Détection des IgG et IgM antitoxoplasmiques. Etude analytique de 3 tests immunoenzymatiques commercialisés

Détection des IgG et IgM antitoxoplasmiques. Etude analytique de 3 tests immunoenzymatiques commercialisés

Med Mal Infect. 1991 ; 21 : 256-60 MISE AU POINT D tection des IgG et IgM antitoxoplasmiques. Etude analytique de 3 tests immunoenzymatiques commerc...

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Med Mal Infect. 1991 ; 21 : 256-60

MISE AU POINT

D tection des IgG et IgM antitoxoplasmiques. Etude analytique de 3 tests immunoenzymatiques commercialis s * F. COTTY'*, C. MARTIN'", T.H. DUONG", F. de CLOSETS" et D. RICHARD-LENOBLE'" RESUME

Trois tests immunoenzymatiques (EIA) commercialis~s : Abbott, Pasteur et bio-M~rieux, sont ~valu~s sur 2 4 4 s~rums. Nos r~sultats montrent pour le dosage des IgG antitoxoplasmiques, une concordance de 86 ~ 90 % entre ies trois tests ; le test Abbott foumit des taux d'anticorps plus faibles, voire faussement n~gatifs. Pour le dosage des IgM, la concordance entre les trois tests varie de 72 ~ 89 % ; les tests Abbott et bioM~rieux donnent des r~sultats douteux pour 6,5 et 12,8 % des s~rums. Malgr~ la standardisation des manipulations par la technique EIA, les tests commercialis~s actuellement pr~sentent des discordances. Celles-ci justifient de pr~ciser, lots de la r~daction des r~sultats, le nora et la marque du test utilis~. M o t s - c l ~ s : Toxoplasmose - EIA lgG - EIA IgM.

apr~s traitement du s~rum par le 2 mercapto~thanol - le suivi s~rologique des sujets devant confirmer ces r~sultats. Ces s~rums ont les caract~ristiques suivantes : - 121 proviennent de femmes suivies lors d'une grossesse ou lors d'un examen pr~nuptial, parmi lesquelles 57 poss~dent une immunisation antitoxoplasmique et 62 ne sont pas immunis~es. - 29 appartiennent ~ des sujets ayant fair une s~ro-conversion r~cente. Ils ont tous des IgM sp~cifiques mais 23 seulement contiennent des IgG sp~cifiques et 6 en sont d~pourvus. - 18 poss~dent un facteur rhumato'fde ~ un taux ~lev~ parmi lesquels 17 correspondent ~ une immunisation ancienne et 1 ~ un sujet indemne de toxoplasmose. - 52 proviennent de patients atteints de SIDA dont 33 ont des IgG spb.cifiques et 19 n'en ont pas, 10 contiennent des IgM sp~cifiques et 42 n'en ont pas. - 24 proviennent de sujets pr~sentant des symptomes pouvant ~voquer une toxoplasmose, parmi lesquels 23 ont une s~rologie en faveur d'une immunisation ancienne et un sujet n'a pas d'anticorps Sl~cifiques.

Depuis une dizaine d'annb.es, le diagnostic de la toxoplasmose par les techniques immunoenzymatiques connaTt un essor considerable. C'est ainsi que sont apparus sur le march~ plusieurs kits de marques diff~rentes, provoquant un v~ritable malaise chez le biologiste qui est confront~ ~ un embarras de choix. Chaque kit a ses caract~ristiques propres. Leur prix est ~galernent variable d'un fabricant ~ l'autre. D~laissant volontairement le cOt~ financier, nous nous sommes proposes de faire une ~tude comparative sur 2 4 4 s~rums des r~sultats obtenus avec les 3 kits EIA: Abbott, Pasteur et bio-M~rieux.

MATERIEL ET METHODES Choix des s~rums Notre ~tude porte sur 2 4 4 s~rums dont certains proviennent des s~ries journali~res et d'autres de la s~roth~que du laboratoire. La presence d'anticorps antitoxoplasmiques, IgG ou IgM, est ~tablie lorsque deux tests EIA sont positifs, ainsi que le test d'agglutination directe des toxoplasmes avant et

M~thodes

* Regu le 16.3.1990. Acceptation d~finitive le 20.12.1990. *" Laboratoire de Parasltologie, CHU de Tours, I:-37044 Tours cedex. *** Laboratoire de Bact~riologie, CHU de Tours, F-37044 Tours cedex.

La recherche des IgG et IgM antitoxoplasmiques est effectu~e avec les kits commercialis~s par les 256

laboratoires Abbott, Pasteur, bio-M~rieux. II s'agit de techniques immunoenzymatiques diff~rant par la preparation antiganique, par ranticorps ravalateur et par renzyme utilis~. Les rasultats obtenus par les 3 tests EIA sont comparas entre eux. En ce qui concerne les IgG, les analyses de concordance sont raalis~es sur les 244 sarums. En ce qui concerne les IgM, seulement 109 sarums sont retenus, car atudias simultanament avec les 3 kits. Les analyses statistiques teUes que le test du Chi 2, la droite de ragression linaaire, sont r~alis~es avec les programmes Statwork et Excel sur Macintosh (Apple).

Etude de ia correlation qualitative

Elle permet de faire les constatations suivantes (tableau II) : TABLEAU !! : lgG antitoxoplasmiques : correlation qualitative globale des r~sultats obtenus par les 3 tests. --

- Pasteur

- DISCUSSION - M~rieux

DETECTION DES ANTICORPS IgG ANTITOXOPLASMIQUES

-I-

--

Abbott Abbott + Pasteur

RESULTATS

globale

+ M~rieux

+

Marieux M~rieux

84 30 114

2 128 130

86 158 244

87 27 114

2 128 130

89 155 244

76 13 89

10 145 155

86 158 244

R~sultats globaux Les s~rums sont classas en fonction de leur taux de positivita o b t e n u avec les 3 tests selon un histogramme (figure 1). Nous pouvons remarquer qu'avec le kit Abbott, nous avons le plus grand effectif de r~sultats n(~gatlfs. Effectlfs 140

- La concordance des saries appari~es est de 86,88 % entre Abbott et Pasteur, 8 8 , 1 1 % entre Abbott et bio-M~rieux, 9 0 , 5 7 % entre Pasteur et bio-M~rieux. - la discordance des saries est significative entre Abbott et Pasteur (0~ = 0,03) et entre Abbott et bio-M~rieux (~ = 0,03). Elle n'est pas significative entre Pasteur et bio-Marieux (oc = 0,53); ces tests apparaissent ainsi avoir une sensibilit~ diagnostique voisine.

120 10o

M~thode de r~gression lin~aire

80 60

Elle montre que les tests Pasteur et bio-Marieux donnent des taux plus ~levas que le test Abbott (figure 2).

4O

20 0 [0-10]

[11-14]

[15-50]

[51-100]

[101-300]

'l• ~-~B°rr [] ~-~Eu~ [] ~M~,~x ]

>300 T|u]( in UIImi

Fig 1 : Histogramme des effectifs en fonction du taux d'IgG antitoxoplasmiques pour les 3 tests. Analyse

quantitative

Selon la madiane et la moyenne, eUe montre des taux d'anticorps IgG globalement plus ~lev~s par les tests Pasteur et bio-Mb.rieux que par celui d'Abbott (tableau I). T A B L E A U I : Comparaison des r~sultats obtenus par ies 3 tests.

Autres

remarques

Certains s~rums ayant des taux d'anticorps proches du seuil de positivit~ seront consid~r~s n~gatifs selon le test Abbott et positifs selon ies tests Pasteur et bio-M~rieux. Ce fait a un retentissement non n~gligeable chez les femmes enceintes ~ la limite de la positivit~. Selon le test utilis~, certaines pourront Otre faussement consid~r~es comme non protegees et, pour celles-ci, il faudra faire une s~rologie une fois par mois jusqu'~ raccouchement. Dans d'autres cas, certaines femmes consid~r~es, peut-~tre ~ tort, comme s~ropositives, ne seront pas suivies au cours de leur grossesse. DETECTION DES IgM ANTITOXOPLASMIQUES

Madiane Moyenne

IgG Abbott

IgG Pasteur

IgG Marieux

13,00 59,52

35,00 110,51

28,00 78,69

R,~sultats globaux

Pour chaque kit, les r~sultats obtenus sont classes en 3 categories: n~gatifs, douteux et positifs (tableau III). Les r~sultats douteux concernent 257

et Pasteur/Abbott

- une corr6lation Abbott/Pasteur 600

6O0

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500 ~F--" o r~ ra <

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400

500

600

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I

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I

I00

200

300

pente de la droite = 1,3

x

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400

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300

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600

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r

....

et M6rieux/Abbott



;',,,I.-

i

500

coeff, de corr61ation r = 0,8

500

100

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400

pente de la droite = 0,6 coeff, de corr6lation r = 0,8

500

i

.

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200 100-

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200

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J

0

2'00

300

460

560

600

G-ABBOTT pente de ladroite = 1,0 coeff, de corr61ation r = 0,8

pente de la droite = 0,7 coeff, de corr61atiOn r -- 0,8 -

--

,

100

G-MERIEUX

une corr61ation Pasteur/M6rieux

600

et M~rieux/Pasteur .....

600

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500

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G-ABBOTT

600

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G-PASTEUR

600

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- une corr61ation Abbott/Pasteur

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-100 ~600

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J

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100

200

300

400

500

G-PASTEUR

G-MERIEUX

pente de la droite = 0,7 coeff, de correlation r = 0,8

pente de la droite = 1,1 coeff, de corr61ation r = 0,8

Fig 2 : IgG antitoxoplasmiques : c o m p a r a i s o n des r4sultats obtenus par la m a t h o d e de r~gression lin4aire. 258

TABLEAU

: lgM antitoxoplasmiques : correlation qualitative globale des r~sultats obtenus par les 3 tests

IV

- Abbott

d Abbott

+ Abbott

48 0 0

7 1 1

4 0 48

48

9

44 3 1 48

Pasteur d Pasteur + Pasteur -

M4rieux d M6rieux + M6rieux -

- M~rieux

d M6rieux

+ M6fieux

59 1 49

54 1 5

3 0 11

2 0 33

59 1 49

52

109

60

14

35

109

8 1 0

8 10 34

60 14 35

9

52

109

principalement les sujets ayant une immunisation ancienne, mais aussi certains sujets en tout d~but de s~roconversion. Le test Pasteur pr~sente le pourcentage de r~sultats douteux le plus faible.

ancienne. Les positivit~s sont proches du seuil limite d~terrnin4 par le fabficant.

R~sultats des 18 s~rums poss~dant un facteur rhumato'ide

Etude de la correlation qualitative globale - Un s~rum est n~gatif pour les IgG et les IgM, par t o u s l e s tests. - L e s 17 autres s~rums ont des IgG antitoxoplasmiques r4v~l~es par les 3 tests EIA. - Quant aux IgM sp(~cifiques : selon le test Pasteur, aucun s~rum n'en poss~de ; selon le test bioM~rieux, un s~rum fournit une densit(~ optique situb.e dans la zone douteuse, et selon le test Abbott, 2 autres s~rums se situent dans la zone douteuse.

Elle montre (tableau IV) que la concordance des s~ries appafi~es est de : - 88,99 % entre Abbott et Pasteur (97/109) - 72,47 % entre Abbott et bio-M~rieux (79/109) - 7 9 , 8 1 % entre Pasteur et bio-M~rieux (87/109).

TABLEAU !I! : lg M antitoxoplasmiques : comparaison des r~sultats obtenus par les 3 tests

CONCLUSION Abbott Pasteur bioM4rieux

N~gatifs

%

Douteux

%

Positifs %

48 59

44,03 54,13

9 1

8,25 0,92

52 49

47,7 44,95

60

55,04

14

12,84

35

32,11

Dosage des lgG antitoxoplasmiques

Le dosage des IgM antitoxoplasmiques se r~v~le ~tre encore bien d~licat. De nombreux s~rums pr~sentent des taux d'anticorps situ~s dans la zone douteuse : 9 / 1 0 9 pour Abbott, 1 4 / 1 0 9 pour bioM~rieux et 1 / 1 0 9 pour Pasteur. Des discordances + / - entre les tests sont observ~es : - 4 fois entre Abbott et Pasteur (4 positifs avec Abbott et n~gatifs avec Pasteur). - 9 fois entre Abbott et bio-M~rieux (8 positifs avec Abbott et n~gatifs avec bio-M~rieux ; 1 n~gatif avec Abbott et positif avec bio-M~rieux), 7 fois entre Pasteur et bio-M~rieux (5 positifs avec Pasteur et n~gatifs avec bio-M~rieux; 2 n~gatifs avec Pasteur et positifs avec bioM~rieux). La majorit~ de ces discordances rel~vent de la d~tection des IgM r~siduelles suite ~ une infection

259

La standardisation des r~sultats par les Ul/ml n'est toujours pas acquise (2). II appara~t donc essentiel de suivre l'6volution des anticorps ~ l'aide du m~me test et de signaler lors de la r~daction des r~sultats le nora et la marque du test utilis~. L'interpr4tation des taux d'anticorps proches du seuil de positivit~ chez les femmes enceintes est d41icate. L'attitude prudente consisterait ~ les consid4rer comme non immunis~es. Cette attitude peut paraRre abusive et criticable car elle augmenterait la surveillance chez la femme enceinte.

Dosage des lgM antitoxoplasmiques Les tests EIA commercialis~s apportent une am41ioration certaine clans la d~tection des IgM sp(~cifiques (1). Cependant des progr~s restent ~ faire afin d'~viter les r6ponses type "indice se situant dans la zone douteuse" surtout lorsqu'il s'agit d'IgM r~siduelles (3) 8 la suite d'une infection ancienne, ces r~sultats pouvant ~galement r~v41er une s~roconversion r~cente.

SUMMARY

:

l g G A N D I g M ANTI-TOXOPLASMA GONDH D E T E C T I O N . AN ANALYTICAL STUDY OF THREE 1MMUNOENZYMATIC

TESTS

The three following commercially available immunoenzymatics (EIA) tests (Abbott, Pasteur and blo-Merieux) were compared in 244 blood-serum samples. A 86 to 90 % correlation was demonstrated among the three test measurements of the antltoxoplasmic lgG. False-negatives or lower antibody values were found using the Abbott test. Concerning the lgM, a 72 to 89 % correlation was demonstrated, with doubtfully results with the Abbott and the blo-Merieux tests in 6,5 and 12,8 % of the samples. We conclude that there are discrepancies among these three commercially available tests, despite of the use of a EIA standardized method. So, references of the test must be specified with the results of antltoxoplasmic antibody measurements. Key-words

: Toxoplasma gondii -

EIA lgG - EIA lgM.

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