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Inclusions intranucleaires dans la myopathie oculopharyngee
Biology of the
Cell, Volume 63, 1988
ETUDE ULTRASTRUCTURALE DES MODIFICATIONS NUCLEOLAIRES AU COURS DES PROCESSUS D'ENKYSTEMENT ET DE DEKYSTEMENT D'ACANTHAMOEBA CASTELLANII. Pierre DEHAN et Guy GOESSENS. Laboratoire de Biologie cellulaire et tissulaire. I n s t i t u t A. Swaen, 20, rue de Pitteurs, B-q020 Liege, Belgique. Los amibes du genre Acanthamoeba sent des Protozoaires qui, places dans des conditions de milieu d~favorables se diff~rencient en kystes en s'entourant d'une paroi de nature essentiellement cellulosique. A ce stade I'activitd transcriptionnelle est compl~tement inhib~e. Nous avons provoqu~ I'enkystement synchrone de populations d'Acanthamoeba castellanii grace I'utUisation d'un milieu d'enkystement d~pourvu de source de carbone et d'azote. Des kystes matures ont ensuite ~t~ replaces dans du milieu n u t r i t i f normal pour induire le ddkystement et la reprise de la vie trophique. Nous poss~dons donc un materiel biologique propice ~ IV~tude des modifications nucl~olaires accompagnant I'arr~t et la reprise de I'activit~ transcriptionnelle. Los modifications nucldolaires constat~es au coun's de I'enkystement sent ~uccessivement: - une ddsorganisation du nucleolonema caractdristique du nucldole du trophozoTte - une r~duction du volume nucldolaire total accompagnde d'une compaction des constituants fibrillaires du nucldole - une s~grEgation nucl~olaire apparaissant en moyenne 14 heures apr~s le t r a n s f e r t en milieu d'enkystement - I'apparition 30 heures apr~s I'induction de I'enkystement d'une masse homog~ne tr~s dense aux Electrons au contact du nucl~ole qui est r~duit ~ du materiel f i b r i l l o - g r a n u l a i r e diffus. Au cours du ddkystement, nous observons la rdapparition des constituants nucl~olaires classiques alors qua la masse dense dispara~t progressivement.
2UBFPACTIONS
OF HI HISTONE
IN
THE
NUCLEI
OF
PROLIFERATING
AND
INDUCED FRIEND CELLS-I~'~UNOFLUORESCENT LOCALIZATION AND PRTEIN A/GOLD ELECTRON MICROSCOPY. T.Banchev, L.Srebrevs, J.Zletsnova, P.Petrov and R. Tsanev. Institute of Molecular Biology, Bulg~rlan Academy of Sciences, 1i13 Sofia, Bulgaria. Hlstone HI ° subfractlon was recently considered to play a possible role in fundamental processes ss cell proliferatlon,dlfferen%iatlon and malignant transformation, The proposed role of HIOaa s replicetlon represser was based excluseve~y on the inverse correlation between its amount and +he repllcatlve state of differen~ mammalian cells. We approached +his problPm by studies ~t %he single cell level aimed to localize H1 ° by means of light Immunocytochemistry and ultrastructural investig~tlon using
p r o t e i n A / lmmunogold method. Immunofluorescent s t a i n i n g shows t h a t in EAT and i n F r i e n d c e l l s h i s t o n e s H1 ab a r e a s s o c i a t e d with The b u l k c h r o m a t i n , where lmmunogold method I n d i c a t e s i t s e n r i c h m e n t in h ~ t e r o o h r o m a t i n . Both t e o h n i ~ u e s show t h a t H1 ° I s a b s e n t in the e x t r s n u c l e o l ~ r r e g i o n , but ~ low ammount i s observe~ i n the n u B i a o l i by immunofluorescence. I n v e s t i g a t i n g induced F r i e n d o e l l e H1 ° has s p e r i p h e r a l l o c a l i z a t i o n in c h r o m a t t n r e g i o n s where a c t i v e genes might be s i t u a t e d . To s gres+ e x t e n t t h i s web oonfirme~ a l s o by ~he lmmunogold method.
INCLUSIONS INTRANUCLEAIRES DANS LA MYOPATHIE 0CULOPHARYNGEEF . !'1, 3 1 " c , ~ i:~. ~'~ ~c~c~'* (2), D. Ploton (3), H. C o l l i n (1) et M.L. Shelanski ( , ) . (1) INSERM U.153, Paris, (~) Station Centrale de Microscopic Electronique, I n s t i t u t Pasteur, Paris, (3) Laboratoire d'Histologie et INSERM U. 31~, Reims et (~) Department of Pathology, Columbia University, New York. La myopathie oculopharyng~e est une maladie musculaire de survenue tardive, cliniquement caract#ris~e par un ptosis des paupi~res et une dysphagie. A transmission autosomique dominante, ]a myopathie oculopharyngee a une tres large d i s t r i b u t i o n geographique mais les cas los plus nombreux sent france-canadians ayant pour anc~tre commun un couple fran~ais immigr~ au Quebec en 1634 'Barbeau, 1966, In: Progressive Muskeldystrophie, Myotonie, Myasthenie E. Kuhn, ed Berlin, Springer, p. I02). " ', Los ~tudes ultrastructurales de biopsies musculaires de malades attaints oar cette affection ont demontr~ la presence constante de filaments tubulaires darts los noyaux des fibres musculaires (Tom~ et Fardeau, 1980, Acts Neuropath., ~9, 7, 85). Cos structures ont un diam~tre externe de 8,5 nm, un diam~tre interne d'environ 3 nm et une periodicit@ longitudinale d'environ 9 rim. Sur une coupe u l t r a - f i n e donnee, 2 & 5% des sections de noyaux presentent cos structures. Des inclusions intranucl@aires identiques non jamais eta decrites dans aucune autre situation normale ou pathologique. Dana ie but de pr@ciser la nature de cos inclusions, des etudes immunocytochimiques et ultrastructurales ont ~t~ entreprises. Aucun des trOs nombreux anticoros O]rig~s centre des prot~ines filamentaires bien caract@r,sees qui ont @t@ u t i l i s # s , n'a gas permis ]a detection des noyaux anormaux. La reaction r~gressive & I'EDTA (Bernhard, 1969, 3. Ultrast. Res. 27, 250) n'a pas diminu~ le contraste des inclusions intranucleaires ce qui sugg~re qu'elles ne sent pas constitutes par de I'ADN. Des @tudes st~r@-ologiques ont permis de montrer qua la disposition des filaments est complexe et tr~s caract@ristique. Cos inclusions filamentaires constituent le marqueur morphologique de la myoDathie oculopharyngee et son i d e n t i f i c a t i o n devra permettre de corner l ' o r i g i n e de cette affection.
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Cell, Volume 63, 1988
ETUDE ULTRASTRUCTURALE DES MODIFICATIONS NUCLEOLAIRES AU COURS DES PROCESSUS D'ENKYSTEMENT ET DE DEKYSTEMENT D'ACANTHAMOEBA CASTELLANII. Pierre DEHAN et Guy GOESSENS. Laboratoire de Biologie cellulaire et tissulaire. I n s t i t u t A. Swaen, 20, rue de Pitteurs, B-q020 Liege, Belgique. Los amibes du genre Acanthamoeba sent des Protozoaires qui, places dans des conditions de milieu d~favorables se diff~rencient en kystes en s'entourant d'une paroi de nature essentiellement cellulosique. A ce stade I'activitd transcriptionnelle est compl~tement inhib~e. Nous avons provoqu~ I'enkystement synchrone de populations d'Acanthamoeba castellanii grace I'utUisation d'un milieu d'enkystement d~pourvu de source de carbone et d'azote. Des kystes matures ont ensuite ~t~ replaces dans du milieu n u t r i t i f normal pour induire le ddkystement et la reprise de la vie trophique. Nous poss~dons donc un materiel biologique propice ~ IV~tude des modifications nucl~olaires accompagnant I'arr~t et la reprise de I'activit~ transcriptionnelle. Los modifications nucldolaires constat~es au coun's de I'enkystement sent ~uccessivement: - une ddsorganisation du nucleolonema caractdristique du nucldole du trophozoTte - une r~duction du volume nucldolaire total accompagnde d'une compaction des constituants fibrillaires du nucldole - une s~grEgation nucl~olaire apparaissant en moyenne 14 heures apr~s le t r a n s f e r t en milieu d'enkystement - I'apparition 30 heures apr~s I'induction de I'enkystement d'une masse homog~ne tr~s dense aux Electrons au contact du nucl~ole qui est r~duit ~ du materiel f i b r i l l o - g r a n u l a i r e diffus. Au cours du ddkystement, nous observons la rdapparition des constituants nucl~olaires classiques alors qua la masse dense dispara~t progressivement.
2UBFPACTIONS
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p r o t e i n A / lmmunogold method. Immunofluorescent s t a i n i n g shows t h a t in EAT and i n F r i e n d c e l l s h i s t o n e s H1 ab a r e a s s o c i a t e d with The b u l k c h r o m a t i n , where lmmunogold method I n d i c a t e s i t s e n r i c h m e n t in h ~ t e r o o h r o m a t i n . Both t e o h n i ~ u e s show t h a t H1 ° I s a b s e n t in the e x t r s n u c l e o l ~ r r e g i o n , but ~ low ammount i s observe~ i n the n u B i a o l i by immunofluorescence. I n v e s t i g a t i n g induced F r i e n d o e l l e H1 ° has s p e r i p h e r a l l o c a l i z a t i o n in c h r o m a t t n r e g i o n s where a c t i v e genes might be s i t u a t e d . To s gres+ e x t e n t t h i s web oonfirme~ a l s o by ~he lmmunogold method.
INCLUSIONS INTRANUCLEAIRES DANS LA MYOPATHIE 0CULOPHARYNGEEF . !'1, 3 1 " c , ~ i:~. ~'~ ~c~c~'* (2), D. Ploton (3), H. C o l l i n (1) et M.L. Shelanski ( , ) . (1) INSERM U.153, Paris, (~) Station Centrale de Microscopic Electronique, I n s t i t u t Pasteur, Paris, (3) Laboratoire d'Histologie et INSERM U. 31~, Reims et (~) Department of Pathology, Columbia University, New York. La myopathie oculopharyng~e est une maladie musculaire de survenue tardive, cliniquement caract#ris~e par un ptosis des paupi~res et une dysphagie. A transmission autosomique dominante, ]a myopathie oculopharyngee a une tres large d i s t r i b u t i o n geographique mais les cas los plus nombreux sent france-canadians ayant pour anc~tre commun un couple fran~ais immigr~ au Quebec en 1634 'Barbeau, 1966, In: Progressive Muskeldystrophie, Myotonie, Myasthenie E. Kuhn, ed Berlin, Springer, p. I02). " ', Los ~tudes ultrastructurales de biopsies musculaires de malades attaints oar cette affection ont demontr~ la presence constante de filaments tubulaires darts los noyaux des fibres musculaires (Tom~ et Fardeau, 1980, Acts Neuropath., ~9, 7, 85). Cos structures ont un diam~tre externe de 8,5 nm, un diam~tre interne d'environ 3 nm et une periodicit@ longitudinale d'environ 9 rim. Sur une coupe u l t r a - f i n e donnee, 2 & 5% des sections de noyaux presentent cos structures. Des inclusions intranucl@aires identiques non jamais eta decrites dans aucune autre situation normale ou pathologique. Dana ie but de pr@ciser la nature de cos inclusions, des etudes immunocytochimiques et ultrastructurales ont ~t~ entreprises. Aucun des trOs nombreux anticoros O]rig~s centre des prot~ines filamentaires bien caract@r,sees qui ont @t@ u t i l i s # s , n'a gas permis ]a detection des noyaux anormaux. La reaction r~gressive & I'EDTA (Bernhard, 1969, 3. Ultrast. Res. 27, 250) n'a pas diminu~ le contraste des inclusions intranucleaires ce qui sugg~re qu'elles ne sent pas constitutes par de I'ADN. Des @tudes st~r@-ologiques ont permis de montrer qua la disposition des filaments est complexe et tr~s caract@ristique. Cos inclusions filamentaires constituent le marqueur morphologique de la myoDathie oculopharyngee et son i d e n t i f i c a t i o n devra permettre de corner l ' o r i g i n e de cette affection.
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