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Recherche de cryptosporidies dans les selles
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RECHERCHE DE CRYPTOSPORIDIES DANS LES SELLES
Revue frangaise des laboratoires
M.-H. BESSlt=RES, M.-D. LINAS et M. BOYER *
1. L'AGENT PATHOGENE Les cryptosporidioses sont des zoonoses parasitaires dont les agents les Cryptosporidium sont des protozoaires reconnus comme des coccidies. II existe deux especes : Cryptosporidium parvum et
Cryptosporidium muris.
2. RAPPEL I~PIDI~MIOLOGIQUE 2.1. RE'PARTITION GI~OGRAPHIQUE Parasitose cosmopolite. La maladie, responsable de syndromes diarrheiques n6onataux, touche les jeunes mammif~res d'61evage (veaux, porcelets, poulains) et par vole de consequence les fermiers et ies v6t~rinaires. 2.2. MODE DE CONTAMINATION Vole orale par ingestion d'oocystes directement contaminants pr6sents dans i'eau et les aliments souilles. 2.3. CYCLE II se deroule chez un seul et m~me h6te & I'interieur du tractus digestif et respiratoire avec une phase asexu6e ou schizogonie et une phase sexu~e ou gamogonie aboutissant & I'elimination d'oocystes matures dans le milieu ext6rieur. Les oocystes contiennent quatre sporozdltes. 2.4. CIRCONSTANCES DE DIAGNOSTIC CLINIQUE Cette affection intestinale, spontanement r~solutive chez les patients immunocompetents, entraine des troubles s6v~res chez les patients immunod6prim6s en particulier les patients VlH+. Des troubles digestifs s~veres avec diarrh6es aqueuses, rebelles aux th6rapeutiques, sont les sympt6mes cliniques majeurs.
3. DIAGNOSTIC II repose sur la raise en ~vidence des cryptosporidies dans les mati~res fecales et exige I'utilisation de colorations speciales. La coloration de ZiehI-Neelsen modifiee est la plus utilisee. C'est celle que nous d6crivons dans cette fiche technique. Toutefois, la technique d'immunofluorescence & I'aide d'anticorps monoclonaux est tr~s utilisee aujourd'hui. Les 6chantillons de selles sont trait6s de la m~me mani~re et la technique r6alis6e gr&ce & des r6actifs commercialis~s. 3.1. TRAITEMENT DES ECHANTILLONS DE SELLES Selles liquides
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E t a l e m e n t s m i n c e s sur 2 l a m e s
Selles normales ou p&teuses
S u s p e n s i o n d a n s un t u b e d ' e a u distillde sterile Etalements m i n c e s sur 2 l a m e s
J Laisser s6cher & I'air - Fixer au methanol 5 min - S~cher & I'air 3.2. COLORATION D'HENRIKSEN - COLORATION DE ZIEHL-NEELSEN MODIFIEE PAR HENRIKSEN ET POBLENZ Colorer les lames & froid pendant une heure dans un bac contenant une solution de fuchsine ph6niqu6e*. Rincer abondamment & I'eau du robinet. * Laboratoire de p a r a s i t o l o g i e - m y c o l o g i e (,Dr J.-P. SEGUELA) - C.H.U. Rangueil - 3 1 0 5 4 T O U L O U S E CEDEX.
Revue franqaise des laboratoires
FIGURES 1 ~ 4 Oocystes de Cryptosporidium sp. Examen d'un ~talement de selles apr~s coloration d'Henriksen ........ 2. (G x 40)
4. (G x 100)
Differencier quelques secondes dans une solution u ac~ue suHunque a z 70 en agi~an[ ~es tames zu secondes. Rincer abondamment & I'eau du robinet. Contre-colorer dans une solution aqueuse de vert de malachite & 5 % pendant 5 minutes. Rincer abondamment & I'eau du robinet. S~cher & I'air. Lire au microscope : il est possible de rechercher les parasites & des grossissements objectifs 40 apr~s lutage & rEukitt ou & I'immersion objectif 50, mais il faut confirmer le diagnostic & I'immersion objectif 100. ° ASPECT MICROSCOPIQUE Selon les selles, le fond de la pr6paration varie du vert p&le au vert fonce, en passant par le bleu et m#me le violet. Les parasites se pr6sentent comme des ~l~ments arrondis de 3 & 5 IJm, leur coloration varie du rose fushia au rouge fonc~ brillant. Certains d'entre eux peuvent m6me ne pas prendre la coloration. Les oocystes ont une paroi 6paisse, le cytoplasme est finement granuleux avec une zone centrale souvent plus claire. Diagnostic diff6rentiel : les levures apparaissent uniformement color6es en vert ou en rose et les graisses colorees en rouge. * Fuschine ph6niqu6e : Solution A : fuschine 15 g Solution B :solution A 10 ml 6thanol 1 000 ml eau #h~niqu6e & 5 % 90 ml Apr~s m~lange de la solution A et B, filtrer la solution avant I'utilisation. Apr6s pr6paration, cette solution est utilisable de 2 & 3 mois. BIBLIOGRAPHIE DELUOL A.M. - Atlas de paras/to/ogle. Guide pratique du diagnostic au microscope. "Flagell~s, infusoires et coccidies", Volume II, Editions Varia, Paris. ANN O'FEL - Parasitologie - mycologie. Maladies parasitaires et fongiques. E-ditions C & R, 5 ° ~dition, La Madeleine, 1992.
Revue fran~aisedes laboratoires
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RECHERCHE DE CRYPTOSPORIDIES DANS LES SELLES
Revue frangaise des laboratoires
M.-H. BESSlt=RES, M.-D. LINAS et M. BOYER *
1. L'AGENT PATHOGENE Les cryptosporidioses sont des zoonoses parasitaires dont les agents les Cryptosporidium sont des protozoaires reconnus comme des coccidies. II existe deux especes : Cryptosporidium parvum et
Cryptosporidium muris.
2. RAPPEL I~PIDI~MIOLOGIQUE 2.1. RE'PARTITION GI~OGRAPHIQUE Parasitose cosmopolite. La maladie, responsable de syndromes diarrheiques n6onataux, touche les jeunes mammif~res d'61evage (veaux, porcelets, poulains) et par vole de consequence les fermiers et ies v6t~rinaires. 2.2. MODE DE CONTAMINATION Vole orale par ingestion d'oocystes directement contaminants pr6sents dans i'eau et les aliments souilles. 2.3. CYCLE II se deroule chez un seul et m~me h6te & I'interieur du tractus digestif et respiratoire avec une phase asexu6e ou schizogonie et une phase sexu~e ou gamogonie aboutissant & I'elimination d'oocystes matures dans le milieu ext6rieur. Les oocystes contiennent quatre sporozdltes. 2.4. CIRCONSTANCES DE DIAGNOSTIC CLINIQUE Cette affection intestinale, spontanement r~solutive chez les patients immunocompetents, entraine des troubles s6v~res chez les patients immunod6prim6s en particulier les patients VlH+. Des troubles digestifs s~veres avec diarrh6es aqueuses, rebelles aux th6rapeutiques, sont les sympt6mes cliniques majeurs.
3. DIAGNOSTIC II repose sur la raise en ~vidence des cryptosporidies dans les mati~res fecales et exige I'utilisation de colorations speciales. La coloration de ZiehI-Neelsen modifiee est la plus utilisee. C'est celle que nous d6crivons dans cette fiche technique. Toutefois, la technique d'immunofluorescence & I'aide d'anticorps monoclonaux est tr~s utilisee aujourd'hui. Les 6chantillons de selles sont trait6s de la m~me mani~re et la technique r6alis6e gr&ce & des r6actifs commercialis~s. 3.1. TRAITEMENT DES ECHANTILLONS DE SELLES Selles liquides
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E t a l e m e n t s m i n c e s sur 2 l a m e s
Selles normales ou p&teuses
S u s p e n s i o n d a n s un t u b e d ' e a u distillde sterile Etalements m i n c e s sur 2 l a m e s
J Laisser s6cher & I'air - Fixer au methanol 5 min - S~cher & I'air 3.2. COLORATION D'HENRIKSEN - COLORATION DE ZIEHL-NEELSEN MODIFIEE PAR HENRIKSEN ET POBLENZ Colorer les lames & froid pendant une heure dans un bac contenant une solution de fuchsine ph6niqu6e*. Rincer abondamment & I'eau du robinet. * Laboratoire de p a r a s i t o l o g i e - m y c o l o g i e (,Dr J.-P. SEGUELA) - C.H.U. Rangueil - 3 1 0 5 4 T O U L O U S E CEDEX.
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FIGURES 1 ~ 4 Oocystes de Cryptosporidium sp. Examen d'un ~talement de selles apr~s coloration d'Henriksen ........ 2. (G x 40)
4. (G x 100)
Differencier quelques secondes dans une solution u ac~ue suHunque a z 70 en agi~an[ ~es tames zu secondes. Rincer abondamment & I'eau du robinet. Contre-colorer dans une solution aqueuse de vert de malachite & 5 % pendant 5 minutes. Rincer abondamment & I'eau du robinet. S~cher & I'air. Lire au microscope : il est possible de rechercher les parasites & des grossissements objectifs 40 apr~s lutage & rEukitt ou & I'immersion objectif 50, mais il faut confirmer le diagnostic & I'immersion objectif 100. ° ASPECT MICROSCOPIQUE Selon les selles, le fond de la pr6paration varie du vert p&le au vert fonce, en passant par le bleu et m#me le violet. Les parasites se pr6sentent comme des ~l~ments arrondis de 3 & 5 IJm, leur coloration varie du rose fushia au rouge fonc~ brillant. Certains d'entre eux peuvent m6me ne pas prendre la coloration. Les oocystes ont une paroi 6paisse, le cytoplasme est finement granuleux avec une zone centrale souvent plus claire. Diagnostic diff6rentiel : les levures apparaissent uniformement color6es en vert ou en rose et les graisses colorees en rouge. * Fuschine ph6niqu6e : Solution A : fuschine 15 g Solution B :solution A 10 ml 6thanol 1 000 ml eau #h~niqu6e & 5 % 90 ml Apr~s m~lange de la solution A et B, filtrer la solution avant I'utilisation. Apr6s pr6paration, cette solution est utilisable de 2 & 3 mois. BIBLIOGRAPHIE DELUOL A.M. - Atlas de paras/to/ogle. Guide pratique du diagnostic au microscope. "Flagell~s, infusoires et coccidies", Volume II, Editions Varia, Paris. ANN O'FEL - Parasitologie - mycologie. Maladies parasitaires et fongiques. E-ditions C & R, 5 ° ~dition, La Madeleine, 1992.
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