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P17 Dosimétrie biologique et physique après irradiation corporelle totale: évaluation de la radiosensibilité individuelle de patients atteints d'hémopathie maligne
Communications ailleurs, I’apoptose radio-induite in vitro des lymphocytes de leuctmie lymphoi’de chronique parah en mesure de predire l’efftcacite d’une irradiation splenique a faible dose sur la baisse de la lymphocytose.
P16 Modulation de I’exm-ession de TGF-B et TNF-a dans la fibrose radio-induite cutan~~musculaire apks traitement par I’association de pentoxifylline et d’alpha-tocoph&ol MC Vozenin-Brotons I, S Delanian *, V Sivan 1, Y Tricaud I, JJ Leplatt, M Martin’, JL Lefaixt 1 Laboratoire de radiobiologie et d’e’tude du gknome. CEA-DSV-DRR, CEA-Saclay, 91191 Gif-sur-Yvette ; zservice PI7 d’oncologie-radiothtrapie, h6pital Saint-Louis, 75010 Paris, France Objectifde f’&ude. - Nous avons recemment mis en evidence l’interet thtrapeutique de l’association de pentoxifylline et d’alpha-tocopherol (vitamine E) dans le traitement des fibroses radio-induites. En effet, cette association a permis une regression du volume du tissu fibreux d’environ 75 % par un traitement de 6 mois. Atin d’apprehender les mtcanismes mol6culaires lids a cette regression, nous avons Btudit l’expression de deux cytokines pro-inflammatoires, le TNF-a et le TGF+l, qui pourraient &re les cibles privil6giees des traitements antifibrosants. En effet, le TNF-a est implique darts la phase inflammatoire qui conduit a I’dtablissement des tibroses, de plus la pentoxifylline est classiquement d&rite comme un agent anti-TNF-a. En ce qui conceme le TGF$l, son action est centrale darts les phenombnes d’activations cellulaires qui conduisent a l’ttablissement et a la chronicite de la pathologie fibreuse. Mutt+ief et m&hodes. - Les experiences ont Bd realisees sur un modele experimental de port prealablement dtcrit (Er J Radio1 1993 ; 66 : 53744). Les animaux ont et6 divises en trois groupes. Le premier stroupe de cina animaux a recu 1 600 ma de oentoxifylllne par j&r pendant 6’mois. le deuxi‘eme groupede &q animaux I 600 mx de oentoxifvlline et 2 000 UJ de vitatnine E oar jour pendant 6-mois ; le derrtier groupe de cinq animaux a r&u une alimentation non suppltmentte. Des preparations histologiques ont et6 realisees pour chaque groupe d’animaux. Une coloration hemalun-eosine-safran a permis une premiere etude morpho-logique du tissu, puis l’etude de I’expression de TGF-/?I et TNF-a a Ctt rdaliste par immunohistochimie. Bribvement, apres une phase de permeabilisation et de saturation, les coupes de tissu Qaient incub6es sur la nuit a 4 “C avec le premier anticorps speciftque du TGF-/.31 (Santa-Cruz biotech Inc ; dilution 1150) ou du TTW-a (Genzyme Diagnostics ; dilution l/150). L’expression de TGF-PI et TNF-a ttait rtv616e par l’incubation pendant 45 minutes d’un second anticorps couple a la fluoresctine (FITC) (Immunotech ; dilution 11100). Les marquages obtenus ttaient alors observes et quantifits grbe It un microscope a tpifluorescence (Olympus). R&dtats. - Le TNP-a dtait exprimt dans la peau normale de port aussi bien au niveau des cellules de l’epidetme que du derme, ainsi que dans la matrice extracellulaire. Son expression etait fortement induite dans la peau tibreuse. Aucune modification du taux d’expression de TNF-a n’a pu f?tre observte sur les coupes de tissus issues des animaux trait& avec la de pentoxifylline seule ou avec I’association de pentoxifylline et de vitamine E. Dans la peau normale de port, le TGF-PI ttait exprimt dans les cellules de l’tpiderme, mais son expression Ctait faible dans les cellules du derme et dans la matrice extracellulaire. Au contraire, nous avons observe une tres forte expression de TGF-PI dans les myofibroblastes et les cellules endotheliales du derme fibreux, ainsi que dans la matrice extracellulaire. Le traitement par pentoxifylline n’induisait pas de modification de I’expression du TGF-OI aui demeurait tres intense. Mais, nous avons pu dttecter une diminutjon significative de l’expression du TGF-PI dans les coupes de tissus issues du groupe d’animaux trait& avec l’association de de pentoxifylline et de vitamine E.
orales et posters
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Conclusion. - Le traitement par pentoxifylline n’induit pas de regression de la tibrose et n’induit aucune modification de l’expression du TNF-a et du TGF-/?I. L’association de pentoxifylline et de viatmine E permet une reduction du volume du bloc tibreux, cette regression est accompagnee d’une diminution de l’expression de TGF-OI, alors au’elle n’induit nas de modification de l’exoression de TNF-a. L’association de pentoxifylline et de vitamine E*pourrait done engendrer la regression de la tibrose par I’inhibition de la voie du TGF-PI.
Dosimkie biologique et physique aprk irradiation corporelle totale : Cvaluation de la radiosensibiliti individuelle de patients atteints d’hkmopathie maligne J Dossou 1, E Lartigau 1.2, R M’kacher I, JD Legal I, M Hayat 3, A Bridierd, V Bodez4, M Guichard I, T Girinski2, F Eschwege2, C Parmentier I ’ Laboratoire de radioprotection-radiosensibiiik-radiocarcinogeWse, Zdkpartement de radioth&apie, 3dt!partement d’hkmatologie, 4service de physique, institut Gustave-Roussy, 94805 Villejuif, France Objectifde I’ttude. - La dosimttrie biologique est basee sur le dtnombrement des aberrations chromosomiques lymphocytaires des patients irradits. Ces aberrations sont comparees a celles observdes chez des donneurs sains dont les lymphocytes ont 6te irradits in vitro (courbes dose-effet). Les donnees humaines publiQs sont basees sur l’evaluation retrospective des doses, avec de tres larges incertitudes sur la dose delivrte (dosimetrie physique). L’irradiation corporelle totale avant transplantation de moelle osseuse est le seul modele humain de radiotherapie homogene d’un corps en totalite avec une connaissance parfaite de la dose dtlivtie. Mate’riel et me’thodes. - Nous avons utilisd ce modble pour comparer la dosimetrie biologique avec la dosimetrie physique dans les lymphocytes p&iph&iques circulants de 12 patients. Le protocole d’irradiation corporelle totale a consist6 en un conditionnement de deux ou trois fractions joumalitres de 1,8 ou 2.4 Gy, delivrees par un acctltrateur lineaire de 18 MV (debit de dose de 15.8 cGy.min-1). a une dose totale de I2 Gy en 25 jours. L’etablissement in vitro des courbes de reference a Bte realise sur le sang de volontaires sains par deux methodes differentes : la cytogenttique conventionnelle, detectant les aberrations chromosomiques instables (dicentriques) et la m&bode du FISH du chromosome 4 avec marquage pancentromdrique (hybridation in situ des chromosomes en fluorescence), d&e&ant les aberrations chromosomiques stables (translocations). Les memes methodes ont ettt utilistes pour les patients participant a l’etude, les anomalies cbromosomiques ont etb denombrees a 0 Gy et apres la premiere fraction d’irradiation corporelle totale (I ,8 Gy). Rtkdtats. - Chez les volontaires, avant irradiation, on notait I’absence de dicentriques (1 sur I 091, soit 0.1 %) ainsi que le faible nombre de traoslocations du chromosome 4 (3 sur 900, soit 2.5 8 pour tout le gtnome apr& extension gdce a la formule de Lucas). Chez les patients, avant irradiation, on notait 2 % de dicentriques (46 sur 2 491pour 0.08 % attendu) et 11 % de translocations du chromosomeb pour tout le g&me (32 sur 2 566 pour I % attendu), ce qui temoigne indirectement du passe thtrapeutique (chimiotherapie) de ces patients. Chez les 12 patients, pour une dose physique de 1.8 Gy, la dose biologiquement evaluee ttait de I,96 Gy (intervalle de confiance a 95 % : 1,75-2,35), par la mtthode de cytogcnctique conventionnelle et de 2,Ol Gy (1.85-2.45) par le FISH. Conclusion. - La dosimetrie biologique est done en parfait accord avec la dosimetrie physique et est ainsi utilisable en radioprotection et notamment dans le cas d’une irradiation accidentelle pour laquelle une evaluation tres precise de la dose recue est indispensable.
P16 Modulation de I’exm-ession de TGF-B et TNF-a dans la fibrose radio-induite cutan~~musculaire apks traitement par I’association de pentoxifylline et d’alpha-tocoph&ol MC Vozenin-Brotons I, S Delanian *, V Sivan 1, Y Tricaud I, JJ Leplatt, M Martin’, JL Lefaixt 1 Laboratoire de radiobiologie et d’e’tude du gknome. CEA-DSV-DRR, CEA-Saclay, 91191 Gif-sur-Yvette ; zservice PI7 d’oncologie-radiothtrapie, h6pital Saint-Louis, 75010 Paris, France Objectifde f’&ude. - Nous avons recemment mis en evidence l’interet thtrapeutique de l’association de pentoxifylline et d’alpha-tocopherol (vitamine E) dans le traitement des fibroses radio-induites. En effet, cette association a permis une regression du volume du tissu fibreux d’environ 75 % par un traitement de 6 mois. Atin d’apprehender les mtcanismes mol6culaires lids a cette regression, nous avons Btudit l’expression de deux cytokines pro-inflammatoires, le TNF-a et le TGF+l, qui pourraient &re les cibles privil6giees des traitements antifibrosants. En effet, le TNF-a est implique darts la phase inflammatoire qui conduit a I’dtablissement des tibroses, de plus la pentoxifylline est classiquement d&rite comme un agent anti-TNF-a. En ce qui conceme le TGF$l, son action est centrale darts les phenombnes d’activations cellulaires qui conduisent a l’ttablissement et a la chronicite de la pathologie fibreuse. Mutt+ief et m&hodes. - Les experiences ont Bd realisees sur un modele experimental de port prealablement dtcrit (Er J Radio1 1993 ; 66 : 53744). Les animaux ont et6 divises en trois groupes. Le premier stroupe de cina animaux a recu 1 600 ma de oentoxifylllne par j&r pendant 6’mois. le deuxi‘eme groupede &q animaux I 600 mx de oentoxifvlline et 2 000 UJ de vitatnine E oar jour pendant 6-mois ; le derrtier groupe de cinq animaux a r&u une alimentation non suppltmentte. Des preparations histologiques ont et6 realisees pour chaque groupe d’animaux. Une coloration hemalun-eosine-safran a permis une premiere etude morpho-logique du tissu, puis l’etude de I’expression de TGF-/?I et TNF-a a Ctt rdaliste par immunohistochimie. Bribvement, apres une phase de permeabilisation et de saturation, les coupes de tissu Qaient incub6es sur la nuit a 4 “C avec le premier anticorps speciftque du TGF-/.31 (Santa-Cruz biotech Inc ; dilution 1150) ou du TTW-a (Genzyme Diagnostics ; dilution l/150). L’expression de TGF-PI et TNF-a ttait rtv616e par l’incubation pendant 45 minutes d’un second anticorps couple a la fluoresctine (FITC) (Immunotech ; dilution 11100). Les marquages obtenus ttaient alors observes et quantifits grbe It un microscope a tpifluorescence (Olympus). R&dtats. - Le TNP-a dtait exprimt dans la peau normale de port aussi bien au niveau des cellules de l’epidetme que du derme, ainsi que dans la matrice extracellulaire. Son expression etait fortement induite dans la peau tibreuse. Aucune modification du taux d’expression de TNF-a n’a pu f?tre observte sur les coupes de tissus issues des animaux trait& avec la de pentoxifylline seule ou avec I’association de pentoxifylline et de vitamine E. Dans la peau normale de port, le TGF-PI ttait exprimt dans les cellules de l’tpiderme, mais son expression Ctait faible dans les cellules du derme et dans la matrice extracellulaire. Au contraire, nous avons observe une tres forte expression de TGF-PI dans les myofibroblastes et les cellules endotheliales du derme fibreux, ainsi que dans la matrice extracellulaire. Le traitement par pentoxifylline n’induisait pas de modification de I’expression du TGF-OI aui demeurait tres intense. Mais, nous avons pu dttecter une diminutjon significative de l’expression du TGF-PI dans les coupes de tissus issues du groupe d’animaux trait& avec l’association de de pentoxifylline et de vitamine E.
orales et posters
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Conclusion. - Le traitement par pentoxifylline n’induit pas de regression de la tibrose et n’induit aucune modification de l’expression du TNF-a et du TGF-/?I. L’association de pentoxifylline et de viatmine E permet une reduction du volume du bloc tibreux, cette regression est accompagnee d’une diminution de l’expression de TGF-OI, alors au’elle n’induit nas de modification de l’exoression de TNF-a. L’association de pentoxifylline et de vitamine E*pourrait done engendrer la regression de la tibrose par I’inhibition de la voie du TGF-PI.
Dosimkie biologique et physique aprk irradiation corporelle totale : Cvaluation de la radiosensibiliti individuelle de patients atteints d’hkmopathie maligne J Dossou 1, E Lartigau 1.2, R M’kacher I, JD Legal I, M Hayat 3, A Bridierd, V Bodez4, M Guichard I, T Girinski2, F Eschwege2, C Parmentier I ’ Laboratoire de radioprotection-radiosensibiiik-radiocarcinogeWse, Zdkpartement de radioth&apie, 3dt!partement d’hkmatologie, 4service de physique, institut Gustave-Roussy, 94805 Villejuif, France Objectifde I’ttude. - La dosimttrie biologique est basee sur le dtnombrement des aberrations chromosomiques lymphocytaires des patients irradits. Ces aberrations sont comparees a celles observdes chez des donneurs sains dont les lymphocytes ont 6te irradits in vitro (courbes dose-effet). Les donnees humaines publiQs sont basees sur l’evaluation retrospective des doses, avec de tres larges incertitudes sur la dose delivrte (dosimetrie physique). L’irradiation corporelle totale avant transplantation de moelle osseuse est le seul modele humain de radiotherapie homogene d’un corps en totalite avec une connaissance parfaite de la dose dtlivtie. Mate’riel et me’thodes. - Nous avons utilisd ce modble pour comparer la dosimetrie biologique avec la dosimetrie physique dans les lymphocytes p&iph&iques circulants de 12 patients. Le protocole d’irradiation corporelle totale a consist6 en un conditionnement de deux ou trois fractions joumalitres de 1,8 ou 2.4 Gy, delivrees par un acctltrateur lineaire de 18 MV (debit de dose de 15.8 cGy.min-1). a une dose totale de I2 Gy en 25 jours. L’etablissement in vitro des courbes de reference a Bte realise sur le sang de volontaires sains par deux methodes differentes : la cytogenttique conventionnelle, detectant les aberrations chromosomiques instables (dicentriques) et la m&bode du FISH du chromosome 4 avec marquage pancentromdrique (hybridation in situ des chromosomes en fluorescence), d&e&ant les aberrations chromosomiques stables (translocations). Les memes methodes ont ettt utilistes pour les patients participant a l’etude, les anomalies cbromosomiques ont etb denombrees a 0 Gy et apres la premiere fraction d’irradiation corporelle totale (I ,8 Gy). Rtkdtats. - Chez les volontaires, avant irradiation, on notait I’absence de dicentriques (1 sur I 091, soit 0.1 %) ainsi que le faible nombre de traoslocations du chromosome 4 (3 sur 900, soit 2.5 8 pour tout le gtnome apr& extension gdce a la formule de Lucas). Chez les patients, avant irradiation, on notait 2 % de dicentriques (46 sur 2 491pour 0.08 % attendu) et 11 % de translocations du chromosomeb pour tout le g&me (32 sur 2 566 pour I % attendu), ce qui temoigne indirectement du passe thtrapeutique (chimiotherapie) de ces patients. Chez les 12 patients, pour une dose physique de 1.8 Gy, la dose biologiquement evaluee ttait de I,96 Gy (intervalle de confiance a 95 % : 1,75-2,35), par la mtthode de cytogcnctique conventionnelle et de 2,Ol Gy (1.85-2.45) par le FISH. Conclusion. - La dosimetrie biologique est done en parfait accord avec la dosimetrie physique et est ainsi utilisable en radioprotection et notamment dans le cas d’une irradiation accidentelle pour laquelle une evaluation tres precise de la dose recue est indispensable.