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Rôle du stress oxydant dans la sénescence des lymphocytes T induite par l’exposition à la fumée de cigarette
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J2R (Posters)
P11
2 Service de pneumologie, centre hospitalier de Roubaix, Roubaix, France ∗ Auteur correspondant. Adresse e-mail : fl[email protected] (F. Hennegrave)
Rôle du stress oxydant dans la sénescence des lymphocytes T induite par l’exposition à la fumée de cigarette Kerbrat 1,∗ ,
Baskara 1 ,
Dagouassat 1 ,
Henry 1 ,
S. I. M. A. C. Duprez 3 , C.Baillou 2 , F. Lemoine 2 , X. Decrouy 1 , J. Boczkowski 1 , S. Le Gouvello 1,3 1 Inserm U955, Créteil, France 2 Laboratoire de Biothérapies, Hôpital de la Pitié-Salpêtrière, Paris, France 3 Service d’Immunologie Biologique, Hôpital Henri-Mondor, Créteil, France ∗ Auteur correspondant. Adresse e-mail : [email protected] (S. Kerbrat) Introduction La fumée de cigarette, source de stress oxydant, majore la sévérité de diverses maladies inflammatoires chroniques par des mécanismes peu connus. Le rôle pathogène des lymphocytes T CD4+ (LTCD4+ ) producteurs d’IL17 (Th17) dans est établi dans ces maladies, dont la bronchopneumopathie chronique obstructive (BPCO), maladie respiratoire inflammatoire chronique dont le principal agent étiologique est le tabagisme. Dans la BPCO, les cellules pulmonaires présentent une sénescence prématurée, associée à une inflammation plus importante et à la sévérité de la maladie. Méthodes Les LTCD4+ périphériques Th17, Th1/Th2 = non-Th17 et Treg de sujets sains sont isolés, puis traités avec du condensat de fumée de cigarette (CFC). L’induction de sénescence est évaluée en immunofluorescence par l’expression du marqueur de sénescence p16. L’effet des espèces réactives de l’oxygène (ERO) est évalué après traitement par l’anti-oxydant, NAC. La production d’ERO est mesurée par cytométrie en flux par la capacité d’oxydation de la sonde H2DCF-DA. La réponse anti-oxydante est évaluée en RQ-PCR par l’expression des enzymes anti-oxydantes. Résultats L’exposition au CFC induit une expression de p16 plus importante dans les Th17 que dans les autres LTCD4+ . Le traitement par NAC prévient l’expression de p16, indiquant le rôle potentiel des ERO contenues dans le CFC. Les Th17 produisent plus d’ERO que les autres LTCD4+ après exposition au CFC, mais aussi en condition basale. Les résultats de RQ-PCR montrent une moindre expression des enzymes anti-oxydantes (Gpx2, TrxR, HO-1) dans les Th17 par rapport aux Treg, et une expression plus importante d’IL4I1, une mono-amineoxydase productrice d’H2 O2 . Conclusions Nos résultats indiquent que sénescence et susceptibilité à l’agression oxydative pourraient être liées dans les LTCD4+ , et que les Th17 pourraient avoir une plus grande susceptibilité à la sénescence induite par le CFC en rapport avec un taux d’ERO plus important par rapport aux autres LTCD4+ . Nous analyserons ensuite le sécrétome inflammatoire des Th17 associé à l’augmentation de p16 après exposition au CFC, puis nous déterminerons si les particularités observées au niveau du sécrétome et/ou de la réponse oxydative des Th17 chez les sujets sains sont majorées chez les patients BPCO. Mot clé BPCO Déclaration d’intérêts Les auteurs n’ont pas transmis de déclaration de conflits d’intérêts. http://dx.doi.org/10.1016/j.rmr.2015.02.036 P12
Capacité des immunostimulants à restaurer une réponse IL-17, IL-22, IFN-␥ dans le cadre de la BPCO F. Hennegrave 1,∗ , N. Just 2 , O. Le Rouzic 1 , J.C. Sirard 1 , M. Pichavant 1 , P. Gosset 1 1 Équipe 8 du Centre d’Infection et d’Immunité de Lille, Inserm U1019, Institut Pasteur de Lille, Lille, France
Introduction La bronchopneumopathie chronique obstructive (BPCO), dont le tabagisme est le principal facteur de risque, est un problème majeur de santé publique pour lequel il n’existe que des traitements symptomatiques. La progression de la maladie fait intervenir des épisodes d’exacerbations favorisés par une susceptibilité de ces patients aux infections. Des travaux du laboratoire ont montré le rôle du défaut d’IL-17 et d’IL-22 dans la susceptibilité à l’infection par S. pneumoniae et H. influenzae. Notre objectif est d’évaluer la capacité d’immunostimulants agonistes de TLR (LPS, Flagelline et CpG) à moduler la réponse IL-17 et IL-22 mais aussi d’IFN-␥. Méthodes Les taux d’IL-17, d’IL-22 et d’IFN-␥ en réponse au LPS, à la Flagelline et au CpG ont été mesurés par Elisa dans les surnageants de cellules mononucléées (CMN) de : — sujets témoins non-fumeurs ; — sujets fumeurs ; — patients BPCO. Les cellules productrices de ces cytokines en réponse à ces immunostimulants ont été identifiées par cytométrie en flux. L’impact de la fumée de cigarette (CSE) sur la réponse aux immunostimulants a été évalué in vitro chez des sujets non-fumeurs. Le rôle des cellules présentatrices d’antigènes (APC) a également été analysé après exposition aux immunostimulants en présence ou non de CSE. Résultats Parmi les immunostimulants testés, seule la Flagelline induit une réponse IL-17 et IL-22 chez les patients BPCO. Cette réponse Th17 est observée principalement dans les cellules NK, NKT et Lineage− . Cette réponse est liée à une action directe sur les APC, puisque la Flagelline et le LPS augmentent la sécrétion des cytokines pro-Th17 par les monocytes et les cellules dendritiques de sujets témoins. L’exposition in vitro au CSE inhibe l’action de la Flagelline avec un effet direct sur les APC entraînant une diminution de production de cytokines pro-Th17. Conclusion Ce travail montre l’efficacité de la Flagelline à restaurer une réponse de cytokines Th17 par les cellules immunitaires innées chez les patients BPCO. Cependant, l’effet de ce ligand du TLR5 est contrecarré par l’exposition au CSE. L’utilisation de cet immunostimulant pourrait représenter une nouvelle stratégie thérapeutique pour restaurer une immunité compétente chez les patients BPCO. Mots clés BPCO ; Infection Déclaration d’intérêts Les auteurs n’ont pas transmis de déclaration de conflits d’intérêts. http://dx.doi.org/10.1016/j.rmr.2015.02.037 P13
Implication des cytokines IL-19, IL-20 et IL-24 dans la susceptibilité à l’infection au cours de la BPCO B. Koné ∗ , M. Perez-Cruz , G. Kervoaze , M. Pichavant , P. Gosset LI3, Inserm U1019-UMR8204, Institut Pasteur de Lille, Lille, France ∗ Auteur correspondant. Adresse e-mail : [email protected] (B. Koné) Introduction La BPCO est un problème de santé publique caractérisé par des épisodes d’exacerbation principalement dues à des infections bactériennes. Dans le laboratoire, nous avons mis en évidence un défaut de la réponse IL-17/IL-22 dans le cadre de l’exacerbation de la BPCO par des bactéries. Les cytokines IL-20 (IL-19/IL-20/IL-24) ont été décrites comme inhibant la réponse IL17 dans un modèle d’infection cutanée. Ces cytokines agissent en se liant à 2 récepteurs IL-20R␣/IL-20R et IL-22R␣/IL-20R. Notre but
J2R (Posters)
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2 Service de pneumologie, centre hospitalier de Roubaix, Roubaix, France ∗ Auteur correspondant. Adresse e-mail : fl[email protected] (F. Hennegrave)
Rôle du stress oxydant dans la sénescence des lymphocytes T induite par l’exposition à la fumée de cigarette Kerbrat 1,∗ ,
Baskara 1 ,
Dagouassat 1 ,
Henry 1 ,
S. I. M. A. C. Duprez 3 , C.Baillou 2 , F. Lemoine 2 , X. Decrouy 1 , J. Boczkowski 1 , S. Le Gouvello 1,3 1 Inserm U955, Créteil, France 2 Laboratoire de Biothérapies, Hôpital de la Pitié-Salpêtrière, Paris, France 3 Service d’Immunologie Biologique, Hôpital Henri-Mondor, Créteil, France ∗ Auteur correspondant. Adresse e-mail : [email protected] (S. Kerbrat) Introduction La fumée de cigarette, source de stress oxydant, majore la sévérité de diverses maladies inflammatoires chroniques par des mécanismes peu connus. Le rôle pathogène des lymphocytes T CD4+ (LTCD4+ ) producteurs d’IL17 (Th17) dans est établi dans ces maladies, dont la bronchopneumopathie chronique obstructive (BPCO), maladie respiratoire inflammatoire chronique dont le principal agent étiologique est le tabagisme. Dans la BPCO, les cellules pulmonaires présentent une sénescence prématurée, associée à une inflammation plus importante et à la sévérité de la maladie. Méthodes Les LTCD4+ périphériques Th17, Th1/Th2 = non-Th17 et Treg de sujets sains sont isolés, puis traités avec du condensat de fumée de cigarette (CFC). L’induction de sénescence est évaluée en immunofluorescence par l’expression du marqueur de sénescence p16. L’effet des espèces réactives de l’oxygène (ERO) est évalué après traitement par l’anti-oxydant, NAC. La production d’ERO est mesurée par cytométrie en flux par la capacité d’oxydation de la sonde H2DCF-DA. La réponse anti-oxydante est évaluée en RQ-PCR par l’expression des enzymes anti-oxydantes. Résultats L’exposition au CFC induit une expression de p16 plus importante dans les Th17 que dans les autres LTCD4+ . Le traitement par NAC prévient l’expression de p16, indiquant le rôle potentiel des ERO contenues dans le CFC. Les Th17 produisent plus d’ERO que les autres LTCD4+ après exposition au CFC, mais aussi en condition basale. Les résultats de RQ-PCR montrent une moindre expression des enzymes anti-oxydantes (Gpx2, TrxR, HO-1) dans les Th17 par rapport aux Treg, et une expression plus importante d’IL4I1, une mono-amineoxydase productrice d’H2 O2 . Conclusions Nos résultats indiquent que sénescence et susceptibilité à l’agression oxydative pourraient être liées dans les LTCD4+ , et que les Th17 pourraient avoir une plus grande susceptibilité à la sénescence induite par le CFC en rapport avec un taux d’ERO plus important par rapport aux autres LTCD4+ . Nous analyserons ensuite le sécrétome inflammatoire des Th17 associé à l’augmentation de p16 après exposition au CFC, puis nous déterminerons si les particularités observées au niveau du sécrétome et/ou de la réponse oxydative des Th17 chez les sujets sains sont majorées chez les patients BPCO. Mot clé BPCO Déclaration d’intérêts Les auteurs n’ont pas transmis de déclaration de conflits d’intérêts. http://dx.doi.org/10.1016/j.rmr.2015.02.036 P12
Capacité des immunostimulants à restaurer une réponse IL-17, IL-22, IFN-␥ dans le cadre de la BPCO F. Hennegrave 1,∗ , N. Just 2 , O. Le Rouzic 1 , J.C. Sirard 1 , M. Pichavant 1 , P. Gosset 1 1 Équipe 8 du Centre d’Infection et d’Immunité de Lille, Inserm U1019, Institut Pasteur de Lille, Lille, France
Introduction La bronchopneumopathie chronique obstructive (BPCO), dont le tabagisme est le principal facteur de risque, est un problème majeur de santé publique pour lequel il n’existe que des traitements symptomatiques. La progression de la maladie fait intervenir des épisodes d’exacerbations favorisés par une susceptibilité de ces patients aux infections. Des travaux du laboratoire ont montré le rôle du défaut d’IL-17 et d’IL-22 dans la susceptibilité à l’infection par S. pneumoniae et H. influenzae. Notre objectif est d’évaluer la capacité d’immunostimulants agonistes de TLR (LPS, Flagelline et CpG) à moduler la réponse IL-17 et IL-22 mais aussi d’IFN-␥. Méthodes Les taux d’IL-17, d’IL-22 et d’IFN-␥ en réponse au LPS, à la Flagelline et au CpG ont été mesurés par Elisa dans les surnageants de cellules mononucléées (CMN) de : — sujets témoins non-fumeurs ; — sujets fumeurs ; — patients BPCO. Les cellules productrices de ces cytokines en réponse à ces immunostimulants ont été identifiées par cytométrie en flux. L’impact de la fumée de cigarette (CSE) sur la réponse aux immunostimulants a été évalué in vitro chez des sujets non-fumeurs. Le rôle des cellules présentatrices d’antigènes (APC) a également été analysé après exposition aux immunostimulants en présence ou non de CSE. Résultats Parmi les immunostimulants testés, seule la Flagelline induit une réponse IL-17 et IL-22 chez les patients BPCO. Cette réponse Th17 est observée principalement dans les cellules NK, NKT et Lineage− . Cette réponse est liée à une action directe sur les APC, puisque la Flagelline et le LPS augmentent la sécrétion des cytokines pro-Th17 par les monocytes et les cellules dendritiques de sujets témoins. L’exposition in vitro au CSE inhibe l’action de la Flagelline avec un effet direct sur les APC entraînant une diminution de production de cytokines pro-Th17. Conclusion Ce travail montre l’efficacité de la Flagelline à restaurer une réponse de cytokines Th17 par les cellules immunitaires innées chez les patients BPCO. Cependant, l’effet de ce ligand du TLR5 est contrecarré par l’exposition au CSE. L’utilisation de cet immunostimulant pourrait représenter une nouvelle stratégie thérapeutique pour restaurer une immunité compétente chez les patients BPCO. Mots clés BPCO ; Infection Déclaration d’intérêts Les auteurs n’ont pas transmis de déclaration de conflits d’intérêts. http://dx.doi.org/10.1016/j.rmr.2015.02.037 P13
Implication des cytokines IL-19, IL-20 et IL-24 dans la susceptibilité à l’infection au cours de la BPCO B. Koné ∗ , M. Perez-Cruz , G. Kervoaze , M. Pichavant , P. Gosset LI3, Inserm U1019-UMR8204, Institut Pasteur de Lille, Lille, France ∗ Auteur correspondant. Adresse e-mail : [email protected] (B. Koné) Introduction La BPCO est un problème de santé publique caractérisé par des épisodes d’exacerbation principalement dues à des infections bactériennes. Dans le laboratoire, nous avons mis en évidence un défaut de la réponse IL-17/IL-22 dans le cadre de l’exacerbation de la BPCO par des bactéries. Les cytokines IL-20 (IL-19/IL-20/IL-24) ont été décrites comme inhibant la réponse IL17 dans un modèle d’infection cutanée. Ces cytokines agissent en se liant à 2 récepteurs IL-20R␣/IL-20R et IL-22R␣/IL-20R. Notre but