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Spectres cytochromiques de la levure cultivée en anaérobiose ou en aérobiose
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SHORT COMMUNICATIONS
VOL. 26 (z957)
Spectres cytochromiques de la levure cultiv~e en ana~robiose ou en a~robiose Les co urb es A et B de la Fig. I r e p r 6 s e n t e n t les s p e c t r e s r 6 d u i t s 6tudi6s ~ la t e m p e r a t u r e o r d i n a i r e et ~t la t e m p 6 r u t u r e de l ' a z o t e liquide, de cellules de l e v u r e s ' 6 t u n t d6veloppdes duns des c o n d i t i o n s anu6robies. Les courbes A et B des Figs. 2 et 3 r e p r d s e n t e n t , ~ t i t r e de c o m p a r u i s o n , les m~ me s s p e c t r e s duns le cas de la l e v u r e cultiv6e sur le mSme milieu, duns des c o n d i t i o n s u6robies.
2.8
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I
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A
I 2.7 i 2.6
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3.4 3.2 3.,~ 3.1 3£ 2.~ 2.,E
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2.8 2.7 2.15
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6OO
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Fig. I. Spectres r 6 d u i t s de la l e v u r e cu ltiv6e en ana6robiose. A : t e m p d r a t u r e ordinuire, e = 1. 5 m m : b a n d e u n i q u e vers 557 m # ; B: t e m p 6 r a t u r e de l ' a z o t e liquide, e = I m m : t r o i s bundes a ~ 552.5 m # , 558 m # et v ers 575 m # .
550
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-~,,.. Xm/~
Fig. 2. Spectres r6d ui t s de la l e v u r e cultiv6e en u~robiose e t rdcolt~e p e n d a n t la p h a s e e x p o n e n t i e l l e de c roi s s a nc e A : t e m p e r a t u r e ordinuire, e m m : b a n d e b~ vers 555 m # ; B: t e m p 6 r u t u r e de l ' a z o t e liquide, e = 1. 5 m m : b a n d e s a situ$es ~ 600 m/2, 558 m/~, 553 m # et 548 m/~.
B
3£ 3J 3.d 32 3.z 3.2 3.2 3.1 3.C 550
-------,2,.rap
Fig. 3. Spectres r 6 d u i t s de l a l e v u r e cultiv~e en a6robiose e t r6colt6e £ la p h a s e s t u t i o n n a i r e de croissance. A: t e m p 6 r u t u r e ordinuire, e = 2 m m : s p e c t r e classique c o m p r e n u n t a a = 600 m F ; b a = 560 m/z; ca = 550. 5 m/ t ; B : t e m p 6 r u t u r e de l ' u z o t e liquide, e = 0.8 m m : a a = 600 mju, ba = 558 m/z, c l a = 553 m # e t ca = 548 m # .
I1 r e s s o r t de l ' 6 t u d e de ces s p e c t r e s les fuits s u i v a n t s : (i) Le s p e c t r e r 6 d u i t de lu l e v u r e cultivde en a n a d r o b i o s e prfisente: ~t la t e m p f r a t u r e ordinaire, une b a n d e a situ6e vers 557 m/z1; b asse t e m p d r u t u r e , non pus une seule b a n d e a situ6e ~ 554 m/ix, ni d e u x b a n d e s a situdes r e s p e c t i v e m e n t ~ 555 et 585 m/z ~, m a i s t r o i s b a n d e s a s i t u f e s r e s p e c t i v e m e n t ~ 552. 5 m # , 558 m # et vers 575 m/z, c e t t e derniSre d t a n t tr~s large et tr~s fuible. (2) Duns le s p e c t r e de la l e v u r e cultiv6e en unu6robiose, on ne r e t r o u v e pus les b a n d e s a a = 600 m F et ca = 548 m/z, observdes d a n s le cas de l e v u r e s c u l t i v 6 e s en adrobiose, qu' e l l e s s o i e n t rdcolt~es en p h a s e e x p o n e n t i e l l e ou en p h a s e s t u t i o n n a i r e de croissunce* (Figs. 2 e t 3), m a i s on t r o u v e une b a n d e centr6e ~ 558 m/z q u i occupe e x a c t e m e n t lu m6me p o s i t i o n que lu b a n d e dire b a de lu l e v u r e cultiv6e en a6robiose et une b a n d e ~ 552.5 m/~ tr~s v o i s i n e mui s n o n s t r i c t e m e n t s u p e r p o s a b l e h lu b a n d e d i t e c l a 3. Souche: Saccharomyces cerevisiae " Y e a s t F o a m " diploide, ( u i m u b l e m e n t c o m m u n i q u 6 e p a r P. SLONIMSKI). Milieu de culture4: " Y e a s t E x t r a c t D i f c o " : i o g; P O 4H ~ K : I g; SO4(NH4)2: 1.2 g; glucose a n h y d r e : 54 g; eau q.s.p. : I,OOO m l ; i n c u b a t i o n h 25 °. * Si la l e v u r e cultiv6e en a~robiose est r6colt6e p e n d a n t lu p h a s e e x p o n e n t i e l l e de croissance, on r e t r o u v e , ~t la t e m p 6 r a t u r e o r d i n a i r e (Fig. 2, co urbe A) le s p e c t r e p r 6 c 6 d e m m e n t d6crit* p r 6 s e n t a n t une tr~s large b a n d e b l a c o m p a r a b l e A lu b u n d e b 1 des l e v u r e s de brasserie. A l a t e m p 6 r a t u r e de l ' a z o t e liquide, lu b a n d e a a d e v i e n t visible e t la bunde b l a observ6e h l a t e m p 6 r a t u r e o r d i n a i r e s ' e s t scind6e en t r o i s c o m p o s a n t e s situ~es h 548 m/z, 553 m / , e t 558 m/z d o n t les i nt e ns i t ~ s , h c e t t e p h a s e de lu croissance, s o n t tr~s voisines.
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SHORT COMMUNICATIONS
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Les p r 6 c u l t u r e s o n t t o u j o u r s 6t6 r6alis6es en a6robiose. L e s cellules destin6es ~ l'ensemencem e n t de la c u l t u r e o n t 6t6 pr61ev6es q u a n d la pr6culture se t r o u v a i t en p h a s e exponentielle de croissance et q u a n d la densit6 o p t i q u e c o r r e s p o n d a i t ~ e n v i r o n I00 unit6s du p h o t o m ~ t r e de C o l e m a n (ce q u i c o r r e s p o n d A e n v i r o n 2.104 cellules/ml). Les c u l t u r e s adrobies o n t 6t6 r6alis6es d a n s des r6cipients e d ' u n e capacit6 de 2 litres et contenaf~t 200 m l de milieu c o n s t a m m e n t agit6 ~. raison de 130 oscillations m i n u t e s . Les c u l t u r e s ana~robies o n t 6t6 r6alis6es d a n s des r6cipients e n t i ~ r e m e n t en verre P y r e x (Fig. 4) c o n t e n a n t 200 m l de milieu. L ' a t m o s p h ~ r e est constitu6e p a r de r a z o t e h a u t e m e n t purifi6 (azote R c o n t e n a n t m o i n s de o.oo5 % d'oxyg~ne). L ' a i r a 6t6 61imin~ de l'appareil p a r u n b a r b o t a g e d ' a z o t e R sous u n e pression de 8 c m de Hg, 45 m i n a v a n t et 45 m i n apr~s l ' e n s e m e n c e m e n t . E n r u e d ' a s s u r e r sa c o n s t a n t e homog6n6it6, la culture a 6t6 agitde A raison de 13o oscillations m i n u t e s d u r a n t r o u t e l'incubation. L a courbe de croissanee de la levure a 6t6 ~tablie grace ~ des m e s u r e s n6ph6lom6triques faites avec le p h o t o m ~ t r e de Coleman, ~t l'aide du t u b e T du r6cipient de culture. S
Fig. 4- R6cipient utilis6 p o u r les cultures ana6robies. T = t u b e p e r m e t t a n t d'effectuer des m e s u r e s n6ph61om~triques directes; S = s o u p a p e a u m e r c u r e p e r m e t t a n t le d 6 g a g e m e n t d u gaz c a r b o n i q u e de f e r m e n t a t i o n . E n tel ou tel p o i n t de la p6riode de croissance, les cellules de levure o n t 6t6 r6coltdes p a r c e n t r i f u g a t i o n et lavage d a n s NaC1 ~ 0. 9 %, g u n e t e m p 6 r a t u r e voisine de o °, s a n s q u ' a u c u n e p r e c a u t i o n sp6ciale air 6t6 prise p o u r m e t t r e les cellules de levure ~ l'abri d ' u n c o n t a c t avec l'oxyg~ne. L ' 6 t u d e spectrale du culot de c e n t r i f u g a t i o n de levure, A l'6tat r6duit, a 6t6 faite soit £ la t e m p d r a t u r e ordinaire soit A la t e m p 6 r a t u r e de l'azote liquide s u i v a n t la t e c h n i q u e p r 6 c 6 d e m m e n t d¢crite 6,7.
Laboratoire de Chimie biologique de la Facult~ des Sciences, Paris (France) x B. A. 3 D. 4 p. 5 p. s p. 7 p.
P. CHALX
T. HEYMAN-BLANCFIET
EPHRUSSI ET P. SLONIMSKI, Biochim. Biophys. Acta, 6 (195 o) 256. LINDENMAYER ET L. SMITH, Federation Proc., 16 (1957) 212. KEILIN ET E. F. HARTREE, Nature, 164 (1949) 254. SLONIMSKI, ThOse Sciences, Paris, 1952. CHAIX ET G. RONCOLI, Biochim. Biophys. Acta, 6 (195 o) 268. CHAIX ET J. F. PETIT, Biockim. Biophys. Acta, 25 (1957) 481CHAIX ET J. F. PETIT, Biochim. Biophys. Acta, 22 (1956) 66. R e q u le 26 juillet 1957
Oxygen transfer to AMP in the enzymic synthesis of the hydroxamate of tryptophan*, * * T h e e n z y m i c s y n t h e s i s of a m i n o acid h y d r o x a m a t e s f r o m a m i n o acids a n d h y d r o x y l a m i n e is coupled to t h e cleavage of A T P into A M P a n d p y r o p h o s p h a t e 1-3, a n d it h a s been a s s u m e d t h a t a m i n o acyl a d e n y l a t e s are i n t e r m e d i a t e s in t h e s e reactions. A l t h o u g h t h e f o r m a t i o n of t h e s e c o m p o u n d s b y t h e e n z y m e s y s t e m s h a s n o t y e t been d e m o n s t r a t e d , a m i n o acid a d e n y l a t e s are c o n v e r t e d to A T P b y t h e s e e n z y m e s 4, s R e s u l t s are p r e s e n t e d in t h i s p a p e r s h o w i n g t h e direct t r a n s f e r of o x y g e n f r o m t h e c a r b o x y l g r o u p of t r y p t o p h a n to t h e p h o s p h a t e of A M P in t h e f o r m a t i o n of t h e h y d r o x a m a t e of t r y p t o p h a n b y t h e purified p a n c r e a s e n z y m e of D h v m et al. 3 Suggestive p r e l i m i n a r y r e s u l t s h a d been o b t a i n e d w i t h a less purified liver e n z y m e s y s t e m . T h e s e r e s u l t s s u p p o r t t h e c o n c e p t of a n i n t e r m e d i a t e in w h i c h t h e c a r b o x y l g r o u p - o f t h e a m i n o acid is linked to t h e A M P m o i e t y of A T P t h r o u g h its p h o s p h a t e g r o u p 6. * S u p p o r t e d in p a r t b y g r a n t s f r o m t h e A t o m i c E n e r g y C o m m i s s i o n a n d Hill F o u n d a t i o n a t M i n n e s o t a , a n d b y U.S. Public H e a l t h Service G r a n t R G 4637 a t M a s s a c h u s e t t s General H o s p i t a l . ** T h i s is p u b l i c a t i o n 908 of t h e Cancer C o m m i s s i o n of H a r v a r d U n i v e r s i t y .
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Spectres cytochromiques de la levure cultiv~e en ana~robiose ou en a~robiose Les co urb es A et B de la Fig. I r e p r 6 s e n t e n t les s p e c t r e s r 6 d u i t s 6tudi6s ~ la t e m p e r a t u r e o r d i n a i r e et ~t la t e m p 6 r u t u r e de l ' a z o t e liquide, de cellules de l e v u r e s ' 6 t u n t d6veloppdes duns des c o n d i t i o n s anu6robies. Les courbes A et B des Figs. 2 et 3 r e p r d s e n t e n t , ~ t i t r e de c o m p a r u i s o n , les m~ me s s p e c t r e s duns le cas de la l e v u r e cultiv6e sur le mSme milieu, duns des c o n d i t i o n s u6robies.
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Fig. I. Spectres r 6 d u i t s de la l e v u r e cu ltiv6e en ana6robiose. A : t e m p d r a t u r e ordinuire, e = 1. 5 m m : b a n d e u n i q u e vers 557 m # ; B: t e m p 6 r a t u r e de l ' a z o t e liquide, e = I m m : t r o i s bundes a ~ 552.5 m # , 558 m # et v ers 575 m # .
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Fig. 2. Spectres r6d ui t s de la l e v u r e cultiv6e en u~robiose e t rdcolt~e p e n d a n t la p h a s e e x p o n e n t i e l l e de c roi s s a nc e A : t e m p e r a t u r e ordinuire, e m m : b a n d e b~ vers 555 m # ; B: t e m p 6 r u t u r e de l ' a z o t e liquide, e = 1. 5 m m : b a n d e s a situ$es ~ 600 m/2, 558 m/~, 553 m # et 548 m/~.
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Fig. 3. Spectres r 6 d u i t s de l a l e v u r e cultiv~e en a6robiose e t r6colt6e £ la p h a s e s t u t i o n n a i r e de croissance. A: t e m p 6 r u t u r e ordinuire, e = 2 m m : s p e c t r e classique c o m p r e n u n t a a = 600 m F ; b a = 560 m/z; ca = 550. 5 m/ t ; B : t e m p 6 r u t u r e de l ' u z o t e liquide, e = 0.8 m m : a a = 600 mju, ba = 558 m/z, c l a = 553 m # e t ca = 548 m # .
I1 r e s s o r t de l ' 6 t u d e de ces s p e c t r e s les fuits s u i v a n t s : (i) Le s p e c t r e r 6 d u i t de lu l e v u r e cultivde en a n a d r o b i o s e prfisente: ~t la t e m p f r a t u r e ordinaire, une b a n d e a situ6e vers 557 m/z1; b asse t e m p d r u t u r e , non pus une seule b a n d e a situ6e ~ 554 m/ix, ni d e u x b a n d e s a situdes r e s p e c t i v e m e n t ~ 555 et 585 m/z ~, m a i s t r o i s b a n d e s a s i t u f e s r e s p e c t i v e m e n t ~ 552. 5 m # , 558 m # et vers 575 m/z, c e t t e derniSre d t a n t tr~s large et tr~s fuible. (2) Duns le s p e c t r e de la l e v u r e cultiv6e en unu6robiose, on ne r e t r o u v e pus les b a n d e s a a = 600 m F et ca = 548 m/z, observdes d a n s le cas de l e v u r e s c u l t i v 6 e s en adrobiose, qu' e l l e s s o i e n t rdcolt~es en p h a s e e x p o n e n t i e l l e ou en p h a s e s t u t i o n n a i r e de croissunce* (Figs. 2 e t 3), m a i s on t r o u v e une b a n d e centr6e ~ 558 m/z q u i occupe e x a c t e m e n t lu m6me p o s i t i o n que lu b a n d e dire b a de lu l e v u r e cultiv6e en a6robiose et une b a n d e ~ 552.5 m/~ tr~s v o i s i n e mui s n o n s t r i c t e m e n t s u p e r p o s a b l e h lu b a n d e d i t e c l a 3. Souche: Saccharomyces cerevisiae " Y e a s t F o a m " diploide, ( u i m u b l e m e n t c o m m u n i q u 6 e p a r P. SLONIMSKI). Milieu de culture4: " Y e a s t E x t r a c t D i f c o " : i o g; P O 4H ~ K : I g; SO4(NH4)2: 1.2 g; glucose a n h y d r e : 54 g; eau q.s.p. : I,OOO m l ; i n c u b a t i o n h 25 °. * Si la l e v u r e cultiv6e en a~robiose est r6colt6e p e n d a n t lu p h a s e e x p o n e n t i e l l e de croissance, on r e t r o u v e , ~t la t e m p 6 r a t u r e o r d i n a i r e (Fig. 2, co urbe A) le s p e c t r e p r 6 c 6 d e m m e n t d6crit* p r 6 s e n t a n t une tr~s large b a n d e b l a c o m p a r a b l e A lu b u n d e b 1 des l e v u r e s de brasserie. A l a t e m p 6 r a t u r e de l ' a z o t e liquide, lu b a n d e a a d e v i e n t visible e t la bunde b l a observ6e h l a t e m p 6 r a t u r e o r d i n a i r e s ' e s t scind6e en t r o i s c o m p o s a n t e s situ~es h 548 m/z, 553 m / , e t 558 m/z d o n t les i nt e ns i t ~ s , h c e t t e p h a s e de lu croissance, s o n t tr~s voisines.
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Les p r 6 c u l t u r e s o n t t o u j o u r s 6t6 r6alis6es en a6robiose. L e s cellules destin6es ~ l'ensemencem e n t de la c u l t u r e o n t 6t6 pr61ev6es q u a n d la pr6culture se t r o u v a i t en p h a s e exponentielle de croissance et q u a n d la densit6 o p t i q u e c o r r e s p o n d a i t ~ e n v i r o n I00 unit6s du p h o t o m ~ t r e de C o l e m a n (ce q u i c o r r e s p o n d A e n v i r o n 2.104 cellules/ml). Les c u l t u r e s adrobies o n t 6t6 r6alis6es d a n s des r6cipients e d ' u n e capacit6 de 2 litres et contenaf~t 200 m l de milieu c o n s t a m m e n t agit6 ~. raison de 130 oscillations m i n u t e s . Les c u l t u r e s ana~robies o n t 6t6 r6alis6es d a n s des r6cipients e n t i ~ r e m e n t en verre P y r e x (Fig. 4) c o n t e n a n t 200 m l de milieu. L ' a t m o s p h ~ r e est constitu6e p a r de r a z o t e h a u t e m e n t purifi6 (azote R c o n t e n a n t m o i n s de o.oo5 % d'oxyg~ne). L ' a i r a 6t6 61imin~ de l'appareil p a r u n b a r b o t a g e d ' a z o t e R sous u n e pression de 8 c m de Hg, 45 m i n a v a n t et 45 m i n apr~s l ' e n s e m e n c e m e n t . E n r u e d ' a s s u r e r sa c o n s t a n t e homog6n6it6, la culture a 6t6 agitde A raison de 13o oscillations m i n u t e s d u r a n t r o u t e l'incubation. L a courbe de croissanee de la levure a 6t6 ~tablie grace ~ des m e s u r e s n6ph6lom6triques faites avec le p h o t o m ~ t r e de Coleman, ~t l'aide du t u b e T du r6cipient de culture. S
Fig. 4- R6cipient utilis6 p o u r les cultures ana6robies. T = t u b e p e r m e t t a n t d'effectuer des m e s u r e s n6ph61om~triques directes; S = s o u p a p e a u m e r c u r e p e r m e t t a n t le d 6 g a g e m e n t d u gaz c a r b o n i q u e de f e r m e n t a t i o n . E n tel ou tel p o i n t de la p6riode de croissance, les cellules de levure o n t 6t6 r6coltdes p a r c e n t r i f u g a t i o n et lavage d a n s NaC1 ~ 0. 9 %, g u n e t e m p 6 r a t u r e voisine de o °, s a n s q u ' a u c u n e p r e c a u t i o n sp6ciale air 6t6 prise p o u r m e t t r e les cellules de levure ~ l'abri d ' u n c o n t a c t avec l'oxyg~ne. L ' 6 t u d e spectrale du culot de c e n t r i f u g a t i o n de levure, A l'6tat r6duit, a 6t6 faite soit £ la t e m p d r a t u r e ordinaire soit A la t e m p 6 r a t u r e de l'azote liquide s u i v a n t la t e c h n i q u e p r 6 c 6 d e m m e n t d¢crite 6,7.
Laboratoire de Chimie biologique de la Facult~ des Sciences, Paris (France) x B. A. 3 D. 4 p. 5 p. s p. 7 p.
P. CHALX
T. HEYMAN-BLANCFIET
EPHRUSSI ET P. SLONIMSKI, Biochim. Biophys. Acta, 6 (195 o) 256. LINDENMAYER ET L. SMITH, Federation Proc., 16 (1957) 212. KEILIN ET E. F. HARTREE, Nature, 164 (1949) 254. SLONIMSKI, ThOse Sciences, Paris, 1952. CHAIX ET G. RONCOLI, Biochim. Biophys. Acta, 6 (195 o) 268. CHAIX ET J. F. PETIT, Biockim. Biophys. Acta, 25 (1957) 481CHAIX ET J. F. PETIT, Biochim. Biophys. Acta, 22 (1956) 66. R e q u le 26 juillet 1957
Oxygen transfer to AMP in the enzymic synthesis of the hydroxamate of tryptophan*, * * T h e e n z y m i c s y n t h e s i s of a m i n o acid h y d r o x a m a t e s f r o m a m i n o acids a n d h y d r o x y l a m i n e is coupled to t h e cleavage of A T P into A M P a n d p y r o p h o s p h a t e 1-3, a n d it h a s been a s s u m e d t h a t a m i n o acyl a d e n y l a t e s are i n t e r m e d i a t e s in t h e s e reactions. A l t h o u g h t h e f o r m a t i o n of t h e s e c o m p o u n d s b y t h e e n z y m e s y s t e m s h a s n o t y e t been d e m o n s t r a t e d , a m i n o acid a d e n y l a t e s are c o n v e r t e d to A T P b y t h e s e e n z y m e s 4, s R e s u l t s are p r e s e n t e d in t h i s p a p e r s h o w i n g t h e direct t r a n s f e r of o x y g e n f r o m t h e c a r b o x y l g r o u p of t r y p t o p h a n to t h e p h o s p h a t e of A M P in t h e f o r m a t i o n of t h e h y d r o x a m a t e of t r y p t o p h a n b y t h e purified p a n c r e a s e n z y m e of D h v m et al. 3 Suggestive p r e l i m i n a r y r e s u l t s h a d been o b t a i n e d w i t h a less purified liver e n z y m e s y s t e m . T h e s e r e s u l t s s u p p o r t t h e c o n c e p t of a n i n t e r m e d i a t e in w h i c h t h e c a r b o x y l g r o u p - o f t h e a m i n o acid is linked to t h e A M P m o i e t y of A T P t h r o u g h its p h o s p h a t e g r o u p 6. * S u p p o r t e d in p a r t b y g r a n t s f r o m t h e A t o m i c E n e r g y C o m m i s s i o n a n d Hill F o u n d a t i o n a t M i n n e s o t a , a n d b y U.S. Public H e a l t h Service G r a n t R G 4637 a t M a s s a c h u s e t t s General H o s p i t a l . ** T h i s is p u b l i c a t i o n 908 of t h e Cancer C o m m i s s i o n of H a r v a r d U n i v e r s i t y .