiels pour sa r6plication et son expression. La d6termination mol6culaire de ces r6gions repr~sente ainsi un objectif important dans la compr6hension du comportement viral, mais elle est habituellement rendue difficile par la faible sensibilit6 des techniques disponibles ; ces approches sont g6n6ralement exploitables sur des ARN cellulaires fortement exprim6s ou artificiellement concentr6s, mais pas au niveau du volume d ' u n pr616vement sanguin. Dans le but d ' u n e meilleure caract6risation du virus GBVC, eta l'appui d ' u n e 6tude de pr6valence r6alis6e dans notre ETS, nous avons d6velopp6 une m6thode rapide permetrant la d6termination des s6quences terminales a partir d'une quantit6 r6duite de g6nomes viraux : apr6s extraction des ARN et transcription inverse, I'ADNc obtenu est modifi6 par l'action d'une transf6rase terminale et une amorce <
DdveIoppement d'un nouveau test de ddpistage des gdnomes des virus VHB et VHC par la technologie PCR-Taqman : application au ddpistage chez les donneurs de sang B Mercier, L Burlot, C F6rec

ETSBO, 46, rue Fdix-Le-Dantec, 29275 Brest

Transfus Clin Bio11998 ; 5 (Suppl 1)

151 s

Plusieurs pays (AUemagne, ]~tats-Unis, Angleterre, etc) envisagent la mise en place de techniques de biologie mol6culaire pour le d6pistage des g6nomes viraux chez les donn e u r s d e s a n g . Ces n o u v e l l e s m 6 t h o d e s d e v r a i e n t permettent de r6duire la fen~tre de s6roconversion durant laquelle les techniques classiques de d6pistage des anticorps sont n6gatives. Le risque de contamination posttransfusionnel est estim6, en France, a 1/118 000 pour l'h6patite Bet 1/220 000 pour l'h6patite C. Aucune technique ne permet, a l'heure actuelle, de r6aliser cette recherche des g6nomes viraux sur chaque don de sang. C'est pourquoi des strat6gies de poolage ont ~t~ envisag6es et mises en place en Allemagne par exemple. Cependant, de telles approches de poolage peuvent ~tre discut6es, notamment en termes de sensibilit6. Nous avons d6velopp6 une nouvelle approche de detection des g6nomes viraux VHB et VHC par quantification en temps r6el, en utilisant la technologie de PCR-Taqman. Dans un premier temps, nous avons choisi des couples d'amorces et des sondes permettant de d6tecter les diff6rents sous-types de virus VHB et VHC. Dans un second temps, nous avons optimis6 les conditions de PCR, permettant ainsi une analyse simultan6e de ces deux g6nomes viraux. La sensibilit6 observ6e est de moins de 50 copies virales par mL de plasma pour le VHB et moins de 100 copies virales par mL de plasma pour le VHC. En conclusion, cette approche de quantification par PCR-Taqman pourrait permettre la d6tection des g6nomes viraux VHB et VHC sur chaque don de sang en moins de 8 heures. P13-4

Quantification du virus de l'hdpatite B par PCR : amdlioration de la sensibilitd permettant un meilleur suivi de la charge virale L Burlot, JB N o u s b a u m , B Mercier, C L6ostic, H G o u 6 r o u , C F6rec

ETSBO, 46, rue Fdlix-Le-Dantec, 29275 Brest ; service d'hdpato-gastro-ent&ologie, CHU La Cavale Blanche, 29275 Brest La pr6valence de l'antig6ne HBs est estim6e a 0,3 % en France. Le risque de contamination post-transfusionnelle est estim6 ~ 1/118 000. L'6volution quantitative de la r6plication virale est un param6tre important au moment du d6pistage et en cas de traitement de l'h6patite chronique due au virus B. Nous avons d6velopp6 une approche de quantification