b-catenin in vitro et in vivo dans des cellules tumorales cortico-surrénaliennes inhibe la prolifération et augmente l’apoptose cellulaire

SFE Toulouse 2012 / Annales d’Endocrinologie 73 (2012) 264–266 Objectifs.– Il existe deux types de corticosurrénalomes : celui de l’adulte sporadique associé à l’activation de la voie Wnt/b-caténine et celui de l’enfant, héréditaire, associé à l’activation de la voie mTOR. Nous avons développé un modèle murin de CS exprimant l’AgT de SV40 dans le cortex. Les souris AdTag développent des tumeurs bénignes qui progressent en CS à sept mois. Les objectifs sont, d’étudier les mécanismes d’activation de la voie Wnt/b-caténine, de rechercher l’implication de la voie mTOR, puis de tester l’effet d’inhibiteurs pharmacologiques sur la progression tumorale. Méthodes.– L’expression des acteurs des voies Wnt et mTOR a été explorée par des analyses immunohistochimiques et moléculaires chez les souris AdTag (2–7 mois) et sur des tumeurs humaines. Des souris de trois mois ont été traitées pendant quatre mois avec la rapamycine (inhibiteur mTOR) en association ou non avec la quercétine (inhibiteur b-caténine). Résultats.– La progression tumorale s’accompagne : – d’une activation de la voie Wnt (augmentation de ␤-caténine active et axine 2) associée à une perte d’expression d’antagonistes de la voie (Sfrp1 et 5) et de ligands de la voie Hedgehog ; – d’une activation de la voie mTOR (augmentation de mTOR, P-mTOR, P-S6 et P-4EBP1). Cette activation a été confirmée dans les CS sporadiques humains. Le traitement par rapamycine induit une diminution de la masse tumorale associée à une apoptose accrue des cellules tumorales. L’effet de la quercetine seule ou combinée est en cours d’analyse. Conclusion.– Les signalisations mTOR et Wnt constitueraient des cibles thérapeutiques des corticosurrénalomes. http://dx.doi.org/10.1016/j.ando.2012.07.098 CO-34

L’invalidation de la voie Wnt/b-catenin in vitro et in vivo dans des cellules tumorales cortico-surrénaliennes inhibe la prolifération et augmente l’apoptose cellulaire L. Lefèvre a,∗ , S. Gaujoux a , C. Hantel b , M.-P. Launay a , S. Bonnet a , K. Perlemoine a , M. Guillaud-Bataille a , F. Beuschlein b , F. Tissier a , J. Bertherat a , M. Rizk-Rabin a , B. Ragazzon a a Inserm U1016, CNRS UMR 8104, université Paris 5, institut Cochin, Paris, France b University hospital Innenstadt, Ludwigs Maximilians university, Munich, France ∗ Auteur correspondant. Les mutations activatrices du proto-oncogène CTNNB1 (␤-catenin) et l’activation de la voie Wnt/␤-catenin sont associées à un mauvais pronostic des cancers de la corticosurrénale (ACC). L’objectif de cette étude était d’évaluer le rôle des mutations de la ␤-catenin dans la tumorigenèse et l’agressivité des ACC. Les cellules corticosurrénaliennes humaines H295R, présentant une mutation activatrice de la ␤-catenin, ont été transfectées stablement avec un shARN dirigé contre la ␤-catenin et inductible à la doxycycline (clone sh␤). In vitro : L’expression du sh␤ diminue les ARNs (–85 %, p < 0,01) et la protéine ␤-catenin ainsi que l’activité d’un rapporteur luciférase de la voie Wnt/␤-catenin (–53 %, p < 0,01) et d’un gène cible, AXIN2 (–82 %, p < 0,01). L’invalidation de la ␤-catenin conduit à une diminution de la prolifération cellulaire (–46 %, p < 0,05), une accumulation des cellules en phase G1 du cycle cellulaire et une augmentation des cellules apoptotiques (+67 %, p < 0,05). In vivo : sur un modèle de xénogreffes en souris nude d’un clone sh␤ et d’un clone contrôle, neuf jours d’induction à la doxycycline, après l’établissement des tumeurs, entraînent une forte diminution de l’expression de la ␤-catenin (–89 %, p = 0,007) et d’AXIN2 (–87 % p < 0,001) exclusivement dans les xénogreffes sh␤. De plus, un traitement à la doxycycline dès le troisième jours d’inoculation des clones, empêche le développement des tumeurs chez les souris greffées avec le clone sh␤ (poids moyens des tumeurs après 31 jours 67,4 mg vs 0 mg, p < 0,001) tandis que le traitement n’affecte pas le clone contrôle. L’ensemble de ces résultats suggèrent que l’invalidation de la voie Wnt/␤-catenin serait une approche thérapeutique prometteuse. http://dx.doi.org/10.1016/j.ando.2012.07.099

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Mutations de KCNJ5 dans les adénomes produisant de l’aldostérone : corrélations moléculaires et remodelage du cortex surrénalien S. Boulkroun a,∗ , J.F. Golib Dzib b , M.-B. Samson-Couterie a , A.-J. Rickard a , T. Meatchi c , L. Amar c , X. Jeunemaitre c , A. Benecke d , M.-C. Zennaro c a Inserm, UMRS 970, Paris cardiovascular research center and university Paris-Descartes, Sorbonne Paris Cité, Paris, France b Institut des hautes études scientifiques, and centre national de la recherche scientifique, Bures sur Yvette, France c Inserm, UMRS 970, Paris cardiovascular research center and university Paris-Descartes, Sorbonne Paris Cité and Assistance publique-hôpitaux de Paris, hôpital européen Georges-Pompidou, Paris, France d Institut des hautes études scientifiques and centre national de la recherche scientifique and institut de recherche interdisciplinaire, CNRS USR3078 and university of Lille I and Lille II, Bures sur Yvette and Villeneuve d’Ascq, France ∗ Auteur correspondant. Les canaux potassiques jouent un rôle majeur dans la régulation de la biosynthèse de l’aldostérone. Récemment nous avons montré que des mutations somatiques du gène KCNJ5, codant pour le canal Kir3.4, étaient retrouvées dans 39 % des adénomes produisant de l’aldostérone (APA). Si le lien entre les mutations KCNJ5 et la production d’aldostérone a été établi, leur rôle dans la prolifération cellulaire et le développement de l’APA reste à clarifier. Notre objectif était de rechercher des corrélations entre le statut mutationnel et les caractéristiques moléculaires, morphologiques et fonctionnelles des APA et de la surrénale adjacente. Alors que les surrénales avec APA présentent un large remodelage du cortex suggérant un lien potentiel avec la formation de l’APA, le statut mutationnel de KCNJ5 n’est pas corrélé aux mesures morphologiques de remodelage du cortex péritumoral (nodulation, vascularisation et expression de CYP11B2) ou encore à la composition cellulaire des APA. L’analyse transcriptomique de 102 APA ne montre aucune classification des échantillons en fonction de la présence de mutation KCNJ5, ce qui suggère que ce type d’anomalie génétique n’induit pas l’activation de voies de signalisation spécifiques. Cependant, nous avons identifié un réseau de 29 gènes impliquant l’activation du métabolisme lipidique et des récepteurs nucléaires, qui semble constituer un nœud central de convergence entre les phénotypes moléculaires des APA avec ou sans mutations de KCNJ5. Ce réseau encore inexploré pourrait contribuer de fac¸on importante à la prolifération cellulaire et à l’autonomisation de la production d’aldostérone. http://dx.doi.org/10.1016/j.ando.2012.07.100 CO-36

Profil d’expression des microARN dans les adénomes de Conn L. Amar a,∗ , S. Boulkroun a , A. Rickard a , H. Lefebvre b , P.-F. Plouin c , M. Azizi c , M.-C. Zennaro a a Inserm, UMRS 970, Paris cardiovascular research center, Paris, France b 4 Mont-Saint-Aignan, hôpital universitaire de Rouen, Rouen, France c AP–HP, hôpital européen Georges-Pompidou, Paris, France ∗ Auteur correspondant. Objectif.– Bien que l’hyperaldostéronisme primaire (HAP) représente 10 % de la population hypertendue, il existe de nombreuses difficultés diagnostiques, pronostiques et thérapeutiques. La compréhension de la pathogenèse de l’HAP est donc essentielle pour le développement de nouveaux outils diagnostiques. Les microARN (MiR) sont impliqués dans la pathogénie de nombreuses tumeurs, mais il n’y a pas de données sur leurs profils d’expression et leurs rôles possibles dans l’HAP. Notre objectif est d’étudier les adénomes de Conn afin d’identifier de nouvelles voies de signalisation et de mettre au point de nouveaux biomarqueurs. Matériel et méthodes.– L’expression de 754 Mir a été étudiée dans 15 tumeurs et cinq surrénales témoins. Les résultats ont été validés par PCR quantitative dans une cohorte de validation. Par la suite les données ont été intégrées avec les résultats d’un transcriptome effectué sur les mêmes échantillons et ont été